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ESPECTROMETRA DE ABSORCIN
La espectrometra de absorcin es una tcnica en la cual la energa de un haz
de luz se mide antes y despus de la interaccin con una muestra. Cuando se
realiza con lser de diodo ajustable, se la conoce como espectroscopia de
absorcin con lser de diodo ajustable. Tambin se combina a menudo con una
tcnica de modulacin, como la espectrometra de modulacin de longitud de
onda, y de vez en cuando con la espectrometra de modulacin de frecuencia a
fin de reducir el ruido en el sistema.
ESPECTROMETRA DE FLUORESCENCIA
ESPECTROMETRA DE RAYOS X
Cuando los rayos X con suficiente frecuencia (energa) interaccionan con una
sustancia, los electrones de las capas interiores del tomo se excitan a
orbitales vacos externos, o bien son eliminados completamente, ionizndose el
tomo. El "agujero" de la capa interior se llena entonces con electrones de los
orbitales externos. La energa disponible en este proceso de excitacin se
emite como radiacin (fluorescencia) o quitar otros electrones menos
enlazados del tomo (efecto Auger). La absorcin o frecuencias de emisin
(energas) son caractersticas de cada tomo especfico. Adems, para un
tomo especfico se producen pequeas variaciones de frecuencia (energa)
que son caractersticas del enlace qumico. Con un aparato apropiado pueden
medirse estas frecuencias de rayos X caractersticas o energas de electrones
Auger. La absorcin de rayos X y la espectroscopia de emisin se usan en
ESPECTROMETRA DE LLAMA
ESPECTROMETRA VISIBLE
ESPECTROMETRA ULTRAVIOLETA
Todos los tomos absorben en la regin ultravioleta (UV) ya que estos fotones
son bastante energticos para excitar a los electrones externos. Si la
frecuencia es lo bastante alta, se produce la fotoionizacin. La espectrometra
UV tambin se usa para la cuantificacin de protenas y concentracin de ADN,
as como para la proporcin de protenas y ADN en una solucin. En las
protenas se encuentran generalmente varios aminocidos, como el triptfano,
que absorben la luz en el rango de 280nm. El ADN absorbe la luz en el rango
de 260nm. Por esta razn, la proporcin de absorbancia 260/280nm es un buen
indicador general de la pureza relativa de una solucin en trminos de estas
dos macromolculas. Tambin pueden hacerse estimaciones razonables de la
concentracin de ADN o protenas aplicando la ley de Beer.
ESPECTROMETRA INFRARROJA
ESPECTROMETRA RAMAN
ESPECTROMETRA DE FOTOEMISIN
ESPECTROMETRA MSSBAUER
Espectroscopios
Espectrmetros pticos
Comparacin de diferentes espectrmetros
basados en la difraccin: reflexin
ptica, refraccin ptica y fibra ptica.
Los espectroscopios se usan a menudo en astronoma y en algunas ramas de la
qumica. Los primeros aparatos de este tipo eran simplemente un prisma con
graduaciones que marcaban las longitudes de onda de la luz. Los
espectroscopios modernos, como los monocromadores, generalmente usan una
rejilla de difraccin, una hendidura mvil y una especie de fotodetector,
adems de estar automatizados y controlados por un ordenador. El
espectroscopio fue inventado por Gustav Robert Georg Kirchhoff y por Robert
Wilhelm Bunsen.
Espectrgrafos
Espectro electromagntico
Diagrama del espectro electromagntico (ampliar)
El espectro electromagntico (o simplemente espectro) es el rango de todas las
radiaciones electromagnricas posibles. El espectro de un objeto es la
distribucin caracterstica de la radiacin electromagntica de ese objeto.
Tipos de radiacin
Radiofrecuencia
Las ondas de radio suelen ser utilizadas mediante antenas del tamao
apropiado (segn el principio de resonancia), con longitudes de onda en los
lmites de cientos de metros a aproximadamente un milmetro. Se usan para la
transmisin de datos, a travs de la modulacin. La televisin, los telfonos
mviles, las resonancias magnticas, o las redes inalmbricas y de radioaficionados, son algunos usos populares de las ondas de radio.
Microondas
Rayos T
Radiacin infrarroja
* Infrarrojo lejano, desde 300 GHz (1 mm) hasta 30 THz (10 m). La parte
inferior de este rango tambin puede llamarse microondas. Esta radiacin es
absorbida por los llamados modos rotatorios en las molculas en fase gaseosa,
mediante movimientos moleculares en los lquidos, y mediante fotones en los
slidos. El agua en la atmsfera de la Tierra absorbe tan fuertemente esta
radiacin que confiere a la atmsfera efectividad opaca. Sin embargo, hay
ciertos rangos de longitudes de onda ("ventanas") dentro del rango opacao
que permiten la transmisin parcial, y pueden ser usados en astronoma. El
rango de longitud de onda de aproximadamente 200 m hasta unos pocos mm
suele llamarse "radiacin submilimtrica" en astronoma, reservando el
infrarrojo lejano para longitudes de onda por debajo de los 200 m.
* Infrarrojo medio, desde 30 a 120 THz (10 a 2.5 m). Los objetos calientes
(radiadores de cuerpo negro) pueden irradiar fuertemente en este rango. Se
absorbe por vibraciones moleculares, es decir, cuando los diferentes tomos en
una molcula vibran alrededor de sus posiciones de equilibrio. Este rango es
llamado, a veces, regin de huella digital, ya que el espectro de absorcin del
infrarrojo medio de cada compuesto es muy especfico.
* Infrarrojo cercano, desde 120 a 400 THz (2500 a 750 nm). Los procesos
fsicos que son relevantes para este rango son similares a los de la luz visible.
Luz ultravioleta
Rayos X
Despus del ultravioleta vienen los rayos X. Los rayos X duros tienen
longitudes de onda ms cortas que los rayos X suaves. Se usan generalmente
para ver a travs de algunos objetos, as como para la fsica de alta energa y
la astronoma. Las estrellas de neutrones y los discos de acrecin alrededor de
los agujeros negros emiten rayos X, lo que nos permite estudiarlos.
Los rayos X pasan por la mayor parte de sustancias, y esto los hace tiles en
medicina e industria. Tambin son emitidos por las estrellas, y especialmente
por algunos tipos de nebulosas. Un aparato de radiografa funciona disparando
un haz de electrones sobre un "objetivo". Si los electrones se disparan con
suficiente energa, se producen rayos X.
Rayos gamma
Despus de los rayos X duros vienen los rayos gamma. Son los fotones ms
energticos, y no se conoce el lmite ms bajo de su longitud de onda. Son
tiles a los astrnomos en el estudio de objetos o regiones de alta energa, y
son tiles para los fsicos gracias a su capacidad penetrante y su produccin de
radioistopos. La longitud de onda de los rayos gamma puede medirse con
gran exactitud por medio de dispersin Compton.
No hay ningn lmite exactamente definido entre las bandas del espectro
electromagntico. Algunos tipos de radiacin tienen una mezcla de las
propiedades de radiaciones que se encuentran en las dos regiones del
espectro. Por ejemplo, la luz roja se parece a la radiacin infrarroja en que
puede resonar algunos enlaces qumicos.
Espectrometra de absorcin
TEORA DE LA FLUORESCENCIA
INSTRUMENTOS
Otros aspectos a considerar son los efectos del filtro interior. Estos incluyen la
reabsorcin, que ocurre porque otra molcula o parte de una macromolcula
absorbe las longitudes de onda en la que el fluorforo emite radiacin. Si este
es el caso, una parte o la totalidad de los fotones emitidos por el fluorforo
pueden ser absorbidos de nuevo. Otro efecto del filtro interno se produce a
causa de las altas concentraciones de absorcin de las molculas, incluyendo
el fluorforo. El resultado es que la intensidad de excitacin de la luz no es
constante a lo largo de la solucin. Como resultado, slo un pequeo
porcentaje de la luz de excitacin llega a los fluorforos que son visibles para el
sistema de deteccin. Los efectos del filtro interior cambian el espectro y la
intensidad de la luz emitida y, por tanto, deben ser considerados al analizar el
espectro de emisin de luz fluorescente.
APLICACIONES
Este tipo de fluorescencia es una prueba importante que puede ser usada para
estimar la naturaleza del microambiente del triptfano (un aminocido).
Cuando se realizan experimentos con desnaturalizantes, surfactantes u otras
molculas anfiflicas, el microambiente del triptfano puede cambiar. Por
ejemplo, si una protena que contiene un nico triptfano en su ncleo
"hidrofbico" se desnaturaliza con el aumento de temperatura, aparece un
cambio de color en el espectro de emisin del rojo. Esto se debe a la exposicin
del triptfano a un medio ambiente acuoso en contraposicin a una protena
Karl Manne Georg Siegbahn de Uppsala, Suecia (Premio Nobel 1924), fue uno
de los pioneros en el desarrollo de rayos X espectrometra de emisin (tambin
llamado X-espectroscopa de fluorescencia de rayos). Midi las longitudes de
onda de los rayos X en muchos elementos de alta precisin, utilizando
electrones de alta energa como fuente de excitacin.
Instrumentos
Espectrmetros de rejilla
Normalmente, los rayos X que emergen de una muestra deben pasar una
hendidura que define la fuente, y luego los elementos pticos (espejos y/o
rejillas) los dispersan por difraccin segn su longitud de onda y, por ltimo, se
coloca un detector en sus puntos focales.
Interfermetros
INSTRUMENTOS
Tipos de atomizadores
Para atomizar la muestra normalmente se usa una llama, pero tambin pueden
usarse otros atomizadores como el horno de grafito o los plasmas,
principalmente los plasmas de acoplamiento inductivo.
Cuando se usa una llama, se dispone de tal modo que pase a lo largo
lateralmente (10 cm) y no en profundidad. La altura de la llama sobre la cabeza
del quemador se puede controlar mediante un ajuste del flujo de mezcla de
combustible. Un haz de luz pasa a travs de esta llama en el lado ms largo del
eje (el eje lateral) e impacta en un detector.
Fuentes de luz
El estrecho ancho de banda de las lmparas catdicas huecas hace que sea
raro el solapamiento espectral. Es decir, es poco probable que una lnea de
absorcin de un elemento se solape con otra. La emisin molecular es mucho
ms amplia, por lo que es ms probable que algunas bandas de absorcin
molecular se superpongan con una lnea atmica. Esto puede resultar en una
Hay muchas maneras en que los tomos pueden ser llevados a un estado
excitado. El mtodo ms simple es calentar la muestra a una temperatura alta,
producindose las excitaciones debido a las colisiones entre tomos de la
muestra.
A pesar de que las lneas de emisin estn causadas por una transicin entre
estados energticos cuantizados, y pueden ser muy agudas a primera vista,
tienen una anchura finita; es decir, se componen de ms de una longitud de
onda de luz. Esta ampliacin de la lnea espectral tiene muchas causas
diferentes.
Las lneas de emisin en los gases calientes fueron descubiertas por ngstrm,
y la tcnica fue desarrollada por David Alter, Gustav Kirchhoff y Robert Bunsen.
3. Excitacin: Los electrones en estado basal de los tomos de metal son ahora
capaces de absorber la energa del calor de la llama. El cuanto (cantidad) de
energa absorbido depende de las fuerzas electrostticas de atraccin entre los
electrones con carga negativa y el ncleo de carga positiva. Esto, a su vez,
depende del nmero de protones en el ncleo. Como los electrones absorben
energa, se desplazan a niveles ms altos de la energa y pasan a estado
excitado.
APLICACIONES
Compuestos orgnicos
LEY DE BEER-LAMBERT
ESPECTROFOTMETRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE
A = - log (%T)
ESPECTRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE
Si la molcula recibe luz con la misma energa de esa vibracin, entonces la luz
ser absorbida si se dan ciertas condiciones.
PREPARACIN DE LA MUESTRA
Las muestras lquidas pueden ser prensadas entre dos planchas de una sal de
alta pureza (como el cloruro de sodio). Estas placas deben ser transparentes a
la luz infrarroja para no introducir ninguna lnea en el espectro de la muestra.
Las placas obviamente son solubles en agua, por lo que la muestra, los
reactivos de lavado y el medio deben ser anhidros (es decir, sin agua).
MTODO TPICO
Un haz de luz infrarroja es generado y dividido en dos rayos. Uno pasa por la
muestra, y el otro por una referencia que suele ser la sustancia en la que est
disuelta o mezclada la muestra. Ambos haces se reflejan de vuelta al detector,
pero primero pasan a travs del separador, que alterna rpidamente cul de
los dos rayos entra en el detector. Las dos seales se comparan y, a
continuacin, se registran los datos.
USOS Y APLICACIONES
TEORA BSICA
HISTORIA
APLICACIONES
Al igual que ocurre con molculas individuales, un material slido tiene modos
de fonn caractersticos que pueden ayudar a identificarlo. Adems, la
espectrometra Raman se puede utilizar para observar otras excitaciones de
baja frecuencia en los slidos, como plasmones, magnones, y excitaciones de
brecha en superconductores.
MICROESPECTROMETRA RAMAN
Dado que las lentes objetivo de los microscopios enfocan el rayo lser a varios
micrmetros de dimetro, el resultado del flujo de fotones es mucho mayor que
los que se logran en las configuraciones Raman convencionales. Esto tiene el
beneficio aadido de una mayor desactivacin de la fluorescencia. Sin
embargo, el alto flujo de fotones tambin puede causar la degradacin de la
muestra, y por esta razn algunas configuraciones requieren un sustrato que
conduzca trmicamente (lo que acta como un disipador de calor) a fin de
mitigar este proceso.
Puede utilizarse, entre otras cosas, para estudiar mezclas de analitos, para
comprender efectos dinmicos como el cambio en la temperatura y los
mecanismos de reaccin, y es una herramienta de valor incalculable para la
comprensin de la estructura y funcin de las protenas y los cidos nucleicos.
Este tipo de espectrometra se puede aplicar a una amplia variedad de
muestras, tanto en solucin como en estado slido.
Desplazamiento qumico
comparacin con una frecuencia RMN fundamental de 100 MHz, por lo que el
desplazamiento qumico se expresa generalmente en partes por milln (ppm).
Acoplamiento-J
El acoplamiento a cualquier ncleo de espn , tal como el fsforo-31 o el flor19, funciona de esta manera (aunque las magnitudes de las constantes de
acoplamiento pueden ser muy diferentes). Pero los patrones de divisin difieren
de los descritos anteriormente para los ncleos con espn superior a debido
a que el nmero cuntico de espn tiene ms de dos valores posibles. Por
ejemplo, para el acoplamiento al deuterio (un ncleo de espn 1) divide la seal
en un triplete 1:1:1, porque el espn 1 tiene tres estados de espn. Del mismo
modo, un ncleo de espn 3/2 divide una seal 1:1:1:1 en un cuarteto y as
sucesivamente.
Inequivalencia magntica
ESPECTROMETRA DE CORRELACIN
Las protenas son varios rdenes de magnitud ms grandes que las pequeas
molculas orgnicas que se mencionaron anteriormente en este artculo, pero
la misma teora se aplica a la RMN. Debido al mayor nmero de elementos
presentes en la molcula, los espectros unidimensionales bsicos se ven
solapados con la superposicin de seales, hasta el punto de que el anlisis
resulta imposible. Por lo tanto, se realizan experimentos multidimensionales (2,
3 o 4D) para hacer frente a este problema. Para facilitar estos experimentos, es
conveniente marcar isotpicamente la protena con 13 C y 15 N, debido a que
los istopos 12 C predominantes de forma natural no son activos a la RMN,
mientras que el momento cuadrpolo nuclear del istopo 14 N predominante
de forma natural impide que se pueda obtener informacin de alta resolucin a
partir de este istopo de nitrgeno. El mtodo ms importante utilizado para la
determinacin de la estructura de las protenas utiliza experimentos NOE para
medir las distancias entre pares de tomos dentro de la molcula.
Posteriormente, las distancias obtenidas se utilizan para generar una
estructura 3D de la molcula usando un programa de ordenador.
Espectrometra Mossbauer
TEORA BSICA
APLICACIONES
Anlisis de Aceites
El Anlisis de aceites consiste en la realizacin de tests fisico-qumicos en el aceite con el fin de determinar si
el lubricante se encuentra en condiciones de ser empleado, o si debe ser cambiado. es una de las tcnicas
simples, que mayor informacin proporciona al Administrador de Mantenimiento, con respecto a las
condiciones de operacin del equipo, sus niveles de contaminacin, degradacin y finalmente su desgaste y
vida til.
Muchos departamentos de mantenimiento tienen actualmente Programas de Anlisis de Aceite. Algunos
utilizando el laboratorio de su proveedor de lubricantes o contratando los servicios de laboratorio privados. En
muchos de los casos los resultados del anlisis, son recibidos semanas o meses despus de la toma de la
muestra y la informacin se vuelve irrelevante, ya que para ese momento, las condiciones del equipo ya son
diferentes, en muchos casos el aceite ya fue cambiado y en otros el equipo ya fall y fue reparado.
Objetivos del seguimiento analtico de los aceites:
Muestreo: Es importante que la muestra sea representativa, debe ser extrada del equipo en las condiciones
normales de operacin (con el aceite en circulacin y caliente) o inmediatamente despus de haber parado la
mquina. No deben tomarse muestras en fro. Debern tomarse las cantidades necesarias y etiquetarlas con
el mayor nmero posible de datos de su origen.
Anlisis del aceite:
Examen visual
Aspecto: Aceite claro y limpio. Aceite turbio. Fase de agua decantada. Aceite sucio. Aceite sucio con
partculas decantadas. Indeterminable
Color - olor: Mas oscuro implica oxidacin del aceite, mezcla, contaminacin. Mas claro puede
indicar mezcla, presencia de agua
Partculas en suspensin
Mayor - Menor
Indice de acidez (T.A.N): (IP 177 / ASTM D664) - La cantidad de producto bsico, expresado en mg
KOH/g requeridos para neutralizar todos los componentes cidos presentes en 1g de la muestra
Para obtener una muestra representativa, las muestras se calientan a 65C para asegurar
que cualquier sedimento o depsito que pueda contener compuestos cidos se disuelva en
el aceite
Alcalinidad (T.B.N.) (IP 177 / ASTM D664). La cantidad de acido, expresada en el nmero
equivalente de mg KOH, requeridos para neutralizar todos los compuestos cidos presentes en 1g
de muestra
Para obtener una muestra representativa, las muestras se calientan a 65C para asegurar
que cualquier sedimento o depsito que pueda contener compuestos cidos se disuelva en
el aceite
Un haz de luz infrarroja atraviesa una muestra de aceite usado contenido en una celda de
cristal. El espectro de infrarrojo generado por la muestra se reproduce en un grfico
Cada tipo de aceite tiene un espectro caracterstico (como una huella digital) que permite
comparar el aceite nuevo con el usado
Las diferencias entre los espectros muestran algunos cambios de los componentes del
lubricante en servicio
Se pueden medir concentraciones desde 1 a 1000 ppm. Esta tcnica se utiliza para
determinar el nivel de aditivos (Ba,Ca,Mg,P,B), metales de desgaste (Fe,Cu,Pb,Ag,Al,Ni) y
contaminantes (Si,Na,K,Ba)