CK - NAC LQUIDA

MTODO IFCC

Para la determinacin in vitro de la Creatin Quinasa en suero o plasma

PRINCIPIO DEL TEST
La Creatin quinasa srica (CK) libera la creatina del sustrato Fosfocreatina en presencia del cofactor ADP que pasa a ATP. El ATP formado, en presencia de glucosa, reacciona mediante la accin de
la Hexokinasa dando lugar a la formacin de Glucosa-6-fostato, que es degradada a Fosfogluconato por accin de la Glucosa -6-fosfato-deshidrogensa mientras que el cofactor NADP+ se reduce a
NADPH, con el consiguiente cambio en la Abs del sistema.
En condiciones ptimas de reaccin, la Abs/min es proporcional a la concentracin de enzima Creatinquinasa presente en la muestra.
CK

Fosfocreatina + ADP
ATP + Glucosa
Glucosa-6-fosfato + NADP+

G-6-PDH

UTILIDAD DIAGNSTICA
La mayora de los casos de aumento de los valores de la CK estn relacionados con enfermedades del msculo esqueltico o del corazn. Se encuentran valores superiores a los habituales
despus de traumatismos, ciruga, trastornos miopticos, infartos de miocardio, hipotermia prolongada o hipotiroidismo. Tambin en casos de sndrome de Reye o de enfermedad de Duchenne.
Los valores inferiores a los de referencia pueden reejar una vida sedentaria o la presencia de
masa muscular escasa.
Una nica prueba de laboratorio no permite establecer un diagnstico. Los resultados se han de
evaluar en el contexto de todos los datos clnicos y de laboratorio obtenidos.
REACTIVOS
Kit 1 x 50 ml. (Ref. 99 05 24). Contiene:
A. 1 x 40 ml. Disolucin tampn.
B. 1 x 10 ml. Sustrato.
Kit 1 x 125 ml. (Ref. 99 79 74). Contiene:
A. 1 x 100 ml. Disolucin tampn.
B. 1 x 25 ml. Sustrato.

Creatina + ATP

HK

Ref. 99 46 27
Ref. 99 94 94
Ref. 99 49 10
Ref. 99 69 18

Glucosa-6-fosfato + ADP
6-Fosfogluconato + NADPH + H+

PROCEDIMIENTO
Llevar el reactivo de trabajo y el instrumento a la temperatura de trabajo.
Tcnica
Reactivo de trabajo

Monorreactivo
37C (l)

Birreactivo
37C (l)

1000

---

Disol. Tampn (A)

---

1000

Muestra

40

50

---

Mezclar e incubar 1 min

---

250

Sustrato tamponado (B)

Mezclar y poner en marcha el cronmetro.

A los 3 min. anotar la Abs inicial y leer las Abs. despus de 1,2,3 y 4 min.
Determinar la Abs/min promedio de las lecturas

PREPARACIN DEL REACTIVO DE TRABAJO

Los reactivos A y B, estn listos para su uso. En caso de que se quiera trabajar como
Monorreactivo: mezclar los volmenes deseados, pero manteniendo la proporcin 4 partes de
A (Disol. tampn) + 1 parte de B (Sustrato).

Lectura
Longitud de onda: 365 nm; 340 nm: 334 nm.
Blanco: Agua.
Cubeta: termostatizada, 1 cm de paso de luz.

COMPOSICIN DEL REACTIVO DE TRABAJO

Las concentraciones en la disolucin reactiva son:
Tampn Imidazol/Ac. actico pH 6,7
120 mM
Glucosa
23 mM
Fosfocreatina
36 mM
12 mM
Mg2+
ADP
3 mM
AMP
7 mM
N-Acetilcistena
21 mM
NADP+
2.2 mM
Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa
3.500 U/l
Hexoquinasa
7.500 U/l
Estabilizantes y conservantes

CLCULOS
Se utiliza la frmula indicada para obtener el factor para calcular las U/L:
Vt x 106
Abs/min x
= U/L
x l x Vs
Donde:
Vt: Volumen total de la mezcla de reaccin
Vs: Volumen de muestra
l: Paso de luz de la cubeta
: Coeciente de extincin molar de NADPH:
365 nm: 3,53 x 103
340 nm: 6,31 x 103
334 nm: 6,17 x 103

CONSERVACIN Y ESTABILIDAD
Los componentes del kit almacenados 2-8 C, son estables hasta la fecha de caducidad indicada
en la etiqueta.
Una vez mezclados los componentes A y B, la disolucin monorreactiva es estable 2 semanas
mantenida a 2-8 C y 2 das a temperatura ambiente ( 25 C), siempre al abrigo de la luz.
Indicaciones de alteracin de los reactivos:
Presencia de turbidez o de partculas. Blanco del reactivo de trabajo 0,800.
MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO
Material de uso general de laboratorio.
Espectrofotmetro, fotmetro o analizador automtico termostatizado. Cubeta 1 cm de paso de
luz.
MUESTRA
Suero o plasma con heparina o EDTA. La hemlisis ligera no interere en la prueba.
La muestra es estable 1 semana a 2-8C.
PRECAUCIONES
El reactivo contiene Azida sdica al 0,09%, manipular con precaucin.
Las indicaciones de seguridad se encuentran en la etiqueta de los productos. Se aconseja consultar la cha de datos de seguridad antes de la manipulacin del reactivo.
La eliminacin de residuos debe hacerse segn la normativa local vigente
CONTROL DE CALIDAD
Es recomendable la inclusin de sueros control, Seriscann Normal (Ref. 99 41 48) y Seriscann
Anormal (Ref. 99 46 85) en cada proceso de medida para vericar los resultados.
Se aconseja que cada laboratorio establezca su propio programa de control de calidad y los procedimientos de correccin de las desviaciones detectadas.
AUTOANALIZADORES
Adaptaciones a distintos analizadores automticos, disponibles bajo demanda.

Determinar la Abs/min promedio y multiplicar por el factor:

U/L = (Abs365 nm/ min) x 7429
U/L = (Abs340 nm/ min) x 4127
U/L = (Abs334 nm/ min) x 4207
VALORES DE REFERENCIA
T de reaccin
Hombres
Mujeres
25 C
10-80 U/L
10-70 U/L
30 C
15-130 U/L
15-110 U/L
37 C
24-195 U/L
24-170 U/L
Los valores indicados son a ttulo orientativo. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus
propios valores de referencia.
PRESTACIONES. CARACTERSTICAS DE FUNCIONAMIENTO
Las caractersticas de funcionamiento del producto dependen tanto del reactivo como del sistema
de lectura manual o automtico empleados.
Los siguientes datos se han obtenido en un analizador automtico a 37C y 340nm:
Sensibilidad, como lmite de deteccin: 2 U/L
Linealidad: Hasta 1500 U/L. Para valores superiores debe diluirse la muestra 1/10 con disolucin
salina (NaCl 0,9%) y repetir el ensayo. Multiplicar el resultado por 10.
Exactitud, como % de recuperacin: 103%
Precisin en la serie como Coeciente de Variacin: 1,8%
Precisin entre series como Coeciente de Variacin: 3,5%
Veracidad: Los resultados obtenidos con el reactivo no presentan diferencias signicativas al
compararlo con el reactivo considerado de referencia.
Los datos detallados del estudio de las prestaciones del reactivo estn disponibles bajo demanda
INTERFERENCIAS
Sueros muy hemolizados intereren en el ensayo.
No hay interferencia por la Glucosa hasta 600 mg/dl, por Acido Ascrbico hasta 40 mg/dl, ni por
Hemoglobina hasta 500 mg/dl.
BIBLIOGRAFA
Szasz, G., Gruber, W., Bernt, E. (1976). Clin. Chem. 22, 650-655.
Gunzer, G., Kretzschmar, F., Wrynn, K.,USP 6306617, 2001
IFCC, (2002), Clin. Chem. Lad. Med., 40,635-642
Matheu, M., et.al., (1982), Ann. Biol. Clin, 40, 87-164
Szasz, G., Kinne, E., (1979), J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 17, 689-691.

QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.

Empresa Certificada ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revisin: Febrero 2015

PRO4_REG9_CKNACL_4

CK - NAC LIQUID
IFCC METHOD

For in vitro determination of Creatine Kinase in serum or plasma

PRINCIPLE
Creatinkinase (CK) releases Creatine from Phosphocreatine with the aid of ADP that is transformed in ATP. The glucose of reaction media reacts with ATP by the action of Hexokinase, forming Glucose6-Phosphate. This degrades to 6-Phosphogluconate in the presence of Glucose-6-phosphate dehydrogenase and NADP+. The reaction reduces the NADP+ to NADH and there is an Abs change.
When the reaction conditions are optimum, the Abs/min is directly related to the CK activity of the sample.
CK

Creatine phosphate + ADP

ATP + Glucose
Glucose-6-phosphate + NADP+

HK
G-6-PDH

DIAGNOSTIC USE
Mostly, the increase of CK values is related to diseases of skeletal muscle or the heart.
Values higher than usual are observed after trauma, surgery, myopathic disorders, myocardial
infarction, prolonged hypothermia or hypothyroidism. Also, elevated values are described in cases
of Reye syndrome or Duchenne disease.
Results lower than the reference values may reect a sedentary lifestyle or the presence of low
muscle mass.
Single test result can not be used to make a clinical diagnosis. It should integrate clinical and
laboratory data.
REAGENTS
Kit 1 x 50 ml. (Ref. 99 05 24). Contents:
A. 1 x 40 ml Buffer solution.
B. 1 x 10 ml Substrate.
Kit 1 x 125 ml. (Ref. 99 79 74). Contents:
A. 1 x 100 ml Buffer solution.
B. 1 x 25 ml Substrate.

Ref. 99 46 27
Ref. 99 94 94
Ref. 99 49 10
Ref. 99 69 18

WORKING REAGENT PREPARATION

Reagents A and B are ready-to-use.
If a Monoreagent procedure is preferred, then the reagents must be mixed in the ratio: 4 parts of A
(Buffer solution) + 1 part of B (Liquid substrate).
WORKING REAGENT CONCENTRATIONS
The concentrations in the reagent solution are:
Imidazole/Acetic acid buffer pH 6.7
Glucose
Creatine phosphate
Mg2+
ADP
AMP
N-Acetyl cysteine
NADP+
Glucose-6-phosphate dehydrogenase
Hexokinase
Stabilizers and preservatives

Glucose-6-phosphate + ADP
6-Phosphogluconate + NADPH + H+
PROCEDURE
Bring reagents and the analyzer to working temperature.
Monoreagent
37C (l)

Bireagent
37C (l)

1000

---

Buffer Solution (A)

---

1000

Sample

40

50

---

Mix, incubate for 1 min

---

250

Technique
Working reagent

Substrate (B)

Mix, read the Abs. after 3 min. and start the stopwatch.
Read again the Abs. after 1, 2, 3 and 4 min.
Determine the mean of Abs/min of different lectures.
Reading
Wavelength: 365 nm; 340 nm; 334 nm.
Blank: water.
Cuvette: thermostatized. 1 cm light-path.
CALCULATIONS
To calculate the U/L, the following formula shall be used:
Vt x 106
Abs/min x
= U/L
x l x Vs
Vt: Total volume
Vs: Sample volume
l: Cuvette light path
: Extinction Coefcient NADPH:
365 nm: 3.53 x 103
340 nm: 6.31 x 103
334 nm: 6.17 x 103

120 mM
23 mM
36 mM
12 mM
3 mM
7 mM
21 mM
2.2 mM
3500 U/l
7500 U/l

Find the mean Abs/min value and multiply by the factor:

STORAGE AND STABILITY

The components of the kit, stored at 2-8C, will remain stable until the expiration date stated on
the label. The Monoreagent is stable for 2 weeks at 2-8C and for 2 days at room temperature
( 25C), when protected from the sunlight.
Signs of reagent deterioration:
Presence of particles or turbidity in the reagent. Working reagent blank 0.800.
ADDITIONAL EQUIPMENT
General laboratory equipment.
Spectrophotometer; automated analyzer or photometer with thermostated cuvette, 1 cm light-path.
SAMPLE
Serum or plasma with EDTA or heparin. A light haemolysis will not interfere with the assay.
Samples kept in the refrigerator at 2-8C are stable for one week.
CAUTION
The reagent contains Sodium azide at 0.09%. Handle with care.
The safety statements are on the label. It is advisable to look at the SDS before using the reagent.
The disposal of the residues has to be made according to local regulations.
QUALITY CONTROL
Control serum, Seriscann Normal (Ref. 99 41 48) and Seriscann Anormal (Ref. 99 46 85) should
be included in each test series. Each particular laboratory should establish its own control program.
AUTOANALYZERS
QCA has adaptation to different autoanalyzers on request.

Creatine + ATP

U/L = (Abs365 nm/ min) x 7429

U/L = (Abs340 nm/ min) x 4127

U/L = (Abs334 nm/ min) x 4207
REFERENCE VALUES
Reaction temp.
25 C
30 C
37 C

Men
10-80 U/L
15-130 U/L
24-195 U/L

Women
10-70 U/L
15-110 U/L
24-170 U/L

The stated values are for guidance. Each particular laboratory should establish its own normal range, using
its own instrumentation, blood collection methods and test procedures

PERFORMANCE CHARACTERISTICS
The performance characteristics depend on the method used. It is recommended to calculate
these data for each particular test protocol. These results have been obtained using a automated
method at 37C and 340nm.
Sensitivity, as detection limit: 2 UI/ml
Linearity: Up to 1500 U/L. For higher values, it is recommended to dilute the sample 1/10 in saline
(NaCl 0.9%) and assay once again. Multiply the nal result by 10.
Accuracy: 103 %
Repetitivity, as Coefcient of Variation: 1.8%
Reproducibility, as Coefcient of Variation: 3.5%
Trueness: Results obtained with this reagent did not show systematic differences when compared
with reference reagent.
Details of the performance studies are available on request
INTERFERENCES
Highly haemolysed sera will interfere with the reaction.
Glucose concentrations higher than 600 mg/dl, Ascorbic acid higher than 40 mg/dl and Haemoglobin higher than 500 mg/dl will interfere with the reaction.
REFERENCES
Szasz, G., Gruber, W., Bernt, E. (1976). Clin. Chem., 22, 650-655.
Gunzer, G., Kretzschmar, F., Wrynn, K., USP 6306617, 2001.
IFCC, (2002), Clin. Chem. Lad. Med., 40, 635-642.
Matheu, M., et.al., (1982), Ann. Biol. Clin, 40, 87-164.
Szasz, G., Kinne, E., (1979), J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 17, 689-691.

QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.

ISO 9001 / ISO 13485 Certified Company
A 7 Km 1081 P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
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Revision: February 2015

PRO4_REG9_CKNACL_4

CK - NAC LIQUIDE
MTHODE IFCC

Pour la dtermination in vitro de la Cratine Kinase dans le srum ou le plasma

PRINCIPE
La cratine-kinase srique (CK) libre la cratine du substrat phosphocratine laide du cofacteur ADP qui est transform en ATP. LATP form en prsence de glucose ragit par laction de
lhexokinase, en formant du glucose-6-phosphate. Celui-ci se dgrade en phosphogluconate par laction de la glucose-6-phosphate dshydrognase tandis que le NADP+ est rduit NADPH, avec un
changement de lAbs du systme.
Lorsque les conditions de raction sont optimales, la Abs/min est directement lie la concentration denzyme cratine-kinase de lchantillon.
CK

Phosphocratine + ADP
ATP + Glucose

G-6-PDH

Glucose-6-phosphate + NADP+

UTILIT DE DIAGNOSTIC
La plupart du temps, laugmentation des valeurs de CK est lie aux maladies du muscle squelettique
ou le cur. Des valeurs plus leves que dhabitude sont observes aprs des traumatismes, une
chirurgie, des dsordres myopathiques, un infarctus du myocarde, lhypothermie prolonge ou
lhypothyrodie. En outre, les valeurs leves sont dcrites dans les cas de syndrome de Reye ou
la maladie de Duchenne.
Les valeurs infrieures aux valeurs de rfrence peuvent reter un mode de vie sdentaire ou la
prsence dune faible masse musculaire.
Un test de laboratoire unique ne peut pas tablir un diagnostic. Les rsultats doivent tre valus
dans le contexte de toutes les donnes cliniques et de laboratoire obtenus.
RACTIFS
Kit 1 x 50 ml (Rf. 99 05 24). Contenu:
A. 1 x 40 ml Solution tampon.
B. 1 x 10 ml Substrat.
Kit 1 x 125 ml (Rf. 99 79 74). Contenu:
A. 1 x 100 ml Solution tampon.
B. 1 x 25 ml Substrat.

Cratine + ATP

HK

Glucosa-6-fosfato + ADP
6-phosphogluconate + NADPH + H+

TECHNIQUE
Incuber le ractif de travail et lanalyseur 37 C.
Technique

Monoractif 37C (l)

R. de travail

1000

---

Solution tampon (A)

---

1000

chantillon

40

50

---

Mlanger, incuber pendant 1 min

---

250

Substrat tamponn

Biractif 37C (l)

Rf. 99 46 27
Rf. 99 94 94

Mlanger puis mettre en marche le chronomtre. Au bout de 3 minutes, noter lextinction initiale et
lire les absorbances aprs 1, 2, 3 et 4 minutes.

Rf. 99 49 10
Rf. 99 69 18

Lecture
Longueur donde: 365 nm; 340 nm et 334 nm
Blanc: eau
Cuvette: thermostate de 1 cm de trajet optique.

PREPARATION DU REACTIF DE TRAVAIL

Les ractifs A et B sont prts lemploi. En cas dutilisation de la technique Monoractif: mlanger
les volumes souhaits, mais en maintenant la proportion 4 volumes de A (solution tampon) +
1 volume de B (substrat).
COMPOSITION DU REACTIF DE TRAVAIL
Les concentrations dans la solution ractive sont les suivantes:
Tampon imidazole/ac. actique pH 6,7
120 mM
Glucose
23 mM
Phosphocratine
36 mM
2+
Mg
12 mM
ADP
3 mM
AMP
7 mM
N-actylcystine
21 mM
NADP+
2,2 mM
Glucose-6-phosphate dshydrognase
3.500 U/l
Hexokinase
7.500 U/l
Stabilisants et conservateurs

CALCULS
En utilisant la formule indique pour obtenir le facteur de calcul des U/L :
Vt x 106
Abs/min x
= U/L
x l x Vs
Vt: Volume total du mlange de raction
Vs: Volume de lchantillon
l: Trajet optique
: Coefcient dextinction molaire de NADPH:
365 nm: 3.53 x 103
340 nm: 6.31 x 103
334 nm: 6.17 x 103
Calculer la valeur Abs/min obtenue chaque lecture ainsi que la valeur moyenne. Les U/l sont
calcules partir de:

CONSERVATION ET STABILIT
Conservs entre 2 et 8 C, les composants du kit sont stables jusqu la date de premption
indique sur ltiquette. Une fois les composants A et B mlangs, cette solution monoractive
est stable pendant deux semaines entre 2 et 8 C et deux jours temprature ambiante ( 25 C),
toujours labri de la lumire.
Les ractifs seront altr si:
Il existe une prsence de particules ou de turbidit. Blanc Ractif de travail 0,800.
MATRIEL NCESSAIRE MAIS NON FOURNI
Matriel courant de laboratoire.
Spectrophotomtre, analyseur automatique ou photomtre thermostat 37 C, 1 cm de trajet
optique.
CHANTILLON
Srum ou plasma hparin ou sur EDTA. Lhmolyse lgre ninterfre pas avec lessai.
Conserv entre 2 et 8 C, lchantillon est stable pendant une semaine.
PRCAUTIONS DEMPLOI
Le ractif contient de lazide de sodium (0,09 %) comme conservateur. Les indications de scurit
sont sur ltiquette des produits. Manipuler avec prcaution. On conseille de consulter la che des
donnes de scurit avant de manipuler le ractif. Llimination des dchets doit tre effectue
conformment aux normes en vigueur.
CONTRLE DE QUALIT
Nous recommandons linclusion de srums de contrle Seriscann normale (Rf. 99 41 48) et
Seriscann anormale (Ref 99 46 85) dans chaque processus de mesure pour vrier les rsultats.
Nous suggrons que chaque laboratoire dtablir son propre programme et les procdures de
correction des carts dans les mesures de contrle qualit.

U/L = (Abs365 nm/ min) x 7429

U/L = (Abs340 nm/ min) x 4127

U/L = (Abs334 nm/ min) x 4207
VALEURS DE RFRENCE
Temp. de raction
Hommes
Femmes
25 C
10-80 U/L
10-70 U/L
30 C
15-130 U/L
15-110 U/L
37 C
24-195 U/L
24-170 U/L
Il est recommand que chaque laboratoire tablisse ses propres valeurs de rfrence.
PERFORMANCE. CARACTRISTIQUES DE FONCTIONNEMENT
Le fonctionnement du produit dpend tant du ractif que du systme de lecture manuel ou
automatique utilis. Une technique automatique a permis dobtenir les donnes suivantes 37C
et 340nm:
Sensibilit comme limite de dtection: 2 UI/L
Linarit: Lessai est linaire jusqu 1500 U/L. Pour des concentrations plus leves, diluer
lchantillon 1/10 avec une solution saline (NaCl 0,9%). Multipliez le rsultat par 10.
Exactitude: le pourcentage de rcupration est de 103 %.
Coefcient de variation dans la srie: 1,8 %
Coefcient de variation entre les sries: 3,5 %
Justesse. Les rsultats obtenus avec le ractif ne sont pas signicativement diffrents par rapport
au ractif de rfrence considr.
Ltude dtaille de la performance du ractif sont disponibles sur demande.
INTERFRENCES
Les srums trs hmolyss interfrent avec lessai.
Aucune interfrence na t observe avec le glucose jusqu 600 mg/dl, ni avec lacide ascorbique
jusqu 40 mg/dl ni avec lhmoglobine jusqu 500 mg/dl.
ANALYSEURS AUTOMATIQUES
Des adaptations diffrents analyseurs automatiques sont disponibles sur demande.
BIBLIOGRAPHIE
Szasz, G., Gruber, W., Bernt, E. (1976). Clin. Chem., 22, 650-655.
Gunzer, G., Kretzschmar, F., Wrynn, K., USP 6306617, 2001.
IFCC, (2002), Clin. Chem. Lad. Med., 40, 635-642.
Matheu, M., et.al., (1982), Ann. Biol. Clin, 40, 87-164.
Szasz, G., Kinne, E., (1979), J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 17, 689-691.

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