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SOMMAIRE

INTRODUCTION..2

I.

Qu'est ce qu'une micro-algue? ..................................................................................................... 4


A.
Les micro-algues ................................................................................................................... 4
a)
Dfinition et caractristiques ............................................................................................. 4
b)
Milieu de vie ...................................................................................................................... 5
B.
Les micro-algues: une usine photosynthtique ..................................................................... 5
a)
La photosynthse ............................................................................................................... 6
b)Rendement photosynthtique des micro-algues ....................................................................... 7
II. Des micro-algues pour une production d'algo-carburants ........................................................... 7
A.
Production de lipides ............................................................................................................. 7
a)
Localisation de la production des lipides........................................................................... 7
b)
Mcanisme de la lipogense et lipides produits ................................................................ 9
B.
Techniques de mise en culture............................................................................................. 11
a)
Diffrents modes de production de biomasse micro-algale ............................................. 11
b)
Influence du milieu .......................................................................................................... 14
c)
Facteurs permettant daugmenter la synthse lipidique................................................... 16
C.
Extraction ............................................................................................................................ 19
a)
Protocoles d'extraction des lipides ................................................................................... 19
b)
La trans-estrification ...................................................................................................... 20
D.
Exprimentation au laboratoire Agronomie et Environnement (LAE) de lENSAIA ........ 21
III.
La filire micro-algues, la recherche et les projets en cours ................................................... 23
A.
Projets et rflexions au niveau local: ................................................................................... 23
a)
Etude mandate par le Val de Lorraine, Conseil de Pays ............................................... 23
b)
Projet Mines en Lorraine ................................................................................................. 24
B.
LIFREMER et le projet SHAMASH au cur du dveloppement de la technologie des
micro-algues ................................................................................................................................... 26
a)
Le projet SHAMASH ...................................................................................................... 26
b)
LIFREMER, lexpert franais des micro-algues ............................................................ 27
C.
Autres projets dans le Monde .............................................................................................. 28
IV.
Faisabilit pour le futur ........................................................................................................... 29
A.
Limites rencontres ............................................................................................................. 29
B.
Autres valorisations. ............................................................................................................ 30
a)
Industries alimentaires ..................................................................................................... 30
b)
Utilisations agronomiques ............................................................................................... 30
c)
Alimentation humaine ..................................................................................................... 31
d)
Energie et environnement ................................................................................................ 33
CONCLUSION..34
REMERCIEMENTS..35
SOURCES..36
ANNEXES.39
1

INTRODUCTION

Actuellement, le rchauffement climatique d notamment l'utilisation massive d'nergies


fossiles, responsable de fortes missions dun gaz effet de serre, le CO2, est un problme mondial.
Si la prise de conscience de lopinion publique est relle, les politiques mondiales ont du mal se
mettre daccord sur les mesures mettre en place pour limiter les missions de gaz effet de serre.
En France, lEtat, aprs avoir envisag une taxation sur les missions de CO2, a abandonn dbut
2010 ce projet de loi, faute de consensus actuellement au niveau europen, voire mondial sur ce
type de mesure. Des mesures dincitation sont actuellement en place afin de promouvoir des nouvelles technologies plus respectueuses de l'environnement, tandis que des industriels et des scientifiques cherchent de nouvelles solutions dune part pour limiter l'mission de CO2 dans l'atmosphre
et dautre part pour limiter l'utilisation massive d'nergies fossiles au profit de nouvelles sources
d'nergies renouvelables moins polluantes.
En effet, il faut savoir que lEurope dpend aujourdhui denviron 50% dapprovisionnements extrieurs pour satisfaire sa consommation dnergie. Elle est le plus gros importateur de ptrole (19%
de la consommation mondiale) avec le secteur du transport qui consomme 67% de la demande en
ptrole.
Dans ce contexte de recherche de nouvelles sources dnergies, les biocarburants de 1re gnration ont fait leur apparition sur le march ces dernires dcennies. Si on interroge le commun
des mortels sur la dfinition dun biocarburant, on peut sattendre entendre parler de carburant
vert ou de ptrole vert . Cette ide sexplique par le fait que les biocarburants sont des
sources liquides dnergies renouvelables issues de matires vgtales qui tirent leurs nergies de la
photosynthse. Ces biocarburants dits de 1re gnration correspondent lhuile vgtale extraite
des espces olagineuses (colza, palmier huile) et lalcool issu de la fermentation des tissus
riches en sucre de certaines espces cultives. Les diffrentes tudes sur ces biocarburants de 1re
gnration mettent en vidence que ces derniers prsentent de nombreuses limites tant dun point de
vue environnemental que socital (pollution, dforestation, crise alimentaire, ).
Face aux limites notamment en terme de rendement de ces biocarburants de 1re gnration,
les biocarburants de 2me gnration, qui utilisent la totalit de la biomasse constitue principalement de cellulose, dhmicellulose et de lignine (biomasse ligno-cellulosique), ne sont pas plus
prometteurs, victimes de blocages techniques (technologie trs coteuse) et de problmes environnementaux (dforestation, appauvrissement des sols en matire organique, ).
Ainsi les biocarburants de 3me gnration, issus des micro-algues, constituent actuellement
une bonne alternative car ces organismes (i) prsentent un rendement important en lipides (d'un
2

point de vue thorique 30 100 fois plus important que les olagineux terrestres), (ii) ne sont pas
lorigine de concurrence dusage vis--vis des terres agricoles et (iii) valorisent de manire trs efficace le CO2.
Aussi dans les rves les plus fous de certains chercheurs, ces organismes microscopiques
encore mal connus, seraient une usine photosynthtique potentiellement efficace pour le recyclage
du CO2 et la production de biocarburants. Quen est-il aujourdhui de cette potentialit?
Nous avons tent de rpondre cette problmatique, en lien avec le Conseil de Pays du Val
de Lorraine qui sinterroge sur les potentialits des micro-algues notamment dans un contexte de
dveloppement local du territoire. Ce travail nous a permis de raliser une exprimentation (passage
du thorique la pratique) mais surtout d'avoir un premier contact avec le monde professionnel et
celui de la recherche.

I.

Qu'est ce qu'une micro-algue?

A. Les micro-algues
a) Dfinition et caractristiques
Les micro-algues sont des organismes microscopiques unicellulaires. On utilise le terme
micro car la taille d'une micro-algue varie de quelques micromtres une centaine de
micromtres. Pour les tudier, il est ncessaire de les observer au microscope optique ou au
microscope lectronique, ce qui permet de voir plus de dtails, en particulier relatifs leur
morphologie. Dun point de vue taxonomique, les micro-algues appartiennent diffrentes familles
qui ont chacune leurs propres caractristiques, mais elles ont aussi des points communs en
particulier dans leur ultra structure et leur mtabolisme. Les organismes photosynthtiques sont
regroups en trois catgories distinctes: les bactries photosynthtiques, les algues et les plantes
terrestres. Le terme algue regroupe des individus chlorophylliens vivant essentiellement dans l'eau
et qui ne sont pas des embryophytes. Les contraintes du milieu aquatique ont conduit des
convergences structurales et physiologiques comme lexistence dune paroi souple. Les organismes
ainsi regroups sont pourtant bien loigns phylogntiquement: comme les Rhodobiontes (algue
rouge), Chlorobiontes, Stramnopiles (algue brune), Haptophytes. Algues rouges et algues brunes
sont des groupes monophyltiques c'est--dire se reconnaissent comme partenaires sexuels et
donnent une descendance fconde, par contre les algues vertes sont paraphyltiques et donc des
groupes dont l'anctre commun est aussi partag avec d'autres groupes.(voir annexe 1)
Une micro-algue est un organisme photosynthtique unicellulaire dlimite par une membrane
plasmique, qui contient au sein de son cytoplasme de nombreux organites ncessaires son fonctionnement et son mtabolisme : chloroplastes, amyloplastes, oloplastes, mitochondries et son
noyau entour de son enveloppe.

Les micro-algues peuvent vivre sous forme libre ou en colonie. Leur cellule unique et
indiffrencie assure toutes les fonctions. Ce sont des micro-organismes appartenant deux
groupes: les eucaryotes et les procaryotes. Les micro-algues eucaryotes possdent une structure
cellulaire vgtale classique compartimente, avec ou sans paroi cellulosique, et, avec des pigments
photosynthtiques renferms dans des plastes. Les micro-algues procaryotes, appeles aussi
cyanobactries, ont une structure bactrienne classique sans compartiment, les pigments
photosynthtiques tant contenus dans des membranes lamellaires.
En ce qui concerne la multiplication des micro-algues, elles ne grandissent pas. Par contre,
certaines d'entre elles, comme les diatomes, peuvent voir leur taille diminuer. Comme toutes les
micro-algues, elles colonisent leur milieu en se divisant par mitose, rapidement et activement, si les
conditions physico-chimiques et nutritives sont favorables. Lors de cette reproduction asexue, leur
taille diminue jusqu' ce qu'elles ne puissent plus se diviser.
b) Milieu de vie
Les micro-algues vivent dans les milieux fortement aqueux. Il existe 1100 genres de microalgues dont 14000 espces d'eau douce et 14000 d'eau sale. Ce sont des tres photosynthtiques,
c'est--dire qu'elles sont capables de produire de la matire organique partir d'lments minraux
grce aux processus d'assimilation photosynthtique. Ds lors qu'elles disposent de la lumire, elles
vont assimiler les lments minraux nutritifs comme le potassium, le sodium, le calcium et le magnsium, des oligo-lments (molybdne, zinc, cuivre) et le CO2 dissous dans l'eau pour produire
leurs constituants cellulaires. Dans leur cytoplasme, elles possdent des chloroplastes, organites
renfermant des pigments chlorophylliens. Ces pigments assurent le captage de l'nergie lumineuse,
qui est ensuite utilise pour synthtiser la matire organique ncessaire la cellule, partir des lments minraux nutritifs. Les miro-algues sont donc des tres autotrophes par photosynthse mais il
est possible que certaines d'entre elles, comme les euglnes, deviennent htrotrophes lorsqu'elles
sont places dans des conditions dfavorables de survie. Par exemple, si des micro-algues sont places dans le noir, elles perdent leurs chloroplastes et deviennent dpigmentes : elles vont s'alimenter alors grce la matire organique prsente dans le milieu. Notons que certaines micro-algues, en
majorit les cyanobactries filamenteuses, sont capables de fixer l'azote de l'air, grce des structures spcialises appeles htrocystes, qui contiennent une enzyme la nitrognase. Cet htrocyste
n'est pas capable de photosynthse mais il est en relation avec les cellules somatiques adjacentes qui
lui fournissent les matires carbones en change de composs azots.

B. Les micro-algues: une usine photosynthtique


5

a) La photosynthse
Interception de lnergie lumineuse
L'nergie lumineuse constitue l'apport initial permettant l'assimilation du carbone et d'autres
lments par les tres vivants chlorophylliens lors de la photosynthse: synthse de matire
organique partir de la lumire. La photosynthse se droule dans les chloroplastes des tissus
chlorophylliens comme le msophylle. Elle commence par une phase photochimique dans laquelle
un rducteur fort (NADPH) et de l'nergie sous forme d'ATP (adnine tri phosphate) sont labors.
L'nergie lumineuse absorbe par les photosystmes assure un transfert d'lectrons fournis par l'eau.
Puis la phase chimique comporte une carboxylation catalyse par la Rubisco qui consiste rduire
le CO2. Dans cette phase ce sont les NADPH et ATP forms prcdemment qui sont utiliss.
La rduction du CO2
Les micro-algues contiennent diffrents pigments essentiels parmi lesquels la chlorophylle. Il sagit
dune mtalloprotine c'est dire un noyau ttrapyrrolique substitu et centr sur un ion mtallique.
Elle possde une longue chane hydrophobe ce qui augmente sa solubilit dans le milieu apolaire de
la membrane. Son rle est d'absorber l'nergie lumineuse puis la convertir en nergie chimique
(ATP et NADPH, H+). Chez les micro-algues, on trouve de la chlorophylle avec une concentration
suprieure 10 g/l. Elles contiennent galement la lutine en forte concentration qui est un
pigment carotnode, frquemment utilis en pharmacologie pour soigner les maladies oculaires du
vieillissement.
Les ractions photochimiques de la photosynthse vont permettre la rduction du CO2 et former les
glucides. Ce recyclage est ralis grce au cycle de Calvin Benson.

b)Rendement photosynthtique des micro-algues


Le choix des micro-algues pour faire du biocarburant est bas sur plusieurs critres, dont le
rendement photosynthtique. En effet, 1 g de biomasse algale produit environ 1 g de glucides par
hectare, soit, pour l'ensemble de la vgtation terrestre, un gain annuel d'environ 73 milliards de
tonnes de carbone, ce qui quivaut vingt fois la production mondiale de charbon, par contre les
micro-algues sont d'une plus grande efficacit photosynthtique soit 10 100 fois plus que les
plantes.
Lutilisation des micro-algues pour la production dalgocarburants ncessite la fois une
culture intensive dalgues et une maitrise des conditions de culture pour garantir un rendement en
biomasse optimum et une production de lipide suffisamment leve. Durant notre projet pro, nous
avons donc du nous pencher sur les modes et les paramtres de culture afin de comprendre certains
enjeux et limites de lutilisation dalgues pour la production de biocarburants.

II.

Des micro-algues pour une production d'algo-carburants

A. Production de lipides
a) Localisation de la production des lipides
Comme chez les vgtaux terrestres, certaines espces de micro-algues peuvent accumuler, dans
certaines conditions de culture, le carbone fix, sous forme de lipides appels triglycrides. Les
lipides stocks constituent alors une rserve de carbone pour la micro-algue. En conditions normales, ces teneurs restent faibles, comprises entre 20 et 50%, et les lipides sont principalement
constitus de phospholipides et de glycolipides (constituants des membranes). Cependant certaines
espces sont capables d'accumuler jusqu' 80 % de leur poids sec en lipides (Bigogno et al., 2002 ;
Chisti, 2007) . Ainsi, les familles d'algues suivantes sont les plus productrices de lipides : Chlorophyces (ex : Chlorella vulgaris), Chrysophyces (ex : Diatomes) et Bacillariophyces (ex : Chaetoceros calcitrans).
Le stockage de lipides rsulte d'un dsquilibre transitoire entre le flux de carbone issu de la
photosynthse et le flux d'autres lments ncessaires la croissance (phosphore ou azote). La cellule, qui est carence en l'un de ces lments, n'interrompt pas immdiatement l'acquisition du CO 2
ncessaire la photosynthse, alors qu'elle ne peut pas l'utiliser pour construire des protines
puisque, par exemple, l'azote est manquant. Elle doit donc stocker ce flux, et chez certaines espces,
ce stockage a lieu principalement sous forme de lipides.

Ainsi, on observe chez ces espces de micro-algues des organites particuliers : les oloplastes.
Les oloplastes sont des organites spcifiques des cellules vgtales spcialiss dans le stockage des
lipides, essentiellement sous forme de plastoglobules (gouttelettes lipidiques sphriques de triglycrides synthtiss partir d'acides gras venant des chloroplastes). Ce sont des plastes sans pigments,
et plus spcifiquement des leucoplastes. Ils sont souvent associs aux membranes des thylakodes.

b) Mcanisme de la lipogense et lipides produits


La biosynthse des acides gras et des lipides rpond deux impratifs dans la cellule :
- fourniture des acides gras ncessaires la synthse des lipides de structure ;
- mise en rserve de l'nergie.
La biosynthse des acides gras se fait dans le cytosol alors que leur dgradation par -oxydation
se fait lintrieur des mitochondries. Toute biosynthse comme la synthse des lipides ncessite:
-de l'nergie apporte par l'ATP
-du pouvoir rducteur, fourni sous forme de NADPH,H+ provenant essentiellement du fonctionnement de la voie des pentoses phosphates
-des prcurseurs, le seul prcurseur de la synthse des acides gras est l'actyl-CoA.
L'actyl-CoA provient de :
- la -oxydation des acides gras (intramitochondriale),
- de l'oxydation du pyruvate (mitochondriale),
- de la dgradation oxydative des acides amins dits ctognes.
L'actyl-CoA, quelque soit son origine, est form dans la mitochondrie. Pour servir de prcurseur
dans le cytosol la synthse des acides gras, il doit tre export de la matrice mitochondriale vers le
cytosol. Seul le radical actyle est transport travers la membrane interne par le systme citrate.
LE CYTOSOL
SYNTHESE DES TRIGLYCERIDES :
Les triglycrides appartiennent la famille des lipides et sont constitus de trois acides gras et un
glycrol.
Leur synthse comporte trois tapes : formation de l'acide phosphatidique, dphosphorylation
de ce dernier en diglycride et estrification de la dernire fonction alcool du glycrol.
Le L-glycrol provient de la rduction de la 3-phosphodihydroxyactone forme au cours de
la

glycolyse.

La

raction

est

catalyse

par

la

3-phosphoglycrol

dshydrognase.

P-O-CH2-CO-CH2OH + NADH, H+-->P-O-CH2-CHOH-CH2OH + NAD+

1- Formation de l'acide phosphatidique


Deux acyl-CoA ragissent sur le glycrol 3-P pour donner l'acide phosphatidique.
Les fonctions alcool primaire et secondaire du glycrol-P sont estrifies grce l'action de l'acyl
transfrase.

2- Formation du diacylglycrol ou diglycride


C'est le rsultat du dpart du groupement phosphate de l'acide phosphatidique. La raction est catalyse par une hydrolase appele phosphatidate phosphatase.

3- Formation du triacylglycrol ou triglycride


Le diacylglycrol ragit avec un acyl-CoA pour donner le triglycride. Tous les acides gras peuvent
tre diffrents. Une acyl-CoA transfrase intervient.

Les triacylglycrols sont librs dans le cytosol sous forme de gouttelettes lipidiques.

LES TYPES DE LIPIDES PRODUITS :


Les micro-algues marines renferment une grande varit d'acides gras. La composition est
cependant homogne au sein d'une mme classe d'algues. Certains acides gras sont des descripteurs
spcifiques de communauts phytoplanctoniques et la composition en acides gras des espces peut
prsenter un intrt taxonomique.
Certaines micro-algues ont des proprits particulirement intressantes : une partie du CO2
incorpore dans leur biomasse l'aide de l'nergie solaire est transforme en huile. Ainsi, certaines
espces peuvent contenir jusqu' 80 % de leur masse en lipides.
On remarque que le contenu maximum en lipides et leur production varient selon les espces de
micro-algues. Ainsi les micro-algues marines ont en moyenne un contenu maximum en lipides su10

prieur celles d'eau douce. Cependant, on remarque que la production de lipides par jour est plus
importante chez les espces d'eau douce. On remarque quil n'y a pas de relation de proportionnalit
entre le contenu maximum en lipides et la production de lipides journalire chez les micro-algues;
en effet, certaines espces produisent beaucoup de lipides mais n'ont pas un stockage suffisant face
leur production.
Les micro-algues d'eau douce : Chlorella vulgaris, Scenedesmus sp, Bottytricus braunii sont
constitues principalement des acides gras suivants : acide palmitique, palmitolique, starique,
olique et linolique. Les acides gras ont plusieurs rles importants pour la cellule : mtabolique et
structural. La composition en acides gras de ces phospholipides donne aux membranes des proprits physiques (lasticit, viscosit) particulires.

B. Techniques de mise en culture


a) Diffrents modes de production de biomasse micro-algale
Les deux principales mthodes de production grande chelle de biomasse micro-algale sont les
bassins et les photobioracteurs.
Les cultures dalgues lair libre reprsentent 10000 tonnes par an de matire sche. A grande
chelle, la production de masse se fait principalement l'aide de bassins de type raceway , de
toutes tailles (entre 1000 et 5000 m), en eau douce ou sale. Ils sont constitus de bassins clos, de
quelques dizaines de cm de profondeur, circulaires ou formant des boucles imbriques les unes
contre les autres.
Ces bassins sont les plus utiliss car ils permettent dobtenir les rendements les plus importants
en ce qui concerne les cultures lair libre. Linvestissement quils reprsentent et le besoin en main
duvre qualifie est moins important que pour les autres technologies de type photobioracteurs.

Mais mme sils sont largement utiliss dans le monde, les bassins de type raceway prsentent
des inconvnients : tant ciel ouvert, il est difficile de contrler les diffrents paramtres de
culture. De plus, ces systmes sont sensibles la contamination, soit par des espces locales qui
vont se dvelopper et remplacer lespce cultive (bactries), soit par des prdateurs (crustacs, ...).
Pour viter ces problmes, seules des espces extrmophiles poussant dans des milieux alcalins
(comme Spirulina) ou hyper salins (comme Dunaliella salina en Isral) sont cultives en plein air.
Les bassins peuvent aussi tre bchs. Pour toutes ces raisons, les bassins ne permettent quune
production extensive (la productivit est denviron 10 30 t/ha/an).
11

Bassins raceway

Les micro-algues peuvent tre galement cultives en bioracteurs (enceintes dans lesquelles
se droulent des interactions biologiques, utilises pour la production de biomasse, d'un mtabolite,
pour la conversion d'une molcule,...). Dans le cas des algues, on utilise des photobioracteurs,
construits dans des matriaux transparents laissant passer la lumire et autorisant les ractions de
photosynthse. Lclairage se fait partir de la lumire solaire ou artificielle avec des tubes
fluorescents. Il peut tre optimis avec un certain angle d'inclinaison du racteur.
Le principal avantage de cette technique est quelle permet de contrler les conditions de culture
(distribution et vacuation du CO2, de lO2, contrle du pH, de la temprature,), et aussi de
maintenir la strilit de la culture.
Les productivits atteignent environ 100 t/ha/an (alors que lon estime que la limite
thermodynamique de conversion photosynthtique est de 400 t/ha/an).
Les gomtries des photobioracteurs sont trs variables :
-Les photobioracteurs plats sont constitus de deux panneaux parallles transparents, avec une
mince couche de culture circulant entre les deux. Souvent, ces racteurs, de petits volumes, sont peu
utiliss dans le commerce et l'industrie, mais sont dominants pour les essais en laboratoire.
-Les photobioracteurs gomtrie cylindrique sont constitus dun ou de plusieurs tubes
transparents (en verre ou en plastique), agencs horizontalement ou verticalement, ou bien enrouls
en hlice, dans lesquels circule le milieu de culture. Ces racteurs peuvent contenir de 0,5 15 L
pour ceux utiliss en laboratoire, de 20 1000L pour ceux servant des tests en vue de
lindustrialisation, et plus de 1 000 000 L pour ceux utiliss en production industrielle. Parmi ces
derniers types de racteurs, les plus rpandus sont ceux de type colonne. Il existe aussi des
photobioracteurs de type tubulaire orients horizontalement ou verticalement.

12

Photobioracteurs plats, tubulaires, en colonnes


Notre visite au laboratoire de lIfremer (voque plus loin) nous a permis dobserver
directement des photobioracteurs tubulaires et en colonne. Ceux-ci fonctionnent en continu et
peuvent tre rgls de manire contrler un ou plusieurs paramtres la fois (jusqu six
paramtres) comme lintensit lumineuse, les nutriments, le pH, la temprature, etc

Photobioracteurs du laboratoire dIfremer


En terme de fonctionnement, les racteurs peuvent soit fonctionner en continu ou en
discontinu. De manire gnrale, les racteurs fonctionnent en continu, cest dire quils sont
aliments en permanence avec du milieu frais, tandis quune certaine quantit de biomasse produite
est soutire avec le mme dbit (pour garder le volume du racteur constant). Thoriquement,
aucune concentration ne varie au cours du temps dans le racteur. Dans le cas dun racteur
fonctionnant en discontinu : il faut alors mettre au dpart une quantit de nutriments dfinie dans le
milieu de culture ainsi quune certaine quantit de micro-algues que lon va laisser se multiplier
(leur concentration augmente dans le temps tandis que les concentrations en nutriments diminuent)
jusqu ce quelles atteignent une phase stationnaire de croissance, qui tmoigne de lpuisement du
milieu en lments nutritifs. Le racteur est finalement vidang et nettoy avant de dmarrer un
autre cycle. Les rendements sont cinq fois plus importants en continu quen discontinu daprs
Jean-Paul Cadoret, chercheur au laboratoire dIfremer.
13

Mais ces systmes prsentent plusieurs inconvnients. En effet, laccumulation d'O2, dchet
de la photosynthse, peut devenir toxique, du fait de laugmentation de pH qui en rsulte. Les
rayonnements UV passant travers les parois transparentes des racteurs, ainsi que llvation de
temprature, peuvent galement tre fatals. De plus, il est ncessaire davoir un systme d'agitation
par pompe, hlice, turbine, bullage magntique, circulation force ... pour limiter les dpts de la
biomasse sur la paroi (ce qui a pour consquence de diminuer la productivit). Enfin, ces techniques
sont plus volues et donc leur cot de revient est beaucoup plus lev que les cultures en bassin.
Dans le cas de notre projet, nous avons conduit une exprience de mise en culture de deux
souches de micro-algues appartenant deux genres diffrents. En raison des contraintes rencontres
et des moyens dont nous disposions, les algues ont t places en flacon de type Erlenmeyer sur une
table agitante dans un phytotron, ce qui quivaut une culture en systme clos de type bioracteur
en discontinu.

b) Influence du milieu
La croissance d'une culture de micro-algues est contrle par un trs grand nombre de
facteurs dont les plus importants sont la lumire (intensit et photopriode), le pH, les nutriments,
les concentrations en CO2 et O2 et l'tat physiologique. De ce fait, la recherche dune production de
biomasse algale doit passer par une modlisation de la croissance au cours du temps, en fonction de
diffrents paramtres d'tude.
Modlisation de la cintique de croissance algale :
La matrise de la cintique de croissance est galement importante. Les micro-algues sont capables
de se multiplier de manire rapide dans des conditions favorables. Leur croissance en culture suit un
dveloppement en 4 phases:
Une premire phase de latence, qui se traduit par une adaptation aux nouvelles conditions de
culture.
Une croissance exponentielle, o les cellules se multiplient au maximum de leur capacit. Elles
prsentent au cours de celle-ci leur meilleur profil nutritionnel.
Une phase stationnaire durant laquelle les micro-algues ont puis un ou plusieurs lments
nutritionnels ou ont relch des composs limitant la multiplication cellulaire.
Une dcroissance rapide, o la culture vient mourir du fait de la pollution du milieu; on parle de
crash .
D'un point de vue pratique, il convient donc de garder la culture en phase de croissance
exponentielle le plus longtemps possible. Ceci permet de bnficier dun matriel biologique en
14

abondance sans que la mortalit cellulaire ne soit importante.

Cintique de croissance des micro-algues : la croissance suit un dveloppement que lon peut
diviser en 4 phases distinctes.

Les diffrents paramtres dtude influenant le taux de croissance sont la lumire, la temprature et
les apports en azote et en phosphore.

Sur la souche Chlorella sorokiniana, Belkoura et Dauta (en 1992) ont ainsi mis en vidence
un taux de croissance maximal de 2,2 algues supplmentaires par jour, ce qui correspond 3,1
divisions par jour. Ces valeurs sont infrieures pour les Chlorella vulgaris, dont le taux s'lve une
algue en plus par jour (Piquemal, 1990). Le modle dfini pour le taux maximal de croissance est
confirm pour des algues d'un autre genre (Scenedesmus). De plus, les auteurs remarquent qu'un
clairement continu assure, certes, un taux maximal de croissance, mais qu'au-del de 12h
d'clairement, le rendement de production baisse par rapport la quantit d'nergie dispense la
culture. Il en dcoule alors, chelle industrielle, un surcot nergtique qui ne correspond pas un
gain substantiel de masse (comme nous pouvons le voir dans le graphique issu dune publication
ultrieure de Benider, Tahiri, Belkoura et Dauta, en 2001).
15

Les auteurs soulignent galement que les limites de leurs expriences sont lies au phnomne
d'auto-ombrage et aux carences en azote ou en phosphore.
Les influences de l'azote et du phosphore sur des micro-algues Porphyridium purpureum
sont releves dans les travaux de Joannis et al., (2007). Grce leurs rsultats, ces auteurs concluent
qu'il faut une quantit minimale d'azote initiale pour ne pas limiter la croissance micro-algale, sans
dpasser une quantit maximale pour ne pas l'inhiber. Quant au phosphore, la biomasse augmente
avec sa concentration jusqu atteindre un plateau pour une concentration initiale de 30mg.L-1 , ce
qui correspond 30 mg pour 0,2.109 cellules en dbut d'exprience biomasse.

Grce des modles prcis de l'volution de la population algale, reposant sur des paramtres
externes, nous pourrions optimiser les rendements de production de biomasse algale.
c) Facteurs permettant daugmenter la synthse lipidique
Chez certaines espces, il est possible d'augmenter significativement la production de lipides
par un stress. Les stress identifis peuvent tre de diffrentes natures (Sheehan et al., 1998).
Les conditions de carence en azote sont connues pour stimuler la production de lipides. Pour
les diatomes, une limitation par la silice conduit galement la production de lipides. L'augmentation soudaine de l'intensit lumineuse produit un effet similaire. Enfin, un choc thermique, de mme
qu'un choc osmotique stimule galement la production de lipides (Takagi et al., 2006), mais il
semble que ces deux derniers stress favorisent davantage les lipides polaires (phospholipides et glycolipides) associs aux membranes cellulaires.
Les teneurs en lipides (qui seront alors principalement constitues de triglycrides) sont considrablement accrues et peuvent atteindre 80% de la matire sche (Metting, 1996). Ces conditions
de fortes productivits ne peuvent toutefois pas tre maintenues pendant de longues dures : elles
conduisent le plus souvent un arrt de la croissance, puis, aprs un laps de temps, la remobilisation des rserves lipidiques ainsi produites.
16

L'optimisation de la productivit en lipides doit donc passer par un compromis entre croissance
(donc sans carence) et production d'huile (avec un stress ralentissant la croissance). Huntley et Redalje (2006), proposent une manire d'optimiser la production de lipides chez Haematococcus pluvialis en deux tapes : une croissance en photobioracteurs permettant d'atteindre des rendements
levs et de limiter les sources de contaminations de la culture. Cette phase de croissance est suivie
de 2 jours de carence en tang dans lequel les micro-algues sont limites par l'azote.
Le programme franais de production de biocarburant issu de micro-algues, soumis l'ANR
(dans le cadre du Programme National de Recherche sur les Biotechnologies) nomm SHAMASH
cherche tester tous les facteurs possibles permettant d'optimiser la production de lipides par les
micro-algues ceci afin de produire des biocarburants lipidiques
Voici notamment les facteurs sur lesquels la communaut scientifique sest focalise dans le
cadre de ce projet :
1- Carence en azote (N)
Naturellement, les algues produisent assez peu d'huile. Pour parvenir leur faire accumuler
70% de leur poids sec en acide gras, il faut les stresser, explique Olivier Bernard, chercheur
l'INRIA de Nice. En effet, une carence en azote provoque dans le milieu de culture dsquilibre la
proportion d'azote et de carbone que l'algue a l'habitude d'absorber en continu dans ses cellules. Ce
dsquilibre a pour consquence un stockage du carbone, sous forme d'huile.

17

D'aprs le graphique, la teneur en acides gras reste quasiment nulle en absence de nitrates
alors qu'en condition normale celle-ci augmente au cours de la culture. Cependant, on observe un
pic de production de lipides lors de la priode de carence qui est d'autant plus accentu lorsque la
carence se fait rapidement et court terme. Les plus fortes concentrations (1-2 mM) sont plus
efficaces que 0,5 mM pour la production de lipides.
2- Stress lumineux
D'aprs l'exprience dcrite dans l'tude sur l'influence du stress lumineux sur la teneur en acide
gras de Dunaliella salina (bulletin de la Socit de Pharmacie de Bordeaux, 2007), il y a une adaptation des micro-algues au stress lumineux. En effet, en rponse ce stress, elles produisent davantage d'acides gras saturs mais les acides gras polyinsaturs reprsentant toujours environ le double
des saturs. Les acides gras les plus reprsents tant l'acide palmitique (16:0, 32,2 %), suivi des
acides linolnique (18:3, 24,0 %), linolique (trans-18:2, 15,2 %), hexadcattranoque (16:4, 7,3
%), olique (trans-18:1 5,8 %), hexadcanoque (cis-16:2, 3,4 %) et starique (18:0, 2,0 %). Cependant, suite ce stress, elles rintgrent en 24 heures leur teneur initiale en acides gras.
3- Choc thermique
Un brevet de Procd de production slective de lipides polyinsaturs partir d'une culture de
Porphyridium cruentum a t dpos pour une invention permettant la mise en place d'un choc
thermique sur une culture de micro-algues :
En effet, la teneur en acides gras polyinsaturs l'intrieur des micro-algues varie fortement en
fonction des conditions de temprature. Un choc thermique appliqu la biomasse de micro-algues
pendant un temps donn, est un cart thermique par rapport la temprature de culture dans le photobioracteur, de faon modifier l'insaturation des acides gras des lipides.
Une diminution de temprature allant jusqu 4C-15C environ, permet dobtenir des lipides
plus insaturs alors quune augmentation de temprature allant jusqu 40C environ, permet
dobtenir des lipides moins insaturs.
4- Choc osmotique
Une augmentation de la salinit dans un milieu aqueux est l'origine d'un milieu hypertonique qui
constitue un choc osmotique pour des micro-algues marines. Ainsi, la production cellulaire d'acides
gras totaux augmente avec la quantit de sel. Au 20me jour de culture, elle est de 50 g/ml pour 10
% de sel contre 250 g pour 30 %.

18

Ainsi, la micro-algue rpond au stress osmotique par rgulation du flux de carbone entre la synthse d'amidon dans le chloroplaste et la production de glycrol (CH2OH-CHOH-CH2OH) dans le
cytoplasme. Le glycrol intracellulaire sert quilibrer osmotiquement le sel extracellulaire. Dans
les organismes vivants, le glycrol est un composant important des glycrides (graisses et huiles) et
des phospholipides.

C. Extraction
a) Protocoles d'extraction des lipides
1- L'extraction: un dfi
La production de biocarburants partir des micro-algues est souvent cite dans les mdias,
mais elle compte encore de nombreux dfis relever. Lun des premiers challenges consiste
identifier les micro-algues les plus riches en lipides parmi les millions d'espces existantes. En effet,
actuellement trs peu de travaux ont t ralis dans le domaine de la slection de souches de
micro-algues les plus efficientes pour la production de lipides en rponse des stress. Un second
dfi prendre en compte est loptimisation de lextraction des lipides qui demeure une tape encore
trop nglige. Les techniques de pressage froid sont en effet inefficaces: les rendements ne sont
que de 70% (Guillaume Calu, 2006, Biodiesel et Microalgues). Lextraction de lhuile est ralise
lhexane, ce qui nest comptitif ni au niveau conomique ni au niveau environnemental. Des
recherches sur lextraction sont actuellement en cours : la socit Valcobio, un des partenaires du
projet Shamash, travaille sur des techniques dextraction sans produits toxiques.

19

2- Exemple de protocole dextraction en laboratoire


Un protocole d'extraction a t dcrit par Zhu et al. (2002). Il s'agit d'une modification de la
mthode d'extraction par voie humide de Bligh et Dyer (1959). Les cellules sont rcoltes par
centrifugation 8500 tr/min pendant 5 min et laves une fois avec de l'eau distille. Aprs schage,
les chantillons sont broys dans un mortier et extraits par un mlange de chloroforme: mthanol
(2:1, v/v). Aprs agitation mcanique de l'chantillon pendant 5 h et des ultrasons pendant 30 min,
les chantillons sont centrifugs 3000 tr / min pendant 10 min. La phase solide est spare avec
soin en utilisant un papier filtre. La phase solvant est vapore dans un vaporateur rotatif sous vide
60C. La procdure est rpte trois fois jusqu' ce que la totalit des lipides soit extraite.
b) La trans-estrification
Il existe plusieurs ractions permettant de transformer l'huile extraite en carburant. La
technique la plus utilise tant la trans-estrification, qui fait ragir l'huile avec un alcool (mthanol
ou thanol), afin d'obtenir du EMHV (Esters Mthyliques d'Huiles Vgtales, ou Biodiesel). Une
tonne d'huile avec 0,1 tonne de mthanol produit une tonne d'EMHV et 0,1 tonne de glycrine en
prsence d'un catalyseur alcalin. L'algo-carburant obtenu est utilis seul dans les moteurs ou
mlang avec du diesel issu du ptrole. Lquation chimique de la raction de trans-estrification est
la

suivante :

1 mol de trilinolate de glycryle + 3 mol de mthanol --> 3 mol d'E.M.H.V + 1 mol de glycrol.

Cette technique est aussi utilise pour transformer d'autres huiles vgtales en biocarburants,
elle permet de rutiliser le mthanol et d'extraire le glycrol qui a de nombreux usages notamment
en cosmtique.

20

Les huiles extraites de micro-algues diffrent des huiles de vgtaux suprieurs par leur teneur
nettement suprieure en acides gras poly-insaturs (Olagineux, Corps gras, Lipides 2004, vol 11, p
118-121). Les acides gras et les esters mthyliques possdant 4 ou plus doubles liaisons risquent de
soxyder lors de leur stockage et de rduire lacceptabilit de lhuile. Linsaturation totale est
dailleurs limite pour les standards europens: le biodiesel utilis pour les transports et les huiles
de chauffage ne doivent pas dpasser un indice d'iode de respectivement 120 et 130. Les huiles de
micro-algues peuvent tre traites par hydrognation catalytique (cette technique est communment
employe pour obtenir de la margarine partir dhuiles vgtales insatures).
D. Exprimentation au laboratoire Agronomie et Environnement (LAE) de lENSAIA
Nous avons tudi au laboratoire la croissance et la production de lipides des deux espces de
micro-algues suivantes :
- Chlorella vulgaris (provenant de lIfremer), micro-algue deau douce;
- Nannochloropsis salina (provenant de lalgothque de Caen), micro-algue deau de mer.
Ces deux espces ont t cultives dans un milieu minral (Conway) dont la composition est donne
en annexe 2. Pour les deux espces, un inoculum initial de 5ml a t introduit dans 250ml de
Conway. Dans le cas de Nannochloropsis salina, le milieu de Conway utilis a t amend avec du
21

sel (NaCl, 33g/L).

Aprs deux semaines de culture en agitation 20C (photographie), une extraction de lipides a t
ralise sur les volumes suivants :
120ml de Nannochloropsis salina, pour une densit de 11,68.106cellules/ml
235ml de Chlorella vulgaris, pour une densit de 13,52.106 cellules/ml
Lextraction des lipides a t ralise selon le protocole suivant :
-

La suspension cellulaire est filtre sur Buchner (filtre Whatman GFC, diamtre 70 mm).

Chaque filtre sec est remis dans 250ml dun mlange de chloroforme/ mthanol (150/(75)).

Une agitation longue est ralise pour extraire les composs hydrophobes : lipides et chlorophylle.

Une filtration sous vide sur verre n4 est ralise.

Aprs filtration : on retient les dbris cellulaires.

Enfin, on utilise un vaporateur rotatif pour sparer les composs.

22

Aprs filtration sur verre

vaporateur rotatif

Lhuile rcupre est conserve -20C dans une solution chloroforme/mthanol.

On analysera les diffrents types acides gras par Chromatographie Phase Gazeuse. (analyses en
cours ce jour)

III.

La filire micro-algues, la recherche et les projets en cours

A. Projets et rflexions au niveau local:


Le projet que nous avons men nous a permis davoir des contacts avec diffrentes personnes
la fois des chercheurs, des acteurs du dveloppement local et dautres tudiants notamment dautres
coles que lENSAIA.
a) Etude mandate par le Val de Lorraine, Conseil de Pays
Le Conseil de Pays du Val de Lorraine est le regroupement la fois dlus, de chefs
dentreprises, de responsables associatifs et dindustriels qui, ensemble, dfinissent et mettent en
uvre un projet concret de dveloppement et damnagement durable du territoire lorrain. Nous
avons donc eu contact avec Mr Eric Deletang, charg de dveloppement local au sein du Conseil,
qui a commandit nos recherches sur la filire micro-algues.
Dans le cadre de leur projet de 3me anne, les lves de la spcialit Gestion des Activits
Innovantes et Nutrition (GAIN) ont eu pour sujet l'tude technico-conomique de la prennit d'un
projet d'implantation d'une filire de valorisation des micro-algues dans la rgion Est. L'objectif de
la filire tant la cration d'activit conomique dans la rgion mais galement l'inscription de la
rgion Lorraine dans la tendance environnementale. Leur projet sest inscrit dans ltude de
faisabilit commandite par la communaut de communes du Val de Lorraine auprs dAgria
Lorraine.
Les grandes conclusions de leur tude ont t les suivantes :
23

Une valorisation en tant qu'agro-carburant ne serait pas rentable en Lorraine du fait du


manque d'ensoleillement et dun cot d'extraction encore trop lev.

Une valorisation plus abordable serait celle par mthanisation (permettant indirectement la
rcupration de chaleur et d'lectricit par combustion). Mais ce processus impliquerait une
production directement dans le digesteur afin d'viter la phase de rcolte (qui nuit la
rentabilit).

La valorisation par la filire aquacole (avec la nutrition des levages piscicoles) est en plein
essor notamment au travers de diverses commissions travers la France.

La valorisation par les industries alimentaires et cosmtiques reste trs intressante car elle
consiste en la production de molcules forte valeur ajoute.

b) Projet Mines en Lorraine


Des tudiants de lEcole des Mines de Nancy ont souhait prendre contact avec nous car
notre projet sur la filire micro-algues les intressait. En effet, dans le cadre du trophe du
Dveloppement Durable, ceux-ci participent au projet : tude de faisabilit dun cycle nergtique
Micro-algues-huile sous la direction de lArtem. Nous nous sommes donc rencontrs pour
discuter et changer sur nos projets respectifs.
Le but de leur projet est de dvelopper une technique efficace de rduction d'mission de
CO2 dans l'atmosphre pour le compte d'une grande entreprise (Solvay). Il s'agit de remplacer le
charbon utilis actuellement par des micro-algues olagineuses pour faire de la cognration
chaleur-lectricit.
Pour eux, les micro-algues reprsentent une source d'nergie d'origine vgtale abondante et
se renouvelant un rythme rapide. Ceci permet, d'une part, d'pargner la mme quantit d'nergie
fossile et, d'autre part, d'viter le rejet de la quantit correspondante de CO2 d'origine fossile dans
l'atmosphre. Dautant plus que le CO2 dgag est utilis comme lment nutritif ncessaire pour la
culture des micro-algues.
Ils nous ont expliqus les diverses actions quils doivent mettre en uvre pour leur projet
dans diffrents domaines.
1 Etudier les installations actuelles avec un industriel pour bien connatre les effluents et
dimensionner les besoins.
2 Etudier l'abondante littrature sur les micro-algues olagineuses pour dterminer l'espce la
mieux adapte aux besoins dfinis en 1.
3 Elaborer un schma prcis des installations mettre en uvre et le proposer l'industriel.
24

4 Analyser et chiffrer le projet dans ses dimensions physiques, ses dimensions en terme de flux et
dans ses cots d'investissement et de fonctionnement.
5 Identifier les limites techniques, financires et humaines du projet
De plus, ils nous ont signals que ctait un projet de grande ampleur ncessitant beaucoup
de temps pour bien s'assurer de l'efficacit relle du systme en terme de cots, d'conomie de
combustible fossile et de rejets de gaz effet de serre.
Les interrogations de ces tudiants, plutt spcialiss en industrie et gnie des procds,
concernaient essentiellement les potentialits du matriel biologique. Nous leur avons ainsi donn
des indications plus avises sur la bibliographie concernant la croissance et le contenu lipidique des
micro-algues. Ils ont ainsi notamment appris (i) qu lheure actuelle aucune espce de micro-algue
na t choisie au niveau de la communaut scientifique comme modle pour une valorisation
optimale du CO2, (ii) que lassimilation ntait pas totale car un certain taux le CO2 devient
toxique pour les micro-algues, (iii) que toutes les algues ntaient pas quivalentes pour la
production dhuiles vgtales et de co-produits (tourteaux), (iv) que beaucoup de recherches taient
encore en cours notamment en terme de slection despces vu la grande diversit des micro-algues
existant dans les diffrents cosystmes naturels.
Le plan de leur projet est prsent sur la figure suivante :

25

Dans le schma de leur projet industriel, les micro-algues arrivent en bout de chane pour
permettre la rgnration du CO2 en O2 par le biais de la photosynthse. Celles-ci seraient par la
suite sches, grce la chaleur produite par le brlage des dchets vgtaux et organiques, et
permettre ainsi aprs extraction, la production de tourteaux, huile vgtale pure et algo-carburants.
En conclusion, les micro-algues apparaissent comme une ressource particulirement
prometteuse pour un cycle nergtique propre. Les difficults semblent plutt lies aux techniques
de production et de transformation des micro-algues. Cette ressource renouvelable est donc
lorigine dun vritable dfi pour de nombreuses filires industrielles.

B. LIFREMER et le projet SHAMASH au cur du dveloppement de la technologie des


micro-algues
a) Le projet SHAMASH
Le projet SHAMASH a permis de fdrer les quipes franaises sur le sujet des micro-algues pour
la production de biocarburants. Depuis dcembre 2006, ce projet regroupe huit quipes et
26

entreprises franaises avec de nombreux spcialistes (des spcialistes de la culture, de la


physiologie et de lutilisation des micro-algues, des spcialistes de loptimisation des procds de
biotechnologie, des spcialistes des biocarburants, de lextraction et de la purification des lipides). Il
avait pour objectif de produire un biocarburant sous forme dester de mthyle partir de microalgues autotrophes laide dun budget de 2,8 millions deuros. Ainsi de 2006 2009 (fin du
projet), la France a dpos 8 publications, dont 5 sur lamlioration des micro-algues et 3 brevets.
b) LIFREMER, lexpert franais des micro-algues
LIFREMER de Nantes organisme rattach au Ministre de la Recherche- a pour but
daccumuler des connaissances sur les micro-algues pour pouvoir en produire en qualit et quantit
constante. On y amliore et slectionne aussi certaines souches. Dans ses laboratoires, une
importante algothque et les tous nouveaux bioracteurs accompagnent les scientifiques dans leurs
recherches.
Jean-Paul CADORET, directeur du laboratoire Physiologie et Biotechnologie des Algues en lien
avec le projet ANR ( Production de biocarburants lipidiques par des micro-algues ) nous a
accueilli le 11 mars 2010 au sein de son laboratoire. Cette visite a dbut par une confrence
rsumant ltat actuel des recherches sur les micro-algues et limmense potentiel quelles possdent
pour le futur. En effet selon lui, les micro-algues ont de nombreux atouts pour la production de
biocarburants comme nous lavons vu prcdemment- mais aussi dans dautres secteurs comme
les industries alimentaires, la sant, les cosmtiques et lenvironnement (dpollution). Pourtant elles
sont encore trs mystrieuses, nous sommes au XIXme sicle de la culture des micro-algues et il
nous reste tout dcouvrir leur sujet . Par la suite, nous avons pu visiter les laboratoires de
recherche et les diffrentes installations. Nous avons pu enfin voir des productions de biomasse en
photobioracteurs et mme repartir avec un inoculum dune souche de micro-algue pour notre
propre exprimentation. Ainsi Jean-Paul CADORET sest montr tout au long de la journe
passionn et pdagogue, et sa rencontre fut trs enrichissante pour notre projet.
Cette entrevue, en plus des apports de connaissances sur les micro-algues, nous a permis
dchanger avec lui sur le mtier de chercheur et sur son parcours professionnel trs atypique. En
effet, il a pass tout dabord une dizaine dannes comme technicien puis responsable dune
entreprise daquaculture. Puis entre 1988 et 2001, il a intgr lIfremer en tant que technicien, puis
cadre et chercheur dans un laboratoire sur la pathologie puis limmunologie des hutres (comment
se dfendent-elles lorsquelles se font attaquer et pourquoi se dfendent-elles si bien alors quelles
nont pas danticorps?).
Dans son parcours, le plus surprenant a t ses rencontres : cest en Australie quil apprend que
27

lIfremer Nantes recherche un spcialiste en biologie molculaire. Il revient donc aux sources
Nantes et intgre le Laboratoire de Physiologie et Biotechnologie des Algues. Il cre son quipe
Nantes en 2001 et dirige le laboratoire partir de 2005. Cest ainsi que lentreprise de
biotechnologie Algenics se cre tout naturellement en 2008 sur un sujet clair Comment utiliser les
algues comme usine cellulaire pour fabriquer des mdicaments . Depuis presque deux ans,
lentreprise compte 13 salaris.
C. Autres projets dans le Monde
Aujourdhui, de nombreux projets et initiatives de recherches sont en cours lchelle mondiale
pour optimiser la production de micro-algues et de lipides. Tous les projets semblent vouloir
minimiser au mieux les impacts ngatifs (contamination des eaux, sensibilit certains facteurs
environnementaux). Certains pays sorientent plus particulirement sur la slection de microalgues par rapport leur potentiel de rendement par des techniques de slection classique jusquaux
manipulations gntiques. Ainsi, travers le monde, de nombreuses quipes de chercheurs se
livrent une lutte sans merci pour trouver la souche de micro-algue la plus rentable et la plus
performante.
Le tableau ci-aprs rsume la particularit des projets au niveau international :
Pays

Particularits des principaux projets

Etats-Unis

Sapphire Energy (2008) :

Le mieux financ dans le monde (Bioentreprise prive)

Utilisation d'OGM

La biomasse obtenue serait une mixture dite "ptrole synthtique vert"


PetroSun (2001) :

Plus vaste projet de type bassins/ raceways en cours de construction

Compagnie ptrolire en conversion

Projet en Chine
GreenFuel (2001) :

Plus soutenue et srieuse initiative avec photobioracteurs

But : Rduire les taux de NOx et de CO2 tout en produisant de la biomasse algale

Angleterre

Carbon Trust (2001)

La plus grande initiative publique avec un budget de 50 000 millions de dollar

Objectif ferme de concrtisation de machines fonctionnelles d'ici 2020

CO2 probablement issu de sources auxiliaires

France

Japon
Canada

Shamash (2007-2010)

Projet d'une vaste importance en France

Budget de 2,8 millions d'euros pour 3 ans

Universit Tsukuba : Recherche avance sur Botryococcus (souche prometteuse qui a la particularit
dexporter les lipides lextrieur de la cellule)
Projet SRCA (Systme de Recyclage du Carbone par les Algues) :
Systme hybride de bassins ouverts et de serres alimentes par des capteurs photovoltaques

28

IV.

Faisabilit pour le futur

A. Limites rencontres
De prime abord, contrairement aux biocarburants de 1re gnration, la culture de microalgues napparat pas concurrentielle en terme dutilisation de terres arables, qui restent ainsi
disponibles pour les cultures alimentaires. Pour cette raison, la production dalgo-carburant suscite
lintrt et lespoir des chercheurs. Cependant, certaines limites entravent le dveloppement et la
mise sur le march de ces algo-carburants.
Lun des plus gros problmes rsoudre pour obtenir une production qui permettrait de
saffranchir des nergies fossiles reste le manque de surface. En effet, pour remplacer 50 tonnes de
ptrole en France, la culture dalgues ncessiterait environ 1 077 000 ha de culture en zone humide,
ce dont nous ne disposons pas actuellement.
Autre problme important: le cot de tous ces procds. Il est bien plus lev que pour
lutilisation de ptrole. Ces problmes viennent la fois de la production de micro-algues, de
l'extraction des lipides et du schage de l'huile qui consomme de lnergie. Les infrastructures, le
transport de la biomasse, la main d'uvre et les cots d'exploitation en nergie viennent s'ajouter
aux frais, augmentant ainsi le prix de revient. L'un des objectifs des chercheurs est de rduire au
maximum ce cot car pour l'instant le prix d'un litre d'algo-carburant est d'environ 10 euros. La
difficult pour concentrer les micro-algues augmente encore le prix du carburant.
A l'heure actuelle, il est difficile davoir des ides prcises sur le cot de leur culture
grande chelle car il faut souvent se baser sur les chiffres quon obtient partir de la production sur
quelques mtres carrs et extrapoler plusieurs hectares. Les cots peuvent atteindre 70 dollars par
kg de matire sche. Les systmes de type raceway permettent d'obtenir les cots les plus faibles,
cependant, le rendement est relativement peu lev par rapport la culture en racteur. La
production de biocarburants partir de micro-algues ne peut tre rentable que si elle est associe
un systme de dpollution (consommation de nitrate, ammonium et phosphate, CO2) et la
production de coproduits valorisables drivs de la biomasse.
En outre, quelques problmes environnementaux peuvent galement se prsenter : mme si
les algo-carburants produits partir de biomasse micro-algale pourraient compenser lpuisement
en nergie fossile, les pertes en eau dues lvaporation lors de la culture en bassin de type raceway
peuvent tre importantes, ce qui amne en consommer de grandes quantits. De plus, les
substances utilises dans le milieu de culture des algues sont toutes normalement non polluantes et
non toxiques, mais les micro-algues peuvent concentrer les mtaux lourds et cela pose un problme
29

de dpollution si elles sont associes un systme dpuration.


Une autre limite concerne la protection des milieux de vie aquatique d'une contamination
ventuelle par des micro-algues extrieures. En effet, comme tout vgtal, une micro-algue peut tre
gntiquement modifie, le risque majeur serait d'introduire une algue modifie dans l'ocan car la
propagation du nouveau caractre au sein des algues marines ne pourrait tre stoppe. Ainsi les
algues marines naturelles seraient menaces de disparition en tant modifies leur tour. De plus, la
croissance d'une population micro-algale peut conduire une surpopulation et la mort de celle-ci.
Sa dcomposition dans le fond va conduire une diminution du taux d'O2 dans l'eau et une
hypoxie voire une anoxie. Ainsi de nombreux poissons, crustacs et coquillages peuvent mourir.
Des effets mcaniques existent aussi: les branchies peuvent tre obstrues par le mucus produit ou
altres par les excroissances de certaines espces phytoplanctoniques. Enfin, certaines espces
excrtent des toxines qui peuvent aussi causer la mort d'organismes marins et entraner des maladies
chez l'Homme par ingestion de produits de la mer contamins (diarrhes, amnsie, paralysie selon
les types de toxines).
B. Autres valorisations.
L'utilisation des micro-algues pour produire des biocarburants ne valorise quune partie
seulement des constituants de ces cellules, leurs lipides. D'autres substances biochimiques produites
par celles-ci prsentent des avantages et des possibilits d'utilisations dans des domaines divers tels
que la sant, la pharmacologie et la cosmtologie. De plus, la mise en place de co-produits issus de
ces micro-algues pourrait tre une solution pour rduire les cots de production des algo-carburants
encore levs ce jour. Ce qui suit est donc une prsentation de quelques exemples des diffrentes
utilisations possibles des micro-algues elles-mmes, ainsi que de certaines de leurs molcules.
a) Industries alimentaires
Les algues sont trs utilises dans l'industrie alimentaire, notamment pour leurs proprits
paississantes, glifiantes et en tant qu'additifs. Les micro-algues aussi peuvent tre utilises. En
effet, celles qui possdent des carotnodes, dont le bta-carotne ou l'astaxanthine (par exemple
Dunaliella ou Haematococcus), sont utilises en tant que colorant dans divers produits comme les
glaces, les jus de fruits, le beurre, la margarine ou encore dans l'enrobage de tablettes. Egalement,
on peut citer l'additif E160a qui peut tre obtenu grce Dunaliella. Les micro-algues sont aussi
source de vitamines.
b) Utilisations agronomiques
1- Alimentation animale
Les micro-algues sont la base du rseau trophique en milieu marin. De ce fait il apparat
30

qu'elles peuvent tre intgres l'alimentation en aquaculture marine. Elles sont notamment
utilises dans les levages de bivalves et pour les larves de poissons et de crustacs. Ce sont
notamment leurs nombreux acides gras insaturs qui aident la croissance des jeunes larves. Ces
micro-algues (mortes) sont fournies sous forme de ptes de micro-algues ou de micro-algues
sches. Il semble cependant que ces micro-algues mortes soient utilises essentiellement en tant que
complment de l'alimentation donne habituellement ou en tant que supplment quand il n'y a pas
suffisamment d'algues vivantes. En effet, ces algues sches ont des valeurs nutritionnelles plus
faibles que les vivantes et sont peu disponibles dans le commerce. Les micro-algues vivantes
apportent plus de bnfices dans l'alimentation des levages marins que lorsqu'elles sont sches.
De plus, il existe une flore bactrienne naturelle avec la culture des micro-algues qui a t prouve
bnfique pour la sant des mollusques. Enfin, l'utilisation de levures et de bactries dans
l'alimentation de ces levages donnent des rsultats beaucoup moins bons en apports nutritionnels
qu'avec des micro-algues. Les micro-algues vivantes apparaissent comme le meilleur choix dans les
conditions d'levages, pour apporter des valeurs nutritives leves, prsenter des proprits
physiques appropries et fournir un environnement sain l'levage.
On peut par exemple citer Isochrysis galbana et Tetraselmis suecica qui sont considres comme la
meilleure nourriture pour les larves de bivalves.. Les carotnodes prsents prcdemment ont
aussi des applications dans l'levage puisqu'ils amliorent l'tat de sant gnral des animaux. Ils
sont aussi un supplment vitaminique chez les volailles. En aquaculture, ils favorisent la qualit et
la survie des larves de crevettes et sont utiliss dans l'levage et la coloration des saumons.
2- Engrais
Les micro-algues apparaissent galement comme de bons fertilisants des sols pauvres
puisqu'elles apportent notamment du potassium, de l'azote, lments essentiels la croissance
vgtale. Elles permettent aussi de capturer et de garder l'humidit. Enfin, elles acclrent la pousse
des cultures et les protgent en limitant la prolifration des piphytes (organismes vgtaux qui
croient et vivent sur d'autres vgtaux sans se nourrir leurs dpens) et des parasites.
c) Alimentation humaine
Certaines micro-algues sont sources de matire alimentaire haute valeur nutritive en
vitamines, protines, sucres et lipides, produits en grande quantit et utilisables par l'homme.
Notamment les Diatomes, la Chlorelle et la Spiruline sont consommes (sous forme de
complments alimentaires). Par exemple, la Spiruline est forme par 60 68% de sa matire sche
en protines (elle est donc bnfique pour des rgimes alimentaires dsquilibrs en protines), 19%
de glucides, 3% lipides (dont des omga-6), du fer et des vitamines A, B2, B6, B12. Voici des
31

valeurs d'apports nutritifs fournies pour la Spiruline:


Valeurs nutritives de 10g de matire sche de Spiruline
(AJR: apports journaliers recommands)
Vitamine A
Vitamine E
Vitamine B1
Vitamine B2
Vitamine B3
Vitamine B5
Vitamine B6
Vitamine B12
Vitamine K
Calcium
Phosphore
Magnsium
Fer
Zinc
Cuivre
Manganse
Sodium
Potassium
Protines
Acides gras essentiels
Phycocyanine 1500mg
Valeur nergtique
Source
tableau:
(18/12/09)

14mg
1mg
0.4mg
0.4mg
1.4mg
0.01mg
0.08mg
0.03mg
0.20mg
70mg
80mg
40mg
15mg
0.3mg
0.12mg
0.5mg
90mg
140mg
6 8g
Acide linolique (omga-6) 80mg
Chlorophylle 110mg
160kJ

100% des AJR


10% des AJR
30% des AJR
30% des AJR
8% des AJR
0.1% des AJR
4% des AJR
100% des AJR
100% des AJR
8% des AJR
8% des AJR
15% des AJR
100% des AJR
2% des AJR
6% des AJR
15% des AJR
-- des AJR
4% des AJR
Acide gamma linolique 100mg
Carotnodes 37mg

http://www.spirulinestaugustin.com/analyse-valeurs-nutritionnelles.html,

La Spiruline est la micro-algue la plus connue pour ses nombreuses proprits. Grce cellesci, de nombreux scientifiques pensent que la Spiruline serait la rponse apporter pour lutter contre
la malnutrition qui touche les pays les plus pauvres. D'ailleurs, un texte des Nations Unies traite de
l'utilisation des micro-algues alimentaires pour lutter contre la malnutrition aigu dans les situations
d'urgence humanitaire et favoriser le dveloppement durable.
Les omga-6 (en particulier l'acide linolique) sont aussi produits par certaines micro-algues
(Spiruline). Ces acides gras ne sont pas synthtiss chez l'homme ni chez les animaux et pourtant ils
sont essentiels au bon fonctionnement de l'organisme. En effet, ils initient les processus
inflammatoires essentiels pour lutter contre les infections, cicatriser des blessures, ou encore
permettre la synthse d'hormones thyrodiennes, entre autres fonctions mtaboliques. Ces omga-6
peuvent galement se trouver dans la viande, les volailles, les huiles vgtales et les fruits coque.
32

Ainsi, consommer des micro-algues peut assurer l'approvisionnement en omga-6.


d) Energie et environnement
Certaines micro-algues ont la capacit de produire de l'hydrogne grce des enzymes, les
hydrognases, lors de la photosynthse. Or cet hydrogne peut tre utilis comme biocombustible et
ainsi servir de source d'nergie propre et renouvelable. Des recherches sont menes pour augmenter
la production de cet hydrogne, grce aux domaines de recherche en biologie structurale, en gnie
gntique et ingnierie des protines.
Les micro-algues semblent pouvoir servir dans des usines de traitement d'eaux uses. En
effet, l'addition de micro-algues dans des eaux uses ne contenant ni mtaux lourds ni radioisotopes,
peut attnuer les impacts des effluents de ces eaux et des dchets industriels azots. De plus, en
enlevant de l'azote et du carbone de l'eau, les micro-algues peuvent aider rduire l'eutrophisation
de certains milieux aquatiques (eutrophisation: enrichissement en sels minraux (d'un milieu
aquatique) qui entrane un dsquilibre cologique).
Elles sont galement source de biomatriaux comme l'amidon qui peut servir la fabrication
de plastiques recyclables.
Les possibilits d'utilisation des micro-algues sont donc nombreuses et varies, en plus de la
production d'algo-carburants. Des recherches sont en cours notamment sur les pigments dans la
lutte contre le cancer (Laboratoire de l'IFREMER de Nantes). Il faudrait galement tudier des
techniques permettant de rcuprer d'autres substances des micro-algues aprs que leurs lipides
aient t extraits, afin de recycler ces microorganismes pour plusieurs utilisations et ainsi diminuer
les cots de production des algo-carburants par la valorisation de co-produits.

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CONCLUSION

Partout dans le monde, l'intrt pour les micro-algues est de plus en plus grand et ce dans
divers domaines tels que les biocarburants de troisime gnration, la pharmacologie, la mdecine
et l'aquaculture. En effet, elles prsentent un rendement photosynthtique lev et permettent ainsi
un fort recyclage du CO2 industriel. Leur utilisation comme source dnergie permet aussi dviter
les comptitions pour leau potable et les surfaces cultivables.
Mme si les micro-algues prsentent tous ces avantages, de nombreux dfis sont encore
relever afin d'augmenter la production de biomasse et celle dnergie. De plus, les cots de
production et d'extraction de lipides restent encore trop levs pour pouvoir remplacer lheure
actuelle les nergies fossiles par les biocarburants de troisime gnration. La production de
molcules hautes valeurs ajoutes, issues des rsidus dextraction, pour lindustrie en gnral ou
lutilisation de la biomasse algale en mthanisation ou pisciculture semblent tre les seules solutions
lheure actuelle permettant de rentabiliser les algo-carburants.
La ralisation de ce projet au cours de cette anne nous a permis dapprendre ce quest le
travail de groupe, la recherche bibliographique, la prise de contact avec le milieu scientifique et
professionnel. Son droulement a ncessit que nous gardions une motivation intacte et constante
malgr les difficults rencontres.

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REMERCIEMENTS

Notre groupe de projet professionnel tient remercier en tout premier lieu Sverine Piutti,
professeur et matre de confrence lENSAIA, qui a supervis le droulement de ce projet. Tout au
long de cette anne, elle a su orienter nos recherches et nous rediriger dans les moments de
dispersion. Sa bonne humeur et ses encouragements nous ont permis de garder notre vitalit et notre
envie davancer lors du projet.
Nous remercions tout particulirement Jean-Paul Cadoret, directeur du laboratoire
Physiologie et Biotechnologie des Algues lIFREMER de Nantes pour nous avoir accueilli au sein
de son laboratoire et accord un peu de son temps prcieux de chercheur. De plus, il nous a permis
de mettre en place nos exprimentations grce au don dun inoculum de micro-algues. Sa rencontre
fut trs enrichissante pour notre projet.
Un grand merci M. Christophe Schwartz et lAdministration de lINPL pour leur soutien
financier lors de notre visite lIFREMER.
Certaines personnes du groupe ont galement eu le plaisir de collaborer avec M. Michel
Linder pour lextraction et lanalyse des lipides.
Nous tenons aussi remercier M. Laurent Fordoxcel, Responsable des Aquariums au
Musum Aquarium de Nancy pour le don de vitamines.
Enfin, nous voudrions remercier les groupes dtudiants de GAIN en 3me anne de
lENSAIA et le groupe ARTEM de lEcole de Mines pour leur apport dinformations et de
complments nos recherches.

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SOURCES

Sitographie
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36

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paille, http://biocarburant.over-blog.com/article-dong-energy-se-lance-dans-le-biocarburant-tirede-la-paille-40101435-comments.html (18/05/09)
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Bibliographie
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Projet ANR-PNRB

38

ANNEXE 1

Les microalgues
Les microalgues: Une diversit
Microalgues rouges

Microalgues vertes

Diatomes

Microalgues brun/or

Dinophyce
Microalgues dores

Jean-Paul CADORET

Laboratoire Physiologie et Biotechnologie des Algues

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