Comunicacin

celular
y transduccin de seales.

Dr. Csar Osorio Fuentealba

Antesala a la transduccin celular

Las clulas requieren comunicarse con el enterno externo e interno
para poder generar Vida.
Diversas seales del medio externo inducen el inicio de la vida, con
la aparicin de un nuevo ser vivo, hasta el trmino de sta, la
muerte.

Independiente del Cpo de seal, en esta seccin de la clase nos
dedicaremos al estudio de mecanismos moleculares conservados
que permiten a las clulas recibir seales del medio externo, (como
luz, presin mecnica, calor, drogas, agentes qumicos, etc.) y
transformarlas en seales internas, por medio de la acCvacin o
supresin de seales intracelulares que permiten responder a un
determinado esJmulo.

Las clulas necesitan comunicarse con

su medio externo e interno

Transduccin
La transduccin es la
TRANSFORMACIN de
u n a s e a l ( p r i m e r
mensajero) en otra, de
dis1nta naturaleza
(segundo mensajero).

Transduccin de seales
Los mecanismos de transduccin de seales se
caracterizan por:
1. Especicidad
2. Amplicacin
3. Desensibilizacin
4. Integracin

CaractersCcas de un segundo
mensajero

Molculas de bajo peso molecular.

Vida media de corta duracin (segundos).
Emulan la accin del primer mensajero.
Se producen en grandes canCdades,
amplicando la seal del primer mensajero.

Principales Cpos de comunicacin

celular segn distancia seal - efecto
Paracrina: la seal es producida por una clula y
acta sobre otras vecinas (el mismo tejido,
generalmente).
Autocrina: la seal es producida y recibida por la
misma clula.
Endocrina: la seal (hormona) es producida por
una clula, es liberada e incorporada al torrente
sanguneo, recorre grandes distancias y ejerce su
efecto en un tejido disCnto.

Tipos de transduccin de seales

segn naturaleza qumica:
Lipofbica

LipoZlica

Principales mecanismos de transduccin

de seales en eucariontes
Receptores acoplados a protena G.
Receptores con acCvidad Crosina quinasa
intrnseca.
Recptores acoplados a canales inicos

Receptor acoplado a protena G

(GPCR)
Protena integral con
7 dominios
transmembrana.

Los dominios C3 y C4
interactan con la
protena G.

Protena G heterotrimrica
(amplicador de la seal)

Subunidad catalCca

Hidrlisis de GTP a GDP + Pi naliza el

mecanismo de transduccin

GPCR asociado a la enzima adenilato

ciclasa

AcCvacin de la protena quinasa acCvada por cAMP (PKA)

Mecanismos de regulacin de la PKA

Epinefrina (adrenalina) uCliza un

sistema de GPCR adenilato ciclasa

GPCR Fosfolipasa C (PLC)

Sntesis de IP3

Sistema de transduccin Crosina

quinasa

El primer mensajero induce la auto-fosforilacin del receptor, el cual posee moCvos

aminoacdicos que induce esta reaccin.

El resultado es una cascada de fosforilaciones sucesivas de disCnas protenas,
generando nalmente la respuesta celular.

La insulina es un ejemplo clsico del

sistema Crosina quinasa

3. Mecanismos de expresin
gnica.

Expresin gnica en clulas

eucariontes

RibonucleCdos y
desoxiribonucleCdos

Estructura del ADN

Expresin del ADN: 1. Transcripcin

La transcripcin consiste en transcribir el
lenguaje de desoxirribonucleCdos A, C, G y T en
los ribonocleCdos A, C, G y U.

Slo una de las hebras del ADN se uClizada como
molde para la transcripcin (35), la cual se
designa como hebra templado.

El proceso es llevado por la enzima RNA
polimerasa, la cual cataliza la adicin de
ribonucleCdos en senCdo 53, generando el
pre-mRNA.

Resumen de la transcripcin
1. Inicio.

Resumen de la transcripcin
2. Elongacin.

Resumen de la transcripcin
Trmino

Como resultado, se desprende un mRNA no maduro, el cual recibe el nombre de

pre-mRNA.

Procesamiento del pre-mRNA:

Maduracin y splicing
El mRNA resultante de la transcripcin en
eucariontes no es 100% maduro, es decir,
requiere de un procesamiento adicional para
poder ser traducido en los ribosomas.

Maduracin
Adicin de una cola poliA (100 250
adenindas) en el extremo 3 y sntesis del
5cap (7-meClguanilato) en el extremo 5.

Splicing
Corte y remocin de
i n t r o n e s d e l m R N A
maduro (regiones no
codicantes) y empalme
de los exones
(regiones codicantes).

2. Traduccin

4. Muerte celular

Apoptosis: muerte celular programada

Tipo de muerte celular
programada, caracterizada
por el encogimiento y
c o n d e n s a c i n c e l u l a r ,
l i b eraci n d e cu erp o s
apoptCcos, encogimiento
del ncleo y fragmentacin
del DNA.

No hay liberacin del
contenido celular hacia el
citoplasma ni trastornos
inamatorios asociados.

Muerte celular programada:

Mecanismo central que controla el desarrollo multicelular
Conduce a la eliminacin de estructuras completas (por ejemplo: cola de embriones
humanos en desarrollo)
Esculpido de tejidos especficos mediante ablacin de campos celulares (por ejemplo:
eliminacin de tejido entre dgitos en desarrollo)
Regulacin de la cantidad de neuronas del tejido nervioso

Regulacin de procesos de muerte celular:

Por ausencia de factores trficos, lo que conlleva a la activacin de programas
suicidas
Por presencia de seales de muerte provenientes, por ejemplo, del sistema inmune.
La va activada a travs de uno u otro mecanismo es una va molecular comn.

Muerte celular programada:

Cambios morfolgicos bien establecidos

apoptosis (griego: cada)

Disminucin del tamao de la clula

Condensacin
Fragmentacin: liberacin de pequeos cuerpos apoptticos limitados por membrana
que son fagocitados por otras clulas.

Fragmentacin nuclear en apoptosis

DisCntas protenas parCcipan en la

apoptosis
Los genes involucrados en la apoptosis
codican protenas que pueden clasicarse en
3 categoras:
1. Asesinas (killer). Inician el proceso
apoptCco.
2. Destructoras (Destruc.on). Inducen la
muerte celular.
Engulfment: necesarias para la fagocitosis.

La apoptosis es clave en el desarrollo

de los seres vivos
De los 947 clulas somCcas de C.elegans,
131mueren por apoptosis en el desarrollo
embrionario de esta especie.

Cul es el rol de la apoptosis en el
desarrollo de los seres vivos?

C. elegans

Familia de protenas Bcl-2

La familia de protenas Bcl-2
comprende protenas pro y
anC-apoptCcas. Se han
descrito 6 miembros anC y 9
pro apoptosis.

La protena Bax, de alta
similitud con Bcl-2 (ambas en
m a m f e r o s ) e n a l t a s
concentraciones induce la
apoptosis, mientras que Bcl-2
se opone a ella.

Las protenas de la familia
Bcl-2 son protenas que
cuentan con un dominio
transmembrana, localizadas en
l a c a r a e x t e r n a d e l a
mitocondria, ncleo y reJculo.

Familia de protenas Bcl-2

Los principales blancos de las
caspasas corresponden a
protenas de la lmina nuclear
y c i t o e s q u e l e t o ( c o r t e s
proteolCcos).

Tipos de muerte celular

Necrosis
Muerte celular (a nivel de tejido) causada por una
lesin aguda o crnica, con degeneracin tanto en la
zona del dao como en el entorno celular.

La lesin induce un aumento en la permeabilidad de la
membrana plasmCca, liberando el contenido
intracelular al medio externo, generando dao y
prdida de estructura y funcin de clulas vecinas (lisis
celular). Como resultado de esta liberacin existe
inamacin del tejido, caractersCco de la necrosis.

Apoptosis Necrosis
Necrosis: La clula aumenta de tamao y explota, la liberacin de contenido causa dao
a las clulas circundantes e inflamacin.

LAS NEUROTROFINAS PROMUEVEN LA SOBREVIVENCIA DE LAS NEURONAS

Los primeros estudios en demostrar la importancia de factores trficos en el desarrollo
celular emplearon el desarrollo del sistema nervioso como modelo.
A comienzos del siglo XX se demostr que el nmero de neuronas que inervan tejidos
perifricos depende del tamao del tejido blanco.
Ej.: ablacin/insercin de miembros de embriones pollo en desarrollo induce cambios
en la cantidad de neuronas inervantes.
Los cambios se producen por sobrevivencia selectiva de neuronas y no por procesos
de proliferacin/diferenciacin. Las observacin de que algunas neuronas mueren
luego de alcanzar el tejido blanco de inervacin sugiere que stas compiten por
factores de sobrevivencia producidos pro el tejido blanco.

Receptores para neurotrofinas

Las neurotrofinas se unen a una familia de receptores tipo tirosina quinasas llamados
Trk.

La unin de las neurotrofinas a los receptores proporciona sobrevivencia a diferentes

clases de neuronas.

Otro receptor para neurotrofinas es p75NTR (NTR = neurotrophin receptor) pero tiene
menor afinidad que los de tipo Trk.
p75NTR forma complejos heteromultimricos con diferentes Trk, lo que aumenta la
afinidad de los Trk por los ligandos.
Estudios recientes indican que la unin de NGF a p75NTR en ausencia de TrkA
promueve muerte celular.
Niederhauser O, Mangold M, Schubenel R, Kusznir EA, Schmidt D, Hertel C.

NGF ligand alters NGF signaling via p75(NTR) and trkA.

J Neurosci Res. 2000 Aug 1;61(3):263-72.

Knockout de neurotrofinas y sus receptores

Esta tcnica permiti determinar con exactitud el rol de las neurotrofinas y de los
receptores para neurotrofinas en el desarrollo.
Los resultados mostraron que las diferentes neurotrofinas y sus receptores se requieren
para la sobrevivencia de diferentes clases de neuronas.

Las neuronas sensibles al dolor (nociceptivas) expresan TrkA. En ratones

knockout para NGF o TrkA estas neuronas se eliminan selectivamente en el
ganglio de la raz dorsal de estos ratones. Las neuronas que expresan TrkB o
TrkC no se ven afectadas en estos ratones.
Al contrario, las neuronas propioceptivas (que detectan la posicin de los
miembros) que expresan TrkC desaparecen en el ganglio de la raz dorsal de
los mutantes TrkC y NT-3.
Por otra parte, las neuronas sensoriales del ganglio vestibular (que inervan
rganos del odo interno) requieren de BDNF y TrkB para su desarrollo. Los
mutantes de BDNF tienen defectos en el equilibrio que se asocia con el
sistema vestibular.

Tres clases de protenas particpian en la va apopttica

Los estudios en c. elegans han ayudado a dilucidar los mecanismos genticos
moleculares implicados en la apoptosis. Este organismo permite trazar el desarrollo de
cada clula somtica desde la fertilizacin hasta el gusano maduro mediante observacin
al microscopio de Nomarski. De las 1090 clulas somticas generadas durante el
desarrollo, 131 sufren muerte celular. Se han identificado mutaciones especficas de
genes que codifican protenas fundamentales en el control de este proceso. Mutaciones
en los genes ced-3 o ced-4 impiden la ocurrencia de muerte celular programada, y las
1090 clulas del gusano sobreviven. Por el contrario, los gusanos que presentan
mutacin en ced-9, mueren las 1090 clulas.
Conclusin:
1) Las protenas CED-3 y CED-4 se necesitan para que ocurra muerte celular.
2) CED-9 impide la apoptosis.
3) La apoptosis se puede activar en todas las clulas.
4) En los dobles mutantes ced-9/ced-3 no ocurre muerte celular lo que indica que CED-9
acta corriente arriba de CED-3 para suprimir la va apopttica..

Larva con mutacin en

ced-1 que hace que las
clulas apoptticas se
hundan.

Larva con mutacin en

ced-1 y ced-3

En humanos, el primer gen de la va apopttica en ser clonado fue el bcl-2. Se aisl de

linfomas humanos foliculares y se vi que acta como un oncogen que promueve la
sobevivencia celular en lugar de la proliferacin. Al comparar las protenas Bcl-2 y
CED-9 se vi que eran homlogas, por lo tanto se concluy que la apoptosis es una va
que se ha conservado en la evolucin.
Gusanos transgnicos a los que se les insert el gen bcl-2 y que tenan mutado el gen
ced-9 pudieron detener la muerte celular masiva. Por lo tanto ambas protenas actan
como reguladores que suprimen la va apopttica. Adems, ambas protenas
contienen un nico dominio transmembrana que se localiza en la cara externa de las
membranas del ncleo, la mitocondria y el retculo endoplsmico.

Las molculas efectoras de la apoptosis son un grupo de protenas llamadas

caspasas, llamadas as porque son cistena proteasas que rompen enlaces
peptdicos entre cistena y aspartato (ste ltimo aminocido debe ubicarse hacia el
lado C-terminal de la protena). Degradan protenas de la lmina nuclear y del
citoesqueleto que causan la muerte de la clula.
La activacin de las caspasas ocurre en casi todos los prgramas de muerte celular.
CED-3 es la principal proteasa efectosa en C. elegans.
Las clulas de mamfero contienen mltiples caspasas.

Los estudios en lneas celulares ayudaron a dilucidar el rol de las protenas CED de
C.elegans en el control de la apoptosis. La expresin de CED-4 en una lnea humana de
rin induce una rpida apoptosis, que puede ser bloqueada co-expresando CED-9 o
Bcl-2 de mamfero. CED-9 se une directamente a CED-4 y lo relocaliza desde el citosol
hacia membranas intracelulares. Por lo tanto la funcin pro-apopttica de CED-4 es
directamente suprimida por la funcin anti-apopttica de CED-9. CED-4 tambin se une
directamente a CED-3 (y a otras caspasas de mamfero relacionadas) y promueve su
actividad proteoltica. Los estudios bioqumicos muestrasn que CED-4 puede unirse
simultneamente a CED-9 y CED-3.

Overview of the apoptotic pathway in C. elegans and vertebrates. Three general types of
proteins are critical in this conserved pathway. Regulators either promote or suppress apoptosis; the
two regulators shown here, CED-9 and Bcl-2, both function to suppress apoptosis in the presence of
trophic factors. Adapters interact with both regulators and effectors; in the absence of trophic factors,
they promote activation of effectors. A family of cysteine proteases serve as effector proteins; their
activation leads to degradation of various intracellular substrates and eventually cell death. [Adapted
from D. L. Vaux and S. J. Korsemeyer, 1999, Cell 96:245.]

Los reguladores pro-apoptticos promueven la activacin de las caspasas

CED-9 y Bcl-2 suprimen la apoptosis, sin embargo, otras protenas reguladoras actan
promoviendo la apoptosis.
El primer regulador pro-apopttico identificado se denomin Bax, y se encontr
asociado con Bcl-2.
La secuencia de Bax est relacionada a la de CED-9 y Bcl-2. La sobre-expresin de Bax
se relaciona con apoptosis y no con sobrevivencia.
Familia de reguladores de apoptosis: Bcl-2, CED-9, Bax
Anti-apoptticos: Bcl-2 y CED-9

Familia Bcl-2

Pro-apopttico: Bax
Todas son protenas de transmembrana que participan en interacciones oligomricas.

Estudios recientes sugieren que miembros de la familia Bcl-2Recent pueden afectar la

distribucin sub-celular de citocromo c. Adems estudios bioqumicos han implicado al
citocromo c en la activacin de las caspasas.