UNIVERSIDAD TECNOLGICA EQUINOCCIAL

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA INGENIERA

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGA Y APLICACIONES

PRCTICA No. 1
EXTRACCIN CASERA DE ADN DE TEJIDOS VEGETALES Y
ANIMALES
TRAER POR GRUPO
MATERIAL BIOLGICO (200g)
Coliflor
Guineo
Romanesco
Chocho, carne de res,
hgado de pollo
Adems deben traer por grupo (3 personas):
Un pedazo de pia con cscara (200 g)
Papel filtro
100g de sal
Jabn lquido lava vajillas
Alcohol potable
1 licuadora
5 recipientes plsticos pequeos / 6 cucharas
TRAER TODO EL MATERIAL Y VENIR CON MANDIL,
COFIA, MASCARILLA y BOTAS.
Para ingresar al laboratorio deben traer de forma individual la gua impresa y
resuelto el cuestionario. Deben venir estudiando la gua ya que se les tomar una
evaluacin al inicio de la prctica
PRCTICA 1

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EXTRACCIN DE ADN DE PLANTAS Y ANIMALES

1. OBJETIVOS

Realizar la extraccin de ADN de tejidos animales y vegetales usando tcnicas sencillas.

Observar la estructura fibrilar del ADN.

2. CONCEPTOS
El ADN fue identificado inicialmente en 1868 por Friedrich Miescher, bilogo suizo, en los ncleos de
las clulas del pus obtenidas de los vendajes quirrgicos desechados y en el esperma del salmn. l
llam a la sustancia nuclena, aunque no fue reconocida hasta 1943 gracias al experimento realizado
por Oswald Avery
Los cidos nucleicos son biomolculas constituidas por C, H, O, N y P. Son las macromolculas
responsables del almacenamiento, interpretacin y transmisin de la informacin gentica. Se
encuentran normalmente asociados a protenas, formando nucleoprotenas.
La estructura del ADN es una pareja de largas cadenas de nucletidos. La estructura de doble hlice
del ADN fue descubierta en 1953 por James Watson y Francis Crick. Una larga hebra de cido
nucleico est enrollada alrededor de otra hebra formando un par entrelazado. Dicha hlice mide 3,4
nm de paso de rosca y 2,37 nm de dimetro, y est formada, en cada vuelta, por 10,4 pares de
nucletidos enfrentados entre s por sus bases nitrogenadas. Las dos cadenas de nucletidos se
mantienen unidas entre s porque se forman enlaces entre las bases nitrogenadas de ambas
cadenas que quedan apareadas. La estructura en doble hlice del ADN, con el apareamiento de
bases limitado (AT; G-C ), implica que el orden o secuencia de bases de una de las cadenas delimita
automticamente el orden de la otra, por eso se dice que las cadenas son complementarias. Una vez
conocida la secuencia de las bases de una cadena, se deduce inmediatamente la secuencia de
bases de la complementaria
La extraccin de ADN es un paso importante usado en muchos procesos de diagnstico utilizados
para detectar bacterias y virus en el medio ambiente adems del diagnstico de enfermedades y
trastornos gentico. Consiste en sacar los componentes desde un compartimento celular.
La purificacin del DNA es importante porque permite:
1. Identificar mutaciones.
2. Ver caractersticas propias de los tipos de DNA (Polimorfismo).
3. Para clonar (Genes especficos, fragmentos de cromosomas o individuos).
4. Aislar DNA afectado y compararlo con uno bueno.
5. Detectar en las muestras, la presencia de un largo espectro de agentes patognicos.
6. Identificar resistencia microbiana.
7. Evaluar desordenes genticos, neurodegenerativos, neoplsicos, imunolgicos.

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8. Medicina forense para la identificacin de personas.

9. Para hacer tests de paternidad.

Los pasos bsicos para la extraccin de ADN son:

1. Disgregacin o fragmentacin del Tejido / Lisis celular.- El procedimiento ideal de lisis debe
tener la fuerza necesaria para romper el material de inicio (clulas o tejidos) y la delicadeza
para preservar las molculas de inters (ADN o ARN). Para ello existen mtodos:
a. Mtodos fsicos: homogenizacin mecnica, homogenizacin en solucin,
molienda manual en mortero, uso de perlas de vidrio, sonicacin
(ultrasonido)
b. Mtodos qumicos: detergentes
c. Mtodos enzimticos: Lysozima (pared celular de bacterias), lyticasa
(glucano de levaduras), proteasas (enlaces peptdicos de protenas de
pared y membrana plasmtica)
2. Clarificacin.- Consiste en la eliminacin de restos celulares. Para ello se usan procesos
como: centrifugacin, filtracin o un mtodo mixto que involucra uso de enzimas y
centrifugacin
3. Purificacin.- consiste en separar el cido nucleico deseado de otros componentes como:
protenas solubles, otros cidos nucleicos no deseados, de Lpidos, carbohidratos, de sales
y otros compuestos orgnicos. Las estrategias de purificacin de ADN son:
a. Desproteinizacin de protenas que rodean al cido nucleico y causan su
precipitacin (generalmente con fenol)
b. Precipitacin de protenas con sales
c. Cromotografa
d. Extraccin de DNA desde un gel de agarosa

Actualmente existen disponibles en el mercado KITs de extraccin que facilitan el trabajo y los
rendimientos son mucho ms altos. El problema nicamente son los costos

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4. Anlisis.- Para realizar el anlisis del ADN extrado y purificado se puede usar dos tipos de
anlisis:
a. Cualitativo: por electroforesis
b. Cuantitativo: por espectrofotometra o mediante radiacin UV

La extraccin bsica (CASERA) de ADN requiere hacer varias series de etapas bsicas:

1.- Romper la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula,
mediante la trituracin y centrifugacin de tejido. A continuacin debe romperse tambin la
membrana nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan los
lpidos de las membranas celulares y las rompen.
2.- Adicionar sal para evitar la unin de las protenas al ADN.
3.- Precipitar el ADN en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol
se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. El alcohol separa el ADN de otros
componentes celulares, los cuales son dejados en la solucin acuosa.

3. MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES:
- Muestra fresca vegetal o animal (100ml)
- Licuadora
- 1/8 cucharadita de sal
- 250 mL de agua destilada.
- Jabn lquido lava vajillas
- 2 pipetas de 5 ml
- Etanol
- Tubos de ensayo

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cscara fresca de pia

2 Hisopos
Contenedores pequeos con Etanol.

Preparacin de Enzima Bromelina:

1. Picar la cscara de pia fresca y pesar 85gr.
2. Colocar en la licuadora y agregar 50 mL agua destilada helada. Licuar durante 5 minutos
hasta que la cascara est lo ms triturada posible.
3. Guardar la mezcla en un recipiente tapado.
Extraccin de ADN:
1. Tomar la muestra y picarla finamente, colocarla en un vaso de precipitados hasta completar
100 mL.
2. Colocarla en el vaso de la licuadora, aadir 1/8 de cucharadita de sal y a continuacin 200
mL agua destilada helada. Licuar durante 5 minutos.
4. Tamizar la mezcla 2 veces.
5. Colocar 2 cucharadas de jabn lquido lava vajillas y revolver hasta formar espuma. Dejar
reposar durante diez minutos.
6. Con la pipeta tomar 5 ml de la mezcla del fondo, colocarlo en el tubo de ensayo.
7. Colocar con la esptula una pizca de enzima dentro de los tubos y refrigerar hasta que la
enzima sedimente.
8. Tomar 5mL. de Etanol y verterlos despacio en los tubos de ensayo. Observar cmo se forma
una capa fibrosa de ADN color blanco entre las dos fases ETANOL- EXTRACTO o
suspendida en la fase Etanol.
Con la punta inferior de un hisopo tomar la masa fibrosa y colocarla en contenedores de
Etanol, sellarlos bien y refrigerar.
4. CUESTIONARIO
1. Describa dos mtodos actuales de extraccin de ADN de tejidos

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2. Dibuje una molcula de ADN y ARN en la que se observe claramente su estructura (A

MANO)

Cmo se realiza de extraccin y purificacin del ADN plasmdico?

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5. BIBLIOGRAFA
Salazar, Oriana. 2007. Mtodos de extraccin y purificacin de cidos nucleicos.
Ciencias de la salud. 2009. Extraccin de ADN. Universidad Centro Occidental.
http://bibmed.ucla.edu.ve/DB/bmucla/edocs/materialdidactico/micro/biocelular/practica/extraccion_ad
n.pdf
6. REGISTRO DE DATOS
ELABORAR UNA TABLA DE RESULTADOS DOCUMENTADA CON FOTOS DE CADA
TUBO.
TABLA1. RESULTADOS ENSAYOS DE OBTENCIN DE ADN

GUINEO

HIGADO DE
ROMANESCO CHOCHO CARNE RES
POLLO

TEJIDO :

COLIFLOR

TUBO N.

OBSERVACIONES:

GRAFICO:

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OBSERVACIONES ADICIONALES