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Nutricin y alimentacin
EMILIO MARTNEZ DE LA VICTORIA MUOZ
Instituto de Nutricin y Tecnologa de los Alimentos (INYTA)
Universidad de Granada
MARIANO MAAS ALMENDROS
Instituto de Nutricin y Tecnologa de los Alimentos (INYTA)
Universidad de Granada
JESS MARTN ZIGA
Servicio Produccin y Experimentacin Animal.
Centro de Instrumentacin Cientfica
Universidad de Granada
NECESIDADES NUTRICIONALES
Energa
Protenas
Evaluacin de la calidad de una protena
ndices qumicos
ndices biolgicos
ndices microbiolgicos
Necesidades de protenas
Hidratos de Carbono
Fibra
Grasa
Minerales
Vitaminas
Otros nutrientes
Agua
REQUISITOS NUTRICIONALES
PROCEDIMIENTO Y PRESENTACIN DE LAS DIETAS
Ventajas e inconvenientes del tipo de procesamiento
REGMENES ALIMENTICIOS
Alimentacin ad libitum
Alimentacin restringida
Alimentacin horaria o controlada
Alimentacin a la par
Alimentacin ad libitum frente a restringida
RESUMEN
BIBLIOGRAFA
Nutricin y alimentacin
Nutricin y alimentacin
Nutricin y alimentacin
Los estndares para ratas y ratones se sitan en un valor de densidad calrica entre 3.6 y 3.8
kcal/g de dieta (aprox. 15-19 kJ/g) para una alimentacin ad libitum y con un contenido
adecuado en otros nutrientes. En dietas con un contenido energtico alto se recomienda elevar
los niveles de otros nutrientes.
Protenas
Son macronutrientes cuya funcin principal en el organismo, es participar en la formacin
de estructuras corporales y en la sntesis de molculas reguladoras de distintas funciones
orgnicas. Por tanto, se dice que la protena es un nutriente de tipo plstico, aunque su esqueleto
hidrocarbonado puede ser utilizado como combustible para obtener energa. En realidad, los
animales no necesitan las protenas como tales aportadas por los alimentos sino los
Aminocidos (AA) que la componen para poder sintetizar tras su incorporacin, sus propias
protenas. Adems, no necesitan todos los AA sino solo los esenciales.
Los procesos digestivos rompen la protena alimentaria en sus monmeros, los AA, o en
pequeos pptidos que son los que atraviesan la barrera de mucosa del intestino delgado hasta
llegar al medio interno y de all a todos los tejidos para la sntesis de protenas propias. Los
mecanismos de la sntesis proteica requieren que todos los AA que van a formar parte de una
determinada protena deben estar presentes de forma simultnea y en la proporcin adecuada.
Por tanto, la falta de un AA o el AA que se encuentre en menor proporcin respecto a las
necesidades biosintticas, van a condicionar la tasa de sntesis de esa protena.
Sobre esta base, en el diseo de una dieta se debe tener en cuenta, no solo la cantidad sino la
calidad, es decir en que medida los AA que forman parte de ella se adecuan a la composicin de
las protenas propias del animal. La calidad de una protena puede afectarse negativamente por
distintos causas como un incorrecto almacenaje, un sobrecalentamiento en el proceso de
peletizacin y por un tratamiento trmino inadecuado. Este dao no es fcilmente detectable y
es necesario realizar algunas pruebas para conocer la calidad proteica de una dieta.
Evaluacin de la calidad de una protena
El primer criterio de evaluacin es determinar su composicin cuantitativa, ya que si la
protena bruta de la dieta no alcanza un nivel adecuado puede comprometer el crecimiento y
desarrollo del animal. Para ello se cuantifica el contenido en nitrgeno total por mineralizacin
de la dieta, mediante el mtodo de Kjelhdajh. Posteriormente, el valor de nitrgeno total
obtenido se multiplica por un factor, dependiendo del tipo de fuente proteica utilizada y su
composicin en AA para obtener la cantidad de protena. Los factores mas utilizados son 6.25
(obtenido de dividir 100/16 - peso molecular del nitrgeno -) y 5.4 (para la protena de trigo y
productos lcteos). Este dato cuantitativo nos dice muy poco o nada acerca de las propiedades
de esa protena o protenas y por tanto de su calidad nutricional.
De manera general, la calidad depende de su composicin en AA y de la disponibilidad
relativa de los mismos con relacin a los requerimientos por una determinada especie de AA
esenciales y nitrgeno no proteico. En cuanto al primero, el perfil de AA de la protena, hay
tcnicas muy fiables como la Cromatografa Lquida de Alta Eficacia (HPLC). Para determinar
la calidad de una protena. Se emplean ndices de tipo qumico, biolgico y microbiolgico.
ndices qumicos
Aminograma. Consiste en la determinacin del perfil de AA de una protena previa
hidrlisis de esta. El aminograma ayuda a conocer las deficiencias y excesos que pueden
aparecer en un ensayo biolgico y a predecir la respuesta al mezclar protenas. Sin embargo, hay
que ser discreto en la interpretacin de los aminogramas, sobre todo si no estn bien
establecidos los requerimientos de cada uno de ellos para una especie concreta.
Nutricin y alimentacin
Cmputo qumico. Al ser difcil comparar los mritos nutricionales de distintas protenas
con diferentes perfiles de AA, se propuso un sistema de cmputo qumico para clasificar las
protenas. La escasa calidad proteica depende, principalmente, de la deficiencia relativa de
algunos AA esenciales. Como protena patrn o ideal se toma la protena de huevo completo
y se determina el porcentaje de exceso o defecto de AA individuales de la protena problema
respecto a la patrn. A partir de estos datos se establece el concepto de AA limitante, definido
como aquel que presenta mayor deficiencia con respecto a la protena patrn. As, el cmputo
qumico de una protena dada es el porcentaje de la deficiencia del AA limitante. Por ejemplo, la
protena de trigo tiene como AA limitante la lisina cuya deficiencia respecto a la protena patrn
es de un 63 %, por tanto su cmputo qumico es 37 (100-63).
ndice de AA esenciales (IAAE). Para su clculo se establece primero la relacin huevo de
los aminocidos esenciales, que es el porcentaje en que un AA de la protena problema se desva
de la cantidad presente en la protena patrn que se considera del 100 %. A partir de estos datos
el IAAE se calcula como la media geomtrica de la relacin huevo.
Existen algunos mtodos para calcular la biodisponibilidad de algunos aminocidos como el
caso de la lisina disponible.
ndices biolgicos
En general son ms exactos que los qumicos pero ms caros y requieren una infraestructura
mayor. En el Cuadro 4-1 se recogen las formulas correspondientes para el clculo de los
diferentes ndices. Entre ellos se encuentran:
Valor global de la protena (VGP). Este ndice nos informa del valor de una protena
como suplemento de una dieta basal. Se emplea como animal de experimentacin el
pollo y se define como la ganancia de peso adicional por unidad de protena
suplementaria ensayada, expresada como porcentaje.
Coeficiente de eficacia en crecimiento (CEC). Realizado con ratas al destete, utilizando
una dieta al 10 % de protena durante 4 semanas. Los resultados se comparan con una
dieta que contiene casena. Los clculos son iguales que para el VGP.
Ambos ndices se utilizan para conocer las diferencias en la calidad proteica entre muestras
procesadas segn distintas tcnicas o para apreciar cambios debidos a la fabricacin, siempre
que estas alteraciones afecten al AA limitante.
Valor sustitutivo de la protena (VS). Nos informa, a travs del balance de nitrgeno,
del grado en que una protena puede sustituir a cualquier otra. Para ello se realizan dos
balances de nitrgeno (ver ms adelante) (BN1 y BN2) con ingestas de nitrgeno (IN)
semejantes.
Valor biolgico (VB). Es el procedimiento ms utilizado. La tcnica seguida es la de
Thomas-Mitchell. En esencia, este mtodo relaciona el nitrgeno ingerido (o la protena
ingerida) que es retenido por el animal con el nitrgeno que es absorbido. Para su
aplicacin deben tenerse en cuenta las prdidas endgenas de nitrgeno, tanto urinarias
como fecales. La determinacin del VB permite determinar el nivel de protena
requerido para obtener un balance positivo de nitrgeno y describir diferentes
alteraciones en las protenas debido al procesado. Incluso puede servir para examinar la
eficacia de la protena para satisfacer las demandas en situaciones fisiolgicas
singulares (crecimiento, lactancia, gestacin, etc.)
Utilizacin neta de la protena (UNP). Expresa el tanto por ciento del nitrgeno retenido
en relacin al ingerido. Aritmticamente es el producto entre el VB y el coeficiente de
digestibilidad verdadero (CDV).
Valor productivo de la protena (PPV). Indica tambin el nitrgeno retenido pero
analizando directamente el nitrgeno corporal.
Nutricin y alimentacin
Tabla 4.1. ndices biolgicos para la valoracin de la calidad de las protenas en la dieta.
Pp
Pc
100
VS (%) = 100
100( BN1 BN 2 )
NI
VB =
I ( H He (O Oe )
100
I ( H He )
NPU = I ( H H e ) ( O Oe ) 100
ndices microbiolgicos
El ms utilizado es el realizado con Streptococcus zymogenes. Los requerimientos en AA de
este microorganismo pueden satisfacerse completamente, suplementando con casena. Midiendo
el crecimiento de este microorganismo con otra fuente proteica se puede determinar el valor
nutricional relativo (RNV) de esa protena respecto a la casena tomada como el 100 %.
Necesidades de protenas
En funcin de todo ello y a la vista de los problemas de digestibilidad, disponibilidad y
balance de AA es muy difcil establecer, de forma precisa la cantidad de protena que debe
administrarse a los animales para conseguir su desarrollo ptimo. Adems, ya que la protena es
el ingrediente ms caro de la dieta debe sacrsele el mayor rendimiento y evitar su utilizacin
como fuente energtica. Las fuentes proteicas ms utilizadas se recogen en el Cuadro 4-2. Como
puede observarse, casi ninguna aporta la seleccin ideal de AA, por tanto al disear una dieta
para animales de laboratorio se recomienda la utilizacin de mezclas en las que las deficiencias
de una fuente son compensadas por los excesos en la otra u otras.
El exceso de protena en la dieta, en estudios a medio y largo plazo, favorece la aparicin de
ciertas alteraciones patolgicas (principalmente renales) y reduce la longevidad del animal.
Nutricin y alimentacin
Aminocido
Casena cida
Alanina
Arginina
Asparragina
Cistina
Ac. Glutmico
Glicina
Histidina
Isoleucina
Leucina
Lisina
Metionina
Fenilalanina
Prolina
Serina
Treonina
Triptfano
Tirosina
Valina
188
231
431
25
1306
113
181
288
569
481
181
319
650
363
269
75
344
356
Casena
ANRC
188
231
469
25
1563
125
200
313
594
488
200
331
706
381
300
75
369
388
Lactoalbmina
369
188
769
200
925
144
131
319
875
669
131
244
319
313
369
144
250
313
Concentrado de
protena de trigo
331
175
681
169
1094
125
131
338
744
588
156
219
331
338
413
125
206
319
Protena de
soja aislada
269
475
725
81
1194
263
163
306
513
394
81
325
319
325
238
81
238
313
Al elegir la fuente proteica se debe optar por aquella que tenga, a priori, una mejor
utilizacin digestiva y metablica, es decir una protena de alta calidad. Por otro lado debemos
tener en cuenta la densidad energtica de la dieta. De hecho, en muchos casos las necesidades de
protena se expresan como el cociente protena/energa, con objeto de evitar las posibles
interferencias cuando nos encontramos con dietas que presentan grandes diferencias en su
densidad energtica. Tras numerosos estudios de balance de nitrgeno, crecimiento, desarrollo y
capacidad reproductiva utilizando distintas protenas a distintos niveles en la dieta, se ha
propuesto, en dietas de ingredientes naturales y para animales en crecimiento, una concentracin
del 15 % de una protena o mezcla proteica de alta calidad. Estos requerimientos se formulan
para una concentracin de energa del 17 kJ de energa metabolizable (EM) por gramo alimento
(4 kcal de EM/g).
Si estamos considerando dietas de ingredientes naturales, y a efectos prcticos, los
porcentajes de protena cruda deben establecerse en torno al 18-25 %. Por lo general, un nivel
del 20% de protena cruda resulta adecuado, en la mayora de los casos, siempre que se incluya
una fuente proteica de alta calidad, como polvo de leche, harina de pescado o de soja. Es
importante en este ltimo caso utilizar el concepto de suplemento proteico, empleando mezclas
de protenas con perfiles de AA esenciales complementarios.
Las dietas que slo se basan en cereales son inadecuadas para el crecimiento y la reproduccin
de la mayora de las especies. De hecho, el contenido de protena cruda de los cereales se
encuentra entre el 10-15%, y adems son bastante deficientes en lisina. Aparte de la lisina, los
AA azufrados metionina y cistina suelen estar en niveles bajos (y a veces tambin el triptfano)
cuando el maz es la base de las dietas. Hoy en da, alguno de estos AA, incluyendo la
metionina y la lisina, se fabrican a escala comercial y relativamente baratos, por lo que es
econmicamente factible completar la dieta con ellos.
Nutricin y alimentacin
La protena aportada en la dieta para adultos y animales en crecimiento debe ser de alta calidad,
si bien los requerimientos durante el desarrollo son ms elevados. Se ha propuesto para los
adultos un nivel de protenas del 4.5-6%, lo que se traduce en una dieta de ingredientes naturales
con unos niveles alrededor del 7%.
Respecto a las necesidades en AA, los estudios realizados se basan en la capacidad de las
mezclas de estos para provocar, no solo un ptimo crecimiento, sino una ganancia neta de
nitrgeno (es decir un balance positivo de nitrgeno). En el Cuadro 4-3 se recogen los valores
aceptados en la elaboracin de dietas para rata, ratn, cobaya, hmster y conejo.
La insuficiencia proteica se manifiesta tanto si es cuantitativa como cualitativa, por afectar a
los tejidos de rpido crecimiento principalmente en animales jvenes y en hembras gestantes.
Los sndromes ms acusados residen en un desarrollo inferior al normal, crecimiento ms lento
de los huesos largos, deformidades craneales. La anemia es la consecuencia ms frecuente de un
inadecuado nivel proteico de la dieta, con ello disminuye el contenido srico de la albmina
apareciendo desequilibrios vitamnicos, minerales y endocrinos.
Actualmente, se estudia la posible relacin entre las aportaciones de protena y la presencia
de algunas enfermedades infecciosas y parasitarias. Se ha comprobado que aportes proteico
superiores a los recomendados, aumentan la frecuencia y la gravedad de la "salmonelosis" por
Tiphimurium en ratones, siendo mucho mayor la tasa de mortalidad que cuando el aporte
proteico en la dieta es el adecuado.
Por otro lado, debemos tener en cuenta no slo la cantidad de protena, sino la calidad de
sta y las propiedades de los alimentos que la proporcionan. As, por ejemplo, la soja contiene
una protena cristalizada, inhibidora de tripsina, que puede dificultar la accin intestinal,
disminuyendo la absorcin a travs de las mucosas.
Hidratos de Carbono
En la dieta de ingredientes naturales para animales de experimentacin los almidones de los
cereales son la principal fuente de Hidratos de Carbono (HC). En dietas purificadas el aporte de
HC se realiza utilizando almidn y sacarosa, que adems contribuye a dar sabor al alimento,
mejorar su aceptacin y, por tanto, su ingestin. En los ltimos aos se ha ido sustituyendo parte
de la sacarosa por maltodextrinas, debido a los problemas de acumulacin de grasa en hgado
que genera (esteotasis heptica). La principal funcin de los HC es aportar energa a corto plazo,
por lo que no existen requerimientos especficos sino en funcin del aporte de energa.
Hay fuentes de HC que deben utilizarse con precaucin e incluso no emplearse. Este es el
caso de la fructosa y la sacarosa (disacrido que contiene fructosa), con capacidad para alterar el
flujo glucoltico del hepatocito. Se ha descrito, tras la alimentacin con estos azcares un
incremento en el peso del hgado junto con un mayor contenido en glucgeno y triglicridos,
hipertrigliceridemia y alteraciones renales con nefrocalcinosis. Estos efectos aparecen con
niveles de sacarosa del 55 % y de fructosa del 63 %.
Son escasos los problemas patolgicos asociados a alteraciones en la composicin de
almidones y fculas. En conejo, suelen presentarse ciertas deficiencias enzimticas relacionadas
con la amilasa, que actan como factor predisponente en la enteritis mucoide.
Nutricin y alimentacin
Tabla 4-3. Raciones de nutrientes recomendadas para animales alimentados ad libitum, expresados por kg de
alimento compuesto por un 90% de materia seca 1. Los requerimientos corresponden a animales en crecimiento. Para
ratas en mantenimiento y hembras en gestacin, ver en NRC (1995)
Ratn
Rata
Hmster
Cobaya
Conejo
Energa Digerible 2 (kJ/g)
16.8
16.0
17.6
12.6
10.5
Grasa (g/kg)
s.u.
50
50
s.u.
20
Fibra (g/kg)
r.u
r.u.
s.u.
100
110
Protena (g/kg)
180
1203
150
180
160
Arginina (g/kg)
3
6
7.6
s.u.
6
Asparagina (g/kg)
s.u.
4
s.u.
s.u.
s.u.
cido glutmico (g/kg)
s.u.
40
s.u.
s.u.
s.u.
Histidina (g/kg)
2
3
4
s.u.
3
Isoleucina (g/kg)
4
5
8.9
s.u.
6
Leucina (g/kg)
7
7.5
13.9
s.u.
11
Lisina (g/kg)
4
7
12
s.u.
6.5
Metionina+Cistina (g/kg)
5
6
3.2
s.u.
6
Fenilalanina+Tirosina(g/kg)
4
8
14
s.u.
11
Prolina (g/kg)
s.u.
4
s.u.
s.u.
s.u.
Treonina (g/kg)
4
5
7
s.u.
s.u.
Triptfano (g/kg)
1
1.5
3.4
s.u.
2
Valina (g/kg)
5
6
9.1
s.u.
7
Glicina (g/kg)
s.u.
s.u.
s.u.
s.u.
s.u.
Minerales y elementos traza
Calcio (g/kg)
4
5
5.9
9
4
Cloro (g/kg)
r.u.
0.5
r.u
r.u
3
Magnesio (g/kg)
0.5
0.4
0.6
2
0.35
Fsforo (g/kg)
4
4
3
5.5
2.2
Potasio (g/kg)
2
3.6
6.1
9.5
6
Sodio (g/kg)
r.u
0.5
1.5
s.u
2
Sulfuro (g/kg)
r.u
0.5
1.5
s.u
s.u
Cromo(mg/kg)
2
0.3
s.u
0.6
s.u
Cobre (mg/kg)
4.5
5
1.6
6
3
Flor (mg/kg)
s.u
1
0.024
s.u
s.u
Yodo (mg/kg)
0.25
0.15
1.6
1
0.2
Hierro (mg/kg)
25
35
140
50
r.u
Manganeso (mg/kg)
8.5
Selenio (mg/kg)
r.u.
0.1
0.1
0.1
s.u
Zinc (mg/kg)
30
12
9.2
20
r.u
Vitaminas
Retinol (mg/kg)
0.15
1.2
1.1
7.0
0.17
4
25
62
25
r.u.
Colecalciferol (g/kg)
18
27
2.7
45
36
Acetato dl--tocoferilo (mg/kg)
Menadiona (mg/kg)
3
0.05
4
5
r.u
Tiamina (mg/kg)
5
4
20
2
r.u
Riboflavina (mg/kg)
7
3
15
3
s.u
Piridoxina (mg/kg)
1
6
6
3
39
10
50
10
10
180
Cianocobalamina (g/kg)
cido nicotnico (mg/kg)
10
20
90
10
180
cido flico (mg/kg)
0.5
1
2
4
s.u
Biotina (mg/kg)
0.2
s.u
0.6
0.3
r.u
cido pantotnico (mg/kg)
10
8
40
20
s.u
Colina (mg/kg)
600
1000
2000
1000
1200
Inositol (mg/kg)
r.u
n.r
100
n.r
s.u
cido ascrbico (mg/kg)
n.r
n.r
n.r
200
n.r
No se pueden dar valores absolutos de las raciones de nutrientes, y diferentes comits proponen distintas raciones.
La energa metabolizable generalmente vara entre un 90 a 95% de la energa digerible.
3
Raciones recomendadas para la llamada protena ideal.
n.r = no requerida; r.u = requerida, pero requerimiento desconocido; s.u. = estatus desconocido.
2
10
Nutricin y alimentacin
Fibra
Es un componente hidrocarbonado no digestible de la dieta en animales monogstricos. Esto
significa que no aporta energa, en cantidades apreciables, ni otros nutrientes. Sin embargo,
debido a su papel regulador de todo el proceso digestivo, disminuyendo el tiempo de trnsito y
aumentando el volumen de las heces, entre otras funciones, se le considera un componente
diettico ms. La fibra da mayor volumen a la dieta, evitando la formacin de masas
alimenticias slidas que impiden la penetracin de los jugos digestivos. Tiene efecto laxante por
distender el intestino y contribuye a la palatibilidad de los alimentos, sobre todo en conejo y
cobayo. Un exceso conduce a un menor consumo de alimento provocando a largo plazo la
desnutricin del individuo.
Al ser prcticamente acalrica acta como diluyente energtico en las dietas, y su adicin
provoca un incremento en la ingesta de alimento del animal. Esta caracterstica es aprovechada
para el diseo de dietas experimentales en las que es necesario modificar la densidad calrica
para cambiar la ingesta global de alimentos del animal o bien en estudios de sobre regulacin de
la ingesta. Normalmente en dietas purificadas se aade en proporciones cercanas a 5 % en forma
de fibra no soluble (celulosa). Estudios realizados en rata muestran que la fibra insoluble hasta
niveles dietticos del 20 % no afecta al crecimiento del animal. En dietas de ingredientes
naturales la fibra procede de distintas fuentes vegetales (soja, alfalfa, maz, etc.).
Grasas
La grasa de la dieta formada por lpidos, mayoritariamente triacilglicridos, tiene distintas
funciones dentro del organismo. Por una parte constituye una fuente excelente de energa por su
alta densidad calrica (9 kcal/g), aproximadamente el doble de la contenida en HC y protenas.
Por otro lado, es un elemento estructural de las membranas celulares, aportando cidos grasos
(AG) esenciales que intervienen en diversas funciones corporales como la formacin de
eicosanoides; asimismo es necesaria para la absorcin de vitaminas liposolubles (A, D, E y K).
Por ltimo, tiene un papel importante en la palatabilidad de los alimentos y por tanto en la
aceptacin de la dieta por el animal incrementando su ingestin.
La grasa, en dietas de componentes naturales, esta formando parte de algunas semillas (haba
de soja, cacahuete o linaza) o de algunos componentes de origen animal (harinas de pescado o
carne, polvo de leche). Tambin la grasa de la dieta, tanto en dietas de componentes naturales
como purificadas, puede ser aadida en forma ms o menos pura (aceite de hgado de pescado,
sebo, aceites vegetales, etc.).
El componente lipdico ms abundante en la dieta son los triacilglicridos (grasas neutras),
junto con fosfolpidos y colesterol, en menor proporcin. Los AG presentes en los triacilglicridos determinan la calidad de la grasa de la dieta. Existen tres tipos de AG, los saturados,
monoinsaturados y poliinsaturados, dependiendo de si no contienen, presentan uno o dos o ms
dobles enlaces en su molcula respectivamente. En la Figura 4-1, se recoge la composicin en
AG de distintas fuentes de grasa utilizadas en las dietas para animales de experimentacin.
Nutricin y alimentacin
11
Grasa de coco
Mantequilla
Aceite de palma
Grasa de cerdo
Margarina normal
Grasa de pollo
Aceite de pescado
Margarina poliinsat.
Aceite de oliva
Aceite de maiz
Aceite de soja
Aceite de girasol
0%
20%
40%
60%
80%
100%
AG MONO
AGPI. n-6
AGPI. n-3
Otros AG
Figura 4-1. Perfil de cidos grasos de distintas grasas dietticas. (Tomado de Mataix J y Carazo, E.
Nutricin para Educadores. Ed. Diaz de Santos 1995)
Nutricin y alimentacin
12
Signo
Disminucin del crecimiento
Trastornos reproductores
Dermatitis
Cociente trieno/tetraeno en tejidos y sangre
Fragilidad capilar
Cuadro 4-4. Capacidad relativa de los cidos grasos esenciales n-6 y n-3 para aliviar los signos de
deficiencia en cidos grasos esenciales en ratas
Nutricin y alimentacin
13
especies, la relacin ptima Ca:P es de 2:1 1:1. Los ltimos estudios ponen de manifiesto que
las relaciones menores de 1 (0.96) pueden cubrir las necesidades de ambos minerales. Existen
intereses contrapuestos al intentar determinar las necesidades de calcio; por una parte se trata de
maximizar las concentraciones de calcio y fsforo en el hueso, pero por otra, se tiende a evitar
la osificacin de los tejidos blandos, y en concreto la nefrocalcinosis.
Para animales en crecimiento y adultos (no durante la lactancia) se recomiendan 5g/kg de
alimento de calcio y 3 de fsforo. En hembras en lactantes se debe incrementar un 25 % de
media (6.3 g/kg de alimento de calcio y 3.7 de fsforo). Para una correcta absorcin intestinal
de calcio y su depsito seo, es necesaria la presencia de vitamina D. Una deficiencia en esta
vitamina puede paliarse, en parte, incrementando la ingestin de calcio y fsforo.
Las etapas de la vida en las que se incrementan las necesidades de ambos minerales son el
periodo de crecimiento como consecuencia de la formacin del esqueleto y en las hembras
adultas las etapas de gestacin y lactacin, para compensar las prdidas debidas a la
transferencia de estos elementos al embrin en desarrollo y a la leche. Las aves, necesitan, sobre
todo el calcio para la formacin de la cscara del huevo. Cuando la ingesta de calcio es
inadecuada y se entra en una situacin de balance negativo de calcio, existe una movilizacin
del calcio y fsforo del esqueleto para atender las funciones orgnicas lo que conduce a una
desmineralizacin sea (osteoporosis) hacindose los huesos ms frgiles y fcilmente
fracturables.
Los cereales son una fuente pobre de calcio, y al menos que la dieta contenga cantidades
importantes de productos animales como leche en polvo o harina de carne y huesos, el calcio
debe aadirse a la dieta en forma de harina de hueso esterilizada, fosfato clcico y polvo de
caliza. El fsforo es ms abundante en los productos vegetales, particularmente en el salvado y
en el forraje. Sin embargo, gran parte de este se encuentra en forma de cido ftico con el que el
calcio y otros elementos forman sales insolubles. El fsforo en esta forma no es fcilmente
absorbido, y adems otros elementos, entre ellos el calcio, tampoco estn disponibles para el
animal. El exceso de calcio y fsforo en la dieta puede impedir la absorcin de otros minerales a
travs de la formacin de sales dobles.
Existen una serie de factores dietticos que pueden afectar en uno u otro sentido
(favoreciendo o impidiendo) la absorcin de calcio y fsforo de la dieta por parte de los
animales de experimentacin (Cuadro 4-5).
Las protenas son fuente de fsforo de la dieta en distintas cantidades pero todo el fsforo
que contienen presenta la misma biodisponibilidad en funcin de la forma qumica en que se
encuentra. Dietas pobres en fsforo pero adecuadas en calcio, originan clculos en ratas cuando
el aporte proteico es insuficiente.
Factores que reducen la absorcin
Bajos niveles de vitamina D
Altos niveles de calcio en la dieta (10 g/kg)
Altos niveles de fsforo en la dieta
Alto contenido en grasa (> 20 %)
Presencia de oxalatos
Presencia de fitatos
Aislados de protena de soja
Accin
Disminuyen la absorcin
Disminuyen la absorcin de fsforo
Disminuyen la absorcin de calcio
Disminuye la absorcin de calcio y fsforo en adultos y viejos
Disminuyen la absorcin de calcio
Disminuyen la absorcin de fsforo y calcio
Disminuyen la absorcin de fsforo
Accin
14
Nutricin y alimentacin
15
Nutricin y alimentacin
El contenido en cobre de los alimentos naturales vara en funcin del contenido de este
elemento en el suelo de cultivo. Hay que tener cuidado con el suplemento, ya que el exceso de
cobre puede ser perjudicial y favorecer la aparicin de anemia hemoltica. Los requisitos son de
5 mg/kg de dieta para animales en crecimiento y adultos y de 8 mg/kg de dieta para hembras en
lactacin y gestantes. En dietas con alto contenido en cinc, cadmio y vitamina C hay que
incrementar la cantidad de cobre.
Manganeso: la deficiencia de manganeso como elemento integrante de varios sistemas
enzimticos se traduce en alteraciones del sistema reproductor tanto en machos como en
hembras. Se observan retrasos en la madurez sexual, ciclos estrales irregulares, reabsorcin de
fetos y camadas dbiles. El manganeso tambin se relaciona con el crecimiento normal del
hueso conduciendo su dficit a malformaciones seas. Las altas ingestas de calcio y fsforo,
hierro y cobre pueden dificultar la utilizacin del metal y, por tanto, aumentar sus necesidades.
Cinc: es el componente esencial de una enzima respiratoria, la anhidrasa carbnica.
Interviene, tambin en procesos de queratinizacin y formacin del hueso. Las deficiencias en
este metal conducen a crecimiento retardado, escaso desarrollo del pelo y malformaciones
seas. Su disponibilidad en la dieta se ve afectada por elevados niveles de calcio y fsforo y la
presencia de cido ftico. La harina de soja afecta de forma negativa la asimilacin nutricional
de este metal tanto por su contenido en fitina y en otro factor quelante del calcio. Antiguamente
los roedores obtenan parte de los requerimientos de zinc al lamer y mordisquear las jaulas
galvanizadas. El exceso es txico presentndose anemias probablemente como resultado del
antagonismo entre zinc y cobre. Los requerimientos para animales adultos y en crecimiento son
de 12 mg/kg de dieta, si se utiliza harina de soja se deben incrementar las cantidades hasta 18
mg/kg de dieta. Para ratas en lactacin y gestantes las necesidades se sitan en 25 mg/kg de
dieta. El cinc es necesario en la formacin de distintas enzimas (fosfatasas, catalasas, etc), se
sospecha su deficiencia cuando existe disminucin de crecimiento, prdida de peso e hiper
queratosis; el cobalto est relacionado con la aparicin de anemias micro y normocticas.
Yodo: es imprescindible para la sntesis de las hormonas tiroideas yodadas. Su deficiencia
provoca hipotiroidismo con retraso en la maduracin sexual, inactividad y obesidad; adems la
glndula se hipertrofia apareciendo bocio. La deficiencia en este elemento no es comn aunque
puede aparecer en reas con bajo contenido de yodo en el suelo de cultivo. Los requerimientos
son, para la rata, de 150 mg/kg de alimento.
Selenio: este elemento presenta funciones semejantes a las de la vitamina E en el
organismo, de hecho, es difcil producir una deficiencia en selenio en eratas con un aporte
adecuado de vitamina E. Se conoce, recientemente que el selenio forma parte de muchas
protenas enzimticas (selenoproteinas) en forma de selnometionina o selenocisteina. Tambin
existen proteinas fijadoras de selenio. De entre las selenoproteinas podemos destacar la
glutation peroxidasa y la iodotironina-5-deyodinasa tipo I. El selenio puede estar en dos formas
inorgnicas principales en los alimentos, como selenito o como selenato, en la forma orgnica
adopta una de las dos mencionadas antes. La utilizacin digestiva y metablica de ambos tipos
de fuentes son bastante diferentes siendo de peor a mejor biodisponibilidad la siguientes selenito
< selenato < selenometionina < selenocisteina.
Utilizando distintos criterios los requerimientos se ha establecido en: 150 g/kg de dieta
para dietas de crecimiento y mantenimiento y de 400 g/kg (en forma de selenito) o algo menos
en las otras formas para ratas en gestacin y lactacin.
Molibdeno: es un cofactor para la xantina oxidasa/deshidrogenasa, la aldehido y la sulfito
oxidasas todas ella participan en sistemas redox. Sus requerimientos nutricionales estn todava
mal establecidos ya que faltan criterios fiables. El NRC (1995) apunta la cifra de 150 g/kg de
dieta. Es importante sealar que presenta interacciones con otros minerales como el cobre y el
azufre.
Nutricin y alimentacin
16
Nombre qumico
Retinol
B1
Tiamina
B2
Riboflavina
cido nicotnico
cido pantotnico
B6
Piridoxina
Efecto de la deficiencia
Retardo en el crecimiento
Problemas en la reproduccin
Alteraciones de la visin nocturna
Queratinizacin de epitelios
Mayor sensibilidad a la infeccin
Retardo en el crecimiento
Polineuritis; Convulsiones y Fallo cardiaco
Retardo en el crecimiento
Perdida de pelo; Cataratas
Anormalidades nerviosas
Dermatitis
Prdida del apetito
Baja velocidad de crecimiento
Anemia
Lengua negra (perro)
Despigmentacin capilar
Necrosis adrenal
Prdida del apetito
Dermatitis
Nutricin y alimentacin
17
Biotina
cido Flico
B12
Cianocobalamina
C
D2
D3
E
cido ascrbico
Ergocalciferol
Colecalciferol
Tocoferoles
K1
K2
K3
Filoquinona
Menaquinona
Menaftona
Anemia microctica
Hiperexcitabilidad
Convulsiones
Crecimiento pobre
Disminucin en la produccin de anticuerpos
Dermatitis
Parlisis
Alopecia
Trastornos en la reproduccin
Crecimiento pobre
Anemia macrocitica
Leucopenia
Retardo en el crecimiento
Trastornos en la reproduccin
Anemia perniciosa
Escorbuto ( en primates y cobaya)
Raquitismo en animales jvenes
Osteoporosis en animales adultos
Distrofia muscular
Alteraciones en la reproduccin
Necrosis heptica
Enfermedades hemorrgicas
Aumento en el tiempo de coagulacin
Nutricin y alimentacin
18
Dosis de -caroteno
mol/kg P.C.
< 0.3
1
2
6
12
48
Biopotencia molar
relativa (%)
Moles de -caroteno
equivalentes a 1 mol
de retinol
g de -caroteno
equivalentes a 1 mol
de retinol
100
50
30
15.4
9.5
4.3
1.0
2.0
3.0
6.5
10.5
23.3
1.84
3.75
6.25
12.20
19.70
43.60
19
Nutricin y alimentacin
Nutricin y alimentacin
20
Unidad
mg
mg
mg
mg
mg
mg
mg
g
0.2
1.0
15.0
10.0
3.0
4.0
6.0
50.0
Cuadro 4-8. Necesidades nutricionales de vitaminas del grupo B en ratas (NRC, 1995)
0.2
1.0
15.0
10.0
4.0
4.0
6.0
50.0
21
Nutricin y alimentacin
En las dietas de ingredientes naturales los cereales contribuyen, en gran parte, a los
requerimientos del animal en vitaminas B, aunque el cido nicotnico en los cereales est en
forma ligada y es difcil su utilizacin por la mayora de las especies. Las levaduras secas y los
extractos de hgado son buenas fuentes naturales de vitaminas B. Normalmente se suplementan
las dietas con las vitaminas puras.
Existe la certeza de que todas las vitaminas de este grupo son sintetizadas por los
microorganismos del tracto gastrointestinal. As, los rumiantes no necesitan aporte diettico ya
que los microorganismos ruminales sintetizan las necesarias. Los conejos, cobayas, ratas y
ratones obtienen parte de sus necesidades por la ingestin de sus heces (coprofaga). Existe, de
hecho, peligro de deficiencias en animales SPF igual que ocurra con la vitamina K. La
deficiencia en vitamina B12 raramente se observa aunque solo se distribuye en alimentos de
origen animal. Las razones son dos, en primer lugar se sintetiza en el intestino y en segundo es
eficientemente almacenada en hgado, rin y otros tejidos. Adems, pasa de la madre al feto.
Los requisitos de algunas de las vitaminas del grupo B pueden estar influenciados por otros
constituyentes de la dieta. El cido nicotnico es sintetizado en los tejidos a partir del triptfano
(40 mg triptfano=1 mg niacina). Sin embargo, el triptfano es uno de los aminocidos
esenciales y por tanto solo estar disponible para la sntesis de la vitamina si esta en exceso
respecto a sus necesidades para la sntesis proteica. Se ha calculado que los requerimientos de
triptofano en la dieta estn alrededor del 0.15 %. El exceso de triptofano se transforma en cido
nicotnico y reduce sus requerimientos dietticos. Dietas enriquecidas o deficitarias en niacina y
triptfano inducen anormalidades en el comportamiento, convulsiones, diarrea, disminucin de
peso y desarrollo con pelo spero y alopecia.
Una de las funciones de la vitamina B12 es catalizar la formacin de grupos metilo que son,
subsecuentemente, incorporados a la homocisteina para formar metionina. Por tanto, las dietas
que contienen cantidades elevadas de metionina o compuestos de metilacin como la colina,
hacen que disminuyan los requerimientos de vitamina B12. No obstante, esta vitamina no puede
ser sustituida totalmente por metionina ya que tiene otras funciones. se necesita una
concentracin mayor en dietas que slo contengan protenas de origen vegetales, en las que se
adiciona metionina y colina pero no vitamina B12. Su concentracin en la dieta vara segn la
concentracin de colina, metionina y cido flico (que puede ser sintetizado en el intestino por
bacterias). Dosis menores de esta vitamina producen una mayor incidencia de anormalidades en
neonatos (hidrocefalia).
Existe una interrelacin importante entre la tiamina y la fuente energtica de la dieta. La
tiamina juega un papel importante en el metabolismo de los hidratos de carbono por lo que las
necesidades de tiamina son sensiblemente mayores cuando la fuente de energa de la dieta son
los hidratos de carbono que cuando esta es la grasa. Su deficiencia origina anormalidades en el
sistema nervioso, corazn y disminucin de la reproduccin. Los signos clnicos caractersticos
son anorexia y prdida de peso, el piruvato puede estar aumentado. A las 5 semanas de dficit
aparecen cuadros de encefalopata e hipertrofia cardiaca. Los animales estarn ataxicos,
replegados y dormidos.
Las necesidades de riboflavina dependen del tipo y nivel de hidratos de carbono de la dieta.
Si disminuye el almidn, sus requerimientos aumentan por incremento de la sntesis intestinal
de las vitaminas. Las hembras que toman una dieta baja producen cras de bajo peso, poco
crecimiento y menor peso y contenido de ADN en cerebro. Ratas deficientes pueden presentar
hgado graso, aumentado el recambio proteico y de la actividad enzimtica del metabolismo
aminocido y disminucin de la sntesis de ATP.
La vitamina B6 puede estar en forma de por piridoxeno, piridoxal y piridoxamina. Se
necesita para la reproduccin y el desarrollo. Las cras de hembras deficientes presentan una
diferenciacin renal retardada, los lpidos cerebrales anormales y un aumento de cistationina
22
Nutricin y alimentacin
urinaria. Las hembras necesitan u aporte mnimo de 3-6 mg\Kg para que las cras tengan un
crecimiento y peso cerebral dentro de la normalidad. Las ratas deficientes presentan dermatitis
escamosa simtrica en rabo, zarpas, cara y orejas, anemia microctica, hiper-excitabilidad y
convulsiones, adems de disminucin en la reproduccin y deficiecias en la produccin de
insulina.
En la rata, la biotina en rata es suministrada por diferentes tipos de bacterias intestinales. Su
carencia produce, en ratas en desarrollo, dermatitis exfoliativa, alopecia, acromotricidad, etc.
Vitamina C: se encuentra en la naturaleza como cido ascrbico. No es sintetizada por
microorganismos pero muchas especies de animales pueden sintetizarla y por lo tanto no
necesitan aporte diettico. Las dos excepciones son los primates y el cobaya en los que no existe
la enzima necesaria para llevar a cabo la ltima reaccin de su sntesis y necesitan el aporte en
la dieta. Las principales fuentes alimentarias son los ctricos y las verduras no encontrndose en
cantidades significativas en los componentes habituales de las dietas de ingredientes naturales
para animales de laboratorio. Debido a su labilidad de temperatura y su destruccin rpida por
oxidacin se suele administrar como suplemento de la dieta.
La carencia de esta vitamina se manifiesta en una incapacidad para formar colgeno y tejido
osteoide, alteraciones en el crecimiento de huesos, dientes y hemorragias. La falta de colgeno
impide la curacin de las heridas, los abscesos bacterianos no forman cpsula y se diseminan. El
animal deficiente presenta falta de vascularizacin de las heridas, alteraciones en el crecimiento
de los incisivos, deformaciones seas y engrosamiento de articulaciones costocondrales.
Otros nutrientes
Colina: difiere de las vitaminas en que no tiene un papel cataltico, pero si aporta el
material bsico a partir del cual se van a formar sustancias de gran importancia biolgica. As,
un ster, la acetilcolina, es un importante neurotransmisor. Asimismo, la colina es una molcula
transferidora de grupos metilo que intercambia con otras molculas como la metionina. La
colina forma parte de los fosfolpidos (lecitina) que participan en el transporte de lpidos y en la
formacin de las membranas biolgicas.
Los animales que ingieren dietas con un bajo contenido en colina presentan esteatosis
heptica. La accin lipotrpica de la colina es compartida por otras sustancias y compuestos
incluyendo la metionina, betaina e inositol. En el pollo, la colina esta implicada en la prevencin
de la perosis.
La colina puede sintetizarse en los tejidos animales pero no a la suficiente velocidad para
poder atender a todas las necesidades y por tanto debe ser administrada con la dieta. Si hay un
aporte suficiente de otros compuestos metilantes como metionina o betaina sus necesidades
disminuyen. Las deficiencias en colina son poco comunes ya que se encuentra en casi todos los
ingredientes utilizados en las dietas y especialmente en las fracciones fosfolipdicas de los
tejidos animales y vegetales.
Las dietas se formulan, habitualmente con cloruro o bitartrato de colina. Normalmente se
tiende a utilizar este ltimo porque es menos higroscpico . Los clculos para el aporte diettico
de colina deben de hacerse en funcin del contenido en metionina y en grasa de la dieta. Se
recomiendan 750 mg/kg de dieta (7.2 mmol/kg) cantidad equivalente a 1.8 g de bitartrato de
colina por kg de dieta. El incremento en la cantidad de grasa, las deficiencias en folato o
vitamina B12 y los incrementos en la temperatura del ambiente incrementan las necesidades de
colina.
Inositol: aunque el inositol (Mio-inositol) se incluye, a veces, como un nutriente esencial,
actualmente no parece estar justificado. Estructuralmente es semejante a los azcares simples.
Nutricin y alimentacin
23
Cuadro 4-9. Consumo medio de agua y alimento en los principales animales de laboratorio
Nutricin y alimentacin
24
REQUISITOS NUTRICIONALES
El American Institute of Nutrition (AIN) reconoci en 1977 la necesidad e importancia de
estandarizar las dietas para roedores de laboratorio, y de acuerdo con ello elabor unas
recomendaciones generales (AIN 1977 y 1995) dirigidas a los investigadores (vase Cuadro 43). El sustrato cientfico de estas recomendaciones se fundamenta en el crecimiento de ratas y
ratones destetados como ndice de una nutricin optima. La utilizacin de animales no
destetados como modelo hace difcil la extrapolacin de los resultados a animales adultos.
Se han comparado la velocidad de crecimiento y el crecimiento mximo en animales
alimentados ad libitum con dietas que contenan concentraciones diferentes de un nutriente
especfico, manteniendo constante la concentracin de los dems nutrientes.
La concentracin ptima del nutriente estudiado se define como el punto a partir del cual
aumentos adicionales del mismo en la dieta no aumentan significativamente el crecimiento
mximo del animal. Este procedimiento ha aportado luz y ha mejorado el conocimiento
cientfico sobre la naturaleza de los requerimientos nutricionales de los roedores de laboratorio.
Este tipo de trabajos han puesto de manifiesto que el nutriente mas conflictivo es la
protena, necesaria en mayor cantidad para animales jvenes y por lo tanto problemtica en
experimentos de larga duracin donde puede tener una incidencia negativa. En los ltimos 20
aos la reformulacin de dietas en base a los nuevos conocimientos ha incidido
fundamentalmente en este nutriente que se ha ido rebajando para animales adultos. El efecto que
otros nutrientes pueden tener sobre la salud de los roedores en experimentos de larga duracin
es menos importante o esta menos clara que en el caso de las protenas.
Algunos investigadores sugieren que las necesidades de carbohidratos y grasas pueden ser
diferentes para roedores jvenes y adultos. De momento, se necesitan ms estudios para poder
aclarar estas sugerencias (Cuadro 4-10).
Estatus
fisiolgico
Crecimiento
Crecimiento
Crecimiento
Mantenimiento
Gestacin
Lactancia
Peso corporal
(g)
Requerimientos
energticos (MJ/da)
Alimento ad libitum
Consumido1 (g/da)
100
200
300
400
400
400
0.21
0.36
0.49
0.23
0.30
0.65
15
25
34
16
21
46
Nutricin y alimentacin
25
Nutricin y alimentacin
26
1. Materias primas
Trigo
Soja micronizada
Aceite de soja o manteca
Fosfato biclcico
Clorhidrato de lisina
Antioxidante
Cebada
Pescado rico en protenas
Sal
Carbonato clcico
Aglomerante
Cobre
Cinc
Hierro
Selenio
Yodo
Vitamina D3
Vitamina E
Vitamina B12
Tiamina
Felacina
Riboflavina
Niacina
Acido pantotnico
Biotina Colina
Tabla 4.11. Relacin de materias primas y otros elementos de una dieta estndar de frmula cerrada para
roedores
Con arreglo al tipo de formulacin, las dietas se dividen en tres grupos: de ingredientes
naturales, purificadas y qumicamente definidas.
Dietas de ingredientes naturales
En este tipo de dietas los ingredientes primarios provienen de fuentes naturales y se
confeccionan usando como elemento de base cereales sin refinar (avena, trigo, etc.). Se
clasifican en dos grupos: frmulas comerciales cerradas y frmulas abiertas
Frmula cerrada
Su composicin no es conocida. La mezcla de materias primas utilizadas es secreta y es
propiedad del fabricante de un determinado pienso comercial. En el etiquetado suele aparecer la
composicin en nutrientes desde un punto de vista cuantitativo (vase Cuadro 4-11).
En general, en su fabricacin se suelen utilizar dos fuentes primarias de protena, una de
origen animal (harina de pescado o subproductos lcteos), y otra de origen vegetal (soja, gluten
de maz). Como fuente lipdica se utilizan grasas animales adicionadas con cierta cantidad de
aceites vegetales poliinsaturados que suministren los cidos grasos esenciales necesarios. La
fuente de HC se obtiene de mezclas de cereales (maz, sorgo, arroz, cebada, trigo, avena). Como
fuente fosfoclcica se utilizan el fosfato biclcico y limestrone molido. Las vitaminas y
minerales restantes se suplementan en forma de premezclas.
27
Nutricin y alimentacin
El uso de ingredientes naturales hace que estas dietas cerradas presenten una estimable
variabilidad en el porcentaje de nutrientes, condicionada a su vez por la variabilidad intrnseca
de los componentes naturales. Los factores de tipo ambiental (suelo, clima, prcticas de cultivo,
etc.) y genticos (variedades vegetales o razas animales), influyen en la composicin de las
materias primas utilizadas. Asimismo, los procesos tecnolgicos y de almacenamiento tambin
tienen su incidencia al variar de un fabricante a otro.
Por otro lado, los ingredientes no refinados de este tipo de dietas, como por ejemplo, maz,
soja, carne, pescado, etc. pueden contener diferentes tipos y cantidades de pesticidas,
micotoxinas y otros contaminantes. Esta elevada variabilidad entre diferentes partidas en el tipo
y cantidad de los componentes nutricionales y no nutricionales puede afectar a los resultados
experimentales y disminuir la reproducibilidad de los mismos.
En las dietas comerciales de formula cerrada encontraremos, por tanto, diferencias de
composicin relacionadas con diferentes fabricantes y tambin con los distintos lotes o partidas
dentro de una misma marca. Este hecho es aplicable incluso a las dieta de formula abierta.
Pueden darse errores debidos a cambios en las fuentes, en la calidad de los ingredientes o a
diferencias en los mtodos tecnolgicos. Por ultimo, muchas veces los valores de etiquetado no
coinciden con los datos obtenidos mediante el anlisis qumico correspondiente.
Estos datos ponen de manifiesto que el empleo de dietas de distintas marcas puede
modificar los resultados. En este sentido, a la hora de la publicar los datos experimentales se
debe especificar la marca de la dieta utilizada y describir lo mas correctamente posible su
composicin ya que se puede concluir que no existe lo que se suele denominar dieta estndar
para ninguna especie de animal de laboratorio, aunque en muchas publicaciones se pueda leer
esta descripcin. Los trabajos experimentales, ya clsicos de Baynen (1985, 1987) y Wise y
Gilburt (1981) ponen en evidencia los diferentes tipos de variaciones descritas.
Frmula abierta
En algunos casos se publica la composicin en ingredientes y a estas dietas se las conoce
con el nombre de formulas abiertas. Tienen una composicin conocida y pueden ser
confeccionadas por los usuarios. Entre ellas, destacan la NIH-07, NTP-90, NTP-91, NTP-92,
NPT-2000 para roedores y conejos, descritas con detalle por el National Research Council
(NRC) y el American Institute of Nutrition. Una dieta certificada debe aportar informacin de al
menos 83 parmetros (vase Cuadro 4-3) y la determinacin cuantitativa y cualitativa de
posibles contaminantes abiticos y biticos.
Desde 1988 se han venido formulando y evaluando diferentes tipos de dietas con objeto de
entender y conocer la influencia de la protena, grasa y fibra en la incidencia de enfermedades
crnicas y de tumores. La composicin de la dieta puede influir sobre el crecimiento, la
aparicin de enfermedades, las expectativas de vida, la aparicin de tumores y la respuesta a
tratamientos qumicos.
En estudios a largo plazo realizados en la rata, se ha visto que entre las causas de
mortalidad, posiblemente relacionadas con la dieta, se puede incluir las nefropatas en machos,
los tumores de mama en hembras y los tumores de adenohipfisis en ambos sexos.
Entre 1980 a 1994, la dieta no purificada de formula abierta NIH-07, alta en protena (24%
en peso), baja en grasa y fibra (5% y 3.5% respectivamente) y con una relacin Ca/P de 0.75,
fue seleccionada como la dieta a utilizar para los estudios de toxicologa y carcinognesis en
roedores dentro del National Toxicology Program (USA). Esta dieta, quizs debido a su alta
proporcin de protena y a su baja relacin Ca/P, puede haber contribuido a las nefrocalcinosis,
Nutricin y alimentacin
28
NTP-2000
NIH-07
22.18
22.26
15.0
5.0
4.0
0.0
0.0
7.5
8.5
5.5
3.0
3.0
1.0
0.0
0.3
0.4
0.9
0.26
0.2
0.5
0.5
24.5
23.0
10.0
12.0
10.0
5.0
3.0
4.0
0.0
0.0
0.0
2.5
2.0
1.5
0.5
1.25
0.5
0.09
0.0
+
0.25
Dietas purificadas
Estas dietas se formulan con una combinacin de ingredientes naturales, productos
qumicos puros e ingredientes refinados. Las dietas purificadas solucionan las limitaciones de
las dietas de ingredientes naturales, especialmente las relacionadas con la variabilidad de
diferentes partidas y la presencia de contaminantes.
Nutricin y alimentacin
29
30
Nutricin y alimentacin
31
Nutricin y alimentacin
Alimentacin ad libitum
Este rgimen alimenticio supone el libre acceso al alimento las 24 horas del da. Las ratas,
ratones y conejos consumen, sometidos a este rgimen al menos el 80% del alimento durante el
periodo de oscuridad. La alimentacin ad libitum(AL) es aconsejable en experimentos de corta
duracin porque reduce el tiempo que hay que dedicar al mantenimiento de los animales. As
mismo es el sistema usual en las colonias, tanto para la poblacin reproductora como para los
individuos destinados a experimentacin al menos hasta completar su crecimiento (valor K de la
asintota de crecimiento, en torno a las 8-10 semanas de edad para rata). En experimentos de
larga duracin la alimentacin ad libitum es considerada como la variable incontrolada ms
significativa que afecta el resultado final de los bioensayos con roedores, ver ms adelante.
Alimentacin restringida
Este tipo de rgimen implica una restriccin diettica moderada con objeto de paliar o
limitar la sobrealimentacin, sin que se produzcan deficiencias en algn nutriente o suponga una
desnutricin del animal.
El grupo de San Antonio del National Institute on Aging (NIA), desarrolla diferentes
sistemas de Alimentacin Restingida (AR) para un amplio grupo de animales incluidos
primates, analizando exhaustivamente sus ventajas e incovenientes. Existen diferentes
modalidades:
AR moderada: se restringe en torno al 30% de la ingesta diaria, desde las 6-8 semanas
de edad (unos 12-14 g frente a los 17-20 g/da en al, para rata).
AR estricta: el animal recibe slo entre un 50 a 60% del consumo mximo ad libitum.
Mediante este mtodo se han mantenido ratas hasta los 36-40 meses de edad (fase
senil), de incalculable valor para estudios relacionados con procesos degenerativos
asociados al envejecimiento humano.
La alimentacin restringida implica una mayor asistencia tcnica, material y espacio. En
alimentacin ad libitum a los animales se les suministra comida para varios das (se aconseja no
ms de 48 horas, eliminando los sobrantes, antes del llenado de los comederos). En el caso de
AR, se les debe suministrar a diario (se aconseja en el mismo periodo horario) y deben ser
alojados individualmente, ya que el alojamiento en grupo puede generar competencia y
agresividad, con un desnutricin potencial de los individuos menos fuertes. En la actualidad
existen sistemas automticos de control de acceso al alimento (Chronofeeder), que reducen en
parte estos inconvenientes, al poder programar la cantidad y tiempo de alimentacin a voluntad
de las necesidades experimentales.
Alimentacin horaria o controlada
Se permite consumir a los animales tanta comida como quieran pero slo durante periodos
de tiempo fijados al da. Este rgimen de alimentacin se usa en experimentos en los cuales hay
que estudiar parmetros fisiolgicos o bioqumicos en respuesta a la ingesta y compararlos con
los niveles de los mismos en fase de ayuna o bien en aquellos que requieren un estado
nutricional muy controlado. El empleo de sistemas automticos de acceso de alimento es ideal
para este tipo de rgimen.
Alimentacin a la par
Consiste en tener un grupo control que ingiera la misma cantidad de alimento que el grupo
problema el cual tiene una alimentacin restringida. El objetivo que se persigue es poder
comprobar que efectos son debidos al tratamiento que estemos aplicando al grupo problema y
que efectos son consecuencia de la restriccin diettica. La cantidad consumida por el grupo
tratado diariamente se tomara como medida para alimentar al da siguiente al grupo control.
Este tipo de alimentacin restringida supone por tanto, un mayor trabajo y dedicacin e implica
32
Nutricin y alimentacin
al mismo tiempo el uso de jaulas individuales para evitar que los animales dominantes coman
ad libitum con perjuicio de los ms dbiles del grupo.
Alimentacin ad libitum frente a restringida (importancia en estudios a largo plazo)
Desde el ltimo decenio, se estn generalizando los estudios a largo plazo, no slo en
toxicologa y farmacologa, sino tambin para investigaciones de procesos fisiolgicos y
bioqumicos (oxidacin, radicales libres, neurologa), considerando la variables edad, como
factor clave en el anlisis de los resultados. Frente a ello los requerimientos nutritivos de
roedores maduros (sobre todo rata de las cepas Wistar, Fisher y Sprague-Dowley, mayores de 6
meses), utilizados en estudios crnicos (long-term) son virtualmente desconocidos. En muchos
estudios se mantiene a los animales con las mismas dieta de crecimiento, en regimen ad libitum,
hasta edades superiores a los dos aos, sin tomar en cuanta las variaciones en las raciones
nutritivas y la relacin entre los requerimientos energticos del animal y la densidad energtica
de la dieta. Hasta ahora se ha tomado en cuenta el criterio lineal de que los requerimientos
energticos estn relacionados con el peso metablico, es decir el peso corporal (kg0,75)
estableciendo el Requerimiento de Mantenimiento (RM=0,45x peso corporal0,75) (ver
tab.14.10). Sobre esta base se est controlando el valor energtico de las dietas, utilizando las
tipo hipocalricas para animales de envejecimiento sometidos a ARM o ARE. Esta es el caso de
la NTP-200 con un 14.5% de proteina, 8.5% grasa y un 9.5% de fibra o dietas isocalricas con
modificacin de la fuente y contenido en carbohidratos, en especial la sacarosa.
Otro aspecto es la reduccin y control del consumo de dieta, mediante las diferentes
modalidades de Alimentacin Restringida Controlada (ARC). La sobrealimentacin se
considera como una de las variables ms incontroladas en bioensayos en general. En diferentes
estudios de AR, se ha observado una reduccin de enfermedades degenerativas (nefropatas y
cardiomiopatas), tumores relacionados con nutricin (mamitis y otras neoplasias) y obesidad.
Igualmente, en la alimentacin AL se observa un aumento del tamao de diferentes rganos
frente a animales con AR, correlacionados con un aumento de lesiones degenerativas y/o
proliferativas del rin, hgado, glndulas adrenales, pituitaria y tiroides entre otros rganos.
Las poblaciones con ARC, en comparacin con las alimentadas AL presentan, desde los 24
meses de edad, hasta un 40% ms de supervivencia comparada y un incremento sustancial de la
esperanza de vida media (life span), con un 60% de la poblacin superando los 36 meses de
edad .Todo ello asociado a una a disminucin en la variabilidad intramuestra y entre
laboratorios a la hora de obtener resultados. Actualmente se especula con que muchos de los
benefecios generados por la AR son controlados por el eje hipotalamo-pituitaria-adrenales, via
regulacin hormonal.
La AR no genera cambios apreciables en los parmetros hematolgicos y clnicos en
general con excepcin de los triglicrido y algunos parmetros bioqumicos. No obstante se
aprecian diferencias significativa, en la capacidad de sintesis de proteinas o los niveles de
somatostatina.
Otro aspecto a considerar es la influencia de la alimentacin restringida en las funciones
inmunitarias de los animales de edad avanzada (especialmente roedores), que est siendo objeto de
especial atencin. Entre los beneficios debidos a la dieta restringida, se han citado la prevencin de
la esplenomegalia, el mantenimiento de un mayor tamao en las poblaciones de clulas T
cooperadoras y T citotxicas, y la preservacin de la actividad celular del timo. Dos de los
hallazgos ms interesantes han sido el mantenimiento de una poblacin de clulas T vrgenes, que
asegura la persistencia de la capacidad de produccin de interleucina 2, previniendo el declive de la
inmunidad celular asociado al envejecimiento, y la preservacin de las capacidad de proliferacin
de linfocitos T y B en respuesta a mitgenos, por citar tan slo algunos de los estudios recientes al
respecto.
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Nutricin y alimentacin
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Contaminantes abiticos
Las empresas especializadas envan controles peridicos de este tipo de contaminantes con
los niveles mnimos aceptados por las reglamentaciones internacionales (USP EPA, Federal
Register, 1979, vol.44, n9, May 9). Su presencia se debe a posible contaminacin de las
materias primas en los procesos de cultivo (utilizacin de pesticidas o herbicidas) y a los
mtodos de conservacin y almacenamiento.
Tanto para animales de laboratorio convencionales de alta calidad como para SPF no se
puede permitir la presencia, en sus dietas, de contaminantes abiticos. Por ejemplo los residuos
de DDT (dentro del intervalo 0-1 mg/kg) influyen en la actividad de ciertas enzimas
microsomales hepticas de la rata, modificando la respuesta del hgado a procesos
experimentales. Detectar su presencia/ausencia es particularmente importante en estudios de
induccin de inmunotoxicidad, induccin enzimtica y el desarrollo y reproduccin de
toxicidades.Destacan por su importancia:
Residuos de plaguicidas organoclorados y organofosforados. La presencia de los primeros
debe ser <0.005 mg/kg de pienso y de los segundos <0.01 mg/kg. La estimacin de pesticidas
pasa por el anlisis mediante gases masas por ionizacin qumica o mediante trampa de iones
(cromatografia en fase gaseosa). Una analtica completa implica la determinacin de 13
organoclorados y 14 organofosforados diferentes. No obstante se pueden determinar elementos
diana en base a familias o grupos con estructura qumica similar. Al menos analizar la presencia
de malatin, PCP, dieldrin, lindane, heptaclorine y DDT.
Minerales, normalmente pesados. Se determinan por mineralizacin por va hmeda. La
deteccin de metales pasados se basa en determinar al menos 12 tipos diferentes. Metales diana
son arsnico, cadmio, mercurio y plomo. Es importante la ausencia de nitratos y nitritos.
Antibiticos (penicilina G y otros). Se les aaden a las materias primas para incrementar su
conservacin y evitar contaminaciones microbiolgicas. En muchos casos su presencia se ha
debido a la utilizacin de materias primas que llevaban mucho tiempo (incluso aos!)
almacenadas o procedentes de terceros pases con inadecuados sistemas de almacenamiento y
conservacin. En el caso de ensayos de antibiticos no se puede aceptar la adiccin de estos
elementos, por los efectos de alteracin de la resistencia o sensibilidad del antibitico ensayado
(problemas de obtencin de antgeno). Para una deteccin puramente cualitativa se utiliza un
test colorimtrico similar al utilizados para detectar su presencia en orina o rin. Su
cuantificacin exige de mtodos ms complejos como HPLC (cromatografa).
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Nutricin y alimentacin
Nutricin y alimentacin
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MC1-6
AMES
10 ufc/g
9. 105+
COLI
100 ufc/g
Ausencia
SALM
Aus/25g
Ausencia
CLOS
10 ufc/g
30.3+1.65
ESTAFI
Aus/g
Ausencia
MOH/LEV
100 ufc/g
290+162.3
MP1-3
MT1-3
MT4-6
MT7-9
MT10-12
1.8104
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
15.5
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
195000
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
6-7
TMA
105
110
115
120
15
15
15
15
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Esterilizacin por calor: una esterilizacin eficiente por vapor, exige de un autoclaveado
con presiones de vapor superiores a 1 Atmsfera y para que sea completa, los piensos deben
someterse a temperaturas superiores a los 120oC.Valores desde 80oC e inferiores 120oC, se
consideran pasteurizacin, capaz de destruir los organismos vegetativos y huevos de parsitos
pero no las esporas y alguna flora bacteriana. La destruccin de los contaminantes microbianos
se produce cuando es liberado el calor latente por condensacin, despus del vaco,
garantizando el mantenimiento de la temperatura precisa durante el tiempo preestablecido, ya
que es esencial la penetracin completa del vapor en los pellets. Para conseguir estas
condiciones los piensos deben ser extendidos en capas inferiores a 3 cm de espesor, a fin de
facilitar una distribucin homognea del calor.
En s mismo es evidente que un proceso de esta naturaleza, diseado para la aniquilacin de
microorganismos, pueda originar alguna destruccin de los componentes nutricionales de la
dieta. Aparentemente no afecta al contenido de protena cruda pero s puede afectar a su
digestibilidad efectiva (DT), valor biolgico (BV) y protena neta utilizada (NPU=TDxBV),
debido a una sensible reduccin en la disponibilidad de aminocidos como la metionina y la
lisina fundamentalmente. Por otra parte la esterilizacin por calor puede producir una severa
afectacin de las vitaminas termolbiles fundamentalmente del complejo B, B1, B6, cido
pantotnico, vitamina A, C y cido flico (Figura 4.2). La composicin del complemento
mineral, tambin es importante debido a posibles alteraciones del pH de la dieta que a su vez
pueden afectar a la perdida de nutrientes. Se considera adecuado suplementar las dietas
esterilizadas con el doble de su contenido vitamnico para compensar posibles prdidas. Otra
secuela de la esterilizacin por vapor es el efecto de bronceado (Millard), como consecuencia
de la reaccin entre los carbohidratos y los grupo amino de los aminocidos.
16
14
12
10
15
20
30
15
20
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15
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30
15
20
30
15
20
105
105
105
110
110
110
115
115
115
121
121
121
124
124
124
130
130
H U M E D A D
C E N IZ A S
V IT A
V IT E
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Figura 4.3. A. Muestras de pienso sin esterilizar (superior derecha) y esterilizadas a diferente temperatura
(130C superior izquierda, 115C inferior derecha, 120C inferior izquierda). B. Muestras de pienso en
mal estado y sometidas a anlisis microbiolgicos. Se observa la formacin de colonias de mohos y
levaduras. (Fotos cedidas por J. Martn Ziga).
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