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Chapitre N2

LA QUANTIFICATION

Sommaire

I)

Introduction

page 3

11 Les calculs dincertitudes


111 Incertitude absolue
112 Incertitude relative

II)

Les mthodes absolues

page 4

21 Les mthodes directes


22 Les mthodes directes impliquant lapplication dune loi
23 Les dosages chimiques
221
222

Dosages par mthode directe


Dosages en retour

III) Les mthodes comparatives

page 10

31 Ltalonnage externe
32 Ltalonnage interne
33 La mthode des ajouts doss
331 Application labsorption atomique
332 Application la chromatographie

IV) Conclusions

page 18

V)

page 19

Bibliographie

I)

Introduction

Un des points fondamentaux de la chimie analytique, au niveau de la Recherche et


Dveloppement et au niveau du contrle, est laspect quantitatif et reprsentatif du rsultat
propos.
L aspect reprsentatif de lanalyse sera abord dans le chapitre N12 (chantillonnage et
prparation des chantillon). Il intgre les paramtres de conservation, dextraction et de
purification des chantillons analyser. Ces termes font partie intgrante de la mthode
danalyse.
De mme, chaque mthode danalyse sera associe une mthode de quantification et de
calcul propre la mthode. Cependant, ces mthodes de quantification sont relativement
restreintes et on saperoit rapidement quelles sont communes toutes les mthodes
danalyses.
Globalement, on peut les dissocier en deux familles :
-

Les mthodes qualifies dabsolues lincertitude prs


Les mthodes comparatives

Ltude gnrale des concepts et des domaines dapplication de ces deux familles fait lobjet
de ce chapitre. Un rsultat analytique ne pouvant tre absolu (il est toujours entach dune
certaine erreur, un paragraphe sur lincertitude et le calcul derreur viendra complter cet
expos.
Afin de rendre cette prsentation plus pratique, les diffrentes techniques seront prsentes
partir de normes analytiques lies lindustrie agroalimentaire et lenvironnement.
11 Rappel sur les calculs dincertitudes
Soit une fonction quelconque z de plusieurs paramtres nots x et y dans le cas prsent. Deux
cas se prsentent :
-

z est une fonction additive des variables x et y


z est une fonction complexe (multiplicative par exemple) des variables x et y

Dans le premier cas, on va pouvoir facilement dterminer une erreur absolue sur le calcul de
z, alors que dans le second cas, on ne pourra, aisment, que calculer une erreur relative.
111 Calcul derreur absolue z
soit la fonction z = ax + by + c

a, b et c tant des constantes.

La diffrentielle de z scrit :
dz = a dx + bdy

et

z = dz = a dx + b dy = a x + b y
z = a x + b y

4
Ce que lon peut noncer sous la forme :
Pour une fonction simplement additive, lerreur absolue dune fonction est gale la somme
des erreurs absolues affectes de leurs coefficients.
Connaissant lerreur absolue, il est aise de calculer lerreur relative z / z, en divisant
lerreur absolue par la valeur de la fonction.
Ce qui vient dtre appliqu deux variables peut tre appliqu un nombre quelconque de
variables
112 Calcul de lerreur relative
Dans le cas dune fonction complexe, on est oblig davoir recours aux calculs derreurs
relatives. Le cas le plus simple concerne une fonction z dfinie par z = a x* y
a et b reprsentant des constantes. La diffrentielle de z scrit :
dz = a y dx + a x dy (diffrentielle dun produit)
dz / z = (a y dx / a x y) + (a x dy / a x y)
de qui se simplifie
dz / z = (dx / x) + (dy /y)
soit, lchelle macroscopique
z / z = (x / x) + (y / y)
ce qui, gnralis une fonction complexe n variables snonce :
Lincertitude relative dune fonction est gale la somme des incertitudes relatives.

II)

Les mthodes absolues

Elles sont le fruit dune mesure dun paramtre physique (masse, volume, pression),
dun calcul numrique rsultant de lapplication dune loi (mesure polarimtrique, mesure
dun indice de rfraction), dun calcul rsultant dune raction chimique (acido-bsique,
rdox, complexiomtrique)
21 Mesure dun paramtre physique (masse, volume, pression partielle)
Un exemple concret concerne la dtermination de la teneur en cendres dans des aliments pour
animaux (NF V 18-101)1. Le principe est applicables (sous dautres rfrences normatives)
une multitude de matrices.
Cette application est base sur une double pese aprs dessication 105C et incinration de
la matire organique au four 550C. Ce que lon peut schmatiser sous la forme :

Creuset
m0
Creuset

Echantillon 1
m1

Creuset + Eau +
Fraction organique +
Fraction minrale

Echantillon 2
m2
Creuset +
Fraction minrale
Fraction organique

Echantillon 3
m3
Creuset +
Fraction Minrale

Aprs refroidissement (au dessicateur) et pese, le taux de cendres est exprime par rapport
la matire brute et par rapport la matire sche comme :
% cendres (/ MB)= [(m3- m0) /(m1 - m0)] * 100
% cendres (/ MS) = [(m3- m0) / (m2- m0)] * 100
Le concept est identique pour la dtermination de la matire sche (qui est le rfrenciel
commun toutes les analyses relevant du domaine du vivant)
% MS = [(m2- m0) /(m1 - m0)] * 100
ce qui se traduit par la relation:
% Cendres (/MB) = % cendres (/MS) * % MS
Un calcul derreur relative ralis sur le pourcentage de cendre exprim par rapport la
matire sche peut tre ralis :
La masse (m2 m0) est de lordre du gramme. La masse (m3 m0) est de lordre de la
centaine de mg. La prcision de la balance peut tre considre de lordre du mg.
Le pourcentage derreur ralis sur la teneur en cendres est alors gal 2 m /1 + 2 m / 0,1
= (0,002 / 1) + (0,002 / 0,1) = 0,022 soit 2,2 %. Ceci nous montre quil est aberrant de
restituer un tel rsultat avec cinq chiffres aprs la virgule Dans le cas prsent, on une teneur
en cendres de 10% par rapport la matire sche, ce qui se traduit par une erreur absolue de
0,22 % (deux chiffres aprs la virgule seront significatifs et suffisant).
On retrouve ces concepts de mesure de paramtres physiques dans la dtermination des
carbonates (analyses de terre : norme X 31-105)2 par dplacement de ceux-ci et mesure du
volume de CO2 dgag suivant lquation :
CO32- + 2 H+

H2O + CO2(g)

Une variante de cette mthode consiste mesurer des pressions partielles de CO2 (Qualit de
leau norme NF T 90-011).
22 Mthodes directes bases sur un calcul rsultant de lapplication dune loi
simple
Un certain nombre de mthodes reposent sur une mesure simple dun paramtre physique
intrinsque lchantillon, grandeur extensive, et, partir dune loi simple, den dterminer la
composition. Le dosage de lamidon, dans des aliments pour animaux (3me directive du J.O
du 27/11/1980)3 illustre ce propos.

6
La mthode repose sur une simple lecture polarimtrique du pouvoir rotatoire de la solution
obtenue aprs hydrolyse acide de lamidon constitutif (Mthode de Ewers) et dfcation (sel
de Carrez).
Lors de lhydrolyse acide, lamidon est transform en glucose
Le pouvoir rotatoire est li la concentration par la 1re loi de Biot :
= []D* l * C
expression dans laquelle reprsente le pouvoir rotatoire de la solution, []D le pouvoir
rotatoire spcifique du glucose par rapport la raie D du sodium, l le trajet optique (longueur
du tube exprime en dm) et C la concentration exprime en g/ml.
La concentration en glucose alors dfinie par la relation C = / []D* l
Linconvnient de ces mthodes rside dans le fait quelles ne soient pas slectives. On
saffranchit de ce problme en ralisant un blanc permettant llimination des interfrences.
Dans le cas prsent, le blanc est ralis sur un extrait thanolique 40% de lchantillon. Les
sucres solubles vont alors pouvoir tre quantifis aprs hydrolyse et dfcation, soit
= []D* l * C
et la concentration en amidon est donne par la diffrence (C-C) affecte dun terme correctif
li la matrice :
Teneur en amidon = A ( - )
A prenant en compte le facteur correctif li la matrice, la transposition amidon / glucose et la
longueur du tube polarimtrique.
Un calcul derreur appliqu la teneur en amidon conduit une prcision de lordre du
pourcent.
23 Mthodes bases sur des titrages chimiques
Les plus courantes en laboratoire de contrle, elles sont bases sur des ractions acidobasiques, sur des ractions de complexation, de prcipitation et rdox. On peut les scinder en
deux familles lintrieur desquelles les mthodes de dosage point final sont les plus
rpandues:
-

les mthodes de dosage directes


Les mthodes de dosage en retour

Lavantage des secondes est quelles permettent de saffranchir dun certain nombre de
paramtres lis la mthode.
Dans tous les cas, le calcul est bas sur la conservation de la matire et/ou de la charge
globale, ce qui se traduit par lexpression gnrale:

Le nombre dquivalent apport par lun des protagonistes est gal au nombre dquivalent
reu par les autres.
On fera donc rfrence, dans tous ces calculs la normalit (ou titre) et non pas la molarit.
On rappelle que la normalit est dfinie comme le nombre dquivalents (dions H+ dans le
cas dun acide, dions OH- dans le cas dune base, dlectrons dans le cas dune espce
rdox) libr (ou capt) par litre de solution alors que la molarit est dfinie comme tant le
nombre de mole de lespce i par litre de solution.
Lavantage de lutilisation de la normalit rside dans le fait quune seule quation permet de
rsoudre lensemble des problmes de dosages chimiques.
231 Mthodes de dosage directes
La dtermination de lindice dacide dun corps gras (norme NF T 60-204)4 illustre cette
technique.
Les acides gras libres prsents dans lchantillon (de masse m), solubiliss dans un mlange
ther /thanol, sont doss quantitativement par la potasse de titre N1 = 0,1 N en prsence dun
indicateur color, la phnolphtaline, suivant lquation :
RCOOH + K+ + OH-

RCOO- K+ + H2O

Avant la neutralisation la phnolphtaline (milieu acide) est incolore, alors quen milieu
basique (au-del de la neutralisation) elle se colore en rose (on est donc bien en prsence dun
dosage point final).
La neutralisation (virage) est obtenue pour un volume de potasse vers de V1 ml.
Ans tous les cas, on crira que :
Le nombre dquivalent de potasse vers est gal au nombre dquivalent dacide prsent dans
lchantillon
Soit nb dquivalent vers = N1 V1 = nb dquivalent dacide prsent dans la prise essai de m
gramme.
Par dfinition, lindice dacide reprsente la masse de potasse, exprime en mg, ncessaire
pour neutraliser un gramme de corps gras
et lon obtient , en multipliant par 56,1 la masse molculaire de la potasse, lindice dacide Ia :
Ia = (56,1 * N1 V1) / m
Avec N1 = 0,1 N, m exprime en gramme et V1 exprime en millilitres. Ce qui conduit une
formule gnrale :
Ia = 5,61 V1 / m
Un calcul derreur relative sur Ia montre que Ia / Ia = V1 / V1 + m / m

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Pour une prise dessai de 0,400 g 1 mg prs, et un volume vers de lordre de 20 ml 0,1ml
prs, on obtient un indice de lordre de 300 avec une erreur relative de (0,1 / 20) + (1 / 400) =
0,75 % soit +/- 2 : Il est donc superflu dafficher un rsultat dindice avec une virgule.
Un grand nombre de mthodes utilisent cette technique, par exemple le dosage de lazote
ammoniacal (NF T 90-015)5, le dosage des chlorures par la mthode de Mohr (NF T 90-014)6
la dtermination des titres alcalin (TA) et alcalin complet (TAC) (NF T 90-036)7 et bien
dautres.
Lavantage de ces mthodes est leur simplicit de mise en uvre et de calcul. Linconvnient
majeur rside dans le fait que des interfrences ventuelles ne sont pas prises en compte et le
calcul suppose des titres connus et constants. Hors ceci est rarement vrifi, ce qui impose
loprateur de vrifier rgulirement le titre de ses solutions de dosage et dajuster ses calculs
en fonction des variations observes. Pour ce faire, il ralise en parallle un essai blanc, en
remplaant lchantillon par un volume connu de solution dacide fort de titre connu, qui lui
permet dintroduire le titre exact, k*0,1 N), linstant t, de sa solution titrante. I on note V0 le
volume dacide de titre N0 et V1 le volume de potasse vers, on a la relation
N0 V0 = V1 * 0,1 k (On notera au passage que cette dtermination introduit une nouvelle
erreur relative de lordre de 0,5 1 %)
232 Mthodes de dosage en retour
Une mthode de saffranchir des interfrences lies la procdure de dosage, consiste
raliser un dosage en retour. La dtermination de lazote total, par la mthode Kjeldahl,
(NF V 18-1008, dans le cas des aliments pour animaux) illustre cette technique. Cest une
technique largement utilise dans le domaine du vivant, dans la mesure ou elle permet la
dtermination du taux de protines par application de coefficients multiplicatifs.
Le principe est simple. Il consiste en une minralisation de lchantillon, suivie dun
dplacement des ions ammonium forms par une lessive de soude, entranement la vapeur et
pigeage de lammoniac libr dans une solution dacide sulfurique et enfin dosage de lacide
sulfurique restant par une solution basique de potasse ce que lon peut illustrer de la manire
suivante :
a) Minralisation : En prsence de catalyseur ( base de mercure), en milieu acide
sulfurique concentr et chaud, lazote constitutif (sous toute ses formes) est transform en
ions ammonium :
y N + x H+

y NH4+
b) Dplacement :
En prsence de soude concentre (10 M), les ions ammoniums (acides)
sont neutraliss suivant lquation :
NH4+ + OH-

NH3 + H20

c) Entranement la vapeur Par hydrodistillation, lammoniac est entran vers un rcepteur


contenant une solution dacide sulfurique 0,1 N
d) Pigeage de lammoniac Lammoniac, base, ragit quantitativement avec lacide
sulfurique suivant lquation :
NH3 + H+

NH4+

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e) Dosage de lacide rsiduelLacide sulfurique rsiduel prsent dans le rcepteur est dos par
la soude 0,1 N en prsence dun indicateur color, lindicateur de Tashiro (mthode point
final).
f) Essai blanc ;
En parallle chnatillon, un essai est ralis dans les mmes
conditions, sans utiliser dchantillon.
Soit m la masse dchantillon utilise, soit V0 le volume dacide sulfutique de titre
N0 = 0,1N utilis dans le pige, Ve et Vb les volumes de soude N1 = 0,1N utiliss pour la
neutralisation de lacide sulfurique rsiduel des essais (chantillon et blanc), on peut crire :
Pour le blanc :Nb de milliquivalent dacide sulfurique initialement vers = Nb de
milliquivalents de base ncessaire la neutralisation de lacide sulfurique rsiduel + Nb de
milliquivalent dacide sulfurique ayant ragit avec les espces interfrentes (tous les volumes
sont exprims en millilitres):
N0 V0 = N1 Vb + Interfrents
Interfrents = N0 V0 - N1 Vb
De manire analogue, on peut crire, en ce qui concerne lchantillon, que le nombre de
milliquivalent dacide sulfurique initialement vers est gal au nombre de milliquivalent de
soude vers pour neutraliser lacide sulfurique rsiduel + le nombre de milliquivalents
dacide sulfurique ayant ragit avec les interfrants + le nombre de milliquivalent dacide
sulfurique ayant ragit avec lammoniac issue de lchantillon, soit
N0V0 = N1 Ve + interfrents + Nb de milliquivalents dammoniac
Or les interfrents sont gaux (N0 V0 - N1 Vb)
Et il vient :
Nb de milliquivalents dammoniac = N0V0 N1Ve Interfrents
= N0V0 N1 Ve N0V0 + N1Vb
Nb de milliquivalents dammoniac = N1(Vb Ve)
La masse atomique de lazote tant de 14, il est ais de calculer la masse dazote (exprime en
milligrame) contenue dans lchantillon de masse m, soit 14* N1(Vb Ve) et dexprimer a
teneur pondrale en azote total :
% dazote = [14* N1(Vb Ve)* 10-3 / m ] * 100
et en tenant compte de N1 = 0,1, il vient :
% dazote = 0,14 (Vb-Ve) / m
avec Vb et Ve exprims en millilitre et m exprime en gramme
Un calcul derreur, en travaillant avec 25ml dacide sulfurique 0,1N, conduit une erreur
relative de lordre de 2% en ngligeant lerreur sur le titre N1.
On remarquera que, dans cette technique, on saffranchit du itre exact de la solution dacide
sulfurique, ainsi que de son volume (celui-ci doit tre cependant identique dans les deux
essais).

10
Cette technique retrouve ses applications dans la dtermination de la DCO pour les eaux de
rejet (norme NF T 90- 101)9 pour la dtermination des chlorures dans le lait par la mthode de
Carpentier Volhard, et bien dautres applications.

III) Les mthodes comparatives


Paralllement ces mthodes de quantification que lon peut qualifier de relativement
absolues, il existe un autre concept de quantification qui consiste comparer une valeur
induite (bien souvent un signal lectrique une chelle externe. En fonction des paramtres
matriss par loprateur, cette technique se dcline en trois sous-ensembles :
-

Ltalonnage externe
Ltalonnage interne
La mthode des ajouts doss

Le premier avantage de ces techniques comparatives est de saffranchir dun certain nombre
de paramtres de rglage des appareillages. En effet, dans tous les cas, on va mesurer un
signal lectrique ou un signal optique damplitude faible (des volts, des intensits de
faisceau lumineux) : Il sera donc ncessaire, dans un premier temps damplifier ce signal et,
qui dit amplification, dit gain, dit rglage dun gain optimum. En fonction de paramtres
physiques (vtust des sources lumineuses, encrassement des sources de dtection) le gain
optimum peut conduire des rglages diffrents. Par les techniques comparatives, on
saffranchit de ces paramtres que lon peut qualifier dinternes la machine. On fera
toutefois attention de ne pas les modifier en cours danalyse.
Hormis ces paramtres lis aux rglages de la machine, un certain nombre de paramtres
peuvent tre lis la loi de rponse de la technique. Ainsi, en transmission optique (absorption
molculaire, absorption atomique, mission), il existe une relation simple entre lintensit
du rayonnement incident et celle du rayonnement transmis, du type
d= log10 I0 / It = k l C
expression dans laquelle Io et It reprsentent les intensits des rayonnements incidents et
transmis, l la longueur du trajet optique, C la concentration en espce analyse et k un facteur
de proportionnalit li la technique utilise et propre au solut analys.
Dans certains cas, loprateur matrise la valeur et la constance de l ( cas de labsorption
molculaire en cuves, de labsorption atomiqueDans ce cas, le produit k*l reste constant, et
il existe une relation linaire simple entre le signal et la concentration. Loprateur pourra
alors utiliser une technique dtalonnage externe.
Dans dautres domaines, la chromatographie, labsorption molculaire en film., loprateur
ne matrise pas obligatoirement la quantit dchantillon injecte dans lappareil (lpaisseur
du film dans le cas de labsorption), la rponse nest donc pas simplement proportionnelle la
concentration. Il saffrancht de ce problme en utilisant une technique dtalonnage interne.
Enfin, il peut, par souci dconomie de temps, tre amen utiliser la mthode des ajouts.

11
31 La mthode dtalonnage externe.
La plus simple mettre en uvre, elle est utilisable lorsque lon a la matrise des paramtres
longueur du chemin optique (absorption molculaire, atomique) ou la matrise du volume
inject dans le cas de la chromatographie (Injection en boucle de volume constant applique
en HPLC..).
Dans tous les cas, la technique comporte trois phases :
-

La ralisation dune courbe dtalonnage partir de solutions de concentrations


connues
La mesure du paramtre sur lchantillon inconnu
La comparaison de la mesure la courbe dtalonnage.

Elle est applicable en mthode directe, si le solut est lui-mme color ou absorbe dans le
domaine considr et en mthode indirecte (introduction dun chromophore) si le solut est
transparent dans le domaine considr.
Lexemple de la dtermination du phosphore soluble dans les sols (norme NF X 31-161)10
illustre cette technique (aprs drivatisation).
En prsence de ractif sulfomolybdique, le phosphore forme un complexe color qui absorbe
fortement dans le rouge ( 825 nm). Cette absorption molculaire obit la loi de
Beer-Lambert (d = log10 I0/It = l C), expression dans laquelle reprsente une constante
appele le coefficient dextinction molaire, l le trajet optique (paisseur de la cuve = 1 cm
dans le cas prsent) et C la concentration.
Courbe dtalonnage
A partir dune solution mre dortho phosphate d potassium 450 mg par litre, on prpare une
gamme de quatre solutions talons respectivement 0 ; 2,25, 4 et 9 mg /l par prlvement de
volumes de solution mre adquate et dilution 1000 avec de leau qsp.
On soumet un aliquote de chacune de ces solutions talons la raction de complexation avec
le ractif sulfomolybdique et on mesure labsorbance de la solution aprs complexation.
On peut alors tracer la courbe d = f(C) :

12
ce qui se traduit par une droite dtalonnage dquation :
d = 0,1656 m 0,0006

R = 99,07%

Mesure de lchantillon
Un aliquote dchantillon de masse m0 est soumis la procdure dextraction et celle de
drivatisation de manire analogue celle utilise pour les solutions talons.
La lecture de la densit optique 825 nm conduit une valeur d = 1,247
Comparaison la courbe dtalonnage
Soit on reporte la valeur de la densit optique sur laxe des ordonnes, on intercepte la droite
dtalonnage et on abaisse la verticale qui coupe laxe des abscisses en m, soit on utilise
directement lquation de la droite,(plus prcis et on saffranchit des valeurs errones) ce qui
conduit m = 7,54 mg /l . Connaissant la procdure de ralisation de la solution finale(aprs
drivatisation), il est ais de revenir la teneur en phosphore soluble dans lchantillon initial
de masse m0.
En terme de prcision, la lecture de labsorbance napporte que trs peu derreur, les appareils
fournissant des mesures de densit optique avec des prcision de lordre de 0,1 % (a condition
davoir un signal de forte amplitude). Lerreur principale sera apporte par lensemble des
actions ralises dans la procdure dextraction et de drivatisation.
Avantages et inconvnients
Lavantage essentiel de la mthode rside souvent dans sa facilit de mise en uvre qui en
font une technique trs rpandue. Elle est applicable et applique dans toutes les mthodes
dabsorption atomique (NF T 90-112)11, les mthodes dabsorption molculaire
(NF T 90-012)12, la chromatographie en phase liquide (HPLC)
Linconvnient peut tre, comme cest le cas ici, sa lourdeur (ncessit dappliquer la raction
de drivatisation lensemble des talons).
32 la mthode de ltalonnage interne
Dans un certain nombre de techniques, il nest pas possible de maintenir constant un
paramtre de lanalyse . Cest le cas que lon rencontre notamment en chromatographe en
phase gazeuse (CPG) ou lon ne connat pas prcisment le volume dchantillon inject dans
le chromatographe. Ceci est galement vrai pour les mthodes optiques pour lesquelles on
travaille sur des films, pour lesquels on ne connat pas lpaisseur. On saffranchit de cette
mconnaissance en introduisant, dans lchantillon analyser une substance en quantit
connue. Le choix de cette substance sera explicit ultrieurement.
Une application de cette technique concerne lanalyse des acides gras, sous forme desters
mthylique FAME, par chromatographie en phase gazeuse (norme NF T 60 234)13

13
En chromatographie, la thorie des plateaux, que lon abordera ultrieurement, conduit des
pics chromatographiques (rponse en fonction du temps) Gaussiens. Une des proprits des
courbes gaussiennes est que laire sous-tendue par la gaussienne est proportionnelle la
population prsente.
Traduit en terme chromatographique, cela signifie que laire sous-tendue par le pic
chromatographique est proportionnelle la masse de solut i inject dans le chromatographe,
ce que lon peut crire :
mi = ki Ai
expression dans laquelle mi reprsente la masse de solut i injecte dans le chromatographe,
Ai laire du pic chromatographique correspondant au solut i et ki le facteur de
proportionnalit propre au solut i et dpendant des conditions chromatographiques.
La dtermination du facteur de proportionnalit pourrait se faire par injections de diffrentes
masses mi et mesures des aires Ai correspondantes. Mais, en chromatographie en phase
gazeuse, on injecte des volumes dchantillon de lordre du microlitre laide de
micro seringues. Dans ces conditions, il est pas possible de connatre prcisment le volume
inject dans le chromatographe, mme si celui-ci est relativement constant pour un oprateur
donn . On saffranchit de cette contrainte en introduisant, dans lchantillon analyser un
solut de rfrence que lon appelle ltalon interne. Son choix sera abord en fin de
paragraphe
On peut alors crire :
Pour le solut i
Et pour ltalon interne

mi = ki Ai
me = ke Ae

Ce qui conduit au rapport

mi / me = (ki / ke) (Ai / Ae) = Kie (Ai / Ae)

Kie tant le facteur de rponse du solut i par rapport ltalon interne. Ce terme est constant
dans les conditions chromatographiques donnes.
Par ce rapport, on saperoit que lon saffranchit du volume inject dans le chromatographe.
En effet si lon injecte un volume suprieur, dune analyse lautre, laire du pic du solut i
va augmenter, mais en mme temps laire du pic du solut e va galement augmenter, et ceci
dans le mme rapport, si bien que le rapport de ces deux aires restera constant.
Pour un systme homogne (monophasique), lchantillon prsent dans la seringue
dinjection est le parfait reflet de lchantillon prsent dans notre tube essai
Ce qui peut se traduire par lexpression :
mi / me = mi / me = Kie (Ai / Ae)
soit :
mi = me = Kie (Ai / Ae)
La ralisation et lanalyse de solutions rfrences de mi connues et la connaissance de me
permettra la dtermination du facteur de rponse Kie.
Connaissant ce facteur de rponse et me, on pourra alors dterminer mi dans nimporte quel
chantillon.

14
Comme prcdemment, la procdure comporte trois tapes
-

La ralisation de la courbe dtalonnage


La mesure des aires chromatographiques des chantillons
Linterprtation de ces mesures

La mthode est applique la quantification dun esters mthylique dacides gras, lacide
palmitique C16 :0 par exemple (on pourra gnraliser la mthode lensemble des acides gras
prsents dans une matrice animale ou vgtale.
Etalonnage
On prpare trois solutions hexaniques de palmitate de mthyle contenant 100, 250 et 500
mg/l dester par litre de solution.
En parallle, on prpare une solution hexanique dheptadcanoate de mthyle (C17 :0) 250
mg /l (talon interne)
Dans un flacon vial, on introduit 1ml de solution dtalons et 1 ml de solution dtalon interne
et on procde injection de ces trois nouvelles solutions (1 l par solution)
On obtient les rsultats suivants :
Echantillon
1
2
3

mi (g)
100
250
500

me (g)
250
250
250

Ai (ua)
117.600
307.000
588.000

On peut, pour chacun des chantillons, calculer mi / me et Ai / Ae


Echantillon
1
2
3

mi / me
0.4
1
2

Ce qui conduit la courbe suivante (page suivante)


Et lquation :
Ai / Ae = 1,106 (mi / me) + 0,066

R = 99,8 %

Ou
mi / me = 0,904 (Ai / Ae) 0,0596R = 99,8 %

Ai / Ae
0.480
1.218
2.261

Ae (ua)
245 .000
252.000
260.000

15

Analyse dun chantillon inconnu


Dans un flacon vial, on introduit 1ml de solution hexanique de lchantillon inconnu et 1 ml
de solution dtalon interne et on procde linjection dans le chromatographe de 1 l
environ de cet chantillon.
On relve les donnes suivantes :

Ae = 270.300

et

Ai = 407.500

Exploitation des rsultats


On peut alors calculer Ai / Ae = 1.507

ce qui, inject dans lquation prcdente conduit


mi / me = 1,303

or me = 250 g

soit

mi = 325.81 g

cette quantit tant solubilise dans 1 ml de solution hexanique, on a directement accs la


concentration initiale qui est de :
C = 325.81 mg /l
En fonction de la procdure de prparation de cette solution hexanique, on peut alors aisment
revenir la teneur en cet acde gras dans la matrice initiale.

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Avantages et inconvnients
Lavantage de cette technique est quelle permet de saffranchir compltement des volumes
injects dans le chromatographe.
Le premier inconvnient est quelle est relativement longue mettre en uvre, prparation
des solutions talons, de la solution dtalon interne, analyse de ces diffrentes solutions
Le second point trs important concerne le choix de ltalon interne. Celui-ci doit avoir une
structure chimique proche de celle des soluts analyss. Il ne doit pas tre prsent dans a
matrice initiale. Il doit sintgrer dans le chromatogramme sans interfrence avec les autres
soluts. Il ne doit pas ragir chimiquement avec dautres constituants prsents et doit tre
compatible avec le systme de dtection utilis. Enfin il doit tre parfaitement soluble dans le
solvant de mise en solution de lchantillon.
Toutes ces contraintes fon quil nest pas toujours ais de trouver un talon interne qu rponde
toutes ces contraintes.
Dans le cas trait, lheptadcanoate de mthyle rpond parfaitement lensemble de ces
contraintes de par sa structure (cest un acide gras comme ceux tudis), de par son absence
des substances naturelles (vgtales ou animales) et par son positionnement sur le
chromatogramme.
A titre dexemple, dans ces conditions chromatographiques, le nonadcanoate ne peut tre
utilis comme talon interne : si de par sa structure, il est proche des soluts tudis, il est
galement absent ltat naturel des substances vgtales et animales mais son comportement
chromatographique est tel quil interfre avec celui du C18-3 acide linolnique.
Au-del de la chromatographie, cette technique est utilise en spectroscopie Infra-rouge, en
Rsonance Magntique nuclaire et en radiochimie.
33 Mthodes des ajouts doss
Moins utilise dans les mthodes officielles, cette technique prsente lavantage de sa
simplicit et de sa mise en uvre. Elle est cependant trs utilise pour des analyses de traces
dlments mtalliques et / ou de polluants. Elle est base sur une double dtermination dun
solut inconnu :
-

Une premire dtermination sur lchantillon brut


Une seconde dtermination sur lchantillon dop

On peut lappliquer toutes sortes de techniques analytiques, on va en voir deux exemples


simples lun concernant labsorption atomique, lautre la chromatographie
331 Application labsorption atomique en flamme
Soit une solution inconnue de concentration C1 en lment mtallique M1. Labsorption
atomique de cette solution rpond une loi du type :
d = log10 I0 / It = K l C
expression dans laquelle I0 et It reprsentent les intensits
des rayonnements incidents et transmis, l la longueur de la flamme, C la concentration en

17
lment mtallique dos et K le facteur de rponse de cet lment (dans les conditions
danalyse)
En procdant lanalyse directe de lchantillon, on peut crire :
d1 = K l C1
avec C1 = m1 /V
On va alors doper cet chantillon avec une masse m2 de llment mtallique M1 (on pourra
raisonnablement ngliger la variation de volume), ce qui va conduire une nouvelle densit
optique :
d2 = K l C2
avec C2 = (m1 + m2) /V
soit le rapport :

d1 / d2 = C1 / C2 = (m1 / V) / (m1 + m2) / V

d1 / d2 = m1 / (m1 + m2)
et
m1=

m2 (d1 / d2)
|1 (d1 /d2)]

332 Application a chromatographie


On peut galement utiliser cette technique en chromatographie. Elle ne permet cependant pas
de saffranchir du volume inject et on devra avoir recours un standard interne pour lever
cette ambigut.
Soit un chantillon contenant une masse m1 de solut analyser. On lui ajoute une masse
me de standard interne, comme dans le cas de ltalonnage interne et on procde linjection
chromatographique.
On obtient deux aires A1 et Ae pour ce premier chantillon, avec une relation simple :
m1/ me = K1e A1 / Ae
A lissue de cette premire injection, on ajoute une masse m1 connue de solut analyser
chantillon prcdent et on procde son injection chromatographique.
On obtient alors deux nouvelles aires A1 et Ae pour le solut et le standard interne avec le
rapport (en ngligeant les variations de volume et de masse):
(m1 + m1) / me = K1e A1 / Ae
ce qui conduit, en faisant le rapport de ces deux expressions et en simplifiant par K1e et me

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m1 / (m1 + m1) = (A1 / Ae) / (A1 / Ae)


soit :
m1 =

m1 ( A1 / Ae)
[ (A1 / Ae) (A1 / Ae)]

par rapport la technique de ltalonnage interne, la technique des ajouts doss est plus
simple mettre en uvre dans la mesure ou elle ne ncessite que deux points danalyse.
Cependant, par souci de fidlit, on sera bien souvent oblig de procder trois analyses de
manire obtenir une valeur moyenne.

IV) Conclusions
N peut retenir que toutes les techniques analytiques mettant en uvre des techniques
spectrales font appel des mthodes de quantification bases sur un talonnage externe, si les
paramtres, autres que la concentration, sont matriss. Dans tous les autres cas, on aura
recours des techniques dtalonnage interne. Ces techniques conduisant, dans la plupart des
cas des analyses discriminatives et relativement fines. Les erreurs ralises sont alors, en
gnral, imputables la prparation des chantillons (dilution, extraction, pese)
Dans le cas danalyses globales, les mthodes sont bases sur des principes de conservation de
la matire (cas des pese, et de lidentit des quivalents lectroniques ou ioniques
changs, ce qu lon traduit par une seule loi N1V1 = N2 V2. Lerreur sur le rsultat st lie la
complexit de lexpression du rsultat. Dans les cas les plus simples, elle sexprime en erreur
absolue (et on peut la transformer en erreur relative), dans les autres cas, elle sexprime en
erreur relative (et on pourra toujours revenir une erreur absolue). Dans tous les cas, il nest
pas justifi daccompagner un rsultat avec trois ou quatre chiffres aprs la dcimale.

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BIBLIOGRAPHIE

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