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AREQUIPA PERU
2016
INDICE DE CONTENIDOS
CAPITULO I............................................................................................... 11
1.1 INTRODUCCION................................................................................11
1.2 OBJETIVOS........................................................................................ 13
1.3 HIPOTESIS......................................................................................... 14
CAPITULO II: MARCO TEORICO...................................................................15
2.1. MICROALGAS................................................................................... 15
2.1.1. Caractersticas generales de las microalgas............................................15
2.1.2. Morfologa y Taxonoma de Chlorella...................................................15
2.1.3. Composicin Bioqumica..................................................................17
2.1.4. Reproduccin................................................................................. 17
2.1.5. Cintica de crecimiento de las microalgas..............................................18
2.1.6. Medios de Cultivo para Microalgas......................................................18
2.1.7. Parmetros de cultivo.......................................................................20
2.1.8. Contenido lipdico de las microalgas.....................................................23
2.1.10 Sntesis de Lpidos..........................................................................24
2.1.11 Usos y aplicaciones de las microalgas..................................................25
2.2. SISTEMAS DE CULTIVO......................................................................26
2.2.1. Sistemas Abiertos............................................................................26
2.2.2. Sistemas cerrados............................................................................26
2.3 T DE COMPOST.................................................................................31
2.3.1 Biodigestor..................................................................................... 31
2.3.2 Caractersticas del T de compost.........................................................32
2.3.3 Caractersticas de la materia prima.......................................................33
2.3.3 El proceso del T de compost..............................................................34
2.4 LIPIDOS............................................................................................. 36
2.4.1 cidos Grasos Poliinsaturados.............................................................36
CAPITULO III: MATERIALES Y MTODOS.....................................................43
3.1 LUGAR DE EJECUCIN.......................................................................43
3.2 MATERIALES..................................................................................... 43
3.2.1 Material Biolgico............................................................................43
3.2.2 Material de Laboratorio.....................................................................43
3.2.3 Medios de cultivo............................................................................. 45
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INDICE DE TABLAS
INDICE DE FIGURAS
Figura 1 Chlorellasp...................................................................................... 16
Figura 2 Esquema de la sntesis de lpidos en microalgas (Fernndez et al. 2012)...........25
Figura 3 Variedad de microorganismos presentes en el t de compost.........................33
RESUMEN
ABSTRACT
In the present work is a study on the mass culture of Chlorella sp. in a tubular
photobioreactor using an unconventional means, such as compost tea, produced in an
aerobic bio-digester for the purpose of obtaining oils and therefore saturated or
unsaturated fatty acids.
We used different methods for experimentation, where compost tea from the aerobic
digestion by microorganisms in cow manure was first obtained. At this stage was the
physicochemical analysis of cow manure such as analysis of moisture, ash, and
organic matter. The bio-digester evaluated temperature which was found subject,
once compost tea is performed a chemical analysis to know the concentration of salts
present in the environment required for the growth of Chlorella sp. In a second stage,
proceeded to evaluate the kinetics of growth of Chlorella sp at different
concentrations of 100%, 75%, 50%, 25% and 15% with the average compost tea,
comparing the speed with a medium conventional (hydroponic means). Proceeded to
perform a massification and adaptation of the strain with half compost tea at
concentrations of 100%, 75% and 50% where turned to assess its growth kinetics to
confirm the best speed of growth, finally joined a photobioreactor with half compost
tea to 75%. From the photobioreactor proceeded to harvest the microalgae by gravity,
which artificially dried and extracted the oil extraction methods for solid - liquid.
Obtaining a yield of 22.03% dry biomass. Analysis to oil obtained a physicochemical specific weight and iodine value. Finally do you a profile of fatty acids
(qualitative and quantitative analysis) to the oil obtained from Chlorella sp.
In conclusion, the middle of compost tea can be used as a sustainable and economical
alternative means for microalgae cultivation and obtaining of oils as a good source of
fatty acids.
Key words: biodigester, tea of Compost, Chlorella sp., photobioreactor, speed of
growth, oils, fatty acids.
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CAPITULO I
1.1 INTRODUCCION
En la actualidad el manejo de los recursos naturales es la llave principal de la
sostenibilidad econmica y ambiental, esto ha generado la bsqueda de nuevas
tecnologas para producir un impacto positivo tanto para el medio ambiente como en
la economa de la sociedad. (Palomino, 2010).
Las microalgas son un grupo de organismos unicelulares, considerados como uno de
los grupos ms verstiles en trminos de su tamao, forma y funcin ecolgica.
Poseen un gran potencial como fuente de varios productos qumicos de indiscutible
importancia econmica. (Albarracn, 2007). Las microalgas vienen a ser una
alternativa a las problemticas que se han generado, tanto por el cultivo y uso de
aceites comestibles para la produccin de los biocombustible; como a la disminucin
de los gases invernaderos mitigando las emisiones de CO 2. Tenindola como una
seria posibilidad para poder aliviar en cierta medida el impacto ambiental causado
por la contaminacin provocada por el hombre. (Alvear et al., 2011)
La produccin de biocombustibles a partir de aceites vegetales, viene presentando
dificultades debido principalmente a que es necesario el uso de enormes extensiones
de tierra frtil, lo que nos lleva a una crisis alimentaria. Las microalgas se presentan
como la materia prima alternativa debido a sus ventajas tales como el rea de
produccin es mnima, presentan un alto rendimiento lipdico, no dependen las
condiciones climticas, periodo de produccin corto.
Las diversas investigaciones en biotecnologa de microalgas principalmente
conducen a la obtencin de cepas con alto contenido lipdico y el desarrollo de
mtodos de extraccin y purificacin de estos a escala industrial. (Garca et al, 1993).
Para la obtencin de estos productos es necesario contar con las condiciones
necesarias, un equipamiento (fotobiorreactor), con un microambiente adecuado para
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as poder generar las cantidades importantes de biomasa, donde sea posible extraer su
mximo de aceites en especial de cidos grasos.
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1.2 OBJETIVOS
1.2.1 OBJETIVO GENERAL
Obtener cidos grasos poliinsaturados a partir de Chlorella sp. utilizando un
fotobiorreactor en sustrato no convencional en base estircol de vaca.
1.2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
1. Aislar una cepa Chlorella sp. nativa de la regin Arequipa.
2. Obtener y caracterizar fisicoqumicamente el estircol
3. Construir un biodigestor aerbico en base a estircol de deshecho de granjas
lecheras y analizar el T de compost para ser utilizado como fuente de
nutrientes para el cultivo de microalgas.
4. Evaluar la cintica de crecimiento de Chlorella sp.
a diferentes
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1.3 HIPOTESIS
Dado que el estircol es un recurso orgnico de desecho, proveniente del
ganado vacuno lechero proporcional al nmero de cabezas en la regin
Arequipa, que por biodigestion aerobia produce el T de compost.
Es probable que pueda ser utilizado como medio no convencional para el
cultivo masivo de microalgas como la Chlorella sp. para la produccin de
aceites conformando una fuente de cidos grasos poliinsaturados.
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2.1. MICROALGAS
2.1.1. Caractersticas generales de las microalgas
Las microalgas son un conjunto heterogneo de microorganismos fotosintticos
unicelulares procariontes (cianobacterias) y eucariontes, que se localizan en hbitats
diversos tales como aguas marinas, dulces, salobres, residuales o en el suelo. Su
biodiversidad es enorme, se han estudiado cerca de 30000 especies, siendo las algas
verdes y las diatomeas las ms estudiadas para aplicaciones biotecnolgicas.
(Garibay et al, 2009).
El mecanismo de fotosntesis en las microalgas es generalmente ms eficiente al
convertir la energa solar debido a su estructura celular simple. Adems, logran
asimilar el CO2 del ambiente debido a que crecen en suspensin acuosa, teniendo
disponibilidad de nutrientes, rayos solares, un amplio rango de temperaturas y pH,
favoreciendo la produccin de O2 sumado a la acumulacin de lquidos de alta
densidad como forma de energa (aceites). (Alvear et al, 2011; Dragone et al, 2010).
El crecimiento fotosinttico
Divisin: Chlorophyta
Clase: Chlorophyceae
Orden: Chlorococcales
Familia: Oocystaceae
Gnero: Chlorella
Tabla 1 Clasificacin Taxonmica de Chlorella
Fuente: Lopez S. & Barrientos R. 2007
El nombre Chlorella proviene del griego Chloros, que significa verde, y el latin ella,
que significa cosa pequea. Su color es un verde fuerte gracias a su elevado
contenido de clorofila,
rpidamente requiriendo solo CO2, agua, luz solar y minerales. (Alvear et al, 2011).
Las clulas son esfricas, ovoides o elipsoides, solitarias o agrupadas. El protoplasto
consta de un cloroplasto en forma de copa que puede contener o no un pirenoide, y
de un citoplasma central incoloro, en el cual est inmerso el ncleo diminuto.
(Gonzlez 2010, Se, 1998).
Figura 1 Chlorellasp.
Fuente: Culture Collection of Autotrophic Organisms
17
Porcentaje
78
67
51 58
12 17
8 10
14 22
89
45
2.1.4. Reproduccin
La Chlorella se multiplica continuamente segn un proceso de divisin celular en
que cada clula se divide 1:4, hasta conducir a una proliferacin multitudinaria. En
esta especie todas las clulas son parecidas y capaces de dividirse pro biparticin o
transformarse en esporocistes o gametocistes y dar esporas o gametos. (Alvear et al,
2011).
Esto se debe a que sus clulas esfricas aisladas contienen un plasto parcial
voluminoso provisto de un pirenoide. Cuando estas clulas alcanzan su tamao
mximo, el ncleo se divide en 4 o en 8 y se forman en el interior de la clula madre
4 a 8 clulas ms pequeas, idntica a ella; son las autosporas, liberadas por
dehiscencia (apertura natural o espontanea) de la pared de la clula madre,
transformndose directamente en nuevas Chlorella al crecer. (Maldonado, 2014;
Alvear et al, 2011; Des Abbayes, 1989).
2.1.5. Cintica de crecimiento de las microalgas
Las fases de crecimiento se definen por el nmero de clulas presentes a un tiempo
determinado y por las condiciones de cultivo. (Gmez, 2012; Gonzles, 2000).
o Fase Inicial o de latencia
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En este tipo de medios se conocen todas las sales y nutrientes que contengan. En
estos medios se hacen ciertas modificaciones para mejorar el crecimiento de las
algas, por ejemplo la concentracin del buffer, adicin de NaHCO 3 o suplementar
con suelo u otros extractos. Algunos ejemplos son: ASP-2, ASP-6, Muller, etc.
(Valenzuela, 1993).
2.1.7. Parmetros de cultivo
A) Luz
Es el factor fundamental en el cultivo de las microalgas, debido a que posee
propiedades importantes como son:
o Calidad espectral
Depende de la longitud de onda, se utiliza la fraccin del espectro de luz
solar que es fotosintticamente activa, es decir de 350 a 700nm
(Maldonado, 2014; Sthephens& Ross, 2010).
o Intensidad
Se expresa como la cantidad de energa en una superficie durante un
periodo de tiempo. (Gliessman, 2002). Hay reportes donde la produccin
y acumulacin de metabolitos de inters es afectado por la radiacin de
luz blanca, sin embargo, la intensidad y el rgimen de la iluminacin
varan con el gnero de microalga. (Maldonado, 2014;Martin, 2010),.
o Fotoperiodo
El fotoperiodo, tiempo de exposicin a la luz, tiene efecto en los ciclos de
vida y las actividades metablicas de las microalgas. (Maldonado, 2014).
B) Temperatura
La tasa de crecimiento aumenta cuando la temperatura aumenta, dentro de un rango
ptimo, ya que si no se obtiene el efecto contrario. La temperatura ptima para la
fotosntesis aumenta cuando aumenta la intensidad de luz. La temperatura tambin
influye en la disponibilidad de nutrientes. La temperatura mnima (16C) por debajo
de la cual no hay crecimiento; una temperatura optima (16C 27C) se produce un
crecimiento rpido; y una temperatura mxima (35C) encima de esta no hay
crecimiento. (Maldonado, 2014; Madigan et al, 2004).
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C) pH
El rango de pH esta entre 7 y 9, con un rango ptimo de 8.2 a 8.7. Un pH ptimo es
generalmente mantenido gracias a la aeracin con aire enriquecido con CO 2. El pH
aumenta conforme la edad del cultivo sea mayor, debido a la acumulacin de
minerales y a la oxidacin de nutrientes. (Maldonado, 2014; Benavente et al, 2012).
D) Agitacin
Requisito importante para obtener altos rendimientos de biomasa microalgal. Los
efectos que produce son: (Maldonado, 2014; Richmond, 1986).
o Asegura la distribucin homognea de la clulas y nutrientes dentro del
cultivo.
o Mejora la distribucin de la luz evitando el efecto de ensombrecimiento.
o Evita la sedimentacin celular en el fondo del cultivo, estimulando el
metabolismo celular.
E) Nutrientes
Los requerimientos nutritivos varan de acuerdo a la especie y las condiciones
ambientales de los cultivos. Los nutrientes inorgnicos pueden dividirse en dos
grupos: macronutrientes, requeridos en grandes cantidades y micronutrientes,
requeridos en concentraciones muy bajas. Los macronutrientes (incluye compuestos
de nitrgeno, fsforo, silicio y azufre) son componentes fundamentales de
macromolculas y tienen un papel clave en la estructura celular. Por su parte, los
micronutrientes tienen un papel metablico especfico en la fisiologa de las
microalgas. (Gonzlez, 2010).
La proporcin ptima especfica para cada especie puede variar dependiendo de
varios factores como la tasa de crecimiento, temperatura, luz o disponibilidad de
CO2 (Lagus, 2009). As mismo, las especies difieren en sus requerimientos de
fsforo y nitrgeno y en la cintica de asimilacin de nutrientes, por lo cual
presentan diferentes proporciones ptimas.
o Nitrgeno
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23
24
Los cidos palmtico (16:0) y oleico (18:19) son los precursores de las molculas
poliinsaturadas, a su vez producidas mediante mecanismos de desaturacin aerobia y
elongacin. Por su parte, se sugiere que la biosntesis de triglicridos sucede en el
citosol y en el retculo endoplsmico esencialmente a travs de la catlisis por aciltransferasas del traslado secuencial de cidos grasos a las posiciones 1, 2 y 3 del
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A) Fotobiorreactor
Un fotobiorreactor es un biorreactor que incorpora algn tipo de fuente de luz para
proporcionar una fuente de energa fotnica en el reactor. (Chisti, 2007).
Ya que
estos sistemas son cerrados, el cultivo de microalgas no interacta con los gases del
medio ambiente evitando su contaminacin. En este sistema se introduce un medio
de cultivo que proporciona los nutrientes necesarios para el crecimiento de las
microalgas.
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o Mezcla
El mezclado debe permitir condiciones homogneas, favorecer la
transferencia de nutrientes, dispersin uniforme de cianobacterias entre las
zonas oscuras e iluminadas, transferencia de energa, romper gradientes de
difusin en la superficie celular, retirar el oxgeno fotosinttico generado,
evitar estratificacin trmica ya que puede existir amplitud trmica entre
fondo y superficie del fotobiorreactor de hasta 8 C (Carvalho et al., 2006).
Un buen mezclado debe aumentar la productividad hasta el 40% en un
reactor tubular. El sistema de mezcla de gases causa menores daos que otros
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en la
acumulacin de O2.
o Evitar la acumulacin de sustancias inhibitorias.
o Mantener temperatura y pH ptimos.
B) Tipos de Fotobiorreactores
La eficiencia de un fotobiorreactor es determinada en base a la captacin, transporte,
distribucin y uso de la luz (Zijffers et al., 2008). Se han diseado diferentes
fotobiorreactores con propiedades especficas que pueden agruparse en tres tipos
bsicos: tubulares, de superficie plana (flat plate) y de tanque agitado. Los tubulares
y de superficie plana son los ms empleados considerando que utilizan luz solar.
(Merida, 2013).
o Fotobiorreactores de Placa Plana
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buena
o Fotobiorreactores Tubulares
El fotobiorreactor tubular es uno de los ms adecuados para cultivos en
exteriores bajo la accin de la radiacin solar. Consiste de colector solar,
conformado de un arreglo de tubos rectos transparentes, generalmente de
plstico o vidrio, cuya su funcin es capturar la mayor cantidad de luz solar
posible para el cultivo microalgal presente en su interior. (Piedrahita et al.,
2012).
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que dentro del biodigestor encontramos que viven unas bacterias que son capaces de
descomponer el estircol y otros residuos orgnicos, que despus se convierten en
productos de beneficio tanto para la agricultura, la ganadera y la comunidad. Una
de las caractersticas ms importantes de la biodigestin es que disminuye el
potencial contaminante de los excrementos de origen animal y humano. (Cotrina et
al., 2013)
A) Biodigestor anaerobio
Es donde se da el proceso biolgico por el cual se realiza la digestin anaerbica de
los desechos orgnicos, en ausencia de oxgeno, y mediante la accin de un grupo de
bacterias anaerbicas, se descompone en productos gaseosos o biogs (CH4, CO2,
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H2, H2S, etc.), y en digestado o biol, que es una mezcla de productos minerales
(N, P, K, Ca, etc.) y compuestos de difcil degradacin.
El biogs contiene un alto porcentaje en metano, CH4 (entre 50-70%), por lo que es
susceptible de un aprovechamiento energtico mediante su combustin en motores,
en turbinas o en calderas, bien slo o mezclado con otro combustible. (IDEA, 2007)
B) Biodigestor aerobio
Es donde se da el proceso biolgico por el cual se realiza la digestin aerbica de los
desechos orgnicos, con presencia de oxgeno y un grupo de bacterias anaerbicas,
en el cual se obtiene un extracto principal o T de compost.
2.3.2 Caractersticas del T de compost
El t de compost es una extraccin liquida de la cual se extraen microorganismos y
los nutrientes de forma aerbica o anaerbica. Estas dos formas de extraccin tienen
diferentes ventajas, sin embargo, la forma aerbica permite extraer y multiplicar un
conjunto de microorganismos ms diversos. (Francescangeli, 2013).
El t de compost es una terminologa moderna, sin embargo, la utilizacin de
extractos biolgicos data desde hace miles de aos por diferentes culturas (Griegos,
Egipcios y mayas), pero solo actualmente a travs del uso de bombas que
suministran aire se han logrado obtener soluciones biolgicas de microorganismos y
nutrientes benficos. El t de compost es un extracto acuoso de alta actividad
biolgica que se consigue por una fermentacin aerbica de la materia orgnica.
(Riegel, 2008).
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34
35
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carbono 9 y 10, y los dems dobles enlaces adicionales estn situados generalmente
entre este doble enlace y el grupo metilo terminal de la cadena. En la mayora de los
casos, los dobles enlaces se hallan separados por un grupo metileno y suelen tener
configuracin cis. La nomenclatura usual para estos compuestos consiste en indicar
la longitud de la cadena, el nmero de insaturaciones y la posicin del doble enlace
ms cercano al grupo metilo terminal. Entre los PUFAs se distinguen dos grandes
familias: (Belarbi, 2004)
o Serie n-6, est constituida por el cido linoleico (18; 2n-6, LA), el cido linolenico (18; 3n-6, GLA) y el cido araquidnico (20; 4n-6, AA).
o Serie n-3, est constituida por el cido -linolenico (18;3n3, ALA), el cido
eicosapentaenoico (20;5n3, EPA) y el cido docosahexaenoico (22;6n3,
DHA).
Los PUFAs pueden ser obtenidos tanto de fuentes vegetales como de animales
terrestres y marinos. La eleccin de una fuente depende de la concentracin del
PUFA deseado, de la disponibilidad de la fuente y de la presencia o ausencia de
impurezas. En la actualidad los aceites de pescado al contener una alta proporcin de
cidos grasos, son los ms utilizados para su produccin. (Ibez, 2005).
Las microalgas son fuentes econmicamente atractivas. El contenido en PUFAs de la
microalga no solo depende de la especie sino tambin de las condiciones de cultivo a
la que se encuentra sometida, siendo estas: composicin del medio de cultivo,
aireacin, intensidad de luz, duracin del fotoperiodo, temperatura y edad del cultivo.
(Ibez, 2005).
Algunas de las ventajas que poseen los aceites extrados de las microalgas en
comparacin con los extrados a partir de aceites de pescado, son las siguientes:
(Ibez, 2005)
o Las microalgas presentan una produccin estable durante todo el ao.
(producciones contraladas)
o La composicin en cidos grasos ms sencilla, lo que simplifica los
procedimientos de fraccionamiento y purificacin.
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Existen tres tipos principales de cidos grasos de omega-3 que se ingiere a travs de
los alimentos y que el organismo utiliza: el cido alfa-linolnico (ALA) y los cidos
grasos poliinsaturados de cadena larga. El cido eicosapentaenoico (EPA) y el cido
docosahexaenoico (DHA), una vez ingeridos, el cuerpo convierte los ALA en EPA y
DHA.
La mayora de los cidos grasos omega-6 se consumen en la dieta a partir de aceites
vegetales como el cido linoleico. El organismo convierte el cido linoleico en los
cidos grasos poliinsaturados de cadena larga: gamma-linolnico (GLA) y el cido
araquidnico (AA).
La ingesta suficiente de cidos grasos poliinsaturados (omega-3 y omega-6) es
importante por el papel crucial que desempean en la salud:
o El desarrollo y mantenimiento de una correcta funcin cerebral, en recin
nacidos, embarazo y lactancia, el DHA es un constituyente esencial de las
membranas de las clulas cerebrales y de otros tejidos nervioso.
o La visin, el DHA constituye de las membranas de las clulas de la retina.
o Las respuestas inmunitarias e infamatorias, en procesos inflamatorios de las
articulaciones, el uso de suplementos con cidos grasos omega-3 alivian el
dolor de la articulaciones disminuyen la rigidez matutina y permite reducir la
cantidad de medicamentos que las personas con artritis reumatoidea
necesitan.
o La produccin de molculas semejantes a las hormonas, en los trastornos
mentales, los cidos grasos omega-3 son componentes importantes de la
membranas de las clulas nerviosas ayudndolas a comunicarse entre si, lo
cual es un paso esencial para mantener una buena salud mental.
o Cncer, el equilibrio entre los cidos grasos omega-3 y omega-6 parece tener
un papel importante en el desarrollo y crecimiento de algunas formas de
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39
Este tipo de extraccin es muy utilizada para obtener lpidos de origen animal y
vegetal, en el caso de las microalgas, el solvente es adicionado a la biomasa seca
aunque en algunos casos es utilizada biomasa con cierta cantidad de agua,
disminuyendo los costos, pero disminuye tambin la eficiencia de la extraccin.
Una gran variedad de solventes orgnicos suelen ser utilizados en la extraccin de
aceite de microalgas, siendo los ms populares el hexano y el etanol, mediante una
mezcla hexano: etanol es posible extraer ms del 98% de los cidos grasos presentes
en la biomasa (Richmond A., 2004).
El sistema de extraccin Soxhlet ha sido ampliamente utilizado en la extraccin de
aceite de microalgas, este sistema, se compone de un baln donde se encuentra un
solvente orgnico que se calienta hasta ebullicin, un tubo de extraccin Soxhlet,
donde se coloca la muestra, la cual va contenida en un cartucho, y un condensador;
en el cual, despus de evaporarse, el solvente orgnico se condensa y cae al tubo
Soxhlet, donde extrae el aceite contenido en la biomasa seca hasta que el tubo se
llena, cuando el tubo est lleno de solvente, este, por medio de un sifn, vuelve al
baln arrastrando el aceite que contiene el resto de solvente y se repite el proceso.
(Salazar, 2012).
40
41
42
Reactivos
1. cido fosfrico 95%
2. cido sulfrico concentrado
3. Agar agar
4. Agua destilada
5. Alcohol
6. Almidn 1%
7. Bicarbonato de sodio
8. Cloroformo puro
9. Cloruro de calcio
10. CO2 medicinal
11. Dicromato de potasio 1N
12. Difenil amina 1% p/v
13. Hexano
14. Ioduro de potasio 15%
15. Reactivo de Wijs
16. Sulfato ferroso 0.5N
17. Tiosulfato de sodio 0.1N
Otros
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Algodn
Asa de kohle
Cinta de pH
Crisoles
Embudo Buchner
Flask de 40ml Thermoscientific NUNC
44
45
del envase hacia arriba y ligeramente inclinada. Una vez recogida la muestra el
recipiente fue cerrado, evitando as la contaminacin con el exterior. (Zambrano,
2012).
3.3.2 Aislamiento de Chlorella sp.
Para lograr aislar la cepa de la microalga Chlorella sp.se realiz en dos fases:
o Diluciones seriadas.
Se homogenizo la muestra de agua obtenida, se midi 1ml y se coloc en un
tubo de ensayo agregndole 9ml de medio hidropnico al 100%, teniendo la
relacin de 1:10 siendo esta nuestra muestra inicial.
Se tom 1ml de la anterior dilucin y se coloc en un segundo tubo de ensayo
agregndole tambin 9ml de medio hidropnico, obteniendo la relacin
1:100. De ah se pas 1ml de la anterior dilucin a un tercer tubo agregando
9ml de medio hidropnico, obteniendo una relacin de 1:1 000.despues se
pas 1ml de anterior solucin a un cuarto tubo agregando 9ml del medio
hidropnico, obteniendo la relacin de 1:10 000. Y finalmente en un quinto
tubo, obteniendo una relacin de 1:100 000 para que el cultivo sea limpio y
no est contaminado con bacterias y protozoos. (Ghandi et al, 2012).
o Rayado en agar o sembrado.
Se prepararon placas Petri con agar al 2% y medio hidropnico, luego con un
asa de kohle se sac muestras del tubo de ensayo con dilucin 1:10 000,
donde se sembr por el mtodo de la estra.
Se llev a incubar de 5 - 7 das a temperatura ambientes y condiciones de luz
artificial 2400 lux constante. Se llev una colonia de muestra al microscopio
para observar si el contenido microalgal era uniforme. Esta colonia observada
se le llevo a un segundo sembrado para reducir la contaminacin y
asegurarnos que se obtuvo unidades microalgales de una sola especie.
A) Obtencin del stock primario
Del segundo sembrado en placas se tom una colonia de microalgas con el asa
de Kohle y se llev a un tubo falcn de 15ml con medio de cultivo hidropnico al
100%, el cual se dej en las mismas condiciones que los anteriores, obteniendo
as nuestro semillero o stock primario. (Gmez et al. 2012).
46
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Primero se sec la cpsula hasta obtener un peso constante durante dos horas
a 120 C. Al cabo de ese tiempo se introdujo en un desecado, se enfri, se
pes hasta un peso constante (P0.g).
Se pes 50 gr, de estircol, el cual se introdujo en la cpsula previamente
pesada sin comprimir el material y se pes dicha cpsula (P1, g), se introdujo
la cpsula as preparada en una estufa a 70 a 75 C. Durante 24 horas con el
fin de eliminar toda la humedad de la muestra. Al cabo de ese tiempo se
introdujo en un desecador, se enfri y se pes hasta un peso constante (P 2.g).
(Zambrano, 2012).
Se calcul el porcentaje de humedad del estircol.
Humedad=
gr . de agua
100
gr .de muestra humedd
(1)
o Ceniza
La cpsula que contena la muestra secada a 120 C se quem con un
mechero, se coloc la cpsula as tratada a la mufla durante 4 horas a 800 C,
al cabo de ese tiempo se introdujo en un desecador, se enfri y se pes hasta
peso constante (P3. g).Se calcul el porcentaje de cenizas del estircol de
vaca. (Zambrano, 2012).
Gramos de ceniza: (P3 P0)
Cenizas=
gr . de ceniza
100
gr .de muestra seca
(2)
48
( ml de K 2 Cr 2 O7 . N )(V 1 . N . F )
peso de muestra en gr .
(3)
5 .1
V 2 . 0.5
(4)
49
aire. Las mangueras fueron sujetadas al recipiente de plstico perforado. Una vez
sellado se pint de negro para una mayor captacin del calor y se conect el motor
para dar aireacin.
El biodigestor se dej funcionando durante 15 das, donde diariamente se fue
monitoreando su temperatura a diferentes horas de da: 7:00 am, 11:00 am, 1:00pm,
3:00pm, 5:00pm y 7:00 pm. El pH tambin fue monitoreado diariamente.
3.3.5 Obtencin y caracterizacin del Te de compost
50
P ( w ) x n (lm/ w)
2
A( m )
(5)
Dnde:
P: potencia (watts)
n: eficacia luminosa (lumen/watts)
A: rea iluminada (m2)
o Temperatura de 25-26C que se le proporciono por conveccin con agua con
un termostato que estuvo graduado a una temperatura de 28 C y se agito
peridicamente para evitar la sedimentacin. (Uribe, citado Gmez, 2012)16.
51
(6)
(7)
Cf
)
Co
(8)
Dnde:
:velocidad de crecimiento
(hrs-1)
ln 2
(9)
Dnde:
g: tiempo de generacin (hrs)
52
(discontinuo) a escala de
53
Cantidad
6,10
11,4
60
5,00
54,7
Parmetros de Diseo
JLB y R La joya
Chlorella sp
Te de compost (75%)
54
Volumen de Total
6,00L
Altura
60cm
Fotoperiodos
16 horas de luz
Tipo de Energa
Artificial (Fluorescentes Leds)
Iluminacin
2400 lux
Mezcla de gases
CO2 O2
Temperatura
25 26 C
Agitacin
Neumtica (bomba de pecera)
Materiales
Acrlico, vidrio y plstico
Control
Termmetro, pH-metro.
Fuente: Elaboracin propia
3.3.9 Cultivo en un Sistema cerrado fotobiorreactor tubular
55
A. Determinacin de la densidad
56
(10)
Donde:
Ww
Wa
(11)
Ww
V p
w
Donde:
a : Densidad del aceite (g/cm3)
W a : Peso del aceite (g)
Se corroboro este mtodo utilizando otros tres aceites (vegetal, oliva y almendras),
de los cuales se midi la densidad mediante el mtodo normal y el mtodo
modificado.
57
en el matraz que
( V tV m )N12,69
G
(12)
En donde:
I : ndice de Iodo
Vt
blanco (ml)
Vm
muestra (ml)
N : Normalidad de la solucin del Tiosulfato de Sodio
58
C. Rendimiento de Aceites
Para la obtencin del rendimiento de aceites, se us los siguientes datos:
m: peso de la muestra seca (gr)
m1: peso del picnmetro vaco (gr)
m2: peso del picnmetro con el aceite extrado (gr)
Se calcul el porcentaje de los aceites en la muestra a partir de la siguiente ecuacin:
%Aceites=
m2 m1
x 100
m
(103)
59
Obtencin de la fuente de
Obtencin y caracterizacin
fsico-qumica del estircol de
vaca.
Chlorella sp.
Aislamiento de Cepa Chlorella
Masificacin y Adaptacin de
la cepa Chlorella sp.
Diseo y Construccin del
Fotobiorreactor
Cultivo en un Fotobiorreactor
tubular vertical de 5L
Separacin, cosecha y secado de
Microalgas
61
(a)
(b)
62
Humedad (%)
27,25
Ceniza (%)
5,38
63
2
3
PROMEDIO
27,2
6,01
27,81
5,56
27.42
5.65
Fuente: Elaboracin propia
4,78
4,58
4.65
64
PROMEDIO
POR DIA
07:00
10.40
11:00
24.27
13:00
27.07
15:00
31.13
17:00
20.80
19:00
13.13
Fuente: Elaboracin propia
65
19.00
14.00
9.00
6:00
8:24
10:48
13:12
15:36
18:00
20:24
El T de compost fue analizado para nitratos, nitritos, fosfatos y amonio, por ser
estas, sales de inters para el crecimiento de las microalgas. El cual fue analizado en
los Laboratorios Analticos del Sur, obteniendo los siguientes resultados
Tabla 7 Concentracin de sales del T de Compost
Sal
Concentracin (mg/L)
NO3
4.0
NO2
0.356
PO4
3.96
NH4
20.5
Fuente: Elaboracin propia
La descomposicin del estircol de vaca proporciona varias fuentes de nitrgeno
como amonio, nitratos y nitritos y fosforo como fosfatos que son principales
nutrientes en el crecimiento de microalgas, este proceso se lleva a cabo
principalmente por la actividad de las bacterias nitrificantes quimioauttrofas.
Algunas de stas oxidan los iones de amonio en presencia de agua a nitritos y otras
oxidan los nitritos y nitratos, obtenindose un producto rico en sales asimilables para
las microalgas (Granados et al, 1983).
Como cada proceso de degradacin tiene una bacteria especfica que oxida a un in
particular, el alto contenido de amonio presente en los anlisis, probablemente se
deba a la poca cantidad de bacterias nitrificantes (Spotte, citado Granados 1983) que
oxidan este in, repercutiendo al final del proceso en la concentracin de nitratos. En
los anlisis de amonio del medio de cultivo experimentado, se encontr una
concentracin de 20.5 mg/L. Los estudios realizados por Treboux (1904); Prindsheim
(1912); Schreiber (1927) y Brasurd y Foyn (1930), as como los de Allison (1931);
Miller (1933); mencionados por Chu, (1943), demuestran que el amonio puede ser
utilizado en forma similar al nitrato y que algunas veces las microalgas crecen mejor
en su presencia. El amonio como fuente de nitrgeno de muchas algas, ha sido
estudiado tambin por Guillard (1963); Eppley y Roger (1970), quienes indican que
la utilizacin de este compuesto en su forma de amonio no es tan fcil de asimilarlo
como es el caso de los nitratos.
67
Das
0
1
2
3
4
5
6
7
Media
Concentracin(Microalgas/ml)x107 Te de Compost
100%
75%
50%
25%
15%
0,16
0,25
0,39
0,14
0,04
0,40
1,32
1,25
0,28
0,18
0,54
1,60
1,70
0,83
0,65
2,85
5,07
2,17
1,03
2,08
6,02
7,65
5,70
1,25
2,25
9,25
11,00
7,73
1,35
2,05
9,57
7,02
7,33
0,88
0,21
6,13
7,20
3,55
0,77
4,363,91 5,143,77 3,732,85 0,820,42 1,071,01
Fuente: Elaboracin propia
68
Segn los resultados de esta experimentacin podemos darnos cuenta que el exceso y
el dficit de nutrientes no favorecen a la concentracin poblacional de las microalgas.
La concentracin tiene que ser la adecuada donde la microalga tenga los nutrientes
en forma asimilable para que la poblacin sea mayor.
1.20E+08
1.00E+08
8.00E+07
100%
Microalgas/ml 6.00E+07
75%
50%
4.00E+07
25%
2.00E+07
0.00E+00
0
15%
1
Dias
69
Segn la curva de crecimiento que se observa, los das que se encontrara en cultivo
sern de 5 das. En
Das
1
2
3
4
5
Media
70
medio de cultivo hidropnico al 100% son los adecuados para el ptimo crecimiento
de la cepa de Chlorella sp.
1.60E+08
1.40E+08
1.20E+08
1.00E+08
Microalgas/ml 8.00E+07
6.00E+07
100% MH
50% MH
4.00E+07
15% MH
2.00E+07
1.00E+04
0
Dias
100%
0,19
72
50%
0,11
15%
0,004
14,4
3,92
0,13
Te de Compost (x108)
100%
75%
50%
0,63
0,37
0,12
0,72
0,67
0,19
2,18
2,18
0,45
3,96
3,76
1,12
6,12
8,64
1,96
6,24
18,9
6,56
73
Media
2.00E+09
1.50E+09
Microalgas/ml 1.00E+09
100% TE
75% TE
5.00E+08
50% TE
0.00E+00
0246
Dias
74
Das
1
2
3
4
5
Media
75
Foto biorre
a cto r
D ias
microalgas/ml
2,41
16,2
0,0230,01
77
78
79
Es posible comparar el contenido lipdico de nuestra Chlorella sp. con los aceites
vegetales extrados a partir del algodn, soya y oliva que son los ms comerciales,
donde el rendimiento es similar al nuestro.
80
Para verificar que los datos obtenidos son vlidos, se realiz la prueba con otros tres
distintos aceites (vegetal, oliva y almendras) obtenindose un porcentaje de error
menor al 1%. Indicado en la tabla N 16
(a)
(b)
(c)
Aceite
Densidad
experimental
A. vegetal
A. de oliva
A. de
0.9183
0.909
0.846
Densida
d
mtodo
modific
ado
0.9179
0.9097
0.8439
81
% error
0.0436
0.0770
0.2482
almendras
B) ndice de Iodo
El ndice de Iodo que nos muestra el ndice de insaturaciones, fue medido por el
mtodo de Wijs, el cual fue calculado por la ecuacin
I=
( Vt Vm )N12.69
G
82
con otros vegetales tenemos que nuestro ndice de yodo es similar al aceite de maz
que va de 105 a 135, al aceite de pepita de uva que va de 128 a 150.
Segn el ndice de yodo es posible el uso de este tipo de aceite como materia prima
para biodiesel. Tambin podemos inferir que al tener mayor proporcin de dobles
enlaces es que se supone que haya una mayor tendencia a la oxidacin, es por eso
que este tipo de aceite ha de ser conservada a condiciones de almacenamiento
ptimo.
Resultado
fisicoqumicas
Densidad(gr/cm3)
0,85
ndice de refraccin
1,45
ndice de iodo
133,245
Fuente: Elaboracin propia
Los anlisis obtenidos de caractersticas fisicoqumicas del aceite nos mostraron, que
el aceite a partir de microalgas obtenido si cumple con los parmetros normales de
una aceite crudo ya reportados anteriormente.
4.5.4. Perfil de cidos grasos
Las concentraciones de cidos grasos en el aceite obtenido a partir de la biomasa de
Chlorella sp., cultivadas en un medio no convencional T de Compost, fueron
analizadas por cromatografa de gases/ FID (detector de ionizacin de llama) en el
Laboratorio de Control de Calidad de la Universidad Catlica de Santa Mara.
En la Fig. N25, Se muestra el cromatograma que es una grfica de tiempos de
retencin con respecto a la seal del detector, el anlisis del cromatograma nos
suministr la identidad a partir de estndares conocidos de cidos grasos y la
cantidad a partir del rea y altura de los picos.
83
Carbonos
Nombre en nomenclatura
qumica
84
Concentracin en
aceite de Chlorella
sp (%)
cido behnico
cido araquidico
cido esterico
cido margrico
cido palmtico
cido tridecilico
cido larico
cido heptadecano
cido
heneicosanoico
22
20
18
17
16
13
12
17
cido docosanoico
cido eicosanoico
cido octadecanoico
cido heptadecanoico
cido hexadecanoico
cido tridecanoico
cido dodecanoico
cido heptadecano
4.66
11.13
3.21
4.47
5.32
2.04
5.34
3.42
21
cido heneicosanoico
7.38
Nombre en
nomenclatura
qumica
cido
tetracosenoico
cido
octadecenoico
Concentracin
Frmula
Omega
en aceite de
Chlorella sp (%)
24:1 (15)
9.56
18:1 (9)
0.95
85
Concentracin (%)
0.14
0.083
amarilla
Linaza
Salmon rojo
Semilla de ssamo
Nueces
Harina cocida de raz de
0.064
0.04
0.035
0.018
1.37
maca
Nombre en
Frmula
86
Omega
Concentracin
comn
cido
araquidnico
cido linoleico
nomenclatura
en aceite de
qumica
cido
Chlorella sp (%)
eicosatetraenoico
cido
20:4(5,8,11,14)
3.30
18:2(9,12)
18.87
20:2 (11,14)
8.62
0.54
18:3 (9,12,15)
4.57
20:3 (5,8,11)
6.62
cido
Octadecadienico
cido
eicosadienoico
eicosadienoico
cido
cido
20:5
eicosapentaenoi
eicosapentaenoico
(5,8,11,14,17)
co (EPA)
cido
linolnico(ALA
)
cido
cido octadecatrienoico
cido
eicosatrienoico
eicosatrienoico
87
PUFAs
29.6
51.9
8.4
37.6
85.41
63.25
42.52
Acidos grasos
MUFAs
58.9
17.8
73.7
43
8.4
22.9
10.51
Sfas
7.1
25.9
13.5
14.9
6.19
9.04
46.97
Aceite
Aceite de colza
Aceite de algodn
Aceite de oliva
Aceite de soya
Aceite de Sacha
Inchi
Semilla de nueces
Aceite de
Chlorella sp.*
Chlorella sp (b)
D. salina (b)
*Este trabajo
48.61
51.34
11.91
18.87
4.57
20.56
18.77
39.33
50.65
88
60
50
40
30
20
10
0
cido linoleico
cido a
linolnico
(ALA)
89
CONCLUSIONES
90
1.
2.
3.
orgnica
Se construy un biodigestor aerbico en base estircol de deshecho de granjas
lecheras y se analiz el T de Compost para ser utilizado como fuente de
nutrientes para el cultivo de microalgas, presentado una concentracin de
4.
5.
6.
7.
biomasa seca.
Se caracterizaron 17 cidos grasos presentes en el aceite, siendo el ms
representativo el cido linoleico a una concentracin de 18.87 %
91
RECOMENDACIONES
BIBLIOGRAFIA
92
para
el
cultivo
de
microalgas.
CINVESTAV-IPN,
93
94
95
96
ANEXO 1:
PANEL DE
FOTOGRAFIAS
97
98
99
C. Biodigestor
100
E. Cultivo fotobiorreactor
101
102
G. Extraccion de Aceties
H. Analisis de Aceites
(a)
(b)
104
105
ANEXO 2
CALCULOS
MATEMATICOS
106
Ecuacin 1
Humedad=
gr . de agua
100
gr .de muestra humedad
Humedad=
36.37 gr
100
50 gr
Humedad=72.74
Cenizas=
Ecuacin 2
Cenizas=
gr . de ceniza
100
gr .de muestra seca
0.73 gr
100
13,63 gr
Cenizas=5.36
Ecuacin 3
M .O .=
M .O .=
( ml de K 2 Cr 2 O7N ) (V 1NF)
peso de muestra en gr .
M .O .=4.6
Ecuacin 4
F=
51
V 20.5
F=
51
70.5
F=1.43
107
Ecuacin 5
Ev ( lx )=
Ev ( lx )=
P ( w ) x n (lm/ w)
2
A(m )
5 ( w ) x 60 (lm/w)
0,125(m2)
Ev ( lx )=2400 lux
Ecuacin 6
cel C 1+C 2+ C 3+C 4
=
10000
ml
4
cel 18+ 22+19+ 30
cel
=
10000
=222500
ml
4
ml
cel 15+ 6+11+7
cel
=
10000
=97500
ml
4
ml
cel 22+16+ 7+16
cel
=
10000
=152500
ml
4
ml
108
cel
5
=222500+97500+152500=1,5810 Ecuacin 7
ml
cel C 1+C 2+ C 3+C 4+C 5
=
2510000
ml
5
cel 12+9+ 14+16+ 8
cel
=
2510000
=2950000
ml
5
ml
cel 8+ 14+11+19+ 11
cel
=
2510000
=2700000
ml
5
ml
cel 11+ 12+ 12+13+ 10
cel
=
2510000
=2900000
ml
5
ml
cel
6
=2950000+2700000+2900000=2,8510
ml
Ecuacin 8
=log 2
( CoCf )
=log 2
7,2210
=0,066
7
6,2810
Ecuacin 9
g=
ln 2
g=
ln 2
=10,5
0,066
Ecuacin 10
109
V
( pV a)w
W w =
W w =
Ecuacin 11
a=
Wa
Ww
V p
w
Ecuacin 12
I=
( Vt Vm )N12.69
G
I=
( 57.947.7 )0.0712.69
0.068
I =133.245
Ecuacin 13
%Aceites=
m2 m1
x 100
m
%Aceites=
20.0619.67
x 100
1.77
%Aceites=22.03
110
111
ANEXO 3:
TABLAS DE
CRECIMIENTO
Chlorella sp.
Primera adaptacin - Te de compost (100%)
Das Ensayo
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
18
15
22
46
46
37
50
49
12
8
11
22
21
23
31
34
37
60
41
51
28
26
17
22
6
16
50
40
34
58
41
9
14
12
20
32
25
39
45
29
25
40
38
26
28
16
19
11
7
55
32
39
47
52
14
11
12
29
25
15
47
42
24
24
24
42
26
25
15
30
7
16
29
30
38
90
48
16
10
13
32
24
19
57
33
28
37
48
38
22
28
20
112
8
11
10
26
25
23
41
35
33
39
40
27
23
36
32
22,25
9,75
15,25
45
37
37
61,25
47,5
11,8
10,8
11,6
25,8
25,4
21
43
37,8
30,2
37
38,6
39,2
25
28,6
20
Promedio
valido
Diluc Concentrac
in (microalgas
1,58E+01
1,58E+0
3,97E+01
3,97E+0
5,44E+01
5,44E+0
1,14E+01
2,85E+0
2,41E+01
6,02E+0
3,70E+01
9,25E+0
3,83E+01
9,57E+0
2,45E+01
6,13E+0
Chlorella sp.
Primera adaptacin - Te de compost (75%)
D En
a say
s
o
1
2
3
Cuad
rante
1
Cuad
rante
2
Cuad
rante
3
Cuad
rante
4
11
13
11
2
3
1
2
3
1
2
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
15
20
2
3
6
4
6
17
22
22
23
35
29
36
48
43
17
28
28
32
24
32
20
22
3
2
8
5
3
24
19
19
39
30
32
46
47
49
27
32
28
32
37
31
30
12
4
4
7
15
3
23
19
16
28
33
38
42
44
49
24
26
30
19
31
25
15
16
5
6
9
7
6
20
16
20
23
29
27
37
40
40
26
45
24
21
42
25
Cuad
rante
5
Pro
medi
o
6
5
9
8
7
24
26
17
36
27
30
54
35
50
23
39
24
33
24
24
10,7
5
20
17,5
4
4
7,8
7,8
5
21,6
20,4
18,8
29,8
30,8
31,2
43
42,8
46,2
23,4
34
26,8
27,4
31,6
27,4
Velocidad
Concentr
de
acin
crecimien
total
to
(u-1)
Prome
dio
valido
Dilu
cin
Concentraci
n
(microalgas/
mL)
1,61E
+01
1,61E+05
1,61E+
06
5,27E
+00
1,32E+06
1,32E+
07
1,26E01
6,40E
+00
1,60E+06
1,60E+
07
1,17E02
2,03E
+01
5,07E+06
5,07E+
07
6,93E02
Volu
men
10
3,06E
+01
7,65E+06
7,65E+
07
2,48E02
4,40E
+01
1,10E+07
1,10E+
08
2,18E02
2,81E
+01
7,02E+06
7,02E+
07
-2,70E02
2,88E
+01
7,20E+06
7,20E+
07
1,55E03
Chlorella sp.
Primera adaptacin - Te de compost (50%)
Veloci
Concentr
D
Cuad Cuad Cuad Cuad Cuad Pro Prom
Concent dad de
Ens
Dilu
acin
Volu
a
rante rante rante rante rante medi edio
racin crecim
ayo
cin (microalg men
s
1
2
3
4
5
o
valido
total
iento
as/mL)
(u-1)
1
2
3
4
65
70
67
48
35
20
23
27
30
14
48
19
1
2
3
1
2
1
2
3
1
2
3
4
5
4
8
7
9
10
8
21
27
17
7
4
3
2
11
10
11
7
15
26
22
4
6
4
4
7
12
12
7
25
25
19
10
6
3
6
5
8
8
4
27
19
22
6
5
4
9
9
6
10
8
23
15
39
62,5
26,2
5
27,7
5
6,2
5,2
3,6
5,8
7,8
9
10,2
6,8
22,2
22,4
23,8
113
10
3,88
E+01
3,88E+
05
3,88E+
06
5,00
E+00
1,25E+
06
1,25E+ 7,03
07
E-02
6,80
E+00
1,70E+
06
1,70E+ 1,85
07
E-02
8,67
E+00
2,17E+
06
2,17E+ 1,46
07
E-02
5,70E+
06
5,70E+ 5,81
07
E-02
2,28
E+01
1
2
3
1
2
3
1
2
3
33
37
27
30
27
28
15
8
17
27
34
35
32
28
27
16
15
12
40
30
26
38
32
35
15
17
16
28
33
35
27
28
25
12
11
18
23 30,2
3,09
7,73E+
26
32
1
E+01
06
30 30,6
26 30,6
2,93
7,33E+
29 28,8
1
E+01
06
28 28,6
11 13,8
1,42
3,55E+
9
12
1
E+01
06
21 16,8
Chlorella sp.
Primera adaptacin - Te de compost (25%)
7,73E+ 1,83
07
E-02
7,33E+
3,19
07
E-03
3,55E+
4,36
07
E-02
Veloci
Concentr
D
Cuad Cuad Cuad Cuad Cuad Pro Prom
Concent dad de
Ens
Dilu
acin
Volu
a
rante rante rante rante rante medi edio
racin crecim
ayo
cin (microalg men
s
1
2
3
4
5
o
valido
total
iento
as/mL)
(u-1)
2
3
13
18
16
13
12
12
14
10
25
18
11
30
31
49
49
14
29
28
18
3
1
2
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
23
4
1
3
6
3
5
2
5
8
5
4
9
2
3
1
3
8
19
4
2
3
4
3
4
7
4
5
5
6
9
1
3
5
4
2
24
3
4
4
3
3
6
6
8
5
6
5
2
3
0
1
2
1
20
2
2
5
5
5
2
4
7
4
4
4
5
2
1
3
2
2
6
5
4
5
6
8
6
6
3
9
1
3
2
7
15
11,2
5
16
39,7
5
22,2
5
21,5
3,8
2,8
3,8
4,6
4
4,25
4,75
6
6
5,2
5
5,6
3,4
1,6
2,6
2,6
4
1,41
E+01
1,41E+
05
1,41E+
06
2,78
E+01
2,78E+
05
2,78E+ 4,10
06
E-02
3,30
E+00
8,25E+
05
8,25E+ 6,53
06
E-02
4,13
E+00
1,03E+
06
1,03E+ 1,35
07
E-02
5,00
E+00
1,25E+
06
1,25E+ 1,14
07
E-02
5,40
E+00
1,35E+
06
1,35E+ 4,63
07
E-03
3,53
E+00
8,83E+
05
3,07
E+00
7,67E+
05
10
8,83E+
2,55
06
E-02
7,67E+
8,51
06
E-03
Chlorella sp.
Primera adaptacin - Te de compost (15%)
Das Ensayo
114
Promedio
valido
Diluci Concentrac
n
(microalgas
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
3
2
2
17
12
18
76
54
11
8
9
12
10
7
13
9
6
12
20
21
1
8
9
31
12
15
59
71
12
7
8
9
11
5
6
5
11
21
26
29
11
3
4
24
18
16
49
62
8
6
7
8
4
8
8
9
6
14
17
26
0
3
1
19
12
23
67
82
11
6
5
4
11
9
6
10
10
17
15
38
115
14
7
6
12
15
10
10
6
8
3,75
4
4
22,75
13,5
18
62,75
67,25
11,2
6,8
7
9
10,2
7,8
8,6
7,8
8,2
16
19,5
28,5
3,92E+00
3,92E+0
1,81E+01
1,81E+0
6,50E+01
6,50E+0
8,33E+00
2,08E+0
9,00E+00
2,25E+0
8,20E+00
2,05E+0
2,13E+01
2,13E+0
Chlorella sp.
Primera adaptacin - Medio Hidropnico (100%)
Da
s
1
2
3
Ensay
o
Cuadrant
e1
Cuadrant
e2
Cuadrant
e3
Cuadrant
e4
1
2
3
1
2
3
1
2
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
15
24
25
69
79
86
2
2
22
12
17
26
23
27
29
39
37
58
64
46
14
13
16
67
81
87
7
5
23
16
18
24
22
20
33
49
30
63
67
46
25
26
18
76
94
87
9
4
18
15
16
19
23
8
35
39
46
58
61
61
10
17
22
67
82
97
8
8
19
16
13
23
25
23
37
38
34
59
62
55
Cuadrant
e5
Promedi
o
Promedio
valido
Diluci
n
Concentracin
(microalgas/mL Volumen
)
16
1,88E+0
20
1
1,88E+05
1
20,25
69,75
8,10E+0
84
1
8,10E+05
1
89,25
5
6,2
5,60E+0
1
1,40E+06
0
6
5
21
20,6
1,73E+0
16
15
1
4,32E+06
1
17
16,2
45
27,4
2,41E+0
32
25
1
6,02E+06
1
21
19,8
42
35,2
3,84E+0
50
43
1
9,60E+06
1
38
37
56
58,8
5,74E+0
55
61,8
1
1,44E+07
1
50
51,6
Chlorella sp.
Primera adaptacin - Medio Hidropnico (50%)
116
Promedio
valido
Dilucin
Concentraci
n total
Velocidad de
crecimiento(u)
1,88E+06
10
8,10E+06
2,11E+00
1,40E+07
7,89E-01
4,32E+07
1,62E+00
6,02E+07
4,79E-01
9,60E+07
6,74E-01
1,44E+08
5,80E-01
Velocidad
de
crecimiento
(u-1)
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
7
5
15
40
7
3
8
3
4
4
4
5
5
5
7
6
10
13
12
19
17
16
10
50
4
2
5
4
5
6
3
8
5
4
12
8
12
13
16
12
10
8
16
106
3
5
8
9
4
5
5
6
6
7
9
7
15
15
20
12
11
11
11
98
4
4
14
5
2
3
12
6
3
10
10
4
12
15
21
14
11,25
10
1,14E+01
1
13
73,5
7
5
2,74E+01
1
5
3,8
11
9,2
7,60E+00
1
9
6
3
3,6
4
4,4
4,67E+00
1
6
6
7
6,4
8
5,4
6,00E+00
1
5
6,2
11
9,8
12
7,4
9,87E+00
1
13
12,4
16
14,4
22
18,2
1,57E+01
1
15
14,4
Chlorella sp.
Primera adaptacin - Medio hidropnico (15%)
1
2
3
1
0
0
0
1
2
1
0
0
0
0
0
0,5
0,25
0,5
117
Promedio
valido
4,17E-01
1,14E+05
1,14E+06
2,74E+05
2,74E+06
1,26E+00
1,90E+06
1,90E+07
2,79E+00
1,17E+07
-7,04E-01
1,50E+06
1,50E+07
3,63E-01
2,47E+06
2,47E+07
7,18E-01
3,92E+06
3,92E+07
6,67E-01
1,17E+06
10
Velocidad
Concentracin
Concentracin
de
Dilucin
Volumen
(microalgas/mL)
total
crecimiento
(u-1)
4,17E+03
10
4,17E+04
1
2
3
1
2
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
9
20
8
59
44
18
23
10
16
17
8
14
10
7
5
10
6
14
18
13
49
59
5
35
28
13
24
15
20
13
12
17
19
9
14
14
16
52
70
22
20
14
19
21
15
17
23
15
18
11
19
12
17
9
71
55
32
37
7
21
26
8
11
14
10
15
16
12
12,25
17,25 1,37E+01
11,5
57,75
5,74E+01
57
19,25
28,75 2,09E+01
14,75
17,25
22
1,69E+01
11,5
15,5
15
1,38E+01
11
13,75
14
1,31E+01
11,5
Chlorella sp.
1,37E+05
1,37E+06
5,04E+00
5,74E+05
5,74E+06
2,07E+00
2,09E+05
2,09E+06
-1,46E+00
1,69E+05
1,69E+06
-3,06E-01
1,38E+05
1,38E+06
-2,90E-01
1,31E+05
1,31E+06
-8,04E-02
0
1
Ensayo
27
28
27
31
28,25
32
35
25
23
28,75
18
18
18
32
21,5
35
25
30
33
30,75
2
3
28
29
36
38
38
9
29
31
32,75
26,75
Promedio
valido
Dilucin
Concentracin
(microalgas/mL)
Volumen
Concentracin
total
Velocidad de
crecimiento
(u-1)
Tiempo de
Generacin
(hrs)
8,38E-03
8,27E+01
240
2,62E+01
2,62E+05
6,28E+07
3,01E+01
3,01E+05
7,22E+07
118
4,75
6,5
2,5
10
6,4
7,2
10
6,2
13
10
14
10,6
18
13
13
10
12,6
10
7,4
10
15
10,2
10
12
15
10,4
16
11
10,6
3,63E+00
9,06E+05
2,18E+08
6,63E-02
1,05E+01
6,60E+00
1,65E+06
3,96E+08
3,60E-02
1,92E+01
1,02E+01
2,55E+06
6,12E+08
2,62E-02
2,65E+01
1,04E+01
2,60E+06
6,24E+08
1,17E-03
5,94E+02
Chlorella sp.
Segunda adaptacin - Te de compost (75%)
Das Ensayo
25
15
13
15,25
25
26
11
18
20
21
11
11,5
38
37
32
27
33,5
25
24
31
24
3
1
25
2
25
3
19
7
29
1
Promedio
valido
Dilucin
Concentracin
(microalgas/mL)
Volumen
Concentracin
total
Velocidad
de
crecimiento
(u-1)
Tiempo de
Generacin
(hrs)
240
1,56E+01
1,56E+05
3,74E+07
26
2,80E+01
2,80E+05
6,72E+07
3,52E-02 1,97E+01
24,5
3,25
3,63E+00
9,06E+05
2,18E+08
7,06E-02 9,82E+00
119
10
11
4,75
6,2
5,6
16
18
16
16
13
15,8
11
14
13
15
11
12,8
12
16
14
18
13
14,6
29
19
39
30
34
30,2
30
29
36
35
31
32,2
24
28
37
30
41
32
6,27E+00
1,57E+06
3,76E+08
3,29E-02 2,11E+01
1,44E+01
3,60E+06
8,64E+08
5,00E-02 1,39E+01
3,15E+01
7,87E+06
1,89E+09
4,70E-02 1,48E+01
Chlorella sp.
Segunda adaptacin - Te de compost (50%)
Das Ensayo
1
2
1
2
3
1
2
3
1
2
0
4
5
7
5
8
11
1
1
1
7
4
5
10
6
8
1
1
1
3
10
5
7
9
8
1
0
0
5
3
3
5
7
10
0
0
1
0
0
0
4,75
5,5
5
6,75
7,5
9,25
0,75
0,5
0,75
Promedio
valido
Dilucin
Concentracin
Concentracin
Volumen
(microalgas/mL)
total
Velocidad de
crecimiento
(u-1)
Tiempo de
Generacin
(hrs)
240
5,08E+00
5,08E+04
1,22E+07
7,83E+00
7,83E+04
1,88E+07
2,60E-02
2,67E+01
7,50E-01
1,88E+05
4,50E+07
5,25E-02
1,32E+01
120
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
3
1
4
4
3
5
5
4
2
2
1
5
1
5
7
5
6
1
3
3
5
4
1
6
8
6
2
2
2
3
2
3
5
8
7
2
1
1
4
3
1
7
9
5
1,6
2,2
1,6
4,2
2,8
2,6
6
7
5,6
1,80E+00
4,50E+05
1,08E+08
5,26E-02
1,32E+01
3,20E+00
8,00E+05
1,92E+08
3,46E-02
2,00E+01
6,20E+00
1,55E+06
3,72E+08
3,98E-02
1,74E+01
Chlorella sp.
Fotobiorreactor - 5L
Cuadrante Cuadrante Cuadrante Cuadrante Cuadrante
Das Ensayo
Promedio
1
2
3
4
5
2
3
47
47
45
58
49,25
52
55
52
58
54,25
44
44
42
34
41
81
66
96
80
80,75
84
80
82
97
85,75
67
76
76
72
72,75
11
7,8
12
7,8
2
3
8
7
5
8
8
14
9
10
10
9
8
9,6
Promedio
valido
Dilucin
Concentracin
(microalgas/mL)
Volumen
(mL)
Concentracin
total
Velocidad
de
crecimiento
(u-1)
Tiempo de
Generacin
(hrs)
5000
4,82E+01
4,82E+05
2,41E+09
7,98E+01
7,98E+05
3,99E+09
3,03E-02 2,29E+01
6,87E+00
1,72E+06
8,58E+09
4,61E-02 1,50E+01
7,87E+00
1,97E+06
9,83E+09
8,17E-03 8,48E+01
121
10
11
14
10,6
17
11
20
13
12
13
9,8
16
10
15
20
14
14
11
13
14
12
12,8
16
10
13
12
12
1,02E+01
2,55E+06
1,28E+10
1,56E-02 4,44E+01
1,29E+01
3,23E+06
1,62E+10
3,43E-01 2,02E+00
122
ANEXO 4:
ANALISIS
ESTADISTICO
123
A. Estadstica descriptiva
4,36E+07
1,38E+07
4,43E+07
3,91E+07
1,53E+15
2,27E-01
9,41E+07
1,58E+06
9,57E+07
3,49E+08
8
5,14E+07
1,33E+07
6,04E+07
3,77E+07
1,42E+15
5,70E-02
1,07E+08
2,52E+06
1,10E+08
4,11E+08
8
3,73E+07
1,01E+07
2,86E+07
2,85E+07
8,12E+14
4,47E-01
7,35E+07
3,88E+06
7,73E+07
2,98E+08
8
8,16E+06
1,51E+06
8,54E+06
4,26E+06
1,82E+13
-5,37E-01
1,21E+07
1,41E+06
1,35E+07
6,53E+07
8
1,07E+07
3,82E+06
6,50E+06
1,01E+07
1,02E+14
2,67E-01
2,21E+07
3,92E+05
2,25E+07
7,47E+07
7
3,27E+07
3,15E+07
2,38E+07
3,56E+06
9,36E+06
5,24E+07
1,97E+07
4,32E+07
5,22E+07
2,72E+15
9,30E-01
1,42E+08
1,88E+06
1,44E+08
3,67E+08
7
4,83E+07
124
1,62E+07
4,97E+06
1,50E+07
1,31E+07
1,73E+14
6,99E-01
3,80E+07
1,14E+06
3,92E+07
1,13E+08
7
1,22E+07
1,95E+06
6,75E+05
1,38E+06
1,79E+06
3,19E+12
1,92E+00
5,70E+06
4,17E+04
5,74E+06
1,36E+07
7
1,65E+06
3,31E+08
1,03E+08
3,07E+08
2,53E+08
6,42E+16
1,80E-01
5,61E+08
6,28E+07
6,24E+08
1,98E+09
6
2,66E+08
5,75E+08
2,90E+08
2,97E+08
7,10E+08
5,04E+17
1,63E+00
1,85E+09
3,74E+07
1,89E+09
3,45E+09
6
7,45E+08
1,73E+08
1,01E+08
7,85E+07
2,46E+08
6,07E+16
2,05E+00
6,44E+08
1,22E+07
6,56E+08
1,04E+09
6
2,59E+08
Media
Error tpico
Mediana
Desviacin estndar
Varianza de la muestra
Coeficiente de asimetra
Rango
Mnimo
Mximo
Suma
Cuenta
Nivel de confianza (95,0%)
125
0,04
0,01
0,03
0,03
0,00
1,09
0,07
0,02
0,09
0,26
6
0,03
0,04
0,02
0,03
0,05
0,00
0,69
0,15
-0,03
0,12
0,21
6
0,05
0,15
0,06
0,15
0,09
0,01
0
0,12
0,09
0,21
0,30
2
0,79
0,049
0,014
0,045
0,032
0,001
0,051
0,021
0,025
0,048
0,002
0,036
0,012
0,018
0,026
0,001
0,027
0,011
0,014
0,025
0,001
0,048
0,020
0,070
0,045
0,002
1,168
0,081
0,019
0,100
0,245
5
1,292
0,115
0,012
0,126
0,254
5
0,713
0,056
0,015
0,070
0,180
5
1,019
0,061
0,005
0,065
0,136
5
-0,492
0,098
-0,006
0,092
0,238
5
0,040
0,059
0,033
0,032
0,056
126
0,028
0,011
0,026
0,026
0,001
0,809
0,065
0,001
0,066
0,138
5
0,032
0,047
0,007
0,047
0,015
0,000
1,025
0,038
0,033
0,071
0,236
5
0,019
0,041
0,005
0,040
0,012
0,000
-0,190
0,027
0,026
0,053
0,205
5
0,014
Media
Error tpico
Mediana
Desviacin estndar
Varianza de la muestra
Coeficiente de asimetra
Rango
Mnimo
Mximo
Suma
Cuenta
Nivel de confianza (95,0%)
127
ANEXO 5:
PLANOS DEL
FOTOBIORREACTOR
128
129
130
131
ANEXO 6:
RESULTADOS DE
LABORATORIOS
132
133
134
135
136
ANEXO 7:
PREPARACION DE
MEDIO
HIDROPONICO
137
138