Universidad de Sonora

Laboratorio de bioqumica 1

Prctica No. 9
Precipitacin de protenas

1er semestre

Grupo 2

Maestra: Abril Zoraida Graciano Verdugo

Alumnas: Denisse Karina Anaya Corrales

Siomara Yoselin Anaya Corrales

Hermosillo, Sonora; a jueves 27 de octubre de 2016

Introduccin

La precipitacin de las protenas es uno de los procedimientos

ms empleados en los procesos metodolgicos de la
bioqumica moderna. De ah que sea necesario tener claros
los principios en que se basan los diversos tipos de
precipitaciones.
Por lo general, la solubilidad de las protenas es variable. La
mayora de las protenas globulares es soluble en agua, sea
total o coloidalmente soluble, cuando estn en su estado
nativo. Cuando estn desnaturalizadas las protenas pierden
su solubilidad. Cuando se dice que una protena es
coloidalmente soluble, se quiere indicar, o bien que las
molculas proteicas son de tamao tan grande, que incluso,
dispersas en solucin tienen el tamao y superficie que
caracteriza las partculas coloidales, o que hay alguna fuerza
que las hace formar agregados de tamao coloidal.
De las protenas globulares, las albminas son solubles en
agua pura, pero tambin solubles en soluciones salinas. Las
globulinas son insolubles en agua pura, pero se disuelven en
soluciones neutras de sales como el cloruro de sodio, y para
permanecer en solucin las globulinas necesitan una cierta
concentracin de sal, precipitando cuando el contenido de sal
disminuye. Las protenas coaguladas son insolubles en agua,
soluciones salinas, cidos y lcalis diluidos. Se disuelven en
los acidos minerales y lcalis fuertes, los que las hidrolizan,
desdoblndolas a sus correspondientes aminocidos.
El punto clave para entender la precipitacin de las protenas
es que la protena es una molcula cargada tanto positiva
como negativamente, y que por consiguiente, pueden
reaccionar se entre si y con iones de cargas opuestas o con el
agua. Podemos, por tanto, sealar tres tipos de

interpretaciones de una protena en solucin. A) Protenaprotena, B) Protena- agua, C)Protena- iones pequeos.
Si la interpretacin protena- protena es grande y la
interpretacin protena- agua es pequea, la protena tender
a ser insoluble. Si la situacin es la contraria, o sea que
predomina las interacciones protena- agua, entonces las
protenas tienden a ser solubles. Por consiguiente, cualquier
cosa que aumente o favorezca la interpretacin protenaprotena o disminuya la interaccin protena- agua, disminuir
la solubilidad de la protena, favoreciendo su precipitacin y
cualquier cosa que disminuya la interaccin protena- protena
y aumente la protena- agua, aumentar la solubilidad de la
protena.

Materiales
* Gradilla
* 10 tubos de ensaye de 13x100
* Agitador
* 2 vasos de precipitados de 200 ml
* 9 tubos de ensaye de 13x100
* Escobetilla
* Probeta de 50 o 100 ml
* Embudo
* Pipeta de 5 ml
* 2 vasos de precipitado de 50 ml
* 4 tubos de ensaye de 18x150
*Huevo y un pauelo limpio de tejido no muy cerrado.
Mtodos
Precipitacin por salacin (salting out)
Se rompi un huevo y se separ la yema de la clara. Se
descart la yema y se vaci la yema en un vaso de
precipitados de 250 ml y se agit suavemente la clara. No se
agit vigorosamente, pues provocara la produccin de la
espuma cosa que no es recomendable.
Se filtr a travs de gasa doble o de un pauelo de tejido no
muy cerrado. Se filtr directamente a una probeta para
calcular la cantidad de filtrado que se obtuvo.
Se midi el volumen de filtrado obtenido y se vaci a otro
vaso de precipitado de 250 ml. Se aadi un volumen igual de

una solucin saturada de sulfato de amonio. Se agit

suavemente y se dej reposar por 10 minutos.
Metimos la muestra a dos tubos para centrifugarlos a 25000
revoluciones por 8 minutos. Sacamos de la centrifuga y se
disolvi el precipitado (lo blanco) en un vaso de precipitados
de 100 ml, aadiendo 25 ml de cloruro de sodio al que 1%.
Se conservaron estas soluciones para hacer la siguiente
reaccin.
Precipitacin de la ovoglobulina por
Reaccin de Biuret

salacin

Colocamos en la gradilla 2 tubos de ensaye de 13x100 y los

rotulamos para identificarlos y pipeteamos 2.0 ml de agua
destilada en el tubo 1 y 2.0 ml de solucin de ovoglobulina al
tubo tubo 2. (estas son las soluciones que obtuvimos en la
primera parte). Agregamos 2.0 ml del reactivo de Biuret ya
preparado a cada uno de los 2 tubos. Se agit bien y se dej
reposar por diez minutos.
Se observ el color desarrollado en el tubo 2 que fue positivo
para la reaccin y se anotaron resultados y observaciones en
la hoja de datos.
Deteccin de protenas por la reaccin de
Biuret.
Precipitacin por solventes orgnicos
Se colocaron en la gradilla 4 tubos de ensaye de 18x150 y los
rotulamos. Se pipetearon 3.0 ml de albmina de huevo al .1%
ya preparada, a los tubos 1, 2 y 3.
Se pipetearon 4.0 ml de agua destilada al tubo 4.
Se pipetearon 1.0 ml de cido clorhdrico .1 N al tubo 1.
Se pipetearon 1.0 ml de hidrxido de sodio .1 N al tubo 2.
Se pipetearon 1.0 ml de la solucin amortiguadora de acetato
pH 4.7 al tubo 3.
Se pipetaron 5.0 ml de etanol al 95% a cada uno de los 4
tubos.

Se observ la turbidez relativa de los tubos que indica la

precipitacin y se anotaron los resultados y observaciones en
la hoja de datos.
Precipitacin de la ovoalbmina con solventes orgnicos a
distintos pHs.
Precipitacin por formacin de sales
Se colocaron 6 tubos de ensaye de 13x100 en su gradilla y
los rotulamos.
Se pipetearon 2.0 ml de albmina de huevo al .1%, ya
preparada, a los tubos 1, 3 y 5.
Se pipetaron 2.0 ml de agua destilada a los tubos 2, 4 y 6.
Se piperaron .5 ml de cloruro de mercurio al 5% a los tubos
1 y 2.
Se pipetearon .5 ml de nitrato de plata al 1% a los tubos 3 y
4.
Se pipetearon .5 ml de cido tricloroactico al 10% a los
tubos 5 y 6.
Se observ la formacin de precipitado en los distintos
tubos y se anotaron los resultados y observaciones en la
hoja de datos.
Precipitacin de ovoalbmina por formacin
de sales.
Resultados
Precipitacin por salting out
-Total de mililitros de filtrado obtenido: 17 ml.
-Cantidad de sulfato de amonio slido agregado al filtrado
de la solucin de ovoalbmina: no se realiz esta parte.
Se disminuye la concentracin efectiva del agua, en una
solucin proteica aadiendo una sal muy soluble, se
aumentar la interaccin protena- protena favorecindose la
precipitacin de la protena. La gran cantidad de sal estar
robndole a la protena las molculas de agua que la
solubilizan. Como las protenas varan en la proporcin de

cargas superficiales, las distintas protenas precipitaran a

distintas concentraciones de sal.
Reaccin de Biuret
Tubo No.
1
2

Color
Azul
Violeta

Tiempo
5 minutos (-)
5 minutos (+)

El Biuret es un reactivo de sulfato de cobre diluido en lcali

fuerte. Es un reactivo muy bueno para demostrar presencia de
protenas e incluso cuantificarlas. La prueba la dan positiva
todos los componentes que tengan dos o ms uniones
peptdicas, por lo cual es propia para protenas y ppticas.
La intensidad del color de la reaccin es proporcional a la
cantidad de protena en la muestra
Precipitacin por solventes orgnicos
Tubo No.

Turbidez

Poca turbidez

No turbidez

Muy turbio

No turbidez

Al
aadir
solventes orgnicos a una solucin acuosa de protenas, se
baja la constante dielctrica del agua disminuyendo,
efectivamente, la interaccin protena- agua y aumentando
la interaccin protena- protena, favoreciendo as la
precipitacin. En este tipo de precipitacin si hay que tener
en cuenta factores como el pH pues tienen efecto en la
precipitacin en este caso es el ph de 4.7.
Precipitacin por formacin de sales
Tubo No.
1
2
3
4
5
6

Precipitado
Muy turbio
X
Muy turbio
X
Precipit
X

Las protenas precipitan de sus soluciones por algunos tipos

de metales pesados y el ion del metal pesado muy
probablemente se combinan con la forma aninica de la
protena.
Una manera muy sencilla de precipitar a las protenas es
ajustar el pH se su solucin a su punto isoelctrico. Se forma
entonces un precipitado reversible, que se disolver tanto de
lado alcalino como del lado cido de punto isoelctrico. En el
punto isoelctrico de la protena, la carga neta es cero,
favorecindose entonces a la precipitacin, por ser ese el
punto de menor solubilidad en el agua.

Conclusiones

Cuando la protena no ha sufrido ningn cambio en su

interaccin con el disolvente, se dice que presenta
una estructura nativa. Se llama desnaturalizacin de las
protenas a la prdida de las estructuras de orden
superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la
cadena polipeptdica reducida a un polmero estadstico sin
ninguna estructura tridimensional fija.
Cualquier factor que modifique la interaccin de la protena
con el disolvente disminuir su estabilidad en disolucin y
provocar la precipitacin. As, la desaparicin total o parcial
de la envoltura acuosa, la neutralizacin de las cargas

elctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de

hidrgeno facilitar la agregacin intermolecular y provocar
la precipitacin. La precipitacin suele ser consecuencia del
fenmeno llamado desnaturalizacin y se dice entonces que
la protena se encuentradesnaturalizada.

Cuestionario
1.- Cul es, en general, la solubilidad de las protenas
globulares y a qu se debe esta solubilidad?
Las protenas globulares son solubles en agua, debido a que
sus radicales polares o hidrfilos se sitan hacia el exterior,
formando puentes de hidrgeno con el agua, constituyendo
una capa de solvatacin. Esta solubilidad vara dependiendo
del tamao, de la forma, de la disposicin de los radicales y
del
pH.
2.- Conociendo lo que es el salting out, qu significar el
procedimiento del santing in?
Es el fenmeno por el cual la concentracin de sal aumenta la
solubilidad de la protena. A altas fuerzas inicas, la

solubilidad de las protenas disminuye, este fenmeno es

conocido como salting out. Este fenmeno se da bsicamente
por la competencia por las molculas de agua que forman
parte de la capa de solvatacin.
3.- Por qu el sulfato de amonio es la sal ms empleada en la
precipitacin
de
protenas?
Se usa para precipitar fraccionadamente las globulinas que no
son solubles en agua y para diferenciarlas de las albminas.
Las globulinas se pueden re disolver para hacer subsecuentes
anlisis, como puede ser la extraccin de una protena en
particular por cromatografa de afinidad con NaCl.
El sulfato de amonio es excelente componente para la
llamada precipitacin fraccionada, porque, entre otras cosas,
hace que el agua compita entre la disolucin de esta sal o de
la protena (formada por muchos grupos carboxilo y amonio),
causando que precipite la protena.
4.- Qu protenas precipitan al 50% de saturacin de sulfato
de amonio y que protenas precipitan al 100% de saturacin?
La mayora de las globulinas animales se precipitan con
sulfato de amonio al 50% de saturacin. Las albminas se
precipitan con soluciones de sulfato de amonio al 100% de
saturacin. Da la oportunidad de separar albuminas de las
globulinas
5.- Le conviene investigar qu es una dilisis, cmo se lleva a
cabo
y
para
qu
sirve.
En este caso pueden atravesar la membrana molculas de
bajo peso molecular (solutos), y stas pasan atravesando la
membrana desde la solucin ms concentrada a la ms
diluida. Es el fundamento de la hemodilisis que intenta
sustituir la filtracin renal deteriorada.

Referencias
http://www.ehu.es/biomoleculas/proteinas/desnaturalizacion
.htm
proteinas.org.es/que-son-las-proteinas
http://www.eufic.org/article/es/salud-estilo-de-vida/comidasana/artid/proteinas/
www.ehu.eus/biomoleculas/proteinas/desnaturalizacion.htm
http://www.ehu.eus/biomoleculas/proteinas/desnaturalizacio
n.htm