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D
LEUCORREDUCCION

NUEVAS
TECNOLOGIAS
THeI Irene Feuermann
Especialista Clnica
Pall Medical

Pall Corporation se dedica exclusivamente a la


filtracin y las tecnologas que la complementan
desde hace 60 aos.
Sus productos se utilizan para filtrar, separar y
purificar en las ms variadas aplicaciones
industriales, mdicas y cientficas.

d
El filtro original diseado por el Dr Pall consista en una
malla de acero inoxidable. La invencin de este medio
filtrante llamado PSS (Porous Stainless Steel) dio origen al
desarrollo de las exclusivas tecnologas de filtracin de Pall
Corporation en los ms diversos campos de aplicacin.

Un poco de historia

Uso de filtros de 170m en la


1939 prctica transfusional
Baxter Laboratories, Chicago,
IL, present en 1939 el
contenedor Transfuso-Vac, una
botella al vaco estril
conteniendo citrato, la que
poda utilizarse en conjunto con
un equipo de administracin
que contena un filtro
metlico.

1940 Sin embargo


Un sistema prctico y barato
en el Hospital es la filtracin
previa a travs de un doble
pliegue de gasa lavada y
esterilizada, que se dispone
sobre un embudo o en el mismo
frasco, permitiendo entonces la
transfusin ulterior en las
mejores condiciones.
Hemoterapia. Romero Alvarez, Augusto; Editorial Ateneo, 1947, pag 64

1960 Uso de filtros con malla plstica


Se comenzaron a utilizar los filtros de
malla plstica de 170m para
macroagregados en forma rutinaria.
Esta prctica sola considerarse lo
suficientemente segura como para
evitar cualquier tipo de complicacin
con respecto a la infusin de agregados
y detritos.

d
A fines de los 60, el neurlogo Rusell
Patterson dedujo que los trastornos
neurolgicos que se observaban con
frecuencia luego de la circulacin
extracorprea en las cirugas a corazn
abierto, estaban relacionados con los
micrombolos reperfundidos.

Contact al Dr Pall quien dise un filtro de poliester


de 40m que comenz a utilizarse de inmediato en los
equipos de perfusin.

1974 Uso de filtros para microagregados


En los 70 especialmente durante las
transfusiones masivas en el escenario de
Vietnam, se observ la asociacin entre los
microagregados y el sndrome de distress
respiratorio en el adulto y la disfuncin
cerebral.
Basndose en el diseo de los filtros para los equipos de
circulacin extracorprea, Pall dise filtros de 40m
para microagregados, los que de inmediato
complementaron y/o reemplazaron los filtros de 170m.

Uso de filtros para microagregados

40
Filtro Pall SQ40 despus de la
filtracin de dos unidades de
sangre en SAG-M 21 das.

Microfotografa de
microagregados en la membrana
de 40 micrones PALL

1980

Spin, cool & filter

Tcnica muy
popular que
aceleraba la
formacin de
agregados
leucocitarios:

Sangre almacenada a 4C
+
Centrifugacin
+
Reposo a 4C
+
Filtracin con malla de 40m

Spin, cool & filter

RFNH
Reaccin Febril No Hemoltica

Reaccin Febril No Hemoltica

Liberacin de aminas Liberacin de


vasoactivas
pirgenos

Activacin de
complemento

Primer
filtro
para
leucorreducir
1983
concentrados plaquetarios
El Dr David Pall se interes en la
leucorreduccin de CP, ya que en
el seno de su familia se
presentaron dos casos de
enfermedades hematolgicas.
Este inters lo motiv a
desarrollar el primer filtro para
leucorreduccin de
concentrados plaquetarios.

Uso
de
filtros
para
leucorreducir
1987
concentrados de hemates
Motivados por la popularidad de la
tcnica spin, cool & filter, las
corporaciones Asahi y Pall
desarrollaron filtros especialmente
diseados para leucorreducir
3 o ms log10 de glbulos blancos a
partir de los concentrados de
glbulos rojos o sangre total.

El
uso
de
filtros
para
leucorreduccin
1992
reduce la tasa de infecciones post
quirrgicas
Entre 1992 y 1996 Jensen y cols publican una
serie de estudios que demuestran que la
leucorreduccin reduce el efecto
inmunosupresor de las transfusiones
alogeneicas y como consecuencia disminuyen
las infecciones post quirrgicas en los
pacientes sometidos a ciruga gastrointestinal.

La leucorreduccin de las transfusiones de sangre total


disminuyen la frecuencia de infecciones bacterianas
23% (13/56)
25
20
15

S. Total

10

2% (1/48)

2% (2/93)

S.Total deleuc.

No Transf.

S. Total

S.Total
deleuc.

No Transf.

Jensen,1996. Br. J. Surgery

1995 El uso de filtros para leucorreduccin


disminuye la infeccin por CMV
CMV

A partir de un estudio publicado en la Revista Blood*,


se comienza a sustituir el tamizaje serolgico para CMV
por el uso de hemocomponentes leucorreducidos.
* Raleigh A. Bowden; Blood, vol.86, No 9, 1995: pp 3598-3603

1997 Se publica el estudio TRAP


14

Control
13

Plaquetas irradiadas
con UV-B

12
(%)

10

Plaquetas de afresis
filtradas

8
6
4
2
0

Concentrado de
Plaquetas filtradas

5
4

CP-UVB

PA-F

CP-F

El Estudio para reducir la aloinmunizacin plaquetaria*


demuestra que la filtracin reduce la refractariedad
plaquetaria mediada por aloinmunizacin.
* National Institute of Health, 1997

Aloinmunizacin por transfusin


Donante
Leucocito = CPA

Receptor
Linfocito T
cooperador

HLA-I
Reconocimiento

Linfocito B

Estimulacin

HLA-II

Inhibicin
Plaquetas

HLA-I
Complemento

Anticuerpos
anti-HLA-I

1998 Leucorreduccin Universal (LRU)

Evolucin de la
Implementacin
de la
Leucorreduccin

Durante fraccionamiento
Uso generalizado

Experiencia
clnica y
capacitacin
tcnica

In-line

Banco de Sangre
Bajo demanda
Pre-storage
Cabecera
Bajo demanda
Bed-side

Tiempo

Filtracin en la cabecera del paciente

Experiencia
clnica y
capacitacin
tcnica
Cabecera
Bajo demanda
Bed-side

Tiempo

Filtracin en la cabecera del paciente


Purgado automtico vertical

Self leveling drip chamber


venteo

Filtracin en el Banco de Sangre


Experiencia
clnica y
capacitacin
tcnica
Banco de Sangre
Bajo demanda
Pre-storage

Tiempo

Filtracin en el Banco de Sangre


BPFBLA

Compatible con SCD

Sistema eliminador de aire

Recuperacin > 90%

Bolsa para toma de muestras


lacrada

Rtulos e instrucciones en
espaol

Filtracin en el Banco de Sangre


LRF6BLA / LRF10BLA

Compatible con SCD

Sistema eliminador de aire

Recuperacin > 90%

Bolsa para toma de muestras

Rtulos e instrucciones en espaol

LRF6 con bolsa de 600 ml

LRF10 con bolsa de 1300 ml de


CLX de almacenamiento prolongado

Pediatra / Neonatologa

NEO1

La solucin adecuada para cada demanda


transfusional
Menor prdida de hemocomponentes
Alcuotas listas para enviar a Neonatologa

BPF4NEOL

PL1B

Acrodose PL System

Pool de CP leucorreducidos
prealmacenamiento con control bacteriano

Acrodose PLus

Pool de plaquetas randmicas

Conexin por sistema de conexin


estril

Filtro para leucorreduccin

Bolsa de CLX de almacenamiento


prolongado

Bolsa para toma de muestra para


control de bacterias

Acrodose PLus

Bacteria Detection System


Colecta de
sangre

Muestra, Incubar
(35C)
35C
Incubacin

Temp ambiente

T=0 hr

T=24 hr

Deteccin

T=42 hr

Ingreso de datos & medicin de oxgeno

eBDS

Hasta da 7 ?

Filtracin en lnea
Durante fraccionamiento

Experiencia
clnica y
capacitacin
tcnica

Uso generalizado
In-line

Tiempo

Filtracin en lnea

Filtracin en lnea

d
Filtracin de sangre total, despus de la donacin y antes del procesamiento

PRE Procesamiento
INTRA Procesamiento

Fraccionamiento

transfu
sin

Filtracin de eritrocitos,plaquetas o plasma durante el procesamiento

Fraccionamiento

POST Procesamiento

almacenamiento

almacenamiento

transfu
sin

Filtracin de eritrocitos,plaquetas o plasma despus del procesamiento


PRE almacena
miento

Fraccionamiento

transfu
sin

almacenamiento

POST almacena
miento

transfu
sin

Calidad en
Leucorreduccin
Dcadas de investigacin y desarrollo
e innovacin permanente
de los medios filtrantes y diseo de los filtros

Calidad
1- Medio filtrante

2- Carcasa
3- Sellado entre el medio filtrante y la carcasa
4- Diseo del sistema
5- Consistencia

1- Medio filtrante

Fibras de polister con una


superficie mxima para la
ptima adherencia de
leucocitos
Mxima densidad de fibras
delgadas para minimizar la
prdida de plaquetas, GR y
plasma
Mltiples capas de medio
filtrante lo cual mejora
notablemente la velocidad
de purgado, reduce la
posibilidad de atrapar aire y
ofrece un flujo consistente

Filtracin inteligente
Fragmentos de complemento biolgicamente
activos como el C3a y C3a desArg
Priones
Citoquinas (IL-8, RANTES)

2- Carcasa

Diseo circular que aumenta


la consistencia y eficacia de
filtracin, sin esquinas, las
cuales constituyen reas de
mnimo flujo
Permite el flujo contra
corriente y evita la
canalizacin
Ofrece proteccin contra
fuerzas externas durante
procesos tales como
esterilizacin y centrifugacin

Diseo de la carcasa
que evita
la canalizacin

Caractersticas de
flujo ptimas

3- Sellado

Pall utiliza sellos de


compresin en todos sus
filtros de leucorreduccin
de componentes
sanguneos, lo cual
constituye un proceso
uniformemente controlado
La integridad del sello
asegura el correcto
desempeo del filtro
leucorreductor

4- Diseo

El diseo exclusivo de los sistemas


de leucorreduccin asegura la
mnima intervencin del operador y
la mnima manipulacin del filtro y
las tubuladuras
Los sistemas para leucorreduccin
en cabecera del paciente incluyen
cmara de goteo autonivelante para
facilitar el purgado y el flujo durante
el filtrado
Los sistemas para leucorreduccin
en el banco de sangre incluyen
bolsas para toma de muestras para
control de calidad y dispositivos de
venteo para recuperar una mayor
cantidad de producto

5- Consistencia

Pall reconoce que la sangre es un


agente biolgico que puede ser
filtrado en diferentes etapas de
procesamiento, por lo que los
filtros son diseados para cada
aplicacin especfica
La tecnologa de filtracin
proporciona los ms bajos
niveles de leucocitos residuales
en los componentes sanguneos
filtrados con mrgenes de
seguridad por debajo de las
normas establecidas

Hemocomponente
leucorreducido
<5x

6
10

leucocitos

Contenido aproximado de leucocitos


(por unidad)
Sangre entera
GR
GR lavados
GR desglicerolizados
Plaquetas, afresis
Plaquetas
AABB Technical Manual 13th Edition

109
108
107
106-107
106-108
107

Eficacia de leucorreduccin
Parmetro

Poblacin leucocitaria
residual

Paq. globular

2,5 x 109

Centrifugacin

2,5 x 108

log 1

Sistema automtico

2,5 x 107

log 2

Normas de la AABB

< 5 x 106

log 3

Filtro alta eficacia

< 2,5 x 105

log 4

Hemocomponente
leucorreducido
<5x

6
10

leucocitos

Mtodo de
Recuento de
Leucocitos Residuales

Cmara de
Nageotte

Cmara de Nageotte

Sensibilidad del mtodo: 0,1 leucocitos /microlitro


Hausserscientific Products

Cada rectngulo mide 10 mm x 0,25 mm x 0,5 mm de profundidad.


Volumen = 1,25 mm3
40 rectngulos = 50 mm3 = 50l

Recuento de
leucocitos
residuales por
citometra de flujo

Lmite de deteccin = 0,05 leucocitos/microlitro

Citmetro de Flujo
Autoanalizador de clulas en
suspensin que, alineadas y de a una por
vez, pasan por un haz de lser focalizado
Cada clula, a la vez que dispersa la
luz, emite luz fluorescente por la
excitacin lser

Reactivos para recuento de leucocitos


residuales incluyen:
Detergente para permeabilizar las clulas
Ioduro de propidio para teir el ADN
ARNasa para eliminar el ARN celular
residual que pudiera interferir en la tincin
Microesferas que se utilizan como estndar
interno para el recuento absoluto

Sensibilidad del mtodo: 0.05 L/uL

Lectura por citometra de flujo


Muestra pre filtracin

Muestra post filtracin

N GBr/uL = Eventos GB(R2) x Rto. beads por tubo*


Eventos de beads(R1) Vol de la muestra(uL)
*El recuento de beads por tubo es constante en un mismo lote

Deteccin de bacterias - Pall eBDS


en concentrados plaquetarios

Contaminacin bacteriana en hemocomponentes


Primer riesgo infeccioso en ser reconocido como
tal en la transfusin sangunea (1939)

Novak M. Preservation of stored blood with sulfanilamide. JAMA 1939;113:2227-9.

Reducido en su mayor parte en los 60 por el uso


de sistemas cerrados y estriles
Los recientes avances en las tcnicas de tamizaje
viral serolgico han reducido notablemente los
riesgos de infeccin viral
En la actualidad, la sepsis bacteriana es el evento
infeccioso ms frecuente luego de la transfusin.

Contaminacin bacteriana en hemocomponentes


Segunda causa de fatalidades
asociadas a la transfusin
reportadas a la FDA entre
1976-1998.
Concentrados plaquetarios se
vieron implicados en ms del
doble de las fatalidades
asociadas con glbulos rojos
o sangre total.

Lee, JH. Workshop on Bacterial Contamination of Platelets. CBER, FDA September 24, 1999.
http://www.fda.gov/cber/minutes/bact092499.pdf

Contaminacin bacteriana en hemocomponentes

Cuadro de
situacin
actual

Reconocimiento de la
frecuencia y significacin
clnica de la
contaminacin bacteriana
de hemocomponentes
Desarrollo de estrategias
tendientes a disminuir la
sepsis bacteriana y la
morbilidad y mortalidad
asociadas

AABB

Normativa AABB

Standards for Blood Banks and Transfusion Services - 22nd edition

Pall eBDS - Generalidades


Set para muestreo

Pall Data
Software

Incubador/Agitador

Analizador de oxgeno con lector de cdigo de barra

Tcnica
Pall eBDS utiliza oxgeno como marcador
para determinar la presencia de bacterias
Etapa 1: Las bacterias consumen el oxgeno
del plasma
Etapa 2: Equilibrio de la concentracin de
oxgeno entre el aire y el plasma
Etapa 3: El Analizador de Oxgeno Pall
eBDS mide el oxgeno del espacio superior
y lo compara con un valor lmite
predeterminado

Tcnica
Se estimula el crecimiento bacteriano
en el interior de la bolsa
TSB (agar soja tripticasa)
SPS (sulfonato polianetol sdico)
Incubacin de la muestra a 35C en
agitacin
Mejora el crecimiento bacteriano
Mejora el equilibrio entre el
espacio libre en la bolsa y el
plasma

d
Analizador eBDS Simplicidad y
Seguridad
30 segundos por prueba
Hasta 40.000 pruebas por
ao
Opciones flexibles para
el ingreso de datos
Alta compatibilidad entre
el analizador y el
software

Deteccin de bacterias en concentrados plaquetarios

Calidad en Leucorreduccin

Dcadas de investigacin y desarrollo


e innovacin permanente
de los medios filtrantes y diseo de los filtros

Muchas gracias!!!!

irene_feuermann@pall.com