Artigo Original/Original Article

Comparao entre mtodos para a anlise de coliformes totais e E. coli em

amostras de gua
Comparison of methods for analysis of total coliforms and E. coli in water samples

RIALA6/1291
Marina Chiarelli MARQUEZI1*, Cludio Rosa GALLO1, Carlos Tadeu dos Santos DIAS2

Endereo para correspondncia: 1Laboratrio de Microbiologia de Alimentos, Departamento de

Agroindstria, Alimentos e Nutrio, Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALQ/
USP) Avenida Pdua Dias, 11. CP 09. CEP 13418-900. Piracicaba SP, Fone: (19) 3429-4131, email:
marinamarquezi@gmail.com
2
Departamento de Cincias Exatas, Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALQ/USP)
Recebido: 24.06.2010 Aceito para publicao: 30.09.2010

RESUMO
Neste estudo foram realizadas as contagens de coliformes totais e de E. coli por meio de trs metodologias
(fermentao em tubos mltiplos - FTM, Colilert e Colitag) em amostras de gua coletadas de trs diferentes
pontos (abastecimento, bica e rio). O desempenho analtico dessas metodologias foi comparado analisandose 90 amostras de gua. Nas contagens de coliformes totais em amostras de gua provenientes de bica e de
abastecimento e nas contagens de E. coli em amostras de gua coletadas de abastecimento, bica e rio, as
tcnicas Colilert e Colitag mostraram resultados equivalentes aos da metodologia FTM. Nas anlises de
coliformes totais em amostras de gua do rio, a tcnica de FTM apresentou diferenas significativas quando
comparada aos testes rpidos. Esta diferena pode ter ocorrido pela presena de Aeromonas nas amostras
ou, possivelmente, pela maior capacidade das tcnicas Colilert e Colitag em recuperar as clulas danificadas.
Dessa forma, nos casos em que as tcnicas rpidas forem equivalentes metodologia convencional, d-se
preferncia ao uso dos primeiros testes, por serem mais rpidos, prticos e de menor custo.
Palavras-chave. coliformes, E.coli, anlise de gua.
ABSTRACT
The total coliform and E. coli counts were performed using three methodologies (Multiple-Tube
Fermentation - MTF, Colilert and Colitag) in water samples collected from three different points (water
supply, spout and river). The performances of three methodologies were compared analyzing ninety water
samples. In the analysis of total coliform of water samples from spout and supply and analysis of E. coli
of water samples from supply, tap and river, Colilert and Colitag techniques were equivalent to MTF in
counting these bacteria. However, for analyzing the total coliform in water samples collected from river,
the MTF technique differed significantly from those rapid tests. This significant difference may be due to
the presence of Aeromonas in water samples, or possibly because of the increased capacity of Colilert and
Colitag techniques in recovering the injured cells. Thus, in event of the rapid technique were equivalent to
conventional ones, the former should be used, as they are fast, practical and inexpensive.
Key words. coliforms, E. coli, water analysis.

Rev Inst Adolfo Lutz. 2010; 69(3):291-6

291

Marquezi MC, Gallo CR, Dias CTS.Comparao entre mtodos para a anlise de coliformes totais e E. coli em amostras de gua. Rev Inst
Adolfo Lutz. So Paulo, 2010; 69(3):291-6.

INTRODUO

A gua o alimento mais consumido pela
populao e, por ser um importante veculo de transmisso
de doenas, est associada a grandes riscos sade
pblica1. Dentre as doenas comumente transmitidas pela
gua podem ser citadas: clera, shigelose, leptospirose2.
Segundo a Organizao Mundial de Sade
(OMS), cerca de 80% das doenas relatadas em pases
em desenvolvimento tem como veculo de transmisso
a gua de m qualidade1. Uma vez tratada, a gua deixa
de ser um veculo de agentes patognicos, garantindo a
sade pblica.
Os microrganismos transmitidos pela gua tem
como principal rota de contaminao a fecal-oral, sendo
disseminados na gua a partir da contaminao desta com
esgoto no tratado ou tratado inadequadamente2. Assim,
o controle da qualidade da gua a ser consumida pela
populao uma atividade de extrema importncia.
A identificao de patgenos na gua possvel,
porm uma prtica difcil; sendo assim, prefervel
realizar as anlises de microrganismos indicadores de
contaminao fecal, tais como as bactrias do grupo
coliformes3. As bactrias deste grupo esto presentes
no intestino humano e de animais de sangue quente,
e so eliminadas em grandes quantidades nas fezes e
quantificadas por mtodos simples. Porm, neste grupo,
h tambm bactrias de origem no exclusivamente fecal4.
A E. coli uma bactria pertencente ao grupo
coliforme, que tem como habitat primrio o intestino do
homem e de animais de sangue quente, representando
95% das bactrias do grupo coliformes encontradas nas
fezes humanas e de animais. Por ser uma bactria de fcil
isolamento e identificao em gua e por seu perodo
de sobrevivncia ser semelhante ao dos patgenos mais
comuns, a E. coli considerada a melhor indicadora de
contaminao fecal, sendo a tendncia atual o uso da
deteco especfica de E. coli, e no mais de bactrias do
grupo coliformes termotolerantes4,5.
Dentre os mtodos utilizados para a contagem
de coliformes totais e E. coli em amostras de gua, se
destacam o mtodo convencional fermentao em tubos
mltiplos (FTM) e os mtodos rpidos Colilert e Colitag.
O mtodo FTM apresenta como desvantagem o fato de
ser muito trabalhoso e demorado (at 96 horas). J os
mtodos rpidos Colilert e Colitag se tornam vantajosos
por utilizarem somente um meio e demorarem apenas 24
horas para darem o resultado da anlise, possibilitando

292

aes corretivas, caso seja detectada a contaminao da

gua, impedindo o consumo de uma gua possivelmente
contaminada pela populao.
Os mtodos Colilert e Colitag so aprovados pela
United States Environmental Protection Agency (USEPA),
sendo o Colilert na dcada de 90 e o Colitag em 20046,
com o fim da patente da IDEXX sobre esta metodologia.
Dessa forma, por ser mais novo, poucos trabalhos so
encontrados na literatura envolvendo o mtodo Colitag.
O mecanismo de deteco de coliformes totais e E. coli
desses mtodos rpidos so os mesmos, assim como a
metodologia utilizada.
Segundo os fabricantes do Colitag, esse produto
promove a reativao e posterior deteco de E. coli
danificadas pelo cloro. Esse mtodo confivel e de
acordo com a USEPA gera 0,0% de resultados falsonegativos e 5,0% de resultados falso-positivos para
coliformes totais e E. coli7.
No campo de pesquisa, o uso de mtodos rpidos
se torna vantajoso por diminurem o tempo de anlise e,
consequentemente, aumentarem a produtividade laboratorial.
O objetivo deste trabalho foi comparar a
equivalncia entre os mtodos FTM, Colilert e Colitag
na determinao do nmero mais provvel (NMP) de
coliformes totais e E. coli em amostras de gua provenientes
de abastecimento, bica e rio.
MATERIAL E MTODOS

As amostras de gua foram obtidas na cidade
de Piracicaba SP nos perodos de fevereiro/2009 a
julho/2009. Foram coletadas amostras de trs diferentes
pontos, sendo 30 do abastecimento pblico municipal
(SEMAE), captada em uma residncia localizada no
bairro Alto, 30 do rio Piracicamirim, na Avenida Professor
Alberto Vollet Sachs e 30 de uma bica, localizada na Rua
Silva Jardim, totalizando 90 amostras analisadas. As
coletas foram realizadas segundo Silva et al4, e as amostras
seguiram em caixas isotrmicas para o Laboratrio
de Microbiologia de Alimentos, no Departamento de
Agroindstria, Alimentos e Nutrio, da ESALQ/USP, em
Piracicaba, onde foram prontamente analisadas.
A determinao do NMP de coliformes totais e E.
coli pelos mtodos FTM, Colilert e Colitag foi realizada de
acordo com Hunt e Rice8.
A anlise estatstica foi feita pela anlise de
varincia e aplicou-se o teste de Tukey, usando o sistema
computacional SAS9.

Marquezi MC, Gallo CR, Dias CTS.Comparao entre mtodos para a anlise de coliformes totais e E. coli em amostras de gua. Rev Inst
Adolfo Lutz. So Paulo, 2010; 69(3):291-6.

RESULTADOS
Pela anlise estatstica exploratria foram encontrados
alguns problemas, tais como escala, outliers (pontos
discrepantes) e heterogeneidade de varincias. Para resolver
estes problemas, foi utilizado o mtodo de transformao
potncia tima de Box e Cox10, o qual sugeriu a transformao
logartmica na base 10 dos dados obtidos.
O resultado das anlises dos dados obtidos para
coliformes totais nos trs pontos estudados pelos trs mtodos
analisados, na escala transformada, mostraram uma interao
entre pontos e mtodos. Dessa forma, as mdias de cada
mtodo foram estudadas dentro de cada ponto, e vice-versa,
a partir do desdobramento da interao, conforme a Figura 1.

Nas amostras de gua de abastecimento, no

foi detectada a presena de E. coli em nenhuma das 30
amostras. Assim, no foi encontrada diferena significativa
entre os trs mtodos utilizados.
As mdias obtidas a partir da transformao
logartmica dos dados para a contagem de E. coli em
amostras de gua da bica podem ser observadas na Figura 2.

Figura 2. Mdias das contagens encontradas para E. coli em amostras

de gua da bica. Mdias encontradas a partir da transformao
logartmica dos dados. Mdias seguidas de mesma letra minscula
no diferem entre si pelo teste de Tukey ao nvel de 5% de significncia

Figura 1. Contagens de coliformes totais em cada mtodo dentro de

cada ponto. Mdias e comparaes obtidas a partir da transformao
logartmica dos dados. Mdias seguidas de mesma letra maiscula em
um mesmo ponto no diferem entre si pelo teste de Tukey ao nvel de
5% de significncia

Nas amostras de gua de abastecimento, no foram

detectadas a presena de coliformes totais em nenhuma das
30 amostras; sendo assim, os mtodos no apresentaram
diferenas significativas entre si.
Nas amostras de gua da bica, a menor contagem
foi encontrada pelo mtodo Colitag e, a maior pelo
mtodo Colilert. O mtodo FTM apresentou contagens
intermedirias. Apesar disso, no foi encontrada diferena
significativa entre os mtodos utilizados.
Nas amostras de gua do rio, o mtodo FTM
apresentou a menor mdia e, o Colitag a maior. O mtodo
Colilert apresentou contagens intermedirias. Nesse caso,
foi encontrada diferena significativa entre o mtodo FTM
e Colilert e entre FTM e Colitag.
Na anlise estatstica dos dados obtidos para a
contagem de E. coli, no foi observada uma interao
entre pontos e mtodos. Dessa forma, a comparao das
metodologias foi feita dentro de cada ponto.

Nas amostras de gua da bica, o mtodo Colitag

foi o que apresentou uma menor mdia. A maior mdia
foi encontrada pelo mtodo FTM, ficando o Colilert com
contagens intermedirias. Apesar de tais diferenas, os
mtodos no diferiram entre si.
A Figura 3 mostra as mdias encontradas a partir
da transformao logartmica das contagens encontradas
para E. coli em amostras de gua do rio.

Figura 3. Mdias das contagens encontradas para E. coli em amostras

de gua do rio. Mdias encontradas a partir da transformao
logartmica dos dados. Mdias seguidas de mesma letra minscula
no diferem entre si pelo teste de Tukey ao nvel de 5% de significncia

Nas anlises de gua do rio, o mtodo FTM

apresentou a menor contagem de E. coli. J o mtodo
Colitag, a maior contagem, ficando o mtodo Colilert com

293

Marquezi MC, Gallo CR, Dias CTS.Comparao entre mtodos para a anlise de coliformes totais e E. coli em amostras de gua. Rev Inst
Adolfo Lutz. So Paulo, 2010; 69(3):291-6.

contagens intermedirias. Apesar de tais diferenas entre

as contagens, no foi observada diferena significativa
entre os mtodos.
DISCUSSO
Foi encontrada uma variao muito grande nos
dados obtidos, o que era esperado pela natureza do substrato.
Por ela ser pobre em nutrientes, as bactrias normalmente
no se multiplicam na gua, apenas sobrevivem e so
veiculadas e, se apresentam heterogeneamente dispersas.
Dessa forma, as alquotas pipetadas podem ora conter e ora
no conter as bactrias alvo.
A equivalncia dos mtodos rpidos e dos mtodos
convencionais tem sido muito estudada. Um estudo avaliou
as condies higinico-sanitrias da gua tratada, coletadas
nos pontos finais da rede de distribuio, pelos mtodos
Colilert e FTM. Foi observada a equivalncia desses
mtodos na quantificao de coliformes totais e de E. coli,
tanto nos resultados positivos quanto na ausncia destas
bactrias, destacando a rapidez e simplicidade do Colilert11.
Outro estudo comparou os mtodos da membrana
filtrante, FTM, Colilert nas anlises de gua potvel, e para
recreao. Para as amostras de gua potvel observouse que o mtodo Colilert foi mais sensvel na deteco
de coliformes totais que os mtodos convencionais
utilizados (coeficiente de correlao 0,77). Para a deteco
de E. coli, os trs mtodos apresentaram sensibilidades
iguais (coeficiente de correlao 0,84). Apesar disso, os
mtodos se mostraram equivalentes, sendo o mtodo
Colilert considerado to bom quanto, ou melhor que os
mtodos convencionais estudados. Nas amostras de gua
de recreao, o mtodo Colilert apresentou sensibilidade
igual a dos mtodos convencionais na deteco de E.
coli. Na deteco de coliformes totais, foram encontrados
problemas na confirmao da presena destas bactrias
em amostras analisadas pelo Colilert. Algumas delas
apresentaram resultado cido positivo, porm gs negativo,
indicando a necessidade de novos estudos12.
Em outro trabalho, foram comparadas as
metodologias Colitag e FTM. O Colitag se mostrou to
sensvel quanto o mtodo convencional na deteco de
coliformes em gua de recreao, tanto em contagens
altas como em baixas. No foram observadas diferenas
significativas entre os mtodos, destacando a rapidez do
mtodo Colitag13.
Na comparao dos mtodos FTM com os
mtodos rpidos Colilert e Readycult em amostras de gua

294

subterrnea, de superfcie e tratada, foi observado que as

tcnicas que utilizam substratos definidos apresentaram
uma alta sensibilidade e especificidade (>95%) na deteco
de coliformes totais, e coeficiente kappa prximo de 1,
indicando tima concordncia com o mtodo FTM.
Tanto a deteco de coliformes totais quanto de E. coli foi
maior pelos mtodos rpidos, devido maior capacidade
de recuperao e crescimento das clulas de coliformes
desses mtodos e por eles serem especficos para E. coli,
enquanto que o mtodo FTM no tem tal especificidade.
Apesar destas observaes, os mtodos no apresentaram
diferenas significativas entre si14.
No presente trabalho, tambm no foi observada
uma diferena significativa entre os mtodos rpidos
Colilert e Colitag e o mtodo convencional FTM nas
contagens de coliformes totais em amostras de gua de
abastecimento e bica e na contagem de E. coli em amostras
de gua de abastecimento, bica e rio, concordando com a
literatura pesquisada.
As contagens encontradas para coliformes totais
em amostras de gua do rio apresentaram uma diferena
significativa ao nvel de 5% de significncia. Tal diferena
pode ser resultado da presena de microrganismos no
coliformes que geram resultados falso-positivos nos
mtodos rpidos, tais como Aeromonas. Esta bactria
pode apresentar uma pequena produo da enzima
-galactosidase, enzima presente nas bactrias do grupo
coliforme e usada para a deteco destas nos mtodos
rpidos utilizados. Assim, quando a Aeromonas est
presente em amostras de gua, essa enzima pode reagir
com o substrato cromognico do meio (ONPG), resultando
em uma colorao amarela. Tal cor, nesses mtodos,
indicativa da presena de coliformes totais na amostra.
Os mtodos Colilert e Colitag apresentam, na formulao
de seus meios, mecanismos para a inibio de Aeromonas,
mas, nesse caso, tal inibio pode ter sido insuficiente.
A ocorrncia de resultados falso-positivos
tambm foi destacada em outros trabalhos. Na
comparao entre dez metodologias que utilizam
substratos definidos para a deteco de coliformes
totais e E. coli, incluindo os mtodos Colilert e Colitag,
foram inoculadas, em amostras de gua, duas diferentes
cepas de Aeromonas, com a finalidade de comparar a
capacidade dos mtodos em inibir tais organismos. Foi
encontrada uma grande variao nos resultados e uma
diferena significativa entre os mtodos na capacidade
de inibio de microrganismos no coliformes capazes
de gerar resultados falso-positivos, tais como Aeromonas.

Marquezi MC, Gallo CR, Dias CTS.Comparao entre mtodos para a anlise de coliformes totais e E. coli em amostras de gua. Rev Inst
Adolfo Lutz. So Paulo, 2010; 69(3):291-6.

De modo geral, o Colilert e o Colitag apresentaram uma

capacidade de inibio de Aeromonas aceitvel, mas
apresentaram alguns resultados falso-positivos6.
Em outro estudo, foi feita a comparao entre
os mtodos Colilert e a tcnica da membrana filtrante.
Ocasionalmente o mtodo Colilert obteve resultados
falso-positivos em amostras contendo um alto nvel de
contaminao por Aeromonas15.
Outro fato que pode explicar a diferena
significativa entre os mtodos rpidos e o FTM a
capacidade de recuperao de clulas injuriadas, que
normalmente maior nos primeiros. Dessa forma, nas
amostras de gua do rio poderia haver um nmero grande
de clulas bacterianas injuriadas que foram recuperadas
e, consequentemente, detectadas pelos mtodos Colilert
e Colitag. Como a capacidade de recuperao pelo FTM
normalmente menor, estas clulas no foram detectadas
por este mtodo. Ainda, poderia ser considerado o
fato da no produo da enzima lactose permease,
a qual responsvel pela fermentao da lactose e
produo de gs, que em clulas injuriadas pode no
ser produzida no tempo de incubao recomendado
pela metodologia, o que pode gerar falso-negativos na
tcnica FTM. A diferena na recuperao e deteco de
clulas bacterianas do grupo coliforme injuriadas entre
os mtodos rpidos e os convencionais tambm foi
destacada em outros estudos12,14,16, 17.
De acordo com a literatura, o mtodo Colitag
tem como vantagem sobre o Colilert a sua capacidade de
recuperao de clulas de E. coli danificadas pelo cloro.
Porm, neste trabalho, tal vantagem no foi observada
pela ausncia dessa bactria em amostras de gua de
abastecimento (clorada).
CONCLUSO
Em amostras de gua de abastecimento e da
bica, os mtodos rpidos Colilert e Colitag se mostraram
equivalentes ao mtodo convencional FTM nas contagens
de coliformes totais e E. coli.
Na anlise de coliformes totais em amostras
de gua do rio, o mtodo convencional FTM diferiu
significativamente dos mtodos rpidos Colilert e
Colitag. Na comparao entre os mtodos rpidos
para esta mesma anlise, no foi observada diferena
significativa entre eles.
Na anlise de E. coli em amostras de gua do rio,
ao contrrio do observado para a anlise de coliformes

totais, no foi encontrada diferena significativa entre os

mtodos utilizados (FTM, Colilert e Colitag).
Por no apresentarem diferena significativa nas
contagens de coliformes totais em amostras de gua de
abastecimento e de bica e nas anlise de E. coli, em todos
os tipos de amostras analisadas, recomendado o uso
dos mtodos rpidos Colilert e Colitag como substituto
do mtodo convencional FTM. Tal substituio se faz
vantajosa devido ao menor tempo necessrio para a
realizao das anlises (24 horas nos mtodos rpidos
e 96 horas no convencional), ao menor custo, no
necessidade da realizao de testes confirmatrios e
pelos mtodos rpidos serem menos trabalhosos. Com
a obteno de resultado em um perodo de tempo
menor, possvel evitar o uso de gua contaminada
pela populao.

REFERNCIAS
1.

Macedo JAB de. guas e guas. 3 ed. Belo Horizonte:CRQ-MG; 2007.

2.

Tortora GJ, Funke BR, Case CL. Microbiologia. 8 ed. Porto Alegre:
Artmed; 2005.

3.

Franco BDGM, Landgraf M. Microbiologia dos alimentos. So

Paulo: Atheneu; 2008.

4.

Silva N, Catansio Neto R, Junqueira VCA, Silveira NFA. Manual de

mtodos de anlise microbiolgica da gua. So Paulo: Varela; 2005.

5.

Jay JM. Microbiologia de alimentos. 6 ed. Porto Alegre: Artmed; 2005.

6.

Olstadt J, Schauer JJ, Standridge J, Kluender S. A comparison of

ten USEPA approved total coliform/E. coli tests. J Water Health.
2007;5(2):267-82.

7.

BioAmerica. Colitag: Exatido, Simplicidade e Segurana. [acesso

2010 Set 29]. Disponvel em: [http://www.grupos.com.br/group/
engenhariadeaquicultura/Messages.html?action=download&yea
r=07&month=9&id=1189445991709878&attach=].

8.

Hunt HE, Rice EW, coordinators. Microbiological examinations.

In: Standard methods for the examination of water & wastewater,
21 ed. Washington: APHA; 2005. Part 9000, p. 9-1 9-169.

9.

SAS Institute. SAS/STAT User Guide: vertion 6.08. Carrey. 1997. v. 2.

10. Box GEP, Cox DR. An analysis of transformations. J R Stat Soc

Series B Stat Methodol. 1964;26:211-46.
11. Cantusio Neto R. Comparao entre os mtodos de tubos
mltiplos e o substrato cromognico enzimtico (ONPG/MUG),
para deteco de coliformes na gua tratada. Hig Aliment.
2001;15(90/91):64-7.

295

Marquezi MC, Gallo CR, Dias CTS.Comparao entre mtodos para a anlise de coliformes totais e E. coli em amostras de gua. Rev Inst
Adolfo Lutz. So Paulo, 2010; 69(3):291-6.

12. Eckner KF. Comparison of membrane filtration and multiple-tube

fermentation by the Colilert enterolert methods for detection of
waterborne coliform bacteria, Escherichia coli and Enterococci
used in drinking water and bathing water quality monitoring in
southern Sweden. Appl Environ Microbiol. 1998;64(8):3079-83.
13. Hsieh JJ. A comparison of the Multiple-tube fermentation method
and Colitag method for the detection of waterborne coliform
bacteria. [Acesso 2008 Jul 25]. Disponvel em: [http://socrates.
berkeley.edu/~es196/projects/2001final/Hsieh.pdf.]
14. Greghi S de Q. Avaliao da eficincia de mtodos rpidos
usados para deteco de coliformes totais e coliformes fecais em
amostras de gua em comparao com a tcnica da fermentao
em tubos mltiplos [dissertao de mestrado]. Araraquara (SP):
Universidade Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho; 2005.

296

15. Cowburn JK, Goodall T, Fricker EJ, Walter KS, Fricker CR.
A preliminary study of the use of Colilert for water quality
monitoring. Lett Appl Microbiol. 1994;19:50-2.
16. Fricker EJ, Illingworth KS, Fricker CR. Use of two formulations
of Colilert and Quantitray for assessment of the bacteriological
quality of water. Water Res. 1997;31(10):2495-9.
17. C h a o K K , C h a o C C , C h a o W L . S u i t a b i l i t y o f t h e
traditional microbial indicators and their enumerating
methods in the assessment of fecal pollution of subtropical
freshwater environments. J Microbiol Immunol Infect.
2003;36(4):288-93.