...

Dr. Martn F. Desimone

Profesor Titular
Ctedra de Qumica Analtica Instrumental
Investigador Independiente CONICET

ultravioleta

Potenciometra Directa mediante electrodos Ion-Selectivo (ISE).

Muestra: Suero, plasma, sangre entera y orina.
Volumen por test: 80 L.
Tipo de operacin
Manual o autosampler.
Autosampler
Plato con 39 posiciones de auto muestreo.
Velocidad 60 Test/hora.
Calibracin De un punto y dos puntos.
Electrodos Libres de mantenimiento.
No requiere cambio de membrana.

infrarrojo

IC Electrolyte Analyzer

Na+

20.0-200.0
mmol/L

K+

0.50-10.00
mmol/L

Cl-

20.0-200.0
mmol/L

iCa

0.3-5.0
mmol/L

pH

6.00-9.00

Li+

0.1-3.0
mmol/L
2

...

Para que un producto farmacutico pueda liberarse

para su venta , ste debe cumplir con una serie de
especificaciones.
A
travs
de
ensayos
fisicoqumicos (entre otros), se verifica que se
cumplan con las especificaciones establecidas.

Mediante que forma comprobamos que el

producto
cumple
o
no
con
las
especificaciones?.......Mediante
una
serie
de
ensayos descriptos en un Mtodo Analtico.

Un Mtodo Analtico consta de un conjunto de

ensayos, los cuales tienen como objetivo
asegurar la calidad de los productos (por
ejemplo: farmacuticos elaborados por toda
industria farmacutica).
Algunos ensayos son especficos para algunos
productos mientras que otros son ms
generales y se realizan para casi todos los
productos.

...

Un Mtodo Analtico consta generalmente de

tres sub - mtodos:
Mtodo de Materias Primas
Mtodo de Productos Intermedio
Mtodos para productos Terminados

METODO vs TECNICA
Tcnica: Medio de obtener informacin sobre el analito.
Mtodo: Conjunto de operaciones y tcnicas aplicadas al anlisis de una
muestra. Incluye a la tcnica y a todos los pasos necesarios, por ejemplo,
toma de muestra, preparacin de la muestra, diluciones, extracciones, etc.
Es interesante realizar una definicin de trminos ligados al
anlisis:
Muestra: Parte representativa de la materia objeto del anlisis.
Analito: Especie qumica que se analiza.
Anlisis: Estudio de una muestra para determinar sus
composicin o naturaleza qumica.

...

Preparacin de muestras empleando: tamizado, filtracin, centrifugacin y

precipitacin.
Separaciones con membranas: dilisis.
Tcnicas de headspace.
Extracciones con solventes
Extraccin en fase slida: modos operativos, tipos de fases, automatizacin.
Tcnicas separativas: HPLC, CG, EC
Derivatizacin

Mtodos de anlisis
Mtodos clsicos, que se basaban en propiedades qumicas del analito. Se
incluyen las gravimetras, las volumetras y los mtodos de anlisis cualitativo
clsico.
Pueden ser lentos, en algunos casos sujetos a subjetividades (cambio de
color) y tener alguna fuente de error.
Mtodos instrumentales, emplean equipamiento y estn basados en la
medicin de propiedades fisicoqumicas.
La clasificacin de los mtodos instrumentales se realiza en base a la
propiedad que se mide (espectroscpicos, electroanalticos, trmicos...).
Mtodos de separacin. Se incluyen en este grupo los mtodos cuya
finalidad es la separacin de compuestos para eliminar las interferencias y
facilitar las medidas

...

10

...

Mtodos espectroscpicos
IR

Mtodos electroqumicos
Potenciometra directa o indirecta
Mtodos dinmicos:
ampermetricos

UV-visible
Mtodos separativos

Fluorescencia
Fosforescencia
Quimioluminiscencia
RMN
AA

DIRECTA
GC

Espectrometra de
masas

HPLC

ELECTROFORESIS CAPILAR

...

Terico
Espectroscopa UV-visible

Prof. Dr. Martn F. Desimone

13

14

...

Toda radiacin viene caracterizada por una longitud de onda

(), una frecuencia () o una energa (E), siendo la relacin
existente entre ellas:

E = h = hc/

15

16

...

En definitiva el espectro electromagntico puede expresarse

en trminos de energa, frecuencia o longitud de onda.
17

El interrogante acerca de que tcnica utilizar o en que orden para lograr

un completo anlisis de una sustancia depender en gran medida de los
objetivos perseguidos.
De una manera general podemos indicar como objetivos sucesivos los
siguientes:
Frmula molecular.
Identidad de los grupos funcionales.
Conectividades de los carbonos.
Posicionamiento de los substituyentes y/o los grupos funcionales sobre
el esqueleto carbonado (Obtencin de subestructuras), y
Propiedades estereoqumicas
Cuantificacin
Identificacin

18

...

Cuando la materia es sometida a una determinada radiacin

sufrir un efecto que depender de la energa de dicha radiacin

RADIACION

EFECTO

Rayos X y csmicos

Ionizaciones de las molculas

UV-Visible

Transiciones electrnicas entre los orbtales atmicos y

moleculares

Infrarrojo

Deformacin de los enlaces qumicos

Microondas

Rotaciones de los enlaces qumicos

Radiofrecuencias

Transiciones de spn electrnico o nuclear en los tomos

de la molcula.

20

Caractersticas ms importantes de los mtodos espectroscpicos

TCNICA
ESPECTROSCPICA

INFORMACIN OBTENIDA

Rayos X

Estructura total de la molcula incluida la

estereoqumica de la misma a partir de las posiciones
relativas de los tomos.

Ultravioleta-Visible

Existencia de cromforos y/o conjugacin en la

molcula a partir de las absorciones observadas.

Infrarrojo

a)Grupos funcionales a partir de las absorciones

observadas.
b)Zona de las huellas digitales

Resonancia magntica
nuclear

Grupos funcionales, subestructuras, conectividades,

estereoqumica, etc a partir de datos de
desplazamiento qumico, reas de los picos y
constantes de acoplamiento observadas.

21

10

...

22

ESPECTROFOTOMETRA ULTRAVIOLETA Y VISIBLE

(captulo 470 F.A. 7ed)
La espectrofotometra en el ultravioleta y visible consiste en la medida
de la absorcin de las radiaciones electromagnticas comprendidas en
un intervalo espectral de 200 a 400 nm para la regin ultravioleta y de
400 a 700 nm para la regin visible.
El grado en que la radiacin es absorbida al pasar a travs de un
medio homogneo se expresa en trminos de absorbancia (A). La
absorbancia de una solucin es el logaritmo decimal de la inversa de
la transmitancia (T), siendo esta ltima definida: como la fraccin de
radicacin incidente que logra atravesar la muestra. Para una
radiacin monocromtica, la absorbancia se calcula mediante la
siguiente expresin:

A = log

1
I
= log 0
T
It

Donde: I0 es la intensidad de radiacin incidente,

It es la intensidad de radiacin transmitida.

11

...

TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA

Sabemos que la transmitancia T de una especie absorbente es la fraccin de

radiacin incidente transmitida por esta:
T = P / P0
Y que su absorbancia A viene definida por la ecuacin:
A = - log T = log (P0 / P)
LEY DE LAMBERT Y BEER. ABSORTIVIDAD
De acuerdo con la ley de Lambert-Beer, la absorbancia es proporcional al paso
ptico, b, de la capa absorbente atravesada por la radiacin y a la
concentracin, c, del analito:
A = kbc
La constante de proporcionalidad, k, asume distintas denominaciones segn las
unidades en que b y c son expresadas

24

12

...

De acuerdo con la ley de Lambert-Beer, la absorbancia es proporcional

al paso ptico de la capa absorbente atravesada por la radiacin (b) y a
la concentracin del analito (C)

A = k .b .C
La constante de proporcionalidad (k) asume distintas denominaciones
segn las unidades en que (b) y (C) son expresadas:

k = a [L g.cm] = E [100mL g.cm] = [L mol.cm]

Absortividad (a): es la absorbancia de una solucin cuya

concentracin es de 1 g por litro, medida en una celda de paso ptico
de 1 cm.
Coeficiente de extincin especfica (E): es la absorbancia de una
solucin cuya concentracin es del 1 %, medida en una celda de paso
ptico de 1 cm.
Absortividad molar (): es la absorbancia de una solucin cuya
concentracin es de 1 mol por litro, medida en una celda de paso ptico
de 1 cm.
Los valores de (a), (E) y (), a una longitud de onda especfica y en un
solvente determinado son caractersticos del analito.

13

...

FOTMETRO Y/O ESPECTOFOTMETRO

Es el equipo que utilizamos para medir la absorcin o transmisin de luz por
parte de una muestra. Consta de los siguientes partes:
Fuente de luz: suele ser una lmpara que emite una luz (por incandescencia
de un filamento) policromtica, es decir que contiene distintas longitudes de
onda con distintas intensidades, I0.
Compartimiento muestra: es donde se coloca la muestra, con un espesor
conocido, normalmente disuelta y en una cubeta de 1cm de paso ptico, sobre
la que se hace incidir el haz de luz monocromtica
Sistema ptico: recibe la luz transmitida por la muestra, la focaliza y
selecciona por longitudes de onda
Detector: recibe la seal de la intensidad de la luz transmitida a cada
longitud de onda y la transforma en seal elctrica que un ordenador pueda
procesar.

28

14

...

Los mtodos pticos espectroscpicos se basan en seis fenmenos

1. Absorcin
2. Fluorescencia
3. Fosforescencia
4. Scattering o dispersin
5. Emisin
6. Quimioluminiscencia

30

Los instrumentos caractersticos incluyen 5 componentes

Fuente estable de energa radiante

Un recipiente transparente para contener la muestra
Un dispositivo para realizar la medida que asle una zona
restringida del espectro
Un detector de radiacin
Sistema de tratamiento de seal

31

15

...

Componentes de un instrumento de absorcin

32

Componentes de un instrumento de fluorescencia,

fosforescencia y dispersin

33

16

...

Componentes de un instrumento de emisin y quimioluminiscencia

34

Componentes y materiales para los instrumentos espectroscpicos

35

17

...

Componentes y materiales para los instrumentos espectroscpicos

36

37

18

...

Componentes y materiales para los instrumentos espectroscpicos

38

Selectores de longitud de onda

El ancho de banda efectivo es una medida inversa de la calidad del dispositivo

Un ancho de banda estrecho: aumenta la sensibilidad y la selectividad

Tipos de selectores de longitud de onda:

Filtros
Monocromadores

39

19

...

Filtro de
interferencia

40

Los filtros de interferencia

se caracterizan por las
longitudes de onda del
pico de transmitancia, por
el porcentaje de la misma
y por el ancho de banda
efectivo

Los filtros de absorcin funcionan absorbiendo ciertas zonas del espectro:

Pueden ser vidrios coloreados o una suspensin de un colorante en gelatina que
se coloca entre 2 placas de vidrio
41

20

...

Monocromadores
Se disean para poder variar en forma continua y en un amplio rango, la
longitud de onda de la radiacin.
Es decir, se disean para realizar barridos espectrales.
Constan de:
1. Una rendija de entrada
2. Una lente que produce un haz paralelo
3. Un prisma o red
4. Un elemento focalizador
5. Una rendija de salida

42

Monocromador de red Czerney-Turner

43

21

...

Monocromador de prisma de Bunsen

44

22

...

Clulas fotovoltaicas:
fotovoltaicas la energa radiante genera una corriente
elctrica cuya magnitud es proporcional al nmero de fotones que
incidieron.

Cuando la radiacin electromagntica incide sobre el selenio, se

promocionan electrones a las bandas de conduccin, haciendo que
pasen electrones desde la superficie del selenio hasta el electrodo
colector de plata, producindose un aumento de la conductividad
proporcional al nmero de fotones que inciden sobre la superficie del
semiconductor

48

23

...

Fototubos:
Fototubos la radiacin incide sobre una superficie fotoemisora y
genera emisin de electrones que fluyen al nodo generando una
fotocorriente.
Consisten en un ctodo semicilndrico recubierto interiormente de un
material fotosensible, y un nodo, en el interior de un recipiente en
el que se ha hecho el vaco.

Tubos fotomultiplicadores:
fotomultiplicadores 106-107 electrones por cada fotn
incidente. Este tipo de detector consiste en un ctodo fotosensible y
una serie de electrodos (dnodos),cada uno a un potencial menos
negativo que el que le precede

Detectores de fotoconductividad:
fotoconductividad
usados en IR

Fotodiodos de silicio

49

24

...

Bibliografa:
Anlisis Instrumental. 4ta Edicin Mc Graw-Hill. Skoog DA,
Leary JJ (1994) ISBN: 0-03-023343-7.
Principios de Anlisis Instrumental. 5 Edicin Mc Graw-Hill.
Skoog DA, Holler FJ, Nieman TA (2001) ISBN: 84-481-2775-7
Principios de Anlisis Instrumental. 6 Edicin Cengage
Learning. D.A. Skoog, F.J. Holler, S.R. Crouch (2007)
Anlisis Instrumental. Pearson Practice Hall. Rubinson KA,
Rubinson JF (2001) ISBN: 0-13-790726-5

https://www.youtube.com/watch?v=GkrIchV8vG8
https://www.youtube.com/watch?v=xJZIOOkvTOo

25