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MTODO KJELDAHL
JOS ALEJANDRO VERA, BRYAN ANDRES VELASQUEZ
Programa de Qumica, Facultad de Ciencias Bsicas, Universidad de Pamplona,
Kilometro 1, Va a Bucaramanga, Pamplona-Colombia, 2016

Resumen
En la presente prctica se realiz un estudio a la determinacin de protenas utilizando
el mtodo de Kjeldahl que fue el mtodo del cual se hizo uso en esta prctica, este
mtodo adems de ser el que ms se utiliza, se toma como referencia cuando se usan
otras tcnicas, con este mtodo se determina la concentracin de nitrgeno presente
en la muestra para luego ser transformado. Por tal modo se utiliz en esta prctica una
muestra de alimento. El porcentaje de protena determinado por este mtodo fue un
resultado que estuvo entre los parmetros establecido por la etiqueta de la muestra.
Abstract
In this practice, a study was conducted to protein determination using the Kjeldahl
method which was the method which was used in practice, this method besides being
the most widely used, is taken as a reference when others are used techniques, with
this method the concentration of nitrogen present in the sample and then be
transformed is determined. By so it was used in this practice a food sample. The
percentage of protein determined by this method was a result that was among the
parameters set by the sample label.
Palabras claves: digestin, titulacin, Kjedalh, nitrgeno.

1. INTRODUCCIN
El contenido total de protenas en los alimentos est conformado por una mezcla
compleja de protenas. Estas existen en una combinacin con carbohidratos o lpidos,
que puede ser fsica o qumica. Actualmente todos los mtodos para determinar el
contenido protico total de los alimentos son de naturaleza emprica. Un mtodo
absoluto es el aislamiento y pesado directo de la protena pero dicho mtodo se utiliza
slo a veces en investigaciones bioqumicas debido a que es dificultoso y poco
prctico.[1]
En 1883 el investigador dans Johann Kjeldahl desarroll el mtodo ms usado en la
actualidad para el anlisis de protenas (mtodo Kjeldahl) mediante la determinacin
del nitrgeno orgnico. [2] Aunque se ha modificado durante aos; originalmente se
utiliz permanganato de potasio para llevar a cabo el proceso de oxidacin (digestin),
sin embargo, los resultados no fueron satisfactorios, de manera que este reactivo se
descart. El procedimiento bsico de Kjeldahl mantiene an su posicin como la
tcnica ms confiable para la determinacin de nitrgeno orgnico esta tcnica se
digieren las protenas y otros componentes orgnicos de los alimentos en una mezcla
con cido sulfrico en presencia de catalizadores; para la destruccin de la materia
orgnica se hace con cido sulfrico concentrado, formndose sulfato de amonio que
en exceso de hidrxido de sodio libera amonaco, el que se destila recibindolo en
cido brico. El borato de amonio formado se valora con cido sulfrico. En
consecuencia, es incluido entre los mtodos oficiales estatuidos y es aprobado por las

organizaciones internacionales. Adems, los resultados obtenidos mediante el mtodo

de Kjeldahl se usan para calibrar los mtodos fsicos y los automticos. Segn lo
descrito en el procedimiento, la muestra se disuelve en cido sulfrico concentrado y
se calienta con la finalidad de que la materia carbonosa se libere en forma de CO 2, los
minerales se sulfaten y el nitrgeno se transforme en sulfato de amonio. Como
catalizador se utiliza CuSO4, puede usarse sales de Hg, Zr, Se, pero stos dos ltimos
son muy caros y el Hg es txico. El K2SO4 sirve como elevador de la temperatura de
ebullicin (no es catalizador), por cada 10 C de elevacin de la temperatura, la
velocidad de la reaccin se duplica. [3]
Posteriormente, se determina por titulacin con HCl 0,1 N hasta cambio de color, en
este caso, amarillo a rojo-grosella, el volmen gastado de cido y se procede con los
clculos. Este mtodo de anlisis es aplicable a todo tipo de alimento en general. Si el
alimento ha sido enriquecido con rea, la expresin del resultado es engaosa. [4]
Se han empleado muchos catalizadores. Se ha considerado que el ms efectivo es el
mercurio en forma de xido mercrico; as como el selenio, que es casi tan efectivo
como aqul, pero ambos tienen riesgos txicos y problemas para desecharlos.
Adems, el mercurio forma complejos con el amonaco en el lquido de digestin que
requieren la adicin de tiosulfato de sodio para romper esos complejos y liberar el
amonaco. Williams (1976) recomend el uso de una mezcla de sulfato de cobre (II) y
bixido de titanio. A pesar de ello, Wall y Gehrke (1975) consideraron que esta mezcla
es menos efectiva. [5]
Tambin se ha conseguido reducir el tiempo de digestin por adicin de sulfato de
sodio o de potasio que elevan la temperatura de digestin. Los catalizadores metlicos
se pueden obtener en forma de tableta muy convenientes, compuestas en una base
de sulfato de potasio. Concon y Soltness (1973) y Koops y cols. (1975) han informado
que la adicin de perxido de hidrgeno acelera significativamente la digestin y
disminuye la formacin de espuma. Tradicionalmente, el amonaco liberado del lquido
de digestin hecho alcalino se destila a una cantidad de cido diluido normal, que
finalmente es titulado con lcali normal para dar el contenido en nitrgeno orgnico en
la muestra. Ahora es ms popular destilarlo a una solucin de cido brico al 4 % y
titular directamente al amonaco con cido sulfrico normal. [6]
El ataque finaliza cuando la solucin se torna de un color verde-esmeralda lmpido. En
este proceso de digestin o ataque de la muestra, se libera en la digestin la grasa,
fibra, carbohidratos presentes en la muestra en forma de CO 2; la parte oxigenada de la
protena tambin se libera, slo queda la parte nitrogenada de la protena. Al final del
ataque, se tiene en la solucin H2SO4 sobrante, sales sulfatadas de los minerales
disueltas, y el sulfato de amonio. En el proceso de destilacin, se aade al baln de
Kjeldahl 500 ml. de agua con la finalidad de diluir al cido sulfrico remanente, a la vez
que el sulfato de potasio, sulfato de cobre y sulfato de amonio disueltos precipiten,
dejando libre en la parte superior el H 2SO4 sobrante; es decir hay formacin de dos
fases. Luego se aaden algunas granallas de zinc con la finalidad de evitar la
ebullicin tumultuosa creando ncleos de vaporizacin. Inmediatamente despus de
este paso se adiciona la soda custica por los bordes del baln, para evitar una
reaccin violenta con el cido sulfrico remanente y el (NH 4)2SO4. La adicin de la
soda neutraliza la accin del cido sulfrico sobrante, favorece la liberacin del
amonaco en forma de NH4OH que ser recibido en el vaso erlenmeyer que contiene
la solucin de cido brico. [7]
Inicialmente, al producirse el calentamiento desaparecen las dos fases, se forma una
solucin de color celeste-oscuro, luego al ebullir se torna color marrn debido a la

presencia de un complejo cprico, que desaparece a medida que se libera el

amonaco. El amonaco es captado por la solucin de H 3BO3, que forma un complejo
estable, esto se observa debido al cambio de color que experimenta la solucin de
cido brico, rojo a amarillo, producido por el amonaco y que alcaliniza la solucin
progresivamente, a medida que es captado por el cido brico; esto es visible gracias
al indicador rojo de metilo, pudindose usar otro indicador segn el rango de viraje. [8]
1.1.

Reacciones llevadas a cabo en el mtodo de kjeldahl [9]

Digestin
n-C-NH2 + mH2SO4 catalizadoresCO2 + (NH4)2 calorSO4 + SO2
protena

Neutralizacin y destilacin
(NH2)SO4 + 2 NaOH 2NH3 + Na2SO4+ 2H2O
NH3 + H3BO3 (cido brico) NH4 + H2BO3- (in borato)
Titulacin
El anin borato (proporcional a la cantidad de nitrgeno) es titulado con HCl (o H2SO4)
estandarizado:
H2BO3- + H+ H3BO3
2. METODOLOGA EXPERIMENTAL
2.1.
material y equipo
Balanza analtica
Vidrio de reloj.
Baln o Matraz de kjeldahl.
Probeta de 50mL.
Mechero.
Trpode.
Soporte Universal.
Malla de Alambre.
Equipo de destilacin completo.
Manguera para entrada y salida del agua de refrigeracin.
Erlenmeyer de 250mL.
Bureta de 50mL.
2.2.
Reactivos
Acido sulfrico concentrado H2SO4
Nitrato de plata AgNO3
Sulfato de potasio K2SO4
Sulfato de cobre CuSO4

Zinc Zn
Oxido de aluminio AlO3
hidrxido de sodio NaOH

2.3.

Procedimiento

2.3.1. Preparacin de muestras

La muestra fue aportada por el instructor
Se peso 1g de la muestra y se llevo la muestra a un matraz Kjeldahl.
Se aadi 20mL de H2SO4 concentrado
1,5 g de K2SO4 en polvo
Se pes 0.04g de CuSO4 , aadiendo 0.5-1g de AlO3

2.3.2. Digestin
Se Sujet el frasco en una posicin inclinada en una campana.
Se calent cuidadosamente hasta hervir. Interrumpiendo el calentamiento
brevemente si la espuma se vuelve excesiva; aadiendo una muestra de zinc
se logro evitar que la espuma alcanzara el cuello del frasco.
Se contino la digestin hasta que la solucin se volvi incolora o dbilmente
amarilla
Despus de aproximadamente una hora, una vez que ces la formacin de
espuma y la liberacin de humo se retiro completamente del fuego
Se preparo el aparato de destilacin durante este tiempo. Cuando la digestin
fue completa, se retiro el calentamiento
Se aadi cuidadosamente 250 ml de agua

2.3.3. La destilacin del amonaco

Se monto un aparato de destilacin

Se adicion HCl 0,1 M al matraz receptor.
Se armo el montaje sujetando el matraz de modo que la punta del adaptador se
extienda por debajo de la superficie del cido estndar.
Se conecto las mangueras de manera que comenzara a circular el agua a
travs de la camisa del condensador.
Sostenga el matraz Kjeldahl en un ngulo y introduzca suavemente unos 60 ml
de solucin de NaOH al 50% (p/v), teniendo cuidado de minimizar la mezcla
con la solucin en el matraz.
Se conect inmediatamente el matraz Kjeldahl con el condensador.
Se coloc la solucin a ebullicin y se destil a una velocidad constante hasta
que quede una mitad o un tercio del volumen original.
Se recogi el destilado en el frasco receptor. Aadiendo 2 gotas de verde de
bromocresol al matraz receptor
Se titul el HCl residual con NaOH 0,1 M

3. ANLISIxS DE RESULTADOS

4. CONCLUSIN
El mtodo de Kjeldahl se hace calentando la muestra con cido sulfrico
concentrado en presencia de catalizadores metlicos como el oxido de
aluminio, sulfuro de cobre y de otro tipo para efectuar la reduccin del
nitrgeno orgnico de la muestra a amonaco. La solucin de digestin se hace
alcalina y se destila para liberar el amonaco que es atrapado y titulado con
HCl.
En este laboratorio fue efectiva la determinacin del porcentaje de protena en
una muestra problema. Es notorio que esta prctica nos sirvi para reconocer y
poner en prctica el mtodo de Kjeldahl.
A la hora de realizar la prctica, cuando se realizo la digestin al poner a
calentar la muestra se produjo un desprendimiento de humo y al no ser
realizada en la cabina de extraccin tuvimos dificultades porque este humo al
ser respirada provocaba una ardor en el pecho. Por esto es necesario hacer la
digestin en la cabina de extraccin
5. BIBLIOGRAFA
[1] Kjeldahl, J. (1883) "Neue Methode zur Bestimmung des Stickstoffs in
organischen Krpern" (New method for the determination of nitrogen in organic
substances), Zeitschrift fr analytische Chemie, 22 (1) : 366-383.
[2] Julius B. Cohen Practical Organic Chemistry 1910 Link to online text
[3] A.M.Y. Jaber, N.A. Mehanna, S.M. Sultan. Determination of ammonium and
organic bound nitrogen by inductively coupled plasma emission spectroscopy.
Talanta, 78 (4-5) 1298-1302, 2009.
[4] Fundamentos de qumica analtica. Douglas A. Skoog, Donald M. West.
Cengage Learning Editores, 2005. ISBN: 9706863699. Pg. 218
[5] Estandarizacin de disoluciones valorantes. Jos Morillo Aguado. Dept de
Ingeniera Qumica y Ambiental. Escuela Tcnica Superior de Ingenieros de
Sevilla. Universidad de Sevilla.
[6] Volumetra cido-base: Anlisis de un aceite de oliva. Universidad Miguel
Hernndez.
[7] Quantitative Chemical Analysis, 7Ed. by Daniel C. Harris. Freeman and
Company 2007.
[8] Qumica. American Chemical Society. Pg. 422. Editorial Revert, 2005.
ISBN: 8429170014
[9] Dr. D. Julian McClements. "Analysis of Proteins". University of
Massachusetts Amherst. Retrieved 2007-04-27