Universidad Nacional Mayor de San Marcos

(Universidad del Per, DECANA DE AMRICA)

Facultad de Farmacia y Bioqumica

Proyecto de Tesis de Pregrado

I. Informacin General de la Tesis

1.1 Ttulo
ACTIVIDAD DIURTICA DEL Ilex Guayusa Loes EN RATAS ALBINAS HEMBRAS.

II. Participantes de la Tesis

A. TESISTA (S)
Nombres

Andy Richard

Apellidos

Erazo Azurn

N de Matrcula

07040040

Fecha

Firma

20 de septiembre de 2016
B. Director de la Tesis.

Nombres

Apellidos
Csar
Fuertes Ruytn
Cdigo Docente
Ttulo profesional
Qumico Farmacutico

027154

Especialidad

Qumica
Orgnica

Departamento Acadmico
Qumica Bsica y Aplicada

Categora
Clase
Principal
D.E.
Grados Acadmicos
Mg. Recursos Vegetales y
Teraputicos
Firma

C. Co-Asesor

Nombres
Luis
Cdigo Docente
Especialidad

Apellidos
Rojas Ros
Ttulo profesional

Categora

Clase

Grados Acadmicos

Departamento Acadmico
Farmacologa Clnica
Proyecto de Tesis de Pregrado - Pg. 1

Firma

III. Descripcin del Estudio

A. Antecedentes y fundamentacin cientfica, tcnica o humanstica. Trabajos
previos o contemporneos con el tema del estudio realizados en la facultad y en
otras instituciones del pas y del extranjero.
La guayusa es el nombre comn otorgado a un arbusto aromtico y medicinal del
mismo gnero del acebo, y que es nativo de la amazona ecuatoriana, colombiana y
peruana. Est relacionado, aunque de manera distante con la yerba mate (ilex
paraguarensis). Las hojas de la guayusa tienen una alta concentracin de cafena.
Muchas o la mayora de estas especies nunca han sido estudiadas qumicamente,
siendo la actividad biolgica un indicador de la presencia de principios activos. Muchos
de estos principios activos son, sin duda, nuevos para la ciencia. La flora amaznica en especial la de la Amazona occidental, la zona ms rica de especies hylea - es un
emporio inexplorado de compuestos qumicos, algunos de cuales podran tener efectos
fisiolgicos prcticos que podran ser de inters en las farmacopeas modernas
(Schultes,1987). No en vano, los indgenas amaznicos han desarrollado un
conocimiento ancestral estrechamente relacionado con la naturaleza que les permite
vivir en armona con las condiciones inhspitas de la selva.
Se estima que existen 350,000 plantas en el mundo, de las cuales un tercio todava
esperan por descubrirse, y del cuarto de milln que han sido reportadas, slo una
fraccin ha sido investigada qumicamente. Muchos pases han tomado conciencia del
valor de la biodiversidad dentro de sus fronteras y han desarrollado sistemas para la
exploracin y la preservacin. Sin embargo, la prdida del hbitat todava es la
amenaza ms grande hacia la biodiversidad. (Cseke, 2006). (1)
En la amazona peruana y ecuatoriana, la guayusa (Ilex guayusa Loes) es una planta de
gran importancia ya que es utilizada con diferentes propsitos. El recibimiento de a los
visitantes con agua de guayusa y en las festividades de las diferentes localidades
amaznicas, es un smbolo de aceptacin de extranjeros en las comunidades y se cree
que las personas que toman esta infusin se quedarn eternamente por las tierras
amaznicas. (El Comercio, 2006).
Se conoce que la infusin de guayusa es ingerida por las comunidades Shuar en horas
de la madrugada con el fin de limpiar el organismo de toxinas y es utilizada luego de
haber ingerido carne. Adicionalmente en las mujeres es destinada para evitar
infecciones en el sistema reproductivo y aquellas que hayan tenido un reciente
alumbramiento son baadas con el agua de guayusa, luego de los tres primeros das del
parto, como productor de leche materna, as mismo es considerada como un ayudante
para el incremento de la fertilidad de la mujer. Otra de las bondades atribuidas a la
planta guayusa es la de ser energizante, ayudando a los colonos de la zona a realizar
largas caminatas, esto gracias al alto contenido de cafena que contiene sus hojas.
El Ilex guayusa Loes posee mltiples usos en la selva amaznica hasta hoy en da y se
remonta desde sus ancestros que descubrieron su uso primero como estimulantes, donde
activa los sentidos y mejoraba el rendimiento de las actividades durante el da. Aparte
de stos usos se utiliza tambin como emtico, trastornos digestivos, emenagogo; todo
ello se debe a que dicha planta posee una considerable cantidad de cafena de 2-3%
mayor incluso que el propio caf. Entre sus metabolitos secundarios posee adems
teofilina y teobromina, lo cual le da la propiedad de expectorante, contra procesos
gripales y cuadros asmticos. Es esta mezcla nica de cafena, teofilina y teobromina lo
hacen exclusiva a la guayusa (2).
Dentro de ste contexto es fundamental aclarar que el conocimiento fitoqumico de la
guayusa es limitado y la literatura cientfica es escasa, razn por la cual es necesaria una

profunda investigacin cientfica con el fin de evaluar su actividad biolgica o

farmacutica y los posibles usos comerciales. Actualmente, los pocos datos fitoqumicos
de sta planta slo revelan datos de sus contenidos en cafena, as como la presencia de
triterpenos y cidos clorognicos (Rosero Gordon,2007); por lo tanto, an no se puede
explicar todas las propiedades curativas que la tradicin popular le atribuye (3).
A nivel nacional, el Ilex guayusa no est completamente dilucidado, pues sta planta
crece en su mayora en la selva amaznica oriental del Norte de Sudamrica como
Colombia, Per y el Ecuador; siendo ste ltimo pas donde crece en mayor abundancia.
En nuestra Facultad de Farmacia y Bioqumica se encuentran otros estudios realizados
con respecto al efecto diurtico (2) de otras plantas medicinales y conocidas en nuestro
medio como la DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD DIURTICA DE
CALCEOLARIA MELISSIFORIA BENTHAM sub Sp Pseudocabra MOLAU en el
ao 1965.
A diferencia del pas norteo, en el Ecuador es donde se encontr algunos
antecedentes de investigaciones recientes de la planta Ilex Guayusa Loess como
COMPROBACIN DEL EFECTO ADELGAZANTE DE LA TINTURA DE
GUAYUSA (Ilex guayusa) EN RATONES (Mus musculus) CON SOBREPESO
INDUCIDO en la Facultad de Ciencias-Farmacia y Bioqumica en la Escuela Superior
Politcnica del Chimborazo (ECUADOR 2012), EVALUACIN DEL EFECTO
ANTICELULTICO DE UNA FORMULACIN COSMTICA A BASE DEL
EXTRACTO ALCOHLICO FOLIAR DE GUAYUSA, Ilex Guayusa
Loes(AQUIFOLIACEAE) en la Universidad Politcnica Salesiana (QuitoECUADOR) 2014, y entre otros estudios relacionados con una formulacin para
obtener productos terminados para uso medicinal.(4)
Entre los estudios contemporneos de Efecto diurticos estn las revistas de Colombia,
Ecuador y Cuba pues existen empresas interesadas en hacer un estudio completo de
dicha planta para su posterior uso humanstico. (5,6,7)
Con stos antecedentes, resulta entonces interesante realizar un extracto con porterior
formulacin farmacutica del Ilex guayusa Loes, para su aplicacin como diurtico, ya
que contiene cantidades apreciables de cafena, lo que lo convierte en una materia prima
natural (Radice &Vidari, 2007).

B. Justificacin. Razones o motivos e importancia del tema a ser investigado en el

contexto de la poltica de investigacin de la facultad.
Como se explic, el Ilex guayusa Loes posee mltiples propiedades, entre ellas posee
propiedad diurtica como lo usan los jbaros en la selva y esto es debido a su alta
cantidad de cafena, siendo ste ltimo de vital importancia para su estudio,
principalmente ya que aumenta la eliminacin de Na+ (natriurticos), el cual se utiliza
en caso de trastorno patolgico como el edema, oliguria, cirrosis heptica, hipertensin
arterial, ascitis, diabetes inspida nefrognica, entre otros.

Por estas razones se justifica estudiar la especie vegetal en un modelo farmacolgico,

para validar las propiedades diurticas de la planta.

C. Hiptesis. (Si el estudio lo requiere)

El extracto etanlico de las hojas de Ilex guayusa tiene actividad diurtica

Variable independiente: extracto etanlico de las hojas de Ilex guayusa
Variable dependiente: actividad diurtica.

Proyecto de Tesis de Pregrado Pg. 2

D. Objetivos. Indique los objetivos especficos que espera cumplir:

Objetivo general:
Estudiar la actividad diurtica del extracto etanlico de las hojas de Ilex guayusa
Objetivos especficos:

Realizar el tamizaje fitoqumico para determinar los metabolitos ms

importantes del extracto

Determinar el efecto diurtico del Ilex guayusa Loes.

E. Metodologa de trabajo. Diseo experimental, recoleccin de la informacin,

E tcnicas a ser utilizadas, tamao de la muestra poblacional, pasos o etapas del
estudio, estrategia de investigacin, anlisis estadsticos.
F
Materiales y mtodos

Planta Ilex guayusa Loes.

Jaula metablica individuales.
Ratas albinas machos.
Alcohol etlico 96
Espectrofotometra de absorcin atmica.
Balanza semianaltica.
Estufa
Recipientes secos individuales.
Beaker PYREX
Goteros.
Tubos de ensayo.
Sonda nasogstrica (SNG)
Lapiceros y plumones.
Reloj
Laptop HP-2013
Guantes quirrgicos
Mascarilla.
Extracto etanlico.
Furosemida 25mg/kg.

Recoleccin de la planta:

Dos kilos de la planta medicinal est constituida por las hojas de la planta
especficamente y ser recolectada en el mes de octubre de 2016 de la localidad de La
Colmena, Distrito de Namballe, Provincia de San Ignacio, Departamento de Cajamarca.

Clasificacin taxonmica:

Nombre Cientfico: Ilex guayusa

Reino: Plantae
Clase: Magnoliopsida
Orden: Celastrales
Familia: Aquifoliaceae
Gnero: Ilex
Epteto Especfico: Guayusa
Autor Epteto Especfico: Loess.
Nombre Cientfico: Ilex guayusa Loess (8)

Desecacin, molienda y almacenado

El material recolectado se lavar y, posteriormente se desecar, primero a medio

ambiente en una habitacin oscura, libre de Humedad y luz directa y T
ambiente. Posteriormente se desecar en una estufa a 35 por 48 horas. El
almacenamiento se realizar en envases hermticamente cerrados.

Preparacin del extracto

Las hojas secas se fraccionarn y pulverizarn para posterior maceracin hasta
agotamiento con etanol al 96%. El material vegetal seco y pulverizado se
concentr en Bao de Vapor (rotaevaporador) con calentamiento suave y
presin reducida y se identific como extracto etanlico total.

Tamizaje fitoqumico
El tamizaje fitoqumico da una orientacin de los posibles
componentes qumicos que estn en la hoja.
30-50 gr Material vegetal
EXTRAER CON 90- 150 ml DE TER ETLICO POR MACERACIN
DURANTE 48 HORAS A TEMPERATURA AMBIENTE

FILTRAR

EXTRACTO ETREO
Medir volumen y calcular la concentracin
RESIDUOS SOLIDOS
Secar y pesar

EXTRAER 3 VECES EL PESO DEL RESIDUO EN VOLUMEN CON

ETANOL POR MACERACION DURANTE 48 HORAS.

FILTRAR

EXTRACTO ALCOHLICO
Medir volumen y calcular concentracin
RESIDUOS SOLIDOS
Secar y pesar

EXTRAER CON 3 VECES EL PESO DEL RESIDUO EN VOLUMEN CON

ETANOL POR MACERACION DURANTE 48 HORAS

FILTRAR

RESIDUOS SOLIDOS
Secar, pesar y desechar

EXTRACTO ALCOHLICO
Medir volumen y calcular concentracin

FIGURA 2.1 ANLISIS FITOQUMICO (MIRANDA Y CUELLAR, 2001)

EXTRACTO ETREO
DIVIDIR EN FRACCIONES
5ml

5ml

ENSAYO DE SUDAN
(Aceites y grasas)

ENSAYO DE BALJET
(Lactonas y coumarinas)

15ml (dividir en 3 porciones)

ENSAYOS DE DRAGENDORFF
MAYER Y WAGNER
(Alcaloides)

5ml
ENSAYO DE LIBERMA - BUCHARD
(TRITERPENOS ESTEROIDES)

FIGURA2.2ANLISIS FITOQUMICO
EXTRACTO ETREO (MIRANDA Y CUELLAR, 2001)
EXTRACTO ALCOHLICO
DIVIDIR EN FRACCIONES
1ml
ENSAYO DE CATEQUINAS

2ml
ENSAYO DE FEHLING

2ml
2ml
ENSAYO DE BALJET ENSAYO DE NINDRINA
(Lactonas)

ENSAYO DE Cl Fe

6ml (dividir en 3 porciones)

5ml
ENSAYOS DE DRAGENDORFF
ENSAYO DE LIBERMA BUCHARD
MAYER Y WAGNER
(TRITERPENOS ESTEROIDES)

FIGURA2.3ANLISIS FITOQUMICO
EXTRACTO ALCOHLICO (MIRANDA Y CUELLAR, 2001).
EXTRACTO ACUOSO
DIVIDIR EN FRACCIONES
2ml
ENSAYO DE
FEHLING

(9,10)

2 ml
ENSAYO DE SHINOD
2ml
ENSAYO DE BALJET

6ml (dividir en 3 porciones)

ENSAYOS DE DRAGENDORFF
MAYER Y WAGNER

2ml
ENSAYO DE ClFe
2ml
ENSAYO DE ESPUMA

1 O 2 GOTAS
ENSAYO DE PRINCIPIOS AMARGOS

Animales de experimentacin:

El modelo experimental se llevar a cabo en 36 ratas obtenidas posteriormente en el

Instituto Nacional de Salud(INS), su descripcin de especie, gnero y peso se definir
con el certificado y datos obtenidos del INS. Los animales se mantendrn en el Bioterio
de San Fernando de la Facultad de Medicina Humana de la UNMSM con las siguientes
condiciones: ciclo-luz-oscuridad de 12 horas, T entre 22 a 26C, seis animales en
cada jaula.
Determinacin de la actividad diurtica.- diseo experimental:
La evaluacin de la diuresis se realizar de acuerdo al mtodo descrito por Kau en 1984
con pequeas modificaciones. Las ratas sern colocadas en cajas metablicas
individuales, 24 horas antes de iniciar el experimento para su adaptacin. Se tomarn 36
ratas divididas en 5 grupos con 6 animales cada uno. As, para poder encontrar la dosis
adecuada de la Ilex Guayusa se trabajar de la siguiente manera:
G1: Control negativo
G2: Control positivo
G3: Ilex Guayusa Loess
G4: Ilex Guayusa Loess
G5: Ilex Guayusa Loess
G6: Ilex Guayusa Loess

Cloruro de sodio 2ml/100g de peso corp.

Furosemida - 10mg/Kg.
500mg/Kg
800mg/Kg
1g/Kg
2g/Kg

En el ensayo se har a dosis repetidas a corto plazo. Antes de la administracin de los

tratamientos, todos los animales recibirn una dosis oral de solucin salina al
0,9%(2ml/100g de peso) el da de la experimentacin, para establecer una carga
uniforme de agua y sal. Inmediatamente los animales sern tratados por va oral por
Sonda Nasogstrica (SNG) con las dosis establecidas en el recuadro. La orina se
recolectar luego de dejar a las ratas en sus respectivas cajas metablicas se registrar el
volumen de orina excretada a la , 1, 2, 3, 4, 5, 6 h posadministracin conforme a otros
estudios. Una vez concluido el experimento se proceder al sacrificio de los animales de
experimentacin con ter.

De la orina recolectada a las 6h acumulada, se realizarn las determinaciones de Na+,

K+. Las concentraciones de stos iones en orina se medirn en espectrofotmetro de
absorcin atmica para cada grupo en estudio. El equipo ser calibrado con soluciones
estndares que contendrn diferentes concentraciones de sodio y potasio.

Anlisis estadstico:

Los valores que se obtendrn del experimento se expresarn como la media aritmtica
error estndar de la media (ESM). El anlisis de los resultados de cada especie se
determin mediante el rea bajo la curva del volumen de orina en relacin al tiempo,
utilizando la prueba de varianza (ANDEVA) de dos vas, para establecer si existe
diferencia significativa entre los tratamientos. Por ltimo se realiz la prueba de
Dunnett para comparar el frmaco de referencia, y el extracto de la planta a evaluar en
las dosis de 500, 800, 1000 y 2000 mg/Kg de peso, contra el control negativo a un nivel
igual a 0.05. (11)

F. Fecha de realizacin de la Tesis.

a) Inicio: 01 octubre 2016
enero del 2016

b)Trmino:20

Proyecto de Tesis de Pregrado - Pag 3

G. Calendario e actividades. Colocar en la primera lnea los meses correspondientes

a la ejecucin del estudio (Ej. M,A,M,J,J,A,S,O,N,D,E). En caso de estudios con
ms de 18 meses de actividades se deber presentar el calendario de actividades
completo en hoja aparte. El nmero de actividades depender de cada estudio.

Actividad

Meses
E F M A M J

1. Presentacin del Proyecto

2. Recoleccin y Transporte
3.Secado
4.Trituracin y molienda
5. Preparacin del Extracto
6. Tamizaje fitoqumico
7. Compra de ratas en INS
8. Compra de Materiales
9. Mtodo experimental
10. Resultados
11.Finalizacin de Tesis
12.Sustentacin de Tesis
13.
14.
15.

A S O N D
X
X

H. Referencias Bibliogrficas
1. ALONSO, J., Tratado de fitofrmacos y nutracuticos. Buenos Aires
-Argentina., Corpus., 2004., pp. 166-170, 865-868
2. PACHA J., Ana G. Comprobacin del efecto adelgazante de la tintura de
guayusa (Ilex guayusa) en ratones (Mus musculus) con sobrepeso inducido.
(Tesis). (Bioq. Farm.), ESPOCH, Facultad de Ciencias, Escuela de
Bioquimica y Farmacia. Riobmab-Ecuador. 2012,pp. 5-8.
3. REVISTA DE CIENCIAS DE LA VIDA DE LA UNIVERSIDAD
POLITCNICA SALESIANA- ECUADOR., Mateo Radice, Giovanni
Vidari; Caracterizacin fitoqumica de la especie Ilex guayusa Loes y
Elaboracin de un prototipo de Fitofrmacos de inters Comercial. 2007-vol
6, nmero 2
4. ANTISIO ANBAL, RUBN DARO, LUIS ALBERTO FRANCO;
Efecto diurtico agudo de los extractos etanlicos y acuoso de
Ceraptopteris(HOOK) en ratas normales. Rev BIOMDICA 2013.
5. JORGE HERNN RAMREZ, MAURICIO PALACIOS, SCAR
GUTIRREZ; Efecto diurtico de la especie Salvia scutellarioides en
ratas. 2006. Laboratorio de Farmacologa, Departamento de Ciencias
Fisiolgicas. Facultad de Salud, Universidad del Valle, Cali, Colombia.

6. GARCA GASTN, SCULL RAMN, HERRERA YAMILKA;

DIURETIC EFFECT OF AQUEOUS AND DRY EXTRACTS OF
Caesalpinia bahamensis Lam(BRASILETE) IN WISTAR RATS. Instituto
de Farmacia y Alimentos de la Universidad de la Habana, Cuba. 2011.
7. WWW. TRPICOS.ORG; electronic database research all cientific
community plants.
8. KUKLINSKI ,C, 2003; Farmacognosia. Pgs..16-17-34-35150-151.
Barcelona Espaa.
9. MIRANDA, M. CUELLAR, A. 2001. Farmacognosia y productos
naturales. Editorial Flix Varela. La Habana, Cuba.
10. MIRANDA, M. CUELLAR,A.2000; Manual de prcticas de laboratorio de
farmacognosia y productos naturales. Ciudad de La Habana, Cuba.
11. BOX, G.2008; Estadstica para investigadores. Diseo innovacin y
descubrimiento.

Proyecto de Tesis de Pregrado - Pag 4

IV. Evaluacin
A. Opinin del Director de la Tesis

Fecha

Firma

B. Opinin de la Comisin de Evaluacin del Proyectos de Tesis:

Fecha

_________
Firma

Firma

___________________
Firma

____________________
Firma

Proyecto de Tesis de Pregrado - Pag 5