PROFESOR: LUIS ALFONSO BOLAOS CELIS

PRCTICA 7. EXTRACCIN
DE AMILASA PANCRETICA
YDETERMINACIN DE SU
ACTIVIDAD
BIOQUIMICA CLINICA

ALFONSO JIMENEZ ALONDRA

COCON PEREZ EDUARDO
CUEVAS COCOM ZAYNA MARISOL
DIAZ DIAZ ANA KAREN
TAMAY HERNANDEZ MARIELA ODETH
5.- B

Q.F.B.

OBJETIVO
Demostrar la actividad de la amilasa pancretica extrada del pncreas de un porcino,
para conocer dicha actividad y comportamiento sobre los carbohidratos.
RESUMEN
Las alfa amilasas son enzimas hidrolticas que transforman el almidn en maltosa. Las
alfa amilasas del cuerpo humano proceden de diferentes rganos: la amilasa pancretica
se produce en el pncreas y se elimina en el intestino, mientras que la amilasa salival se
sintetiza en las glndulas salivales y se libera en la saliva. Dado que la amilasa
pancretica y la amilasa salival presentan una homologa estructural del 97%, slo se
pueden diferenciar adecuadamente con un test que utiliza dos anticuerpos monoclonales
para la inhibicin de la amilasa salival. La amilasa sangunea se elimina a travs de los
riones en la orina. Por tanto, el aumento de la actividad de la amilasa en el suero se
refleja en el aumento de la actividad de la amilasa en la orina. La determinacin de la alfa
amilasa en suero y en orina se realiza principalmente para diagnosticar enfermedades
pancreticas y detectar el desarrollo de complicaciones. En el caso de una pancreatitis
aguda, la actividad de la amilasa en la sangre aumenta pocas horas despus del inicio
del dolor abdominal, llega a su cota mxima despus de aprox. 12 horas y vuelve a los
valores de referencia despus de 5 das como mximo. Aunque la amilasa pancretica
es mucho ms especfica para detectar las enfermedades pancreticas que la amilasa
total, se recomienda la determinacin adicional de la lipasa con el fin de confirmar una
pancreatitis aguda.
INTRODUCCION:
Las amilasas son enzimas hidrolticas que degradan el almidn (polmero de glucosa);
para producir glucosa, maltosa o pequeos oligosacridos llamados dextrina lmite.
Las alfa amilasas del cuerpo humano proceden de diferentes rganos: la amilasa
pancretica se produce en el pncreas y se elimina en el intestino, mientras que la
amilasa salival se sintetiza en las glndulas salivales y se libera en la saliva. Dado que la
amilasa pancretica y la amilasa salival presentan una homologa estructural del 97%,
slo se pueden diferenciar adecuadamente con un test que utiliza dos anticuerpos
monoclonales para la inhibicin de la amilasa salival. La amilasa sangunea se elimina a
travs de los riones en la orina. Por tanto, el aumento de la actividad de la amilasa en
el suero se refleja en el aumento de la actividad de la amilasa en la orina. La
determinacin de la alfa amilasa en suero y en orina se realiza principalmente para
diagnosticar enfermedades pancreticas y detectar el desarrollo de complicaciones. En
el caso de una pancreatitis aguda, la actividad de la amilasa en la sangre aumenta pocas
horas despus del inicio del dolor abdominal, llega a su cota mxima despus de aprox.
12 horas y vuelve a los valores de referencia despus de 5 das como mximo. Aunque
la amilasa pancretica es mucho ms especfica para detectar las enfermedades
pancreticas que la amilasa total, se recomienda la determinacin adicional de la lipasa
con el fin de confirmar una pancreatitis aguda.

El jugo pancretico contiene -amilasa, es una alfa-1-4-glucosidasa que acta los

polisacridos de los almidones, que es secretada en forma activa. La amilasa del
pncreas fracciona las molculas del almidn en oligosacridos. Su funcin es catalizar
la hidrlisis de los enlaces de los polmeros de glucosa para producir oligosacrido, con
un pH ptimo de 6.8.
PROCEDIMIENTO:
EXTRACTO ENZIMATICO DEL PANCREAS:
1. Se pesaron 500gr de pncreas y se cortaron en trozos pequeos.
2. Se revolvieron los trozos del pncreas con la arena previamente lavada y enjuagada.
3. Se deposit la mezcla en un frasco grande con tapa rosca, al cual se le aadieron un
litro y medio de agua y 500 ml de alcohol etlico, lo cual corresponde a tres veces el peso
del pncreas y su peso respectivamente.
4. El preparado se dej reposar por dos das.
5. En el laboratorio se tom la arena junto con el pncreas y se trituro con la ayuda de un
mortero con pistilo.
6. La solucin que se tom junto con esa parte del pncreas y arena triturados se filtr
con ayuda de gasas.
7. El filtrado posteriormente se filtr con papel filtro.
DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD DE LA AMILASA PANCREATICA:
1. Para la prctica se realizaron dos diluciones de 1:100 y 1:10.
a. 1:10; se tom 1ml de la solucin del preparado con 9ml de agua destilada y se
homogeniz.
b. 1:100; se tom 1ml de la dilucin 1:10 y se homogenizo con 9ml de agua destilada.
2. Para un mejor manejo de los reactivos se deposit en un tubo de ensaye almidn y en
una piceta agua destilada.
3. Se enumeraron una serie de tubos con los nmeros 1-6 para cada una de las
diluciones, los cuales tambin se marcaron con la dilucin con la que se iban a trabajar,
en ese orden se le agregaron las cantidades de 2.5, 2.0, 1.6, 1.2, 0.8, 0.5 de las diluciones
de la solucin.
4. Posteriormente se depositaron las mismas cantidades de la solucin del pncreas puro
(sin diluir/dilucin cero) en tubos rotulados del 1-6.
5. Se tom un tubo como testigo cada una de las diluciones y para la solucin pura. Para
estos tubos no se necesitaba la solucin del pncreas.

6. Para cada uno de todos los tubos de las soluciones diluidas, puro y testigo se le
aadieron 2.0ml de almidn.
7. A los tubos testigo se le agrego 2.5ml de agua destilada.
8. Prosiguiendo se aadieron 0, 0.5, 0.9, 1.3, 1.7, 2.0 de agua destilada.
9. Al tener todos los tubos con los reactivos estos se homogenizaron y se llevaron a bao
mara por 30 min, en el cual por espacios de 5 min se agitaban los tubos.
10. Al concluir el tiempo se sacaron los tubos del bao mara y se agregaron 3 gotas de
lugol, se homogenizaron y se observaron las coloraciones.
RESULTADOS Y OBSERVACIONES:

Diluciones

Interpretacin

Estas diluciones dieron una coloracin cafmorado cristalina, lo que indica resultados
positivos.

Diluciones 1:100

Al igual que las diluciones 1:100, estas

diluciones 1:10 dieron una coloracin cafmorado cristalinas, por lo tanto fueron
positivas.

Diluciones 1:10

Las diluciones puras no dieron el color

positivo que se present en las anteriores
diluciones, por lo tanto el resultado de estas
fue negativo.

Diluciones puras

DISCUCIONES:
La enzima de la amilasa va a hidrolizar al almidn, a travs de la reaccin de hidrlisis,
consiste en el rompimiento de uniones covalentes por medio de una molcula de agua.
La hidrlisis de un enlace glucosdico se lleva a cabo mediante la disociacin de una
molcula de agua. El hidrgeno del agua se une al oxgeno del extremo de una de las
molculas de azcar; el OH se une al carbono libre del otro residuo de azcar. El
resultado de esta reaccin, es la liberacin de un monosacrido, dos si la molcula
hidrolizada fue un disacrido o bien el polisacridon-1, dependiendo de la molcula
original.
Pudimos identificar cmo es que la amilasa actu sobre el almidn, tambin la presencia
de ste y la de sus productos: la glucosa y maltosa. De igual forma la funcin en el
sistema digestivo y como funciona, presentndose en alimentos parcialmente digeridos
en la parte superior del intestino delgado desencadena la secrecin de jugos pancreticos
en el intestino. Las secreciones pancreticas contienen otro tipo de amilasa llamada alfaamilasa pancretica, que es muy similar, pero no idntica a la amilasa salival. A
continuacin, la amilasa pancretica completa la descomposicin de los almidones en
maltosa. Por ltimo, una enzima llamada maltasa que se encuentra en las clulas que
recubren el intestino delgado descompone la maltosa en glucosa, la cual es absorbida
por la sangre.
CONCLUSIONES:
La amilasa pancretica (partidas, submaxilares y sublinguales) es la encargada de
romper los enlaces del almidn, formando glucosa y maltosa.
La -amilasa hidroliza al almidn en -maltosa; la enzima acta primero solo sobre los
extremos no reductores
La funcin de la amilasa consiste en degradar el almidn para formar azcares simples.

Las enzimas catalizadoras en ese caso la amilasa acta sobre el polisacrido el almidn,
hidrolizando el enlace O-glucosdico, por lo que el almidn se termina por transformar en
unidades de glucosa.
CUESTIONARIO:
1. Por qu el pncreas debe ser lo ms desengrasado posible y mezclado con arena
lavada?
R: para que al momento de cortar el pncreas la grasa no entre en contacto con la enzima
ya que podran mezclarse y dar resultados alterados y de igual forma para que al
momento de mezclarlo con el agua y el alcohol la grasa no corte con ellos y el motivo de
la arena lavada fue para que al momento de revolver el mismo peso de la arena extrajera
la enzima del pncreas
2. Por qu se guarda en refrigeracin el extracto?
R: para que el pncreas no se descomponga al paso de los das y permanezca en buen
estado hasta su momento de emplearse ya que el pncreas tiene un tiempo lmite de
vida.
3. Por qu si se filtra el extracto a travs de papel, pierde su actividad lipoltica?,
Nos ayuda esto en algo, s o no y porque?
R: porque toda la grasa que se necesita para el experimento se queda atrapado en el
papel filtro y por lo mismo disminuye significativamente el filtrado y debido a esto evita
que la enzima necesaria pase por los poros del papel y as obtenemos resultados
errneos.
4. Por qu se debe evitar la sedimentacin?
R: porque la enzima puede actuar con los inhibidores y no reaccionara de manera
adecuada y una razn ms es porque si se sedimenta ya no se logra extraer ms enzima.
BIBLIOGRAFIA:
http://med.javeriana.edu.co/fisiologia/autoestudio/FISIOLOGIAPANCREAS.PDF
http://www.red-gdl.com/wp-content/uploads/2014/06/Amilasa-Pancreatica.pdf

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Quesada, M. S. (2007). Manual de Experimentos de Laboratorio para Bioqumica. (1a
ed.). Costa Rica: Editorial Universidad Estatal a Distancia