INFORME DEL LAB DE MICROBIOLOGIA II

ANTISEPCIA, DESINFECCION Y ESTERILIZACION.

PROFESOR:
Lcdo.: CHRISTHIAN ROMERO

AYUDANTE
ISRAEL ALFONSO.

LEON CHIQUITO GEORGE KEVIN

ESPOL 2016- 1 T

OBJETIVOS

Familiarizar al estudiante con las diferentes tcnicas microbiolgicas utilizadas para el

muestreo de superficie.
Observar la diferencia en el crecimiento de colonias en las diferentes superficies
muestreadas.

INTRODUCCION
Histricamente la prevencin y el control de las enfermedades transmisibles estaban
ntimamente unidos a procedimientos como el salazn, el ahumado, la ebullicin, etc., incluso
sin comprender los mecanismos por los cuales estas actividades evitaban la transmisin de
infecciones.
La desinfeccin se lleva a cabo por medio de biocidas o germicidas, sustancias qumicas
antimicrobianas cuyos mecanismos de accin y resistencia son muy similares a los de los
antibiticos. Esta similitud est generando inquietud por la posibilidad de cruce de informacin
gentica que agrave el problema de las resistencias bacterianas. La mayora de los biocidas
pueden actuar como antispticos, aplicados sobre piel y tejidos, o desinfectantes, sobre
materiales inanimados. El espectro de accin de los germicidas depende de las caractersticas
propias del producto y de factores externos controlables: temperatura, concentracin, tiempo
de exposicin, etc.
La limpieza, como paso previo cronolgicamente a la desinfeccin, constituye un factor de
importancia prioritaria. Una limpieza incorrecta o defectuosa repercutir de forma negativa en
las sucesivas etapas del proceso de antisepsia/desinfeccin o esterilizacin. El proceso de
desinfeccin, a diferencia de la esterilizacin, solo es capaz de eliminar la mayor parte de los
grmenes patgenos (pero no todos). Adems, por las caractersticas del procedimiento, el
material desinfectado pierde rpidamente esta propiedad por carecer del factor de
empaquetado que lo proteja de contaminaciones.
La esterilizacin se define como el proceso mediante el cual se destruyen todos los
microorganismos viables presentes en un objeto o superficie, incluidas las esporas bacterianas.
El concepto de esterilidad expresa una condicin absoluta: un determinado objeto o superficie
est estril o no est estril.
Biocidas son aquellas sustancias que por medios bien qumicos o bien biolgicos pueden
destruir, contrarrestar, neutralizar, impedir la accin o ejercer un efecto de control sobre
cualquier organismo nocivo. Recientemente se ha propuesto una definicin ms simple y clara
segn la cual un biocida es una molcula qumica activa en un producto para inhibir o destruir
bacterias. La actividad antimicrobiana es el efecto letal o inhibitorio, tanto de un producto
biocida como de un antibitico
AGAR DE ALTO ESPECTRO
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.
disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como

mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern
necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento. Siempre han de estar
presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para
las reacciones qumicas que tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne,
extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de estas sustancias para
su aplicacin a los medios de cultivo provocaban la prdida de los factores nutritivos lbiles
AGAR NUTRITIVO
El agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para
todo tipo de bacteria. Es muy til porque permanece slido incluso a relativamente altas
temperaturas. Adems, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo
que se distinguen mejor las colonias pequeas.
En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el lquido, y aparece como una sustancia espesa,
con colonias difcilmente observables. El agar nutritivo contiene normalmente (p/v):1
0,5 % de peptona;
0,3 % de extracto de carne/extracto de levadura;
1,5 % de agar;
0,5 % de cloruro de sodio;
agua destilada;
pH casi neutro (6,8) a 25 C.
El caldo nutritivo se hace exactamente igual, excepto por la omisin del agar.
PEPTONA
Las peptonas son polipptidos formados durante la degradacin enzimtica de protenas. Son
la principal fuente de nitrgeno en el medio orgnico para el cultivo de bacterias.
Contienen aminocidos libres y cadenas cortas de pptidos, ciertas vitaminas y a
veces carbohidratos. Es soluble en agua e insoluble en etanol y ter

EXTRACTO DE CARNE

El extracto de carne es un caldo de carne muy concentrado, normalmente de vacuno. Se usa

para dar sabor a carne a diversas recetas, y para elaborar consoms y sopas. Los extractos de
carne han sido sustituidos en su mayor parte por las pastillas de caldo y el extracto de levadura.
Algunas marcas de extracto de carne han aadido este ltimo a sus frmulas, llegando incluso
al extremo de comercializar en algunos mercados variantes de sus productos que contienen
principalmente extracto de levadura, con poco o ningn contenido crnico.

EXTRACTO DE LEVADURA

El Extracto
de
levadura es
un
extracto soluble en
agua
formado
por
el autorizado de clulas de levaduras. Es un producto rico en vitaminas especialmente
del complejo B, aminocidos y otros factores de crecimiento.
Es utilizado en microbiologa en la preparacin de una amplia variedad de medios de cultivo
como excelente fuente de nutrientes. Tambin se obtiene como producto residual de
la elaboracin de la cerveza, emplendose en la industria de la alimentacin frecuentemente
como aditivo.

QUE SON BIOCIDAS

Los biocidas son sustancias activas, preparados (que contienen una o ms sustancias activas) o
microorganismos cuyo objetivo es destruir, contrarrestar, neutralizar, impedir la accin o ejercer
un control de otro tipo sobre cualquier organismo nocivo por medios qumicos o biolgicos.
Tipos de biocidas
Se pueden presentar de tres formas:

Fsico: Fuentes de radiacin de alta energa (luz UV) que oxidan la pared proteca y
prcticamente queman el microorganismo.
Biolgicos: Sustancias creadas por organismos superiores para autodefensa,
generalmente son de tipo proteco y se denominan enzimas. Por ejemplo: lisozima.
Qumicos: Pueden ser a su vez, inorgnicos o de sntesis orgnica. Por ejemplo: dixido
de cloro (ClO2), isotiazolinas, cloraminas, bromuros de alquilo, cloruros de alquilo o
arilo, etc

ANTIASEPCIA, DESINFECCION Y ESTERILIZACION.

Los procesos de esterilizacin o desinfeccin son diariamente llevados a cabo, no solamente en
el laboratorio, donde son fundamentales para evitar la contaminacin de medios, cultivos,
placas etc., sino tambin en otros mbitos tales como los hospitales, donde fallas en estos
procedimientos aumentan la morbimortalidad de los pacientes. Pensemos lo que sucede en los
quirfanos donde se deben desinfectar pisos, paredes y techos, esterilizar instrumental
quirrgico e indumentaria del personal, y descontaminar el aire del ambiente. O en
contraposicin, lo que sucedera si materiales como catteres, agujas, jeringas, empleados en
maniobras mdicas diarias fueran utilizados aunque fuera con niveles mnimos de
contaminacin.
Esterilizacin: es el proceso mediante el cual se alcanza la muerte de todas las formas de vida
microbianas, incluyendo bacterias y sus formas esporuladas altamente resistentes, hongos y sus
esporos, y virus. Se entiende por muerte, la prdida irreversible de la capacidad reproductiva
del microorganismo. Deberan estar includos dentro de esta definicin la eliminacin de
estructuras como los priones? Se trata de un trmino absoluto, donde un objeto est estril o
no lo est, sin rangos intermedios.
Desinfeccin: es un trmino relativo, existen diversos niveles de desinfeccin, desde una
esterilizacin qumica a una mnima reduccin del nmero de microorganismos contaminantes.
Estos procedimientos se aplican nicamente a objetos inanimados.
Antisepsia: es el proceso que por su baja toxicidad, se utiliza para la destruccin de
microorganismos presentes sobre la superficie cutaneomucosa. Este trmino tampoco implica
la destruccin de todas las formas de vida. Existen agentes como los alcoholes que son
antispticos y desinfectantes a la vez. Dado que el tema que se est abordando son los mtodos
para controlar o destruir distintas poblaciones bacterianas, es necesario saber previamente la
cintica de dicha destruccin, es decir de qu modo muere una poblacin y que parmetros
inciden sobre este efecto.

DIFERENCIA ENTRE BIOCIDAS Y ANTIBIOTICOS.

BIOCIDAS
Se puede aniquilar o inhibir a
las bacterias mediante
distintos
productos antimicrobianos,
a
saber, antibiticos que actan
contra las infecciones en seres
humanos
o
animales
y biocidas como
los desinfectantes y
los conservantes. Esta evaluacin
se centra nicamente en aquellos
productos que actan contra las
bacterias, y no en los biocidas
utilizados en el control de
otros microorganismos o plantas y
animales.
A algunas bacterias no les afectan
los productos antimicrobianos de
manera natural, mientras que otras
pueden
desarrollar resistencia a
ciertos biocidas a lo largo del
tiempo. Las cepas resistentes de
bacterias pueden sobrevivir a
concentraciones de biocidas que
aniquilaran a la mayora de
bacterias de la misma especie. Las
bacterias
pueden
desarrollar
gradualmente tolerancia a
las
sustancias
antimicrobianas,
pudiendo resistir concentraciones
cada vez mayores. En ciertos casos,
la resistencia a los biocidas puede
derivar en resistencia a los
antibiticos.
Los biocidas requieren aprobacin
antes de su lanzamiento al
mercado. Sin embargo, al contrario
que los antibiticos cuyo uso en
seres humanos y animales se
controla minuciosamente, los
biocidas pueden utilizarse sin
ningn tipo de control.

ANTIBITICOS
se refiere a un antibitico que acta
contra una amplia gama de bacterias
patgenas,
tanto
contra
bacterias Gram
positivas como Gramnegativos.
En
cambio un antibitico solo es eficaz
contra familias especficas de
bacterias. Un ejemplo de un
antibitico de amplio espectro
comnmente utilizado es la ampicilina.
Antes de la identificacin formal de las
bacterias causantes de la infeccin,
cuando hay una amplia gama de
posibles enfermedades y podra existir
una enfermedad potencialmente
grave si se retrasa el tratamiento. Esto
ocurre, por ejemplo, en la meningitis,
donde el paciente puede empeorar
gravemente en pocas horas si no se
inicia la administracin de antibiticos
de amplio espectro a tiempo.
Para las bacterias resistentes a los
medicamentos que no responden a
otros, ms antibiticos de espectro
reducido.
En el caso de una superinfeccin ,
donde hay varios tipos de bacterias
que causan la enfermedad, lo cual
justifica el uso de un antibitico de
amplio espectro o un tratamiento
antibitico combinado.
Para la profilaxis despus de una
operacin, con el fin de prevenir las
infecciones bacterianas que se
producen.

RESISTENCIA BACTERIANA
La resistencia bacteriana es la capacidad que tienen las bacterias de soportar los efectos de los
antibiticos o biosidas destinados a eliminarlas o controlarlas. La resistencia bacteriana es un
fenmeno creciente caracterizado por una refractariedad parcial o total de los

microorganismos al efecto del antibitico generado principalmente por el uso indiscriminado e

irracional de stos y no slo por la presin evolutiva que se ejerce en el uso teraputico.
MECANISMOS DE RESISTENCIA
El fenmeno de resistencia tiene un sustrato gentico intrnseco o adquirido que se expresa
fenotpicamente por mecanismos bioqumicos. De esta manera puede observarse la resistencia
desde el ambiente biolgico y otro el bioqumico.
Se conoce como resistencia natural a los mecanismos permanentes determinados
genticamente, no correlacionables con el incremento de dosis del antibitico. Un ejemplo de
esto es la resistencia de la Pseudomonas aeruginosa. a las bencilpenicilinas y al trimetoprin
sulfametoxazol; bacilos gram negativos aerbicos a clindamicina.
La resistencia adquirida aparece por cambios puntuales en el DNA (mutacin) o por la
adquisicin de ste (plsmidos, trasposones, integrones).
En el primero se dan casos tales como la transformacin de una Betalactamasa en una
Betalactamasa de espectro extendido o como en el caso de mutaciones de los genes que
codifican las porinas con el consecuente bloqueo del ingreso del antibitico al interior del
microorganismo.
Existen otras denominaciones de resistencia como son:
Resistencia relativa o intermedia: ocurre un incremento gradual de la MIC (concentracin
inhibitoria mnima) a travs del tiempo. Para obtener un efecto teraputico es necesario
alcanzar niveles sricos y tisulares adecuados. La susceptibilidad o resistencia del germen es en
este caso dependiente de concentracin.
Resistencia absoluta: sucede un incremento sbito en la MIC de un cultivo durante o despus
de la terapia. Es inefectivo el incremento de la dosis clnica usual. Ejemplo de ello es la
Pseudomonas spp. Resistente a gentamicina y el Streptococcus pneumoniae altamente
resistente a penicilina y uso de levofloxacina.
Seudorresistencia: ocurre una resistencia in vitro pero una gran efectividad in vivo. Se
denomina tolerancia antibitica al fenmeno en el cual la diferencia entre la MBC
(concentracin bactericida mnima) y la MIC es muy grande lo cual ocurre con relaciones
MBC/MIC mayores de 8 lo que permite la persistencia del microorganismo.
ETANOL 70% - .
Bactericida de potencia intermedia. Es un antisptico que elimina gran cantidad de bacterias
cuando es aplicado sobre la piel, superficies u objetos inertes. Es activo frente a bacterias Gram
positivas y Gram negativas, incluyendo patgenos multirresistentes (Staphylococcus aureus
resistente a meticilina, Enterococcus resistente a vancomicina). El alcohol etlico al 70 %
destruye el 90 % de las bacterias en dos minutos. Tambin es activo frente a micobacterias,
hongos y virus (incluyendo a HIV, virus de la hepatitis B, virus influenza, virus herpes simple,
citomegalovirus y virus respiratorio sincitial). No tiene actividad esporicida. El alcohol al 70%
puede matar al 90% de las bacterias de la piel si sta se mantiene hmeda (con el antisptico)
durante dos minutos. La friega con algodn humedecido en etanol que se deja secar sobre la
piel mata como mximo al 75% de las bacterias. El espectro de actividad virucida es superior al
de otros alcoholes como el isoproplico. El alcohol isoproplico es ms activo frente a virus
lipdicos que el etanol, pero menos efectivo frente a virus no lipdicos. El etanol posee suficiente
actividad frente a virus lipdicos y no lipdicos para ser considerado virucida de amplio espectro.

MATERIALES
Cajas Petri
Reactivos para tincin
guantes
Mechero de alcohol
Agua pectonada
Tubos de ensayos
hisopos

Cubre objetos
Alcohol
Yodo
Asa bacteriolgica
Porta objetos
Microscopio
Agar

PROCEDIMIENTO
Grupo 3:

Manos sin desinfectar y desinfectadas con alcohol.

Mesn desinfectado con yodo.
Planta piloto, material tabla de picar.

Tmanos los materiales a utilizar, en este caso el hisopo, el agua pectonada y nuestra mano para
proceder a tomar la muestra. Una vez tomada la muestra con el hisopo, este lo colocamos en el
agua pectonada.
Procedimos a lavar nuestra mano con alcohol para hacer el segundo muestreo bacteriolgico,
para esto al igual con ayuda del hisopo lo frotamos en nuestra mano ya desinfectada y
procedimos a guardar dicha muestra en el tubo de ensayo que contena el agua pectonada.
La muestra tomada en el mesn, lo primero que se hizo fue limpiar la parte donde se iba a
recolectar la muestra con jabn lquido de yodo, limpiamos con ayuda de una toalla de papel y
procedimos a tomar la muestra.
En el muestreo de la planta piloto, se lo realizo a una tabla de picar, para esto tomamos nuestro
hisopo y lo frotamos directamente en la tabla de picar, una vez ya terminado esto colocamos el
hisopo en nuestro tubo de ensayo con agua pectonada.
Luego de esto se dej cada muestra reposar en el tubo de ensayo con el agua pectonada por un
lapso de 10 minutos.
Pasado este tiempo se comenz a la siembra, con ayuda de el mechero de alcohol, en cada caja
Petri bamos colocando cada muestra bacteriana para su incubacin. El mtodo de siembra fue
tipo barrido terminado esto se rotularon las cajas y se colocaron en incubadora por un plazo
de 24 horas.

GRAFICOS

Muestra de bacterias
de la tabla de picar
planta piloto.

Bacterias observadas
en el muestreo del
mesn limpiado con
yodo

Muestra manos sin

desinfectar.

Muestra manos
desinfectadas.

Siembra de
muestras.

Traspase de la
muestra del hisopo
hacia la caja Petri

Toma de muestra
para realizar tincin

Toma de muestra.
Imgenes tomadas
en las clases de
laboratorio. m

OBSERVACIONES.
Muestra 1: manos sin desinfectar

Se observaron 2 colonias y las bacterias

observadas en el microscopio fueron cocos y
bacilos Gram +
Muestra 2: manos desinfectadas con alcohol Se observaron 8 colonias y las bacterias
visualizadas fueron cocos.
Muestra 3: mesn limpiado con yodo
Se observ 1 colonia y las bacterias
analizadas fueron estreptococos +
Muestra 4: planta piloto ( tabla de picar )
Se observ 32 colonias y las bacterias fueron
bacilos las que se pudieron visualizar en esta
polaca.

CONCLUSIONES.

En esta prctica se puede concluir que todas las cosas que nos rodean estn llenas de
bacterias, no es necesario limpiar una superficie para saber que esta va a estar libre de
las mismas. En esta prctica pudimos notas que as limpiemos con alcohol, jabn liquido
de yodo, igual va a existir bacterias que no les perjudica estos mtodos para su
crecimiento.
Nuestra planta piloto est obligada a llevar un control ms riguroso ligado a sanidad, ya
que aqu nosotros los estudiantes llegamos a realizar nuestras prcticas trabajando con
alimentos que posiblemente se contaminan en primer instancia que lo colocamos en
cualquier parte de esta planta. Cabe recalcar que en una tabla de picar encontrada en
esta planta, y a la vez siendo utilizada por los estudiantes (segn estaba limpia) con este
anlisis micro bacteriano se pudo analizar que fue la muestra que ms bacterias y
colonias de la misma arroj.