Estimulante neurotrfico

Los receptores en el tratamiento de los trastornos neurodegenerativos

Gunnar Nordvall, Ponto Forsell
Fundacin AlzeCure, Instituto Karolinska Science Park, Huddinge,
Suecia
Contenido
1. Introduccin
2. NT y NT Receptores-Estructura y Funcin
3. Papel de las NT y sus receptores en enfermedades neurodegenerativas
4. farmacolgicos Activadores de NT 62 Receptores
4.1 peptdicos Activadores
4.2 de molcula pequea activadores
5. Conclusin
1. INTRODUCCIN
Las neuronas son los bloques de construccin, tanto del sistema nervioso central
(SNC), incluyendo el cerebro y la mdula espinal y el sistema nervioso perifrico,
incluyendo la somtica, autonmico y nervioso sensorial. hay varios factores
trficos que son necesarias para el desarrollo y mantenimiento de las neuronas.
Las neurotrpicos (NTs) son una clase de factores trficos que promover el
desarrollo, la salud y la supervivencia de las neuronas, y por lo tanto ejercer un
control considerable sobre la homeostasis neuronal. La falta de tratamientos
modificadores de la enfermedad por varios trastornos neurodegenerativos,
incluyendo la enfermedad de Alzheimer (AD), enfermedad de Parkinson (PD), y la
enfermedad de Huntington, tiene desde hace varias dcadas impulsado por la
bsqueda de adecuados maneras de administrar factores de crecimiento neuronal
o para la identificacin de pequeas molculas con soporte neurotrfico que
aumentar la supervivencia neuronal. El uso de protenas recombinantes tales
como el crecimiento del nervio.

2. NTS y NAT-RECEPTORES DE ESTRUCTURA Y FUNCIN

Los NT, incluyendo NGF, BDNF y NT-3-6, se unen con la tropomiosina-quinasa

(TRK) de la familia de receptores tirosina quinasas (TrkA, TrkB, y TrkC). Adems,
cada NT tambin se une a la comn, un miembro de la sper familia de receptores
del factor de necrosis tumoral. Se une al NGF con alta afinidad a TrkA, mientras
que BDNF y NT-4/5 se unen a TrkB yNT-3 se une predominantemente a TrkC,
pero tambin puede unirse a TrkA y TrkB, aunque con menor afinidad. NT se
sintetizan como protenas precursoras, pro-NT, que se escinde para producir la
forma madura, un no covalente ligada al homodmero. La funcionalidad de los
receptores de NT, Trks y p75, es bastante compleja. Tras la unin del ligando, los
Trks forman homodmeros que conducen a la activacin del dominio quinasa
intracelular y varios eventos de autofosforilacin de residuos de tirosina
citoplasmticos. En TrkA, esto inicia una cascada de sealizacin de eventos
celulares, incluyendo la fosforilacin de Y490, reclutamiento de SHC-1,
concomitante activacin de Ras-Raf-1 va, y la fosforilacin de extracelular
regulada quinasa (ERK) 1/2. La fosforilacin de Y751 conduce a la activacin dela
fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3-quinasa) / Akt. La fosforilacinde Y785 en TrkA
conduce a la activacin de la fosfolipasa C para generar diacilglicerol y fosfatos
de inositol y la activacin de la protena quinasaC activacin TrkB pathway. est
mediada en gran parte de la misma manera como quepara TrkA, con principal
toma lugar en la autofosforilacin Y516 y Y817(seq humano, correspondiente a
TrkA Y490 y 785) La complejidad de la sealizacin del receptor NT, es probable
que tener en cuenta la diversas acciones que ejercen las NT. La determinacin de
la estructura tridimensional de las NT y sus receptores han dado una mayor
comprensin de las interacciones moleculares detrs de la activacin. Las NTs
pertenecen a la sper familia de nudo de cistina, un gran grupo de protenas non
globular que consiste en hojas beta y que comparte un ncleo conservado de los
tres enlaces disulfuro entrelazados. Existen las NT como dmeros en solucin. Los
receptores Trk consisten en dos dominios similares a Ig, Ig-C1 (tambin conocido
como D4) y Ig-C2 (D5), y un dominio de repeticin rica en leucina que contiene
tres repeticiones ricas en leucina (LRRs) flanqueada por dos ricos en dominios de
cistena.
La estructura de NGF en el complejo con el dominio extracelular entero (ECD) de
TrkA NGF revel que slo interacta con el Ig-C2(D5) de dominio de TrkA. La
unin de las NT a su receptor afn es medida a travs de dos regiones principales,
llamado el parche conservada, que incluye uno de los bucles de beta-horquilla (L1)
y los residuos de los cuatro beta-captulos que forman la cintura del NGF, que
muestran alta similitud entre las NT y el parche especificidad (residuos 2-14 de
NGF), que es una zona con menor conservacin de la secuencia que confiere la

selectividad exhibida por las neurotrpicas. La estructura de NGF unido a p75

tambin ha sido determinado, demostrando que TrkA y la interaccin p75 con NGF
es diferente, usando reas no superpuestas en NGF.

3. PAPEL DE NT Y SUS RECEPTORES EN

TRASTORNOS NEURODEGENERATIVOS
BDNF y NGF sealizacin es importante apoyar la supervivencia neuronal, la
diferenciacin, la neurognesis, y la plasticidad sinptica. NGF y el BDNF puede
tener efectos similares sobre las neuronas, pero en sitios diferentes debido a
diferencias en patrones de expresin de sus receptores y / o protenas accesorias.
NGF tiene ha demostrado que la promocin de la supervivencia de prosencfalo
basal colinrgico neuronas (SNC), que son disfuncionales en el cerebro de
pacientes con AD. Estas neuronas colinrgicas son altamente dependientes de
NGF para mantener su fenotipo bioqumico y morfolgico. Adems de la validacin
importante papel de NGF en la prevencin de la neurodegeneracin proviene de
animales modelos que estudian el efecto de la privacin crnica de NGF en
transgnico AD11 ratones, usando la expresin de un recombinante neutralizantes
anti-NGF anticuerpo .Aparte de inducir el dficit colinrgico esperado en BFCNs,
los ratones tambin demuestran una neurodegeneracin progresiva que recapitula
muchos aspectos tpicos de la neurodegeneracin AD.BDNF tambin se ha
implicado en la fisiopatologa de la EA. el nivelde BDNF se reduce en el cerebro
de pacientes con AD, lo que sugiere que la falta de apoyo neurotrfico BDNF
mediada puede acelerar la neurodegeneracin. De hecho, un creciente cuerpo de
evidencia experimental sugiere que el aumento de la sealizacin de BDNF podra
potencialmente mejorar la cognicin en la EA. El trasplante de clulas madre en el
cerebro de un triple El agotamiento de BDNF bloque el efecto beneficioso de la
trasplante neuronal, mientras que la expresin ectpica de BDNF tuvo un efecto
positivo similar en la cognicin como las clulas madre trasplantadas. Estos
experimentos apoyan fuertemente BDNF mejorada de sealizacin como un
mecanismo teraputico para estimularla plasticidad sinptica en la EA. Ectpico
expresin de BDNF tambin se ha demostrado que es beneficioso durante otras
condiciones neurodegenerativas. En modelos animales de PD, BDNF tiene ha
demostrado para promover la supervivencia y / o prevenir la degeneracin de las
neuronas dopaminrgicas en la sustancia nigra. Tambin, la ablacin condicional
de BDNF en la corteza, ya sea o sustancia nigra o ablacin de TrkB en el estriado
result gravemente deteriorada en desarrollo del tratamiento de NFG.

4. ACTIVADORES FARMACOLGICO DE NT RECEPTORES

4.1. Activadores peptdicos
Las cualidades pobres de drogas-como de NGF y BDNF han estimulado el inters
en hacer pptidos ms pequeos, que han sido recientemente reviewed.20 Esto
tiene principalmente se centran en la fabricacin de anillos cerrados limitados
pptidos de uno de las estructuras de bucle de las NT. Restringir la conformacin
en un giro beta parece esencial para lograr la actividad, mientras que los pptidos
ms flexibles han estado inactivos

Sobre la base de farmacforos derivados y anlogos peptdicos fromNGF

monoclonal anticuerpos (anticuerpos monoclonales), se sintetiz una biblioteca
giro beta de alrededor de 60 miembros. A partir de ese esfuerzo, el mimtico
pptido cclico 1 (MIM-D3) era identificado y demostrado ser un agonista de TrkA
parcial proteolticamente estable, no fue capaz de bloquear la unin de NGF a
TrkA de la ECD; sin embargo, aparecido competitivo con el mAb 5C3 TrkA-dirigida,
que tiene una unin eptopo dentro del dominio IgC2 de TrkA cerca del sitio de
unin a NGF. D3 fue capaz de inhibir la interaccin entre la ECD de TrkA 5C3 y
con un IC50 de 2 mM. Adems, la interaccin pareca ser selectiva para TrkA, por
no interacta con cualquiera de p75NTR o TrkC. 1 solo fue capaz tanto para
aumentar la supervivencia en cultivos neuronales primarios e inducir la
diferenciacin. Curiosamente tambin fue capaz de potenciar los efectos de NGF
en estos ensayos. Administrando ICV a travs de una minibomba osmtica para
ratas deterioradas mostraron un rescate de larga duracin de los dficits de
memoria asociados con la edad. El compuesto tambin aument la densidad de
pre sinptica colinrgica cortical boatos, as como el tamao de Somal ncleo
basales neuronas a la misma medida que NGF. La barrera sangre-cerebro pobre
(BBB) penetrancia de restringe su uso en los trastornos del sistema nervioso

central, y que se encuentra actualmente en la fase 3 de ensayos clnicos para el

tratamiento del sndrome del ojo seco. El peptidomimic cclicos relacionados con
se informa de estimular el receptor trkC aunque con baja potencia, sobre50 mM de
compuesto 2 dio Tyr fosforilacin en un grado similar como 100 pM NT3.Importantes esfuerzos tambin se han dirigido a la produccin de anticuerpos
monoclonales agonistas actuando en los receptores TrkA24 y TrkB25-28.
Curiosamente, algunos mAbs son desplazables con BDNF que indica un eptopo
de unin que se superponen parcialmente con la de BDNF, mientras que otros
mAbs son nondisplaceable por BDNF(por ejemplo, 29D7). Por lo tanto, el receptor
TrkB puede ser activado por ligando que interactan con un sitio distinto del sitio
de unin de BDNF.
4.2. ACTIVADORES-MOLCULA PEQUEA
A pesar de que una serie de derivados de pptidos y mAbs que imitan los efectos
de las NT han sido identificados, muchos de ellos son propensos a sufrir de
muchos de los mismos inconvenientes que los NTs s mismos, como la mala
estabilidad en plasma y mala permeabilidad especialmente en el SNC. Un nmero
de molcula pequea activadores de las NT se han identificado utilizando una
combinacin de modelado molecular, pantallas virtuales, y ensayos de HTS.
Adems, un nmero de productos naturales han sido identificados que son
capaces de activar estos receptores.
La estructura quinoide 3 (L-783281, demethylasterriquinone B-1 (DMAQB-1)), un
metabolito fngico, se identific originalmente como un activadorde la insulina
receptor.29 Otros estudios demostraron que tambin fue capaz de activarTrk
receptors.30 Las compuesto acta como un agonista parcial en tanto TrkA y los
receptores TrkB con una estimulacin mxima de alrededor de 40% de la de NGF
y BDNF, aunque a la potencia significativamente menor (20 mM). En un
Trktransfected Lneas de clulas CHO, se demostr que 3 podra estimular tanto a
travs de las MAPK y PI-3-quinasa vas, en una medida similar a la cognadoNT. 3
(20 mM) fue capaz de inducir la fosforilacin de Tyr 490. Usando quimrico
receptores, se demostr que 3 es probable que interacten con el intracelular
dominio (CIE) del receptor TrkA. Se pudo demostrar ningn neuronal
supervivencia o efectos de desarrollo de neuritas. El compuesto mostr seales de
clula toxicidad que fue probablemente compuesto relacionado desde un no activo
estrechamente relacionados analgica tambin mostr toxicidad. Con el fin de
identificar anlogos no txicos.Se prepar una biblioteca de 300 asterriquinones y
60 mono-indolylquinones. Dos compuestos fueron identificados con toxicidad
reducida y la capacidad para activar los receptores TrkA. Compuesto 4 tena
aproximadamente el 50% de la estimulante efecto de NGF (EC50 M30) inducir
Y490, Erk y Akt fosforilacin. Curiosamente, 5 tenan el 200% del efecto de NGF

mxima en CHO-TrkA las clulas en 30 mM y el aumento de Y490 y Y674 / 675

fosforilacin. compuesto fue incapaz de inducir la diferenciacin neuronal por s
solo, pero submxima dosis de 5 (1 M) y NGF (10 ng / ml) aument la neuronal
diferenciacin al mismo nivel que 100 ng / ml de NGF.

Amida Gambogic (6), un derivado del cido Gambogic encontrado en la resina

exudada del rbol Garcinia hanburryi, fue encontrado para activar el TrkAreceptor.
Se une selectivamente al receptor TrkA, TrkB y no el oreceptor trkC, induce la
dimerizacin de TrkA, y desencadena la fosforilacinde Tyr490 y Tyr751,
provocando de este modo MAPK y PI3-quinasa / Akt activacin.El uso de las
construcciones de los receptores truncados, que estaba decidido a interactuar con
el juxtamembrane dominio citoplsmico de TrkA. La Kd para 6 a la TrkA receptor
se determin que era de 75 nm, mientras que tuvo una CE50 de 5 nMen un
ensayo para la actividad antiapopttica en las clulas T17 tratadas con 1 mM
estaurosporina. Tambin mostr una mayor proteccin que el NGF contra
glutamato toxicidad en las neuronas del hipocampo. Finalmente, fue capaz de
provocar el crecimiento de neuritas en clulas PC12 y atenuar kainato
neurotoxicidad inducida por cido en C57BL / 6 ratones despus de la
administracin s.c.. Basndose en la forma y tamao molecular adecuado para la
interaccin con el dominio TrkA-D5, se seleccion una pequea biblioteca de
compuestos vinlicos para cuatro compuestos que promovi la proliferacin celular
en clulas PC3, entre estos MT-2 (7). Usando tritiada [3H] -MT-2, la unin era
competitivo con NGF y el valor Kd fue estimado en 50-100 nM para la interaccin

con TrkA en las clulas NIH-3T3.Se utilizaron estudios de acoplamiento y el

modelado molecular para identificar un probable MT2 sitio para unin al dominio
de TrkA-D5. El sitio de unin fue posteriormente confirmado por mutagnesis de
dos residuos clave, T352 y F327, lleva a la prdida casi completa de la unin. MT2
aadi a las clulas PC12 causa dos fosforilacin de Tyr490, pero mnimo
fosforilacin de Tyr674 / 675 y Tyr785. MT2 (10 M) podra, en un modelo in vitro en
el hipocampo, proteger neuronas de la muerte mediada por A en las neuronas
privadas-NGF, comparable a el efecto alcanzado por 2 nM NGF....

Se reclam una serie de derivados phenanthridinone para potenciar la

diferenciacin inducida por NGF y el crecimiento de neuritas en clulas PC12,
ejemplificado con 8,34 En un ensayo de supervivencia celular, 8 potenciar el
efecto por NGF y NT-3 en el tiempo de supervivencia de las neuronas sensoriales
en la raz dorsal y el ganglio de la mdula espinal de rata. El compuesto tambin
potenci el efecto deNT-3 en Trk fosforilacin en hipocampo de rata y cortes de
tejido del cuerpo estriado. La dehidroepiandrosterona (DHEA, 9), un esteroide
producido en las neuronas yglia, se ha demostrado que tienen efectos
neuroprotectores. En las clulas HEK293 expresar TrkA o p75, [3H] -DHEA
muestra una afinidad de unin de 7 y 6 nM, respectivamente.35 Esta unin se
puede desplazar por el tratamiento con NGF; Sin embargo, el 9 no poda
desplazar [125I] -NGF. 9 fosforilacin inducida de Tyr490 en TrkA y el aumento de
la fosforilacin de Akt y Erk en las clulas PC12. En un modelo de ratn nulo NGF,
DHEA fue capaz de revertir la prdida de neuronas sensoriales positivos TrkA en
los ganglios de la raz dorsal. Un conjunto de compuestos de amonio cuaternario
ejemplificado por 10 erandescrito como agonistas de NGF y fueron capaces de
aumentar la diferenciacin en Clulas PC12 y promover survival.36 celular En una
solicitud de patente ms reciente por el mismo grupo, un conjunto de derivados de
triglicina fueron descritos como agonistas NT.El compuesto, ejemplificada por 11
(G79, BN201), se inform aaumentar la diferenciacin en clulas PC12, as como
mejorar la supervivencia celular.7,8-dihidroxiflavona (12, 7,8-DH) fue identificado
despus de la seleccin de una diversa biblioteca de 2.000 compuestos
biolgicamente activos utilizando un ensayo de apoptosis en una clula murina
line.38 El [3H] 7,8-DH fue demostrado que se unen a la ECD de TrkB con una Kd

de 320 nM, pero no a TrkA. La unin pareca haber dirigida principalmente al

cluster-2 dominio cistena. 7,8-DH (5 mg / kg i.p.) inducida por la fosforilacin de
TrkB en cerebro de ratn, 38 principalmente de Y816(hY817) y Y706 (hY707) .39
Desde 7,8-DH se inform a entrar en el CNS, que ha sido ampliamente estudiado
in vivo. Se parece ejercer neuroprotector papeles en una variedad de modelos de
enfermedades neurodegenerativas, en particular7,8-DH ha mostrado efectos
significativos en varios modelos animales de la EA, 40-42 PD, 38 enfermedad de
Huntington, 43 y otros modelos de aprendizaje y memoria. Varios anlogos de
cerca de 12 han sido identificados, con la mejora de la potencia.
se marc para generar 40- [18F] -7,8-DH (15) como un potencial de positronesLa
tomografa por emisin (PET) ligando para el estudio de los receptores TrkB en
vivo.46Uso en autorradiografa in vitro en las secciones de cerebro de rata, 15
mostraron alta especfica la unin a receptores TrkB en la corteza cerebral, as
como hipocampo,caudado-putamen, y tlamo, que era desplazable por BDNF. Sin
embargo, un estudio PET en ratas mostr una baja penetracin de la acreditacin
de este PET trazador, por lo que es inadecuado como un ligando de PET.

En un esfuerzo para mejorar las propiedades de DMPK de 12, el motivo catecol

fue reemplazado con un bencimidazol (16) 0,47 Este compuesto fue capaz de
aumentar TrkB Y816 fosforilacin y la activacin de Akt, in vitro en primaria
neuronas (a 500 nm), as como in vivo en cerebro de ratn despus de 2 h (1 mg /
kg por va oral administracin). Las propiedades de PK in vivo del derivado de
bencimidazol16 mostraron ninguna mejora (t1 / 2 58 min, Tmx 120 min, la Cmx
7 ng / ml, AUCinf 1,293 min ng / ml a 10 mg / kg po) 47 en comparacin con 12
(t1 / 2 134 min, 10 min Tmax, Cmax 70 ng / mL, AUCinf 7,515 min ng / ml a las 50
mg / kg po), 39 y la biodisponibilidad oral de 16 era slo el 2% .En efectos in vivo
en un modelo animal de depresin de 16 fueron vistos despus por va oral
administracin de 2,5 mg / kg a los ratones una vez al da durante 3 semanas. Un
modelo de farmacforo generada a partir de bucle 2 de BDNF se utiliz para
prcticamente cribar una biblioteca de compuesto de 1.000. Despus
computacional filtrado, siete compuestos fueron evaluados para neurotrfico la
actividad en un ensayo de supervivencia en las neuronas del hipocampo E16.

cuatro compuestos(17-20) fueron identificados como agonistas parciales con

valores EC50 de 200-500 pM con un efecto estimulador de aproximadamente el
85% de la de BDNF. LM22A-4 (20) ha demostrado ser selectiva frente a TrkA y
TrkB y en contra .Otros 57 receptores en un panel de la pantalla. Un aumento en
la fosforilacin de Y515 (30% a 5 nM) y la activacin de Erk y Akt (50-70% a 0,1
nM), en relacin con especies no fosforilados, se observ despus del tratamiento
de hipocampo cultivadas En16 neuronas con 20. La unin de 20 a TrkB era
competitivo conBDNF con una CI50 de aproximadamente 47 nM en una
anisotropa de fluorescencia ensayo. El compuesto mostr escasa penetracin
BBB y era, por tanto, administrado por va intranasal (0,22 mg / kg una vez al da)
durante 7 das para ratones, que resultado en un aumento en la fosforilacin de
Trk, Akt y ERK en el hipocampo y el cuerpo estriado. La administracin intranasal
de 20 (3,4 mg una vez al da) a ratas durante 2 semanas mejor el aprendizaje
motor en un modelo rotarod despus traumtica lesin cerebral. Una combinacin
de administracin intranasal e intraperitoneal de 20, para aumentar las
concentraciones cerebrales, fue demostrado para reducir el deterioro motor y
neuropatologa en modelos de ratn de la enfermedad de Huntington.