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Caracterizacin qumica de las antocianinas en los frutos de tamarillo (Solanum betaceum Cav.) Y Andes (Rubus glaucus Benth.

)
La composicin de antocianinas de tamarillo (Solanum betaceum Cav., Variedad roja) y Andes berry (Rubus glaucus Benth.) Se
determin mediante HPLC-PDA y HPLC-ESIMS. A partir de los extractos ricos en antocianina (ARE), se obtuvieron compuestos puros
(1-7) por MLCCC (cromatografa multicapa a contracorriente) y HPLC preparativa adicional, y sus estructuras inequvocas se obtuvieron
por RMN 1D y 2D Anlisis. La nueva antocianina delfinidina 3-O-a L-ramnopiranosil- (1 \ beta 6) -b-D-glucopiransido-30- O-b-Dglucopiransido, as como el conocido cianidina-3-O-rutinosida, pelargonidina-3-O-rutinosida y delfinidin-3-O-rutinosido fueron
identificados como constituyentes del fruto de tamarillo. Aunque la composicin de la antocianina de la baya de los Andes se ha
informado anteriormente en la literatura, la estructura inequvoca elucidacin del principal compuesto, cianidin-3-OaL-rhamnopiranosil(1? 6) -ObD-xilopiranosil- (1? 2) -bD- Glucopiransido, se consigui por primera vez.

Las antocianinas son el grupo ms grande de pigmentos solubles en agua en el reino vegetal. Son responsables de la mayora de los
colores rojos y azules en las frutas y verduras, y recientemente, se han utilizado en la industria alimentaria como pigmentos, debido a sus
brillantes colores atractivos, su alta solubilidad en agua y sus asociados beneficios para la salud (Castaeda- Ovando, Pacheco-Hernndez
, Pez-Hernndez, Rodrguez, & Galn-Vidal, 2009). Es importante sealar que los estudios sobre las propiedades sensoriales y
biofuncionales de las frutas tropicales han aumentado debido a su novedad (Sousa De Brito et al., 2007, Mahattanatawee et al., 2006).
Estas frutas y sus productos derivados han conquistado nuevos mercados en las regiones subtropicales porque los intereses de los
consumidores se han vuelto a los alimentos naturales.
Solanum betaceum Cav. Syn Cyphomandra betacea Sendt. (Solanaceae) es un arbusto nativo de los Andes, especficamente en Per,
Ecuador y Colombia, que pertenece a la familia Solanaceae. En Colombia, las variedades ms comunes son la tradicional de color
amarillo, y la roja (de color amarillo con piel roja y jalea prpura) comnmente llamada tamarillo (Vasco, vila, Ruales, Svanberg y
Kamal-Eldin, 2009). El fruto rojo es la variedad ms comercializada en Colombia y una de las frutas tropicales colombianas altamente
comercializadas en Europa. El fruto es ovoide en forma, una longitud de 6-8 cm, y un dimetro de 4-5 cm; Cuando madura, su cscara es
de color rojo oscuro, y presenta un sabor ligeramente amargo, cido y astringente con un aroma delicado y caracterstico.
Se consume generalmente fresco, o mezclado junto con el agua y el azcar para hacer los zumos y los postres. Los primeros estudios
sobre componentes fenlicos de tamarillo de Nueva Zelanda, que se realizaron por cromatografa en papel y TLC (cromatografa de capa
fina),
informaron
la
presencia
de
3-rutinosides
y
3-glucsidos
de
pelargonidina,
cianidina
y
Delfinidina (Wrolstad y Heatherbell, 1974); Mientras que la pelargonidina 3-glucosil-glucosa, la peonidina 3-glucosil-glucosa y la
malvidina 3-glucosil-glucosa se identificaron en frutos de tamarillo de Brasil mediante espectrofotometra UV-Vis y TLC (Bobbio,
Bobbio y Rodriguez-Amaya, 1983). Recientemente, la delfinidina 3-rutinosida, la cianidina 3-rutinosida y la pelargonidina 3-glucsido5-rhamnosida
(tentativamente)
Fueron identificados por LC / MS de frutos de Brasil (Vera de Rosso & Mercadante, 2007). En las frutas de Ecuador, la presencia de las
antocianinas, delfinidina glucosil rutinosida, delfinidin rutinosida, rutinosida de la cianidina y rutinosida de la pelargonidina; Los cidos
hidroxicinmicos, el cido dicafeoilqunico, el cido cafeoilqunico, la cafecil glucosa y la feruloil glucosa; As como los carotenoides
esterificados, lutena y b-criptoxantina (Mertz et al., 2009; Mertz, Brat, Caris-Veyrat, & Gunata, 2010). Como se puede observar, se han
realizado numerosos estudios sobre las antocianinas del tamarillo, pero se ha prestado poca atencin al aislamiento ya la identificacin
inequvoca por mtodos espectroscpicos.
Rubus glaucus Benth. (Rosaceae), comnmente conocida como Andes berry o mora de Castilla (Fig. 1) es una baya nativa de Amrica
del Sur que se encuentra entre 2600 y 3100 m sobre el nivel del mar y altamente consumido en Colombia (produccin anual superando
10.000 toneladas). La fruta se compone de numerosos pequeos drupes en un recipiente de 1-2,5 cm de largo, que son de color rojo
oscuro o morado. Se caracteriza por un intenso aroma y sabor agridulce; Sin embargo, esta fruta es altamente perecedera y susceptible
durante el manejo poscosecha. Este hecho ha motivado el desarrollo de productos procesados con mayor tiempo de vida til como
estrategia para superar esos problemas. La composicin fenlica de esta fruta y otras relacionadas han sido estudiadas por diferentes
grupos de investigacin (Mertz, Cheynier, Gnata & Brat, 2007; Vasco, Riihinen, Ruales, & Kamal-Eldin, 2009; Cuevas-Rodrguez et al.,
2010 ). Por lo tanto, se han encontrado grandes cantidades de elagitaninos y proantocianidinas, as como derivados de cido
hidroxicinmico, flavonoles (principalmente quercetinglicsidos) y antocianinas. Las antocianinas principales fueron cianidina-3-Oglucsido (67% del contenido total de antocianinas) y cianidina-3-O-rutinosida (31% de las antocianinas totales). Ancianinas menores se
informaron tentativamente como cianidin-3-O-malonil glucsido y un derivado de pelargonidina. Garzn, Riedl y Schwartz (2009)
informaron que el contenido de antocianinas de la baya de los Andes es de 45 mg / 100 g de FW y 3-sambubiosido de cianidina, 3glucsido de cianidina, 3-rutinosida de cianidina, 3-glucsido de Pelargonidin 3-rutinoside como constituyentes principales. Todos los
datos antes mencionados se obtuvieron solamente por anlisis de HPLC-MS, por lo que la composicin antocianina inequvoca de R.
glaucus Benth. Es todava desconocido debido a la falta de estudios de RMN sobre los compuestos purificados.
Tamarillo y Andes son una fuente prometedora de colorantes naturales (Osorio et al., 2007), y han mostrado actividad antioxidante in
vitro (Vasco, Ruales, & Kamal-Eldin, 2008, Murtz et al., 2009, Hurtado, Morales, Gonzlez-Miret, Escudero-Gilete, & Heredia, 2009)
que les da un interesante valor aadido. As, como parte de nuestros estudios en curso sobre la composicin del pigmento de los frutos
colombianos (Osorio et al., 2010, Barrios et al., 2010, Jaramillo, Dawid, Hofmann, Fujimoto, & Osorio, 2011), la composicin de
antocianinas de los anteriores , Se investig despus de su purificacin y posterior anlisis espectroscpico.
2.
2.1.

Materiales

mtodos
General

Los espectros de RMN 1D y 2D se obtuvieron a 303 K usando espectrmetros de 400 MHz (DRX) y 500 MHz Avance III (Bruker,
Rheinstetten, Alemania) en CD3OD / CF3COOD (19: 1, v / v y 98: 2, v / V para el compuesto 7) con picos de disolvente como
referencia. La seal de 13C y la seal de 1H del CD3OD se usaron como referencias secundarias (dC 49,3 y dH 3,35 ppm). Para la
elucidacin estructural y la asignacin de la seal de RMN en experimentos de RMN 2D, tales como espectroscopia COSY, DEPT,
TOCSY, ROESY, g-HSQC y g-HMBC se llevaron a cabo usando las secuencias de impulsos tomadas de la biblioteca de software Bruker.
El procesamiento de datos se realiz utilizando el software XWin-NMR (versin 3.5, Bruker, Rheinstetten, Alemania), as como MestreC (Mestrelab Research, A Corua, Espaa). Los anlisis de HPLC se realizaron en un instrumento de la serie HP 1100 (Hewlett Packard,
Palo Alto, CA, EE.UU.) equipado con detector de matriz de fotodiodos (PDA). Para fines preparativos, se utiliz un aparato de HPLC
que consista en una bomba Merck-Hitachi L-6000A, una vlvula de inyeccin Rheodyne con un bucle de 500 lL y un detector MerckHitachi UV-Vis L-4250. El sistema CCC era un cromatgrafo de contracorriente de bobinas multicapa serie 521 (P.C. Inc., Potomac, MD,
EE.UU.). Se us un espectrmetro HP 8452 UV-Vis para monitorear fracciones de MLCCC. Se realizaron anlisis de ESI-MS en una
Shimadzu QP-8000a (Shimadzu Corp., Kyoto, Japn). Los anlisis de FAB-MS de compuestos puros se realizaron en un espectrmetro
AutoSpecQ usando modo positivo, argn como gas de colisin y yoduro de glicerol-sodio como matriz.
2.2.

Material

vegetal

Se recogieron frutos maduros de tamarillo (variedad roja, cscara 100% rojo, pH 3,5) en Puente Nacional, Santander, Colombia. Un
espcimen de cupn fue codificado como COL 510177 en el Instituto de Ciencias Naturales de la Universidad Nacional de Colombia. La
pulpa, los peelings, las semillas, y la jalea fueron separados manualmente. Las frutas de Mora fueron compradas en diferentes mercados
locales de Chinchin, Caldas, Colombia, y seleccionadas de acuerdo a sus cualidades de madurez de color (ms del 75% de color rojo
oscuro a rojo vino), buena consistencia y forma.
2.3. Sustancias qumicas y reactivos.
Acetonitrilo de grado HPLC y n-butanol, metanol y terc-butilmetilter de calidad ACS (TBME) se adquirieron de Merck (Darmstadt,
Alemania). El agua para separacin cromatogrfica se purific por medio de un sistema de agua con ventaja Milli-Q A 10 (Millipore,
Molsheim, Francia). Para los anlisis de LCMS, se adquirieron acetonitrilo, agua y cido frmico de Honeywell Burdick y Jackson
(Muskegon, MI, EE.UU.). Los siguientes compuestos se obtuvieron comercialmente de las fuentes indicadas entre parntesis: cido
clorhdrico (Merck, Darmstadt, Alemania); CD3OD y CF3COOD (Euriso-top, Saarbrcken, Alemania); CF _ {3} CO _ {2} H (TFA)
(Aldrich Chemical Company, Milwaukee, WI, EE.UU.); Hidrxido sdico, glucosa y ramnosa (Fluka, Steinheim, Alemania); Y xilosa
(Lancaster, Eastgate, Inglaterra).
2.4. Aislamiento de extractos ricos en antocianina (AREs).
Se lavaron frutos de tamarillo (5 kg), y despus de retirar la cscara y las semillas, la gelatina se separ manualmente de la pulpa y se
diluy con agua (1: 1 p / p). A continuacin, porciones de 250 g se aplicaron por separado a un 80 \ Columna abierta de resina Amberlite
XAD-7 de 4 cm (Rohm and Haas, Darmstadt, Alemania). La columna se enjuag con agua y los pigmentos adsorbidos se eluyeron con 1
l de metanol-cido actico (19: 1, v / v), de acuerdo con el procedimiento de Degenhardt, Knapp y Winterhalter (2000). El metanol se
elimin a vaco a 35C y el residuo se 2.5. Fraccionamiento de extractos ricos en antocianos
La
ARE
de
tamarillo
fue
fraccionada
por
separado
por
MLCCC
(Cromatografa de contracorriente multicapa) en porciones de 0,6 g. El sistema disolvente era una mezcla de TBME / n-butanol /
acetonitrilo / agua (2: 2: 1: 5, v / v / v / v, acidificado con TFA al 0,1%, v / v). Se us una sola bobina (tubo de PTFE de 75 - 2,6 mm y un
volumen total de aproximadamente 410 ml) y la velocidad de revolucin se ajust a 800 rpm. La capa menos densa se utiliz siempre
como fase estacionaria y el caudal de la fase mvil fue de 1,0 ml / min. Se recogieron 80 fracciones (4 ml cada una) y se agruparon
basndose en su absorcin UV-Vis como sigue: F1 (1-8), F2 (9-24), F3 (25-48), F4 (49-67), F5 (67-80) y F6 (fase estacionaria). De la
misma manera, se obtuvieron 4 g de la baya de los Andes ARE por fracciones separadas en porciones de 1 g y se obtuvieron 90
fracciones de 5 ml y se reunieron como se mencion: F1 (1-11), F2 (12-15), F3 (16 F4 (31-36), F5 (37-44), F6 (45-50), F7 (51-85), F8
(86-90), F9 (fase estacionaria). Todas las fracciones se controlaron a 520 nm, la longitud de onda especfica para las
antocianinas.liofiliz. El producto final fue de 4,0 g de extracto rico en antocianina (ARE). Se procesaron frutos de bayas enteros de los
Andes (945 g) como se describi anteriormente para obtener 13,7 g de ARE.
2.6. Anlisis de HPLC.
Caracterizacin
de
las
antocianinas
en
las
ARE
y
MLCCC
Fracciones se realiz por HPLC usando una columna Zorbax-SB C18 de 5 m (250 m 4,6 mm i.d., Agilent Technologies, Santa Clara,
CA, EE.UU.), y la deteccin se llev a cabo utilizando un detector de matriz de fotodiodos. El sistema disolvente era una mezcla de
acetonitrilo / cido frmico / agua (3:10:87, v / v / v, disolvente A) y acetonitrilo / cido frmico / agua (50:10:40, v / v / v, disolvente B )
Y el caudal fue de 0,8 ml / min. Se utiliz gradiente lineal de 6% a 20% de B a 0-10 min, 20-40% de B a 10-20 min, 40-50% de B a 2030 min y 50-6% de B a 30-35 min . Antes de la inyeccin (volumen de 100 lL), todas las muestras se filtraron a travs de un filtro de
membrana Millipore de 0,45 lm. La cuantificacin de las antocianinas se llev a cabo en relacin con el patrn externo, Delphinidin-3ObD-rutinoside (Dp-3-rut, 3-20 mg / mL) y cyanidin-3-ObD-rutinoside (Cy-3-rut, 3 - 20 mg / mL) para el tamarillo y la baya de los
Andes, respectivamente. Los valores son medias desviacin estndar de cuatro experimentos. Las antocianinas puras (1-7) se
obtuvieron por HPLC preparativa a partir de fracciones de MLCCC, en una columna LUNA C18 de 5 ml (250 x 10 mm, i.d.,

Phenomenex ^ {TM}, Torrance, CA, EE.UU.). Las separaciones se hicieron isocrticamente con una mezcla 95: 5 (v / v) de disolventes A
y B a un caudal de 4 ml / min. La deteccin se realiz a 520 nm. En tamarillo, se purificaron antocianinas F2 1 (22 mg) y 2 (3 mg); De
antocianinas F3 3 (93 mg) y 4 (37 mg); Y de F4 se obtuvo el compuesto 5 (51 mg). En la baya de los Andes, se obtuvo la antocianina 7
F2 (73 mg); De F4 antocianina 4 (76 mg); Del compuesto F6 compuesto 5 (4 mg); Y de la antocianina 6 F8 (3 mg).
2.7. Anlisis ESI-MS.
Los parmetros de ESI-MS utilizados en los anlisis de compuestos puros fueron los siguientes: tensin de rociado 4,5 kV, caudal de gas
nebulizador (N2) a 4,5 l / min, voltaje de sonda 4,5 kV, voltaje curvado de desolvatacin 130 V, temperatura CDL 230 C, voltaje de
deflector 45 y 60 V. El instrumento fue operado en modo de in positivo explorando desde m / z 50-800 u. Las muestras de antocianinas
puras se diluyeron (1 mg / ml) en una mezcla de acetonitrilo-cido frmico-agua (45:10:45) y se inyectaron directamente en la fuente de
ESI
a
un
caudal
de
100
lL
/
min.
Para la identificacin del compuesto 7, se adquirieron los espectros de masas y iones del producto en un espectrmetro de masas de triple
trapecio / tramo inico lineal de API 4000 Q Trap (Applied Biosystems, Darmstadt, Alemania). La fraccin aislada se disolvi en una
mezcla de metanol / agua (70:30, v / v) y se introdujo directamente en el espectrmetro de masas por infusin de flujo utilizando una
bomba de jeringa. El espectrmetro de masas se activ en modo de exploracin completa bajo un dispositivo de ionizacin por
electrospray (ESI) que funcionaba en modo de ionizacin positiva con una tensin de pulverizacin de +5500 V. Los parmetros de MS /
MS se optimizaron para este compuesto. La adquisicin de datos y el control instrumental se complet con el software Analyst 1.4.2
(Applied Biosystems, Darmstadt, Alemania).
2.8.
Anlisis
del
azcar
Para el compuesto 7, se analiz el anlisis de carbohidratos unidos de forma glucosdica mediante cromatografa de intercambio aninico
utilizando un sistema de cromatografa inica ICS-2500 (Dionex, Idstein, Alemania) que consista en una bomba de gradiente GS 50, un
muestreador automtico AS50, , Y un detector electroqumico ED 50 que funciona en modo de deteccin amperomtrica pulsada. El
detector
fue
equipado
con
un
electrodo
de
trabajo
de
oro
operando
Con una forma de onda cuadrupolar de hidratos de carbono estndar suministrada por el fabricante. La adquisicin de datos y el control
instrumental se complet con el software Chromeleon (versin 6.80, Dionex). La separacin cromatogrfica se realiz a 30 C en una
columna CarboPac PA-20 (150 - 3 mm, Dionex) conectada con una columna de proteccin CarboPac PA - 20 (30 - 3 mm, Dionex),
usando un gradiente isocrtico de solucin de hidrxido sdico 2,5 mM) durante 20 min. Despus de cada muestra, la columna se lav
con una solucin de hidrxido sdico (200 mM) y se equilibr con solucin de hidrxido sdico (2,5 mM) durante 10 minutos antes de la
inyeccin. Adems, se realiz una cromatografa con un volumen de inyeccin de 10 lL y un caudal de 0,5 ml / min. Para el anlisis
cualitativo, los carbohidratos unidos glucosdicamente se identificaron mediante la comparacin de los tiempos de retencin y la cocromatografa de los siguientes compuestos de referencia: glucosa, ramnosa y xilosa. Para la preparacin de la muestra se coloc una
alcuota (1 mg) del compuesto diana, disuelto en cido clorhdrico acuoso (2 mol / L, 0,5 ml) en un vial de vidrio cerrado, y luego se
calent a 110C durante 120 min. Despus de enfriar a temperatura ambiente se aadieron 150 ll de solucin de hidrxido potsico (4 N)
y 50 ml de agua. Cada muestra se transform en viales de inyeccin automtica para inyeccin en el sistema HPIC.
2.9. Datos espectroscpicos.
Las estructuras de los compuestos 1-7 podran ser aclaradas por medio de experimentos de UV / Vis, LC-MS / MS, LC-TOF-MS, y 1D /
2D-RMN.
3. Resultados y discusin.
3.1. Identificacin de las antocianinas en el fruto de tamarillo El anlisis de HPLC del extracto de gelatina en bruto revel tres
antocianinas principales, los picos 3, 4 y 5 que representan aprox. 97,8% del rea total a k520 nm (figura 2A). Las menores antocianinas
1 y 2 tambin fueron detectadas y responsables del 2,2%. Adems, se detect un componente mayoritario (90,7%) en la ARE de la
cscara de tamarillo, cuyo tiempo de retencin y caractersticas espectrales fueron los mismos que los del compuesto 4 a partir del
extracto de jalea. Ambos extractos mostraron actividad antioxidante in vitro bajo ensayo TEAC (Hurtado et al., 2009).

Fig. 2. Anlisis de HPLC (k = 520 nm) de (A) ARE de fruto de tamarillo (Solanum betaceum Cav.), Y (B) fruto de Andes (Rubus glaucus
Benth.). Los nmeros de pico corresponden a los nmeros de compuestos en la Tabla 1.

Tabla 1 Datos cromatogrficos, espectroscpicos y espectromtricos de las antocianinas de los frutos de Tamarillo (Solanum betaceum
Cav.) Y Andes berry (Rubus glaucus Benth.).

a.
b.
c.
d.
e.
f.

Los nmeros de compuesto y los tiempos de retencin se refieren a los nmeros dados en las Figs. 2 y 3;
Medido en solucin acuosa acidificada (5 \ mu M \ lambda 5 \ mu M).
Los valores se expresan como media SE a partir de cuatro mediciones.
re. Mg de Dp-3 rut / 100 g de ARE.
mi. Mg de Cy-3 rut / 100 g de ARE.
Estos fragmentos se obtuvieron mediante MS / MS; -no determinado.

El uso de MLCCC permite disminuir la complejidad de las AREs. Los polifenoles, como las antocianinas, son a veces difciles de
separar en la cromatografa clsica; As, la cromatografa en contracorriente (CCC) utiliza un sistema lquido bifsico que permite
separar los componentes de la mezcla en escala preparativa sin prdida de material por retencin (Ignat, Volf, & Popa, 2011).
Despus de este procedimiento se llev a cabo fcilmente la purificacin de pigmentos por HPLC preparativa.
Los anlisis ESI-MS para antocianinas aisladas mostraron iones fragmentos correspondientes a tres antocianidinas, delfinidina a m /
z 303 (1 y 3), cianidina a m / z 287 (4) y pelargonidina a m / z 271 (2 y 5) (Tabla 1).
Para el compuesto 1, se confirm un peso molecular de 773 u basado en los fragmentos obtenidos por ESI-MS y FAB-MS. El
otro fragmento de iones a m / z 303 [M? 162? 162? 146] + sugiere la presencia de dos hexosas y una pentosa como resto de
azcar en este compuesto. La ausencia de absorcin en la regin UV-Vis entre 310 y 355 nm indica que no hay acilacin con
cido cinmico aromtico en esta molcula (Giusti & Wrolstad, 2001). Los protones de aglicona en la seccin de campo
descendente en el espectro de 1H-RMN, confirmaron la presencia de delfinidina como antocianidina del compuesto 1 (Tabla
2). Tres seales de protones anomricos aparecen como dobletes en dH 5,28 (J = 7,7 Hz), 5,05 (J = 7,3 Hz), y 4,66 (J = 1,8
Hz) de acuerdo con la presencia de tres azcares, como se sugiri a partir del anlisis de Espectro de ESI-MS. A pesar de que
los protones de azcar estaban parcialmente superpuestos entre s, la asignacin podra lograrse completamente mediante el
anlisis simultneo de los espectros de COSY, TOCSY y HMQC, y estaban de acuerdo con dos unidades de glucosilo y uno de
ramnosilo (Tablas 2 y 3). El valor de la constante de acoplamiento 1H-1H indica una configuracin b para las glucosas y
sugiere una configuracin a para la ramnosa. Estas configuraciones se confirmaron mediante el experimento heterocigotado
HSQC midiendo las constantes de acoplamiento 1JCH para protones a dH 4,66 y 5,28 ppm, valores que eran 169,8 y 164,5
Hz, correspondientes a la configuracin a y b respectivamente (Pedersen, Andersen, Dagfinn y Nerdal, 1995). Los picos
cruzados en los espectros HMBC de 1 a d 5,28 / 144,5 ppm y 5,05 / 146,6 ppm muestran que un resto glucosilo est unido a
C-3 de la aglicona y el otro est unido a la posicin C-30. Adems, la cruz de pico entre el protn anomrico ramnosil y C-600
en d 4,66 / 67,9 ppm confirma el punto de unin entre el resto ramnosil y la unidad 3-glucosil. Estos resultados tambin
fueron confirmados por NOE experimento diferencial. La irradiacin de protones anomricos a dH 5,28 y 5,05 ppm mostr un
incremento en la seal a dH 8,98 (H-4) y 8,09 (H-20) ppm, respectivamente. Por lo tanto, se encontr que la identidad de 1 era
delfinidina 3-O-a L-ramnopiranosil- (1) -b-D-glucopiransido-30-O-b Dglucopiransido (Figura 3). Hasta donde sabemos,
esta es la primera vez que este compuesto se reporta en la literatura.
Se han identificado ms de 50 antocianinas con un resto glicosilo en la posicin 30 de la aglicona. La mayora de ellos han
sido aislados de especies pertenecientes a Orchidaceae, Leguminoseae, Ranunculaceae y Gentianaceae; Sin embargo, algunos
se han encontrado en Compositae, Liliaceae, Rhamnaceae, Nymphaceae, Lobeliaceae, y Commelinaceae (Andersen y
Jorheim, 2006). Las antocianinas como el compuesto 1 con un resto de azcar en la posicin 30 de la aglicona no se han
informado previamente en la familia de las solanceas y esta es la primera vez que este compuesto se informa como
constituyente de S. betaceum Cav.

El compuesto 2 se caracteriz por la prdida de 469 u de la


In molecular m / z 740 dando como resultado un fragmento de iones de pelargonidina aglicona (271). Sobre la base de la bibliografa
(Giusti, Rodrguez Saona, Griffin y Wrolstad, 1999), el 469 u era indicativo del disacrido de antocianina unido a otro resto de 146 u, que
se asign a un residuo de cido cumrico, debido a la Mxima absorcin UV-Vis a k 315 nm. El espectro de 1H NMR de este compuesto
(Tabla 2) mostr seales caractersticas de un anillo de benceno p-disustituido a dH 6,80 (d, J = 8,3 Hz, 2H) y 7,37 (d, J = 9,5 Hz, 2H),
as como Los de un enlace E-olefnico a dH 6,28 (d, J = 15,7 Hz) y 7,59 (d, J = 15,7 Hz), confirmando as la presencia de un residuo pcumarolo en este compuesto. Los datos de RMN 1H del resto de azcar estaban de acuerdo con los datos del compuesto 1, evidenciando
la presencia de un resto 3-rutinosido. Debido a la pequea cantidad de este compuesto, los espectros de 13C y 2D-RMN no se
adquirieron, por lo que no se pudo definir la posicin unida del residuo p-cumarilo. As, el compuesto 2 se identific tentativamente como
pelargonidin-p-coumaroyl-rutinoside.
Basndose en datos de 1D y 2D-1H y 13C-NMR (Tabla 3), la se encontr que las identidades de los compuestos principales eran
delfinidin-3-O- (600-O-rhamnopiranosil) -b-glucopiransido (3), cianidin-3-O- (600-Oa-ramnopiranosil) -b-glucopiransido (4) , Y
pelargonidin-3-O- (600-Oa-ramnopiranosil) -b-glucopiransido (5). Los datos de RMN-1H de estos compuestos no se muestran porque
los valores para los protones aglicn estaban de acuerdo con los publicados anteriormente por Andersen y Fossen (2001) y los datos de
los restos de azcar eran similares al compuesto 1. Estos resultados coinciden parcialmente con los obtenidos Para el tamarillo de Brasil
(Vera de Rosso & Mercadante, 2007). Slo utilizaron HPLC-PDA-MS / MS para el anlisis y reportaron delfinidina 3-rutinosida,
cianidina 3-rutinosida y pelargonidin-3-glucsido-5-rhamnosida como pigmentos de tamarillo mayores. En el presente trabajo, la
estructura de la antocianina 5 podra establecerse inequvocamente.

3.2.
Identificacin
de
antocianinas
en
la
baya
de
los
Andes
El perfil HPLC-PDA a 520 nm (Figura 2B) revel la presencia de dos antocianinas mayores en la baya de los Andes ARE, la cianidina-3O- (600- Oa - ramnopiranosil) - b - glucopiranosido (4) y el compuesto 7.
Los espectros UV-Vis del compuesto 7 mostraron mximos de absorcin tpicos a k271 y 516 nm. Los anlisis de LC-MS evidenciaron
un ion pseudomolecular en el modo ESI + [M] + a m / z 727. Los iones de fragmento a m / z 287 [M ^ {132} , 581 [M ^ {146}] + y 595
[M ^ {132} +, revelaron adems la presencia de una hexosa, una metilpentosa y una pentosa. Adems, el ion fragmento a m / z 287 est
de acuerdo con la cianidina que es la aglicona. Para la elucidacin de la estructura y la asignacin de la seal de RMN se realizaron
mediciones de RMN 2D. El resto de cianidina se confirm a partir de los protones de los dos sistemas ABH 3H en el espectro 1H NMR.
El primer sistema ABH 3H tpico se pudo ver para H-C (60) a 8,29 ppm (dd, 1H, J = 8,6 Hz, 2,4 Hz), H-C (20) a 8,02 ppm (d, 1H, J = 2,3
Hz) y H - C (50) a 7,02 ppm (d, 1H, J = 8,8 Hz) y el segundo sistema ABH 3H para H - C (4) a 8,87 (s a, 1H), H - C (8) a 6,89 (d, 1H, J =
2,0 Hz) y H - C (6) a 6,66 (d, 1H, J = 1,9 Hz).
Adicionalmente,
el
espectro
de
1H
NMR
del
compuesto
7 muestran los tres protones anomricos de un hexosilo, un metilpentosa y un resto pentosa, resonaron a dH 5,45, 4,63 y 4,76 ppm. El
protn anomrico del radical rhamnosilo mostr una constante de acoplamiento de 1,6 Hz, lo que indica una configuracin a, mientras
que los restos glicosilo y xilosilo mostraban constantes de acoplamiento de 7,5 y 7,6 Hz, indicando as configuraciones b. La
identificacin de carbohidratos unidos glicosdicamente se confirm adicionalmente mediante hidrlisis cida seguida por cromatografa
inica de alto rendimiento de los correspondientes monosacridos. Se determin que los azcares del compuesto 7 eran glucosa, ramnosa
y xilosa en comparacin con compuestos autnticos. La asignacin de los restos de azcar as como la unin del azcar a la aglicona se
realiz mediante experimentos COSY, HMQC, HMBC y TOCSY. Sobre la base de los datos heteronucleares, la estructura
Del compuesto 7 se identific como cianidina-3-O- (200-ObD-xilopiranosil-600-OaL-rhamnopiranosil bD-glucopiransido) previamente
reportado en la piel de los frutos de Kadsura japonica (Ishikura, 1971), Ribes rubrum L. (Goiffon , Mouly & Gaydou, 1999), bayas de
Viburnum opulus L. (Jordheim, Giske y Andersen, 2007), y extractos de frambuesa negra y frambuesa (Tulio et al., 2008), entre otros.
Sin embargo, segn nuestro mejor conocimiento, esta es la primera vez que se informa como un constituyente de R. glaucus Benth.
Con
un
anlisis
similar
al
descrito
anteriormente
y
basado
en
ESI-MS e 1H y 13C, se determin la identidad de las antocianinas 5 y 6 como pelargonidina 3-O- (600-O-a-ramnopiranosil) -bglucopiransido y cianidin-3-O-b-D-glucopiransido, respectivamente. Los datos de RMN estaban de acuerdo con los antes publicado
(Andersen & Fossen, 2001).
4. Conclusin.
4. Conclusin.
La nueva delfinidina 3-O-a-L-rhamnopiranosil- (1 \ beta) -b-Dglucopiransido-30-O-b-D-glucopiransido se aisl y se identific por
primera vez en tamarillo ARE (S. betaceum Cav.) Como constituyente aminor. Adems, se aislaron los 3-O-rutinosidos anteriormente
citados de cianidina, delfinidina y pelargonidina y su identificacin se bas principalmente en espectroscopia de RMN 2D y EM. La
composicin inequvoca de R. glaucus Benth. ARE, con cianidin-3-O- (200-ObD-xilopiranosil-600-Oa-LO ramnopiranosil-bDglucopiransido) y cianidin-3-O- (600-O-rhamnopiranosil) -b-glucopiranosido, siendo Los principales constituyentes. Estas frutas
tropicales podran considerarse como una buena fuente de pigmentos naturales con potencial actividad antioxidante.

Expresiones de gratitud.
Los autores aprecian enormemente el apoyo financiero Colciencias, Colombia, IPICS-Universidad de Uppsala, Suecia, y Universidad de
Nario, Pasto, Colombia.

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