UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS

INSTITUTO DE QUMICA
DEPARTAMENTO DE QUMICA ANALTICA

Determinao de Cafena em gua potvel e superficial por

HPLC-UV aps extrao e pr-concentrao por LLE e SPE

Prof. Coordenador: Fbio Augusto

Prof. Auxiliares: Tamires Valim Marques
Henrique Caracho Ribeiro
Marcia Kaori Kasahara

RA: 156541

Matheus Luis Romero

RA: 156733

Matias Orlando Miranda

RA: 191807
2 semestre/2016

1.1. INTRODUO TERICA E OBJETIVOS

A presena de certas substncias no meio ambiente tornou-se cada vez mais
preocupante 1, devido ao fato de que a atividade antropomrfica utiliza a gua e descarta em
seus efluentes vrios compostos que alteram o ciclo e a qualidade da gua 2.
Uma dessas substncias a cafena, presente em bebidas e medicamentos. Seu consumo
aumentou bastante e sua ingesto excessiva malfica para a sade. Apesar da cafena ter sido
detectada em guas naturais h 30 anos, somente em 1996 Ogunseitan, O. props a cafena
como marcador qumico de contaminao antropomrfica 3.
Foram desenvolvidos muitos mtodos para analisar cafena em guas, mas a maioria
consiste em: 1) preparao da amostra e pr-concentrao da mesma; 2) identificao e 3)
quantificao. Neste experimento, empregaremos o mtodo de LLE (Extrao Lquido-Lquido)
e SPE (Extrao em Fase Slida) para realizar a preparao da amostra e pr-concentrao do
analito, para posterior comparao. Para a identificao e quantificao utilizaremos o HPLC
(Cromatografia Lquida der Alta Eficincia).
A tcnica de LLE (Extrao Lquido-Lquido) consiste em uma tcnica de extrao e
pr-concentrao exaustiva por partio, no qual empregado dois solventes imiscveis, e
promovido a agitao para que a extrao ocorra, e o analito passe de uma fase para a outra por
afinidade.
J o SPE (Extrao em Fase Slida) uma tcnica de extrao e pr-concentrao
tambm exaustiva porm por adsoro, no qual empregado um sorvente slido 4. A SPE
apresenta quatro etapas bsicas. A primeira o condicionamento do cartucho, que consiste em
usar o eluente adequado para disponibilizar os stios ativos e ajustar as foras dos solventes de
eluio com o da amostra, seguido da extrao dos analitos da amostra. Depois, a lavagem do
cartucho para eliminar os interferentes e por ltimo, a eluio dos analitos de interesse para
anlise 5.
A Cromatografia Lquida de Alta Eficincia uma tcnica que permite fazer
separaes, identificao e quantificao. empregada uma fase mvel lquida e a fase
estacionria, e os analitos so separados pela afinidade com a fase estacionria.
Este experimento visa o preparo de amostras via LLE e SPE e sua comparao, alm de
determinar a concentrao de cafena em amostras de gua.
1.2. PARTE EXPERIMENTAL
No experimento de Extrao Lquido-Lquido (LLE), para uma melhor extrao na
amostra de gua do lago, adicionamos NaCl slido, sendo possvel separar a fase orgnica da
fase aquosa, pois durante o experimento a fase orgnica tinha muitas bolhas. No experimento de
Extrao em Fase Slida (SPE) no houve modificaes no roteiro.

1.3. RESULTADOS E DISCUSSO

Nos experimentos de Extrao Lquido-Lquido e Extrao em Fase Slida foram
obtido os seguintes valores:
Tabela 1: Tabela com os resultados obtidos no experimento de LLE

concentrao
(g/L)
400
800
1200
1600
2000

rea do pico
26098
51857
79004
104511
130298

Tabela 2: Tabela com os resultados obtidos em SPE

concentrao
(g/L)
400
800
1200
1600
2000

rea
do
pico
26098
51857
79004
104511
130298

E a partir destes valores construiu-se a curva analtica.

Curva analtica obtida para o experimento de LLE

140000
120000
100000
80000
rea do pico

f(x) = 63.28x - 3402.4

R = 0.98

60000
40000
20000
0
0

500

1000

1500

2000

concentrao (g/L)

2500

Figura 1: Curva analtica obtida no experimento de LLE

Curva analtica obtida no experimento de SPE

150000
100000
rea do pico

f(x) = 65.26x + 37.4

R = 1

50000
0
0

500

1000

1500

2000

2500

concentrao (g/L)

Figura 2: Curva analtica obtida no experimento de SPE

Tabela 3: Tabela com os resultados das solues brancos

soluo
branco 1
branco 2
branco 3
Desvio padro
branco
LOD
LOQ

SPE
rea do
pico

LLE
rea do
pico
542
454
429

688
960
822

59
2,7
9,1

136
6,3
20,8

onde LOD (limite de deteco) e LOQ (limite de quantificao) foram calculados pela seguinte
frmula:

LOD=

3 Branco
Coeficiente angular da curva analtica

LOQ=

10 Branco
Coeficiente angular da curva analtica

Para uma melhor anlise da curva de calibrao, foi feito um grfico de resduos. Os
resduos foram calculados da seguinte maneira:

resduos=1

rea do picoreal
rea do picoterica

onde a rea do pico terica foi calculada a partir da equao da reta da curva analtica.

Grfico do resduo obtido durante o experimento de LLE

0.2000
0.1000
resduo 0.0000
0
-0.1000

500

1000 1500 2000 2500

-0.2000
concentrao (g/L)

Figura 3: Grfico de resduos referente ao experimento de LLE.

grfico de resduos
0.01
0.01
0.01
0
0
resduo
0
0
0
0
-0.01
-0.01
-0.01

500

1000

1500

2000

2500

concentrao (g/L)

Figura 4: Grfico de resduos referente ao experimento de SPE.

possvel observar que os resduos, apesar de uma maior discrepncia no ponto x =
400 no grfico referente ao LLE e nos pontos x = 800 e x = 1200 no grfico de SPE, so
mnimos, como esperado. Isto significa que se pode assumir o valor da concentrao calculado
pela curva analtica.
Assim, determinou-se a concentrao de cafena nas amostras utilizando a equao da
reta y = 63,251*x 3402,4 para LLE e y = 65,264*x + 37,4 para SPE, onde y representa a rea
do pico e x a concentrao de cafena em g/L, e o valor encontrado de x foi utilizado para
calcular a concentrao de cafena na amostra por:

Concentrao de cafena na amostra=

5x
300

Tabela 4: Concentraes de cafena calculadas a partir da equao da reta

LLE
amostra

rea do
pico

fortificada

57476

gua potvel

34430

gua de rio

2185

SPE
concentrao (g/L)

amostra

rea do pico

14,7 padro

47267

12,1

328

0,1

11329

2,9

8,8 gua potvel

0,5 gua de rio

concentrao
(g/L)

A partir do valor encontrado para a amostra padro e a fortificada podemos calcular a

eficincia de extrao e o fator de pr-concentrao O valor terico para a concentrao de
cafena de 20 g/L. A eficincia de concentrao foi calculada a partir da frmula:

C obtido
100
Cadicionado

fator de pr concentrao=

Csoluo apsa extrao

C amostrabruta

onde Cobtido a concentrao encontrada do analito na amostra, C adicionado a concentrao que foi
adicionada de analito na amostra, C soluo aps a extrao a concentrao de analito na soluo feita
aps a extrao (obtida na anlise) e Camostra bruta a concentrao do analito na amostra bruta.
Tabela 5: Valores para eficincia de extrao e fator de pr-concentrao
LLE
eficincia de extrao
fator de pr concentrao

SPE
73,3
44,0

60,3
36,2

Pelos valores da tabela acima se pode observar que tanto a eficincia de extrao quanto
o fator de pr-concentrao do mtodo por Extrao Lquido-Lquido foram melhores, apesar de
uma das vantagens do SPE em relao ao LLE ser uma extrao mais completa do analito e a
menos consumo de solventes orgnicos, alm da maior eficincia na separao do analito dos
interferentes, procedimento manual mais conveniente, remoo de partculas e mais fcil de
ser automatizado 7. No entanto, a aparelhagem do LLE muito mais simples e barata, alm dos
cartuchos de SPE serem descartveis.
Uma das causas provveis para isto seria a saturao do cartucho, pois as amostras
estavam com bastante material particulado.

1.4. CONCLUSO
As duas tcnicas de extrao SPE e LLE - se mostraram eficazes na separao e na
pr-concentrao da cafena. Talvez uma etapa de filtrao para a remoo do material
particulado melhorasse o desempenho de ambas as tcnicas.

1.5. BIBLIOGRAFIA
1. IDE, Alessandra H. Ocorrncia e avaliao da remoo de produtos farmacuticos por duas
estaes de tratamento de esgotos. 2014. 47p Trabalho de concluso de curso (Bacharelado
em Qumica Tecnolgica com nfase em Qumica Ambiental) Departamento Acadmico de
Qumica e Biologia, Universidade Tecnolgica Federal do Paran, Curitiba, 2014.
2. DEBLONDE, T.; COSSU-LEGUILLE, C.; HARTMANN, P. Emerging pollutants in
wastewater: A review of the literature. International Journal of Hygiene and Environmental
Health, v. 214, p. 442-448, 2011.

1. VIDAL, CRISTIANE et al. A anlise de cafena nas amostras coletadas no Brasil.

Cassiana C. Montagner, Cristiane Vidal, Fernando F. Sodr, Igor C. Pescara e Wilson F.
Jardim, p. 25, 2014.
2. Wells, 2003
3. RAIMUNDO, C. C. M. Ocorrncia de interferentes endcrinos e produtos farmacuticos
nas guas superficiais da bacia do rio Atibaia. 126p. Dissertao (Mestrado em Qumica
Analtica). Instituto de Qumica, Universidade Estadual de Campinas, Campinas, 2007.
4. NASCENTES, Clsia C.; ARRUDA, Marco A. Z.; MANIASSO, Nelson. Experimentos
didticos em qumica analtica envolvendo separao de fases e pr-concentrao. Qum. Nova,
So Paulo, v. 25, n. 3, p. 483-489, May 2002.
5. MAJORS, Ronald E. SolidPhase Extraction. Handbook of Sample Preparation, p. 53-79,
2010.