RESUMEN REPLICACIN Y REPARACIN DEL DNA

La replicacin es el proceso de perpetuacin del material gentico

generacin tras generacin. Es un proceso complejo y trascendental para la
vida, que debe realizarse con exquisita precisin.
La replicacin del material gentico es una etapa del ciclo de vida de la
clula que deber darse solo una vez y, siempre, antes de comenzar la
mitosis.
LA MAQUINARIA DE REPLICACIN DEL ADN
La replicacin del DNA es semiconservativa
La replicacin es semiconservativa: las dos cadenas de nucletidos del DNA
se separan y cada una sirve como molde sobre el que se sintetiza una
nueva cadena. Es decir, cada una de las cadenas de nucletidos originales o
parentales permanece intacta (conservada) a pesar de que ya no est
combinada en la misma molcula.
Existen tres posibles modelos para explicar el proceso de replicacin:
replicacin semiconservativa, conservativa y dispersiva ( lean con detalle esa
parte del captulo para que den una explicacin somera, el grfico en la diapositiva
les va a orientar).

Origen de replicacin de los cromosomas

Los orgenes de replicacin son las zonas del DNA donde se inicia el proceso
de replicacin. En ellos se produce la apertura de la doble hlice,
formndose una burbuja de replicacin que va creciendo de forma
bidireccional.
Toda molcula de DNA que vaya a ser replicada tiene un origen de
replicacin desde donde se inicia el proceso en ambas direcciones hasta que
se termina de copiar toda la molcula de DNA. Las molculas circulares del
DNA bacteriano tienen un nico origen de replicacin; sin embargo los
cromosomas lineales de las clulas eucariotas tienen varios orgenes desde
donde se iniciar la replicacin simultneamente. Son molculas ms largas,
y varios orgenes garantizarn que en un breve perodo de tiempo toda la
molcula se replique completamente. En este origen de replicacin se inicia
la apertura de la doble hlice, pudindose observar al microscopio
electrnico las burbujas de replicacin. El mecanismo principal de
replicacin de un cromosoma bacteriano se denomina replicacin theta (por
la imagen similar a la letra griega 0 que adopta el cromosoma en
replicacin). En los cromosomas lineales, con varias burbujas abrindose
simultneamente, stas se irn haciendo ms grandes, se irn aproximando
unas a otras hasta fusionarse y completarn la replicacin de la molcula.
Cada burbuja tendr dos horquillas de replicacin que irn desenrollando la
hlice de DNA en direcciones opuestas (apertura bidireccional) mientras las
dos cadenas se van replicando.
Etapas de la replicacin del DNA bacteriano

Al origen de replicacin se une una protena de iniciacin que desenrolla el

DNA. La DNA helicasa rompe los puentes de hidrgeno de la horquilla de
replicacin, y las protenas SSB estabilizan las cadenas separadas. La DNA
girasa reduce la fuerza de torsin que se genera cuando se desenrollan las
dos cadenas del DNA.
-

Origen de replicacin
Apertura de la hlice
Inicio de la sntesis del DNA
Sntesis del DNA
Unin de los fragmentos.

Diferencias significativas en la replicacin del DNA en eucariotas

Una importante diferencia entre el DNA de las clulas eucariotas frente a las
procariotas es que las molculas, adems de ser lineales, son de mayor
longitud. En el cromosoma eucariota hay varios orgenes de replicacin que
aseguran una rpida copia de la larga molcula de DNA; sincronizar este
proceso es algo complejo. Los orgenes de replicacin de los organismos
eucariotas presentan secuencias muy variadas, todas son ricas en A-T,
debido al menor nmero de puentes de hidrgeno que deben romperse. El
complejo multiproteico ORC se une a las secuencias y comienza a abrir la
hlice.
Las clulas eucariotas tienen miles de orgenes de replicacin, con el fin de
poder replicar todo el genoma en un tiempo adecuado. No obstante, el uso
de muchos orgenes crea un problema con la coordinacin de la replicacin.
Todo el genoma se debe replicar de forma precisa una sola vez en cada ciclo
celular, de forma que ningn gen quede sin replicar y ninguno lo haga ms
de una vez. Para lograr esta precisin durante la replicacin del DNA, es
necesario dividir este proceso en dos pasos distintos. En el primer paso, los
orgenes reciben una aprobacin para iniciar la replicacin. Este paso se
produce en un momento inicial del ciclo celular, cuando un factor permisivo
de la replicacin (licensing replicationfactor) se une a un origen. En el
segundo paso, las protenas de iniciacin producen la separacin de las
cadenas de DNA y el comienzo de la replicacin en cada origen aprobado.
La clave est en que las protenas de iniciacin solo actan en los orgenes
aprobados. A medida que las horquillas de replicacin se alejan del origen,
el factor permisivo se desprende y deja al origen en estado "no aprobado",
por lo que no puede reiniciarse la replicacin hasta que se renueve el
permiso. Para asegurar que el proceso solo se desarrolle una vez en cada
ciclo celular, el factor permisivo nicamente puede actuar una vez que la
clula termin la mitosis y antes de la activacin de las protenas de
iniciacin. Se han identificado una gran variedad de enzimas encargadas del
proceso de replicacin del cromosoma eucariota, aunque presentan
funciones muy parecidas a las descritas en la replicacin del DNA
procariota. Quiz la ms complejas son las DNA polimerasas, diferentes en
nmero y funciones a las procariotas.
Replicacin telomrica
La replicacin de los telmeros (extremos del cromosoma) ha proporcionado
nuevas claves para comprender la "fecha de caducidad" de las clulas.

Si se observa la horquilla de replicacin avanzando hacia el extremo de un

cromosoma, la banda retrasada habr generado un primer complementario
al extremo 3'-OH, que la DNA polimerasa correspondiente se encargar de
retirar. Sin embargo, en este caso no hay un extremo 3'-OH libre para que la
DNA polimerasa contine rellenando el espacio dejado al retirar el primer.
Queda un extremo protuberante que debe ser rellenado por la enzima
telomerasa, una ribozima (con una porcin de protena y una porcin de
RNA). Los telmeros presentan secuencias repetitivas ricas en G y la porcin
de RNA de la telomerasa posee una secuencia de unos 15 a 20
ribonucletidos que son complementarios a este extremo protuberante. Esta
porcin de RNA sirve de molde para que la actividad polimerasa de la
telomerasa sintetice DNA complementario al RNA de la propia enzima. De
esta forma se extiende el extremo del cromosoma impidiendo que se acorte
cada vez que se replica. Estudios recientes han indicado que las clulas que
estn en crecimiento presentan una alta actividad telomerasa, mientras que
las clulas somticas, al tener una baja actividad telomerasa, van sufriendo
un acortamiento de los cromosomas hasta que la clula muere. Por lo tanto,
se podra decir que la fecha de caducidad de una clula depende de la
actividad de la telomerasa.
REPARACIN DEL DNA
Mutaciones y variabilidad gentica
Las mutaciones son cambios heredables en el DNA. Son la fuente de la
variabilidad gentica, pero tambin causa de muchas enfermedades.
La replicacin de las largas molculas de DNA es un proceso complejo y
muy regulado. La DNA polimerasa solo se equivoca en una de cada 10 7
bases aadidas, gracias a su capacidad correctora. Sin embargo, los errores
en el DNA no solo pueden ser ocasionados por una falta de fidelidad durante
el proceso de replicacin, sino que el material gentico, aun estando
protegido en el ncleo de la clula eucariota, sufre daos a lo largo de su
vida. Por ello existe una gran maquinaria celular encargada de revisar el
material gentico y reparar todos los daos que vaya detectando. Solo en
algunos casos estos sistemas de reparacin fallan, y entonces los errores
permanentes se fijan como mutaciones. Una mutacin es un cambio
heredable en la informacin gentica. Las mutaciones son la fuente de la
variabilidad y diversidad de los organismos vivos, de la evolucin. Sin ellas y
la variacin gentica que generan, los organismos no podran adaptarse a
los cambios del medio ambiente y estaran en peligro de extincin. Sin
embargo, desde el punto de vista de un individuo, estas mutaciones pueden
ser fatales, no slo para la clula sino tambin para todo el organismo.
Tipos de mutaciones gnicas
Las mutaciones gnicas son cambios en un solo gen y pueden ser
sustituciones de bases, inserciones o deleciones. Una sustitucin de una
base puede ser una transicin (sustitucin de bases del mismo tipo) o una
transversin (sustitucin de bases de diferentes tipos). Las inserciones y
las deleciones suelen cambiar el marco de lectura de un gen.

Las mutaciones gnicas se pueden clasificar en tres tipos bsicos de

acuerdo a su naturaleza molecular: sustituciones de bases, inserciones y
deleciones.
1 Sustituciones de bases: es el tipo ms sencillo de mutacin gnica. En
ellas, se produce la alteracin de un solo nucletido en el DNA. Cuando se
altera la base de un nucletido, tambin se alterar la base del nucletido
de la cadena opuesta. Por ello, una sustitucin de una base provoca la
sustitucin de un par de bases.
Las sustituciones de bases pueden ser de dos tipos. En una transicin,
cambia una purina por otra diferente o, alternativamente, una pirimidina
reemplaza por otra pirimidina diferente. En una transversin, una purina
reemplazada por una pirimidina o, al contrario, una pirimidina
reemplazada por una purina. Las transiciones suelen ser ms frecuentes.

se
se
es
es

2 Inserciones y
3 Deleciones: suponen la adicin o la eliminacin, respectivamente, de uno
o ms pares de nucletidos. Son ms frecuentes que las sustituciones de
bases. Las inserciones y deleciones dentro de secuencias que codifican
protenas pueden conducir a mutaciones de cambio de marco de lectura de
un gen. El codn de iniciacin del mRNA establece el marco de lectura;
despus de este codn, se leen otros codones en forma sucesiva como
grupos de tres nucletidos no superpuestos. La adicin o delecin de un
nucletido cambia el marco de lectura y altera todos los aminocidos
codificados por los codones que siguen a la mutacin. Ahora bien, como los
codones estn constituidos por tres nucletidos, el marco de lectura no se
alterar si las inserciones o deleciones consisten en algn mltiplo de tres
nucletidos, aunque s pueden afectar al fenotipo. Estas mutaciones se
denominan inserciones y deleciones en el marco de lectura,
respectivamente.
Causas de las mutaciones
Adems de las mutaciones ocasionadas por errores en el proceso de
replicacin, se pueden producir otros tipos de mutaciones. Las que surgen
por cambios naturales en la estructura del DNA se denominan mutaciones
espontneas, mientras que las provocadas por cambios causados por
sustancias qumicas ambientales o por radiaciones se denominan
mutaciones inducidas.
Mutaciones espontneas: se producen por cambios qumicos espontneos
en el DNA. Uno de estos cambios es la despurinacin, es decir, la prdida de
una base prica de un nucletido. La despurinacin se produce cuando se
rompe el enlace covalente que une la purina con el azcar desoxirribosa, lo
que produce un sitio apurnico (un nucletido que carece de su base prica).
Un sitio apurnico no puede hacer de molde para una base complementaria
durante la replicacin, por lo que se incorpora un nucletido incorrecto a la
cadena de DNA recin sintetizada, produciendo un error. Otro cambio
qumico espontneo que tiene lugar en el DNA es la desaminacin, esto es,
la prdida de un grupo amino de una base. La desaminacin puede

producirse de forma espontnea o ser inducida por sustancias qumicas

mutagnicas.
Mutaciones inducidas: Numerosos agentes ambientales, incluidas ciertas
sustancias qumicas y la radiacin, pueden daar el DNA. Un agente
ambiental que eleva de forma significativa la tasa de mutacin por encima
de la tasa espontnea se denomina mutgeno. Algunos mutgenos son:
-

Anlogos de bases: son sustancias qumicas con estructuras similares

a las de algunas de las cuatro bases del DNA. La DNA polimerasa no
puede distinguir entre los anlogos y las bases estndar; as si se
realiza la replicacin en presencia de los anlogos, stos podrn
incorporarse a las molculas de DNA recin sintetizadas. Por ejemplo,
el 5-bromouracilo (5-BU) es un anlogo de la timina (posee la misma
estructura que sta excepto por la presencia de un tomo de bromo
en el carbono 5 en lugar de un grupo metilo). El 5-bromouracilo
puede aparearse de forma incorrecta con la guanina, dando lugar a
una transicin (T A 5-BU A 5-BU G -9 C G).
Reacciones oxidativas: las formas reactivas del oxgeno (como el
perxido de hidrgeno, los radicales superxidos y los radicales
hidroxilos) se producen tanto en el curso del metabolismo aerobio
normal, como por la radiacin, el ozono, los perxidos y ciertas
drogas. Estas formas reactivas del oxgeno daan el DNA e inducen
mutaciones provocando cambios qumicos en esta molcula. Por
ejemplo, la oxidacin convierte la guanina en 8-oxi-7,8dihidrodesoxiguanina, que suele aparearse de forma incorrecta con la
adenina en lugar de la citosina y causa una mutacin de transversin
G C --- T A.
Agentes intercalantes: los agentes intercalantes, como la proflavina,
la naranja de acridina, el bromuro de etidio y la dioxina, tienen un
tamao casi igual al de un nucletido. Producen mutaciones al
intercalarse entre bases adyacentes del DNA, distorsionando la
estructura tridimensional de la hlice, y provocan inserciones y
deleciones durante la replicacin, que conducen a mutaciones de
cambio del marco de lectura. Por ello, a menudo los efectos
mutagnicos de los agentes intercalantes son graves.
La proflavina y la naranja de acridina son agentes intercalantes.
Ambas se insertan entre las bases adyacentes del DNA, alteran la
estructura tridimensional de la hlice, y provocan inserciones y
deleciones de un nucletido durante la replicacin.
Radiaciones: las radiaciones ionizantes, como los rayos X o los rayos
gamma, penetran en los tejidos y daan el DNA. Desplazan
electrones de los tomos donde se encuentran, transformando las
molculas estables en radicales libres e iones reactivos. Luego, stos
alteran las estructuras de las bases y rompen los enlaces fosfodister
del DNA. Por otro lado, las radiaciones ionizantes producen roturas en
la doble cadena del DNA.

La luz ultravioleta, aunque posee menos energa que la radiacin

ionizante y no expulsa electrones ni causa ionizacin, es altamente
mutagnica. Las bases pricas y pirimidnicas absorben con rapidez la luz
UV; como resultado se establecen uniones qumicas entre las molculas

pirimidnicas adyacentes en la misma cadena de DNA, formndose

estructuras denominadas dmeros de pirimidina. Los dmeros de pirimidinas
ms frecuentes estn formados por dos bases de timina (dmeros de
timina), pero tambin pueden darse dmeros de citosina y de timinacitosina. Estos dmeros distorsionan la configuracin del DNA y, a menudo,
bloquean la replicacin, lo que inhibe la divisin celular y provoca la muerte
de la clula. La mayora de los dmeros de pirimidina se reparan por
mecanismos que se vern a continuacin.
Efectos fenotpicos de las mutaciones
Existen diversos tipos de mutaciones gnicas: mutaciones de cambio de
sentido, sin sentido, silenciosas o neutrales, que provocan diversos efectos
fenotpicos.
La sustitucin de una base que altera un codn en el mRNA y produce la
incorporacin de un aminocido diferente en la protena se conoce como
mutacin de cambio de sentido. Una mutacin sin sentido cambia un codn
con sentido (aquel que codifica un aminocido) por un codn sin sentido
(uno que termina la traduccin). Una mutacin silenciosa altera el codn,
pero, gracias a la redundancia del cdigo gentico, el codn sigue
codificando el mismo aminocido. Una mutacin neutral es una mutacin de
aminocido que altera la secuencia de aminocidos de una protena, pero
que no cambia su funcin. Se produce cuando un aminocido se reemplaza
por otro qumicamente similar, o cuando el aminocido tiene poca influencia
en la funcin de la protena.
Reparacin de los daos en el DNA
El DNA est sometido constantemente a agentes mutagnicos y cambios
espontneos. A pesar de ello, la tasa de mutacin permanece
considerablemente baja gracias a la eficiencia con la que se repara el DNA.
Menos de una de cada 1.000 lesiones del DNA se convierte en mutacin. El
resto, se corrigen. Los cuatro mecanismos generales de reparacin del DNA
se comentan a continuacin:
Reparacin de los errores de apareamiento: la replicacin es
extraordinariamente precisa. La mayora de los errores que aparecen
inicialmente se corrigen, y no se transforman en mutaciones permanentes.
Algunas de estas correcciones se realizan durante la replicacin por la
actividad de correccin durante la lectura. Pero muchos de los nuclotidos
incorporados de forma incorrecta que escapan a la deteccin de la
correccin durante la lectura, se corrigen por reparacin de los errores de
apareamiento. La presencia de nucletidos agregados de forma incorrecta
que persisten tras la replicacin deforman la estructura tridimensional del
DNA; las enzimas encargadas de eliminar estos nucletidos reconocen la
deformidad y usan la cadena de nucletidos original como molde para
reemplazar el nucletido errneo.
Reparacin directa: los mecanismos de reparacin directa no reemplazan
los nucletidos alterados, sino que les devuelven sus estructuras correctas
originales. Uno de los mecanismos de reparacin directa mejor
caracterizados es la fotorreactivacin de los dmeros de pirimidina inducidos

por la luz UV. La bacteria E. coli y algunas clulas eucariotas poseen una
enzima denominada fotoliasa, que utiliza energa de la luz para romper las
uniones covalentes que conectan las pirimidinas en un dmero.
Reparacin por escisin de bases: en este mecanismo de reparacin,
primero se escinden las bases modificadas y despus se reemplaza el
nucletido completo. La escisin de las bases modificadas la cataliza un
grupo de enzimas denominadas DNA glucosilasas, cada una de las cuales
reconoce y extrae un tipo especfico de base modificada rompiendo la unin
entre esa base y la desoxirribosa.
Una vez extrada la base, una enzima denominada endonucleasa AP
(apurnica o apirimidnica) corta el enlace fosfodister, y otras enzimas
eliminan la desoxirribosa. Luego, la DNA polimerasa agrega nucletidos
nuevos al grupo 3'-OH y reemplaza los nucletidos en la cadena daada. La
DNA ligasa sella el enlace fosfodister, restaurndose de ese modo la
secuencia original.
Reparacin por escisin de nucletidos: este proceso elimina lesiones
voluminosas del DNA que distorsionan la doble hlice, como los dmeros de
pirimidina. Es un proceso bastante verstil y puede reparar muchos tipos de
daos diferentes del DNA. Se encuentra en clulas de todos los organismos,
y es uno de los mecanismos de reparacin ms importante. Este mecanismo
de reparacin es complejo. En los seres humanos, participan muchos genes.
Primero, un complejo de enzimas examina el DNA buscando distorsiones en
su configuracin tridimensional. Cuando se detectan, otras enzimas separan
las dos cadenas en la regin daada y las protenas SSB estabilizan las
cadenas separadas. Despus, se corta el esqueleto de azcar-fosfato de la
cadena daada a ambos lados de la lesin y se elimina una parte de la
cadena daada; la DNA polimerasa rellena el hueco y la ligasa lo sella.