Prctica de laboratorio No.

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Departamento de Biologa
Universidad del Cauca
EL MICROSCOPIO
Desde su invencin, el microscopio ha sido una herramienta invaluable en el
desarrollo de la teora cientfica. El aumento de los lentes se conoce hace mucho
tiempo, pero en biologa se us ya como el microscopio compuesto de luz. Un
microscopio de estas caractersticas est compuesto de dos elementos; un sistema
de lentes de aumento primario y secundario, similar a un telescopio. La luz pasa a
travs de un objeto y luego es enfocada por los lentes primarios y secundarios. Si
el haz de luz es reemplazado por un haz de electrones, el microscopio ser un
microscopio electrnico de transmisin. Si la luz es reflejada del objeto en lugar de
pasar a travs de l, el microscopio de luz ser un microscopio de diseccin.

Figura 1. Microscopio de campo clar

Figura 2. Sistema de iluminacin

EJERCICIO 1. EL MICROSCOPIO DE CAMPO CLARO

1. Observe el poder de aumento y la apertura numrica de los lentes del

microscopio (Nikon). Estos valores estn estampados o pintados en la superficie
lateral de los objetivos. Registre el poder de aumento y apertura numrica de cada
uno de los lentes en el espacio que se muestra a continuacin.
Aumento (x)

Apertura numrica (AN)

Escriba la apertura numrica del condensador __________

Escriba el aumento de los oculares y si son normales o de campo
amplio_______
El mximo de resolucin depender de la apertura numrica mayor
efectiva del sistema. El valor ms alto est dado por el objetivo
100X, o lentes de aceite de inmersin.
Indique la apertura numrica de los lentes 100X ___________
Indique la apertura numrica del condensador _____________
La apertura numrica para la interfase de aire =
1.0
La apertura numrica para la interfase de aceite=
1.3 1.5
La apertura numrica mxima efectiva es el valor ms bajo de los
enumerados. Depende del ngulo y por lo tanto del mximo
posicionamiento del condensador. Usando el valor de NA ms bajo
de los listados anteriormente como apertura numrica de trabajo,
calcule el lmite de resolucin para su microscopio, asumiendo la
luz violeta con una longitud de onda de 400 nm.

A partir de la ecuacin:
valor calculado para su microscopio es:

, y por lo tanto, el

Lmite de resolucin = _____________

1. Obtenga un portaobjetos preparado con la letra o. Coloque la placa y

ajstela en el dispositivo diseado para este fin. Rote el condensador
enfocando para moverlo a su posicin ms alta. Aunque hay una localizacin
ideal para el condensador, la posicin correcta de este cambiar para cada
objetivo.
2. Encienda el estabilizador que alimenta al microscopio utilizando el
interruptor y luego haga lo mismo con el microscopio y asegrese que el
condensador est abierto.
3. Observe y ajuste los oculares a su distancia interpupilar y diptica.
3

4. Busque una localizacin adecuada en el centro del campo de visin y cierre

su ojo izquierdo. Usando la perilla de ajuste fino, enfoque hasta cuando
tenga una imagen clara con su ojo derecho solamente. Luego cierre su ojo
derecho y ajuste el foco del ocular izquierdo con la perilla de ajuste fino del
microscopio.
5. Siempre comience el enfoque con el aumento de 10X aunque vaya a utilizar
el aumento de 100X. Los lentes del objetivo son parafocales, lo cual
significa que si uno est enfocado, cada uno de los otros est en foco
cuando se regresa a un objetivo diferente.
6. Retorne al objetivo 10X y mueva la preparacin (portaobjetos) hasta cuando
localice la letra en el campo de visin. Observe la orientacin de la letra o
en su preparacin y en el campo de visin.
7. Para usar el objetivo 40X, centre el objeto que desea ver (el 40X tendr un
campo mas pequeo) y rote el objetivo para que quede en posicin 40X. Hay
algn cambio en la orientacin de la letra o?
No rote el dispositivo de tal manera que quede en posicin 100X.
8. Dibuje la imagen de la letra o a 10X.

EJERCICIO 2. USO DE ACEITE DE INMERSION (100X).

Materiales

Microscopio equipado con objetivo 100X, lentes para aceite de inmersin.

Aceite de inmersin
Placa preparada con bacterias u objetos pequeos adecuados

Procedimiento
1. Coloque la placa preparada en el dispositivo sujetador de placas de la
platina. Utilizando el objetivo 100X, enfoque en el campo apropiado que
contenga bacterias. Centre la bacteria en el campo de visin, manipulando el
dispositivo de desplazamiento lateral y vertical.
2. Rote al objetivo 40X y reenfoque con el objetivo fino. Nuevamente, centre el
objeto que desea examinar.
3. Rote el revlver de tal manera que obtenga una posicin intermedia entre los
objetivos 40X y 100X.
4. Coloque una pequea gota de aceita de inmersin en el centro del rea de
visin de la placa.
5. Contine rotando el revlver de tal manera que el objetivo 100X coincida con
la gota de aceite.

Bajo ninguna circunstancia coloque el objetivo 40X en el aceite.

Use el enfoque fino y reenfoque su espcimen.
6. Determine las formas de las bacterias y dibjelas en el lugar previsto.
7. Inmediatamente despus de usar el aceite, elimine algn residuo de aceite
de la placa y del objetivo 100X limpiando cuidadosamente con papel para
lentes humedecido con xilol, tolueno o un substituto del xilol designado
para este propsito.
Generalmente todos los solventes orgnicos y espcialmente xilol y
tolueno son potencialmente peligrosos. Son inflamables y entran al
cuerpo mediante absorcin directa a travs de la piel o pulmones. Una
alta exposicin a estos solventes est ligada a dao del hgado y
carcinognesis potencial. Use los solventes cuando sea necesario y en
un rea bien ventilada.
Una vez que haya colocado el aceite en la placa, los objetivos 10X y 40X no
deben usarse hasta cuando no se haya removido el aceite. Use el aceite solo
cuando sea necesario y despus de completar todo el trabajo con los aumentos
menores. Para regresar a trabajar con los menores aumentos, la placa debe
estar completamente limpia y seca de residuos. Por esta razn, el aceite de
inmersin se utiliza slo cuando sea necesario y despus de usar el aumento de
40X.
Bibliografa
1. Microscopio Lavobal 2, Instrucciones para el uso, Boletn N 30-G060-4, Carl Zeiss
Jena, DDR.
2. Nikon: (http://www.microscopyu.com/articles/formulas/formulasfieldofview.html)
3. (http://www.twingroves.district96.k12.il.us/Renaissance/University/Inventions/Micro
scope)
4. http://www.az-Microscope.On.Ca/main.html

Taller microscopa ptica

Fecha de entrega: 29 de febrero-2016
1. Porqu los objetivos de inmersin tienen mayores aperturas numricas que los
lentes secos (sin aceite)?
a. Se usan ms cercanos al espcimen, por lo tanto sus lentes interceptan luz a
ngulos que los lentes secos la podran perder.
b. El aceite usado con los lentes previene la refraccin de la luz lejos de los
objetivos como se produce con las lentes secas.
c. El aceite usado con los lentes incrementa las diferencias entre los ndices
refractivos del portaobjetos y el medio entre el portaobjetos y los lentes del
objetivo.
d. a y b
e. b y c
2. Qu tipo de luz visible da la mejor resolucin en el microscopio de luz?
a. Rojo
b. Verde
c. Amarillo
d. Naranja
e. Azul
3. Todos los siguientes organismos pueden observarse con el microscopio de campo
claro excepto:
a. Virus
b. Hongos
c. Algas
d. Protozoos
e. Bacterias
4. Cul de los siguientes lentes de microscopio no aumenta la imagen formada?
a. Lentes magnticos
b. Lentes oculares
c. Lentes del objetivo

d. Lentes del condensador

e. Ninguno de los anteriores

El condensador es un sistema de lentes situadas bajo la platina su funcin es la de concentrar la luz

generada por la fuente de iluminacin hacia la preparacin. En el interior del condensador existe un
diafragma-iris cuya funcin es limitar el haz de rayos que atraviesa el sistema de lentes eliminando los
rayos demasiado desviados.
5. Si el mnimo tamao de imagen que puede detectar el ojo humano es 0.1 mm,
cual es el mnimo aumento necesario para hacer un objeto de una m medible?
a. 10X
b. 100X
c. 1000X
d. 10.000X
e. 100.000X
6. Cul de los siguientes es visible con el ojo sin utilizar ninguna clase de aumento?
a. Bacteria gram positiva
b. Bacteria gram negativa
c. Una cpsula
d. Una colonia
e. Un aticuerpo
7. Cul es el aumento total de unos lentes de ocular 10X lentes de objetivo 45X?
a. 15X
b. 45X
c. 150X
d. 450X
8. Cul es la diferencia entre objetivos acromticos, semi-plan y plan?

RTA// Los objetivos pueden ser de tres tipos: Acromtico, Semi- Plano y Plano.
Acromtico significa que la lente del objetivo es curvada por lo tanto la imagen tambin es esfrica
y solamente el centro (aprox. 65%) es plano.
En el caso de un objetivo semi-plano, aproximadamente un 80% de la lente es plana.
La lente de los objetivos planos es totalmente plana y as el 100% de la imagen que se ve es plana.
9. Describa en trminos de uso las diferencias entre el estreo-microscopio y el
microscopio de luz.
10. Enumere los parmetros que afectan la resolucin de los microscopios

pticos.

a) Es producido por el comportamiento de la luz al incidir sobre el objeto en

estudio(difraccion).
b) Es producido ya sea por defectos propios de las lentes.
c) Producida por las variaciones en los ndices de refraccin de las diversas
frecuencias (colores) que conforman la luz blanca visible.(cromaticas)
11.La resolucin de un microscopio ptico es 300 nm cuando para la iluminacin se usa
la luz de una longitud de onda (= 450 nm). Determine la resolucin del
microscopio si la fuente de luz se remplaza por luz roja con una longitud de onda de
680 nm.
12.Qu significa (NA) apertura numrica inscrita en la parte exterior de un objetivo?
Es la capacidad de recoger la luz de una lente. Cuanto mayor sea la apertura mayor
ser el brillo y la resolucin de la imagen. Es decir es un rango de ngulos donde el
sistema acepta la luz.
13.Cul es la relacin entre NA y brillo de una imagen?
14.Cul es el significado de profundidad de campo y profundidad de foco?
Profundidad decampo es el rango de movimiento a lo largo del eje ptico que un
objeto o espcimen puede moverse sin afectar la claridad de visin. Esto significa
que la profundidad de campo es la cantidad que el objeto o espcimen puede
moverse y seguir siendo claro.
La profundidad de foco es el opuesto a la profundidad de campo, que tiene lugar en
el lado opuesto del lente. Tambin, la profundidad de foco se mide en unidades
microscpicas de medicin, tales como nanmetros, mientras que la profundidad de
campo se mide en unidades macroscpicas, tales como metros o pies.
15.Qu son aberraciones esfricas y cromticas?
16.Utilice las imgenes tomadas durante la prctica y elabore una composicin
utilizando diferentes aumentos.
17.Muestre un ejemplo de procesamiento de imgenes para mejorar la calidad y
presentacin de las mismas.
18.Indique las posibles fallas presentadas en sus imgenes.
a) Falla en la profundidad de campo ya que la imagen no se acomodo en un plano o en
una zona donde estuviese enfocado y no se saliera de a nitidez ni de desenfoque.
b) El angulo de enfoque era muy bajo ya que es muy complejo lograr un punto de
equilibrio entre el brilloy la nitidez.
c) La incidencia de luminosidad en la profundidad de campo donde no es ntida y no
tiene brillo de la imagen.
19.Cul es el papel del aceite de inmersin cuando se utiliza un objetivo de 100X?
20.Especifique el significado de la informacin que aparece en los objetivos del
microscopio que Ud. Us en la prctica.