PRCTICA 8.

EXTRACCIN DE LIPASA PANCRETICA Y

DETERMINACIN DE SU ACTIVIDAD
BIOQUIMICA CLINICA

19 DE NOVIEMBRE DE 2016
QUIMICO FARMACEUTICO BIOLOGO
5.- B
PROFESOR.- LUIS ALFONSO BOLAOS CELIS

INTEGRANTES:
ALFONSO JIMENEZ ALONDRA
COCON PEREZ EDUARDO
CUEVAS COCOM ZAYNA MARISOL
DIAZ DIAZ ANA KAREN
TAMAY HERNANDEZ MARIELA ODETH

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BIOQUIMICA CLINICA

Objetivo
Demostrar la actividad de la lipasa pancretica, extrada de un pncreas porcino,
para conocer la actividad enzimtica sobre los lpidos.
Resumen:
Las lipasas son enzimas con propiedades funcionales muy interesantes que
permiten su utilizacin prctica en diversos campos de las industrias agroqumica,
farmacutica, de detergentes y alimentaria, as como en qumica fina. Entre las
aplicaciones ms importantes de estas molculas se encuentran: la resolucin de
mezclas racmicas, la obtencin de compuestos pticamente puros y la
bioconversin de principios activos. En este trabajo se presenta una amplia revisin
del tema, que abarca desde aspectos estructurales y funcionales de las lipasas,
hasta la inmovilizacin de estas enzimas mediante adsorcin interfacial y su empleo
en biotecnologa.
Introduccin:
Las lipasas (glicerol-ster hidrolasas; EC 3.1.1.3) son enzimas ubicuas que se
encuentran en prcticamente todos los seres vivos. Juegan un papel esencial en la
digestin, el transporte y el procesamiento de los lpidos (triglicridos, ceras, grasas
y aceites). Son importantes porque son responsables de disgregar las grasas de los
alimentos para que puedan ser absorbidas por los organismos. Son una subclase
de esterasas que interviene en el catabolismo de las grasas y aceites, al romper y
modificar los enlaces ster de los lpidos y sus derivados. Su reaccin principal es
la hidrlisis de los enlaces ster presentes en los acilglicridos, es decir, la ruptura
del triacilglicerol a diacilglicerol y a monoacilglicerol, cidos grasos y glicerol.

Adems, pueden catalizar la hidrlisis o sntesis de un grupo amplio de steres

carboxlicos. Sin embargo, tambin participan en reacciones de sntesis y
transesterificacin de acilglicridos y fosfoglicridos. Estas enzimas pueden tener
actividad intracelular o extracelular. Su actividad ptima se encuentra a
temperaturas cercanas a los 30 C, pH neutro y en presencia de aireacin.

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BIOQUIMICA CLINICA

Una caracterstica peculiar de las lipasas es que son enzimas solubles en agua que
actan sobre sustratos insolubles y agregados, por lo que operan unidas a
interfaces lpido-agua. Bajo estas condiciones, se produce un incremento de la
actividad cataltica, respecto a las soluciones con concentraciones por debajo de la
concentracin micelar crtica, fenmeno conocido como activacin interfacial.
La lipasa pancretica acta sobre sustratos insolubles emulsionados y requiere un
activador, la colipasa, para hidrolizar los triglicridos en cidos grasos y diglicridos
o monoglocridos. La accin de la lipasa sobre las grasas neutras producen su
desdoblamiento hasta cidos grasos y glicerol, esta accin puede ponerse de
manifiesto mediante la titulacin de los cidos grasos liberados por accin hidroltica
de la lipasa con NaOH 0.1 N. Cuando la grasa no est emulsificada, la superficie
que presenta es muy poca, por lo que la accin de la lipasa es incompleta, pero si
hay una buena emulsificacin, la superficie de contacto aumenta y tambin la accin
de la enzima.
Procedimiento:
1. EXTRACTO PANCREATICO:
a. Se pes el pncreas en una bscula, a lo cual dio la cantidad de 425
gr.
b. El pncreas se trituro junto con la arena, despus de esto se transfiri
a un contenedor de boca ancha.
c. Se le agreg 1,275 ml de agua y 425 ml de alcohol etlico,
posteriormente se homogenizo y se dej reposar 2 das a temperatura
ambiente.
2. PRCTICA DE LABORATORIO:
a. En un vaso de precipitado de 50 ml se verti 1 ml de la crema dulce
diluida para hacer una dilucin 1:10 junto con 9 ml de agua destilada,
para posteriormente hacer una dilucin 1:100 tomando 1 ml de la
dilucin anterior con 9 ml de agua destilada.
b. Se vertieron 5 ml de la dilucin1:100 a dos tubos de ensayo marcados
con los nmeros 1 y2.
c. Teniendo estos tubos se le agreg a cada uno 5 gotas de rojo de fenol.
d. Al tubo 1 se le agreg 1 ml del extracto pancretico fresco, en el caso
del tubo 2 se le agreg 1 ml del extracto pancretico previamente
hervido.
e. Posteriormente se le agreg 5 gotas de NaHCO3 al 5 %

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BIOQUIMICA CLINICA

f. Para ambos tubos despus de homogenizar se llevaron a bao mara

por 60 min a 40C.
Observaciones y resultados:

El tubo con pancreatina fresca (tubo 1) no obtuvo el color amarillo

esperado, es decir no hubo contenido de lipasa, y quedo de un
color rosa formando un precipitado y el tubo 2 que es de
pancreatina hervida mantuvo el color rosa. Por consecuencia no
fueron titulados (neutralizados)
Conclusin:
Las enzimas pancreticas son qumicos naturales que ayudan a
descomponer grasas, protenas y carbohidratos. El jugo
pancretico contiene las enzimas pancreticas y tambin ayuda a
neutralizar el cido producido por el estmago en el momento en
que entra en el intestino delgado. La lipasa, junto con la bilis,
descompone las molculas de grasa para que estas puedan ser
absorbidas y usadas por el organismo.
Discusin:
Para una eficiente accin de la enzima lipasa pancretica es necesario, un pH
mayor a 4, la presencia de sales biliares y eficiencia de un cofactor, que debe estar
en cantidades adecuadas y que corresponde a la colipasa, que es producida por el
mismo pncreas.
La reaccin de hidrolisis frecuentemente es seguida por una alteracin del pH
debido a la disociacin de los triglicridos en el transcurso de la reaccin enzimtica.
Cuestionario:
1. Por qu al terminar el periodo de incubacin e hidrlisis el tubo con
pancreatina fresca debe tener color amarillo?
R. no nos coloreo pero deducimos que el cambio de color fue debido a la presencia
de la enzima que fue el vehculo para que surgiera la hidrolisis.
2. Por qu el tubo con pancreatina hervida debe conservar el color rosa?
r. de igual manera no nos coloreo debido a que como hervimos el pncreas esta al
coserse el calor hizo que la enzima llegara va a un estado de vida en el cual estara
muerta y con ello ni habiendo la enzima no se lleva a cabo la reaccion.
3. Por qu el extracto pancretico hervido se emplea como testigo?

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BIOQUIMICA CLINICA

Por qu es la muestra en la cual a no contiene la enzima debido a que llego a su

vida 0.
4. Por qu se emplea NaOH 1.0 N para titular?
Porque es mucho ms fcil titular un cido fuerte porque si titularas con una base
dbil te tomara mucho tiempo neutralizar la reaccin.
Bibliografa:

https://es.scribd.com/doc/283239279/4-Estructura-FunciOn-y-ClasificaciOnde-Las-Enzimas
http://www.revistas.unal.edu.co/index.php/biotecnologia/article/view/15574/3
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Biotecnologa.
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9388BC928380DDC205CD6DD458AD3?sequence=1