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DEDICATORIA

Dedico este trabajo a dios por permitirme estar viva y por dame la fuerza para seguir
luchando da a da. A mis padres por su apoyo incondicional, por haberme enseado a
nunca rendirme a la vez haberme inculcado valores los cuales son la base de mi
formacin. Al docente porque incentivar la investigacin la cual ser de mucha
importancia para nuestra carrera.

AGRADECIMIENTO
A mis padres por brindarme su amor incondicional

INDICE
CONTENIDO
INTRODUCCIN
FUNDAMENTO TERICO
1. CONCEPTO DE GENETICA BACTERIANA
2. ESTRUCTURA DEL GENOMA BACTERIANO
FUNCIONES DEL ADN
3. REPLICACIN DEL ADN BACTERIANO
MODELOS DE REPLICACION
4. MUTACIONES
BASES MOLECULARES DE LA MUTACION
Mutaciones por desfase
Mutaciones hacia atrs o reversiones
Mutaciones debidas a muchos pares de bases
VELOCIDADES DE MUTACIN
Mutaciones en genomas con cido ribonucleico ARN
PREVENCIN
5. MUTAGENOS
6. RECOMBINACIN GENTICA DE LOS MICROORGANISMOS
CONJUGACION BACTERIANA
TRANSFORMACIN DEL DNA
TRANSDUCCIN
7. APLICACIONES EN LA INDUSTRIA
8. CONCLUSIONES
9. BIBLIOGRAFIA
10. LINKOGRAFIA

INTRODUCCIN
Las bacterias son microorganismos con una capacidad extraordinaria de adaptacin a
diferentes condiciones ambientales. Para comprender la esencia de esta capacidad es

importante conocer sus bases genticas, es decir cmo est organizada la informacin
gentica, como realizan y regulan su expresin y que mecanismos de variacin gnica
poseen.
Desde el punto de vista del estudio gentico la cualificacin ms importante de las
bacterias es la extraordinaria velocidad de crecimiento adems de su capacidad
infecciosa, la cual radica en que poseen la informacin gentica necesaria para colonizar
los tejidos del husped, invadirlos y/o producir sustancias txicas que causarn la
enfermedad.
Por otro lado, el conocimiento del funcionamiento gentico de las bacterias, ha permitido
usarlas para sintetizar productos tiles a la medicina, y en la industria alimentaria,
principalmente en el proceso de fermentacin. Con el paso del tiempo se ha visto que el
desarrollo de la ingeniera gentica y la disponibilidad de tcnicas de biologa molecular
ha ido incrementando y mejorando.

FUNDAMENTO TERICO
CONCEPTO DE GENETICA BACTERIANA
Gentica: Es la disciplina que trata de los mecanismos por los cuales los caracteres se
transmiten de un organismo a otro y como se expresan. Puesto que la transmisin de la

informacin biolgica es la base de la funcin celular, la gentica es una herramienta de


primera magnitud.
El estudio de la gentica desde la perspectiva molecular es fundamental para entender la
variabilidad de los organismos y la evolucin de las especies.
Gentica microbiana: es la ciencia que define y analiza la herencia o la constancia y
cambio de las funciones fisiolgicas que constituyen las propiedades de los
microorganismos. Adems permite entender mejor las funciones esenciales de su material
gentico y las caractersticas que rigen su comportamiento, su capacidad de adaptacin al
medioambiente y la expresin de mecanismos de virulencia que les permite colonizar.
(FIGURA 1 Y 2)

Gentica humana

gentica bacteriana

ESTRUCTURA DEL GENOMA BACTERIANO


El genoma bacteriano est compuesto por un nico cromosoma. El cromosoma
bacteriano es una estructura filamentosa superenrollada de un nico filamento de ADN
que una vez separado de la bacteria aparece en forma circular. A diferencia de los
cromosomas eucariotas no est asociado con histonas y ocupa aproximadamente el 10%
de la clula bacteriana por lo que no tienen la posibilidad de compactar su ADN en
estructuras tipo nucleosomas. Debido a eso, deben compactar su ADN de otra manera.
Es por eso que adopta el superenrollamiento.

El superenrollamiento en el cromosoma bacteriano se debe a la asociacin con enzimas


denominadas topoisomerasas (que producen cortes en las cadenas de ADN, aumentan o
disminuyen el superenrollamiento y resellan). Este superenrollamiento se dice que tiene
sentido negativo porque tiene el sentido contrario al enrollamiento de una hebra de ADN
sobre la otra. Esto supone para la bacteria una fuente de almacenamiento de energa
para ser usada en muchos procesos fisiolgicos que la requieren, por ejemplo la
separacin de las dos hebras de ADN necesaria para la replicacin y la transcripcin.

El cromosoma bacteriano es suficientemente largo como para formar muchos lazos


circulares, que como tales pueden superenrollarse formando una serie de dominios
topolgicos independientes. Esta organizacin en dominios colabora a la compactacin
general del genoma bacteriano e impide que, con la ruptura de una hebra (en cualquier

sitio del cromosoma) se pierda el superenrollamiento total, manteniendo la energa


almacenada.
El ADN est compuesto por dos cadenas de polinuclotidos compuestos por
mononucletidos unidos entre s por molculas de ortofosfato. Cada una de estas
molculas esterifica por un lado la desoxirribosa de un nucletido en posicin 5 y por el
otro, el azcar del nucletido siguiente en posicin 3. Las bases del ADN bacteriano son
pricas (adenina y guanina) y pirimdicas (citosina y timina) y generalmente contiene de
1000 a 9000 kilobases (kb), dependiendo de la bacteria en estudio. Ambas cadenas
poseen polaridades opuestas y es por ello que se establecen uniones adenina-timina y
guanina-citosina en los dos sentidos posibles (AT o TA y CG o GC). Dicho fenmeno se
conoce como complementariedad de bases, es decir que la A es complementaria a la T y
la C lo es para la G. Estos enlaces mantienen estable la estructura de doble hlice de
ADN, en la cual se pueden distinguir pares de nucletidos o pares de bases (pb). Estos pb
pueden usarse como unidad de tamao o longitud para las molculas de ADN, de esta
manera podemos decir por ejemplo que el ADN cromosmico de Escherichia coli tiene un
tamao de 4,2 millones de pb o lo que es lo mismo de 4.200 kilobases (Kb).Volviendo al
ejemplo de E. coli, los 4.200 Kb de su genoma implican una longitud de 1,3 mm es decir
unas mil veces la longitud de la clula.

FUNCIONES DEL ADN

1. El ADN confiere a la bacteria todas sus caractersticas genticas. El cromosoma


se subdivide en segmentos denominados loci que actan como unidades
genticas funcionales (genes). Cada gen posee una secuencia de bases y por lo
tanto, determina la estructura de un polipptido. La localizacin de cada gen
dentro de un cromosoma constituye el denominado mapa gentico de la bacteria.
Se ha establecido que la composicin de bases de un cromosoma se expresa
como el porcentaje de guanina-citosina sobre el nmero total de bases y este
porcentaje puede ser utilizado para estudiar relaciones filogenticas entre
diferentes bacterias.
2. Interviene en los mecanismos de transferencia gentica de bacteria madre a hija.
3. La duplicacin del ADN trae aparejada la simultnea divisin celular.
4.

Regula la sntesis proteica ya que es capaz de portar genes que codifican hasta
4.000 cadenas poli-peptdicas diferentes, cuya sntesis requiere la formacin inicial
de ARN a partir del ADN mediante la ARN-polimerasa en un proceso denominado
transcripcin.

REPLICACIN

DEL

ADN

BACTERIANO
El genoma completo de una clula, sea procariota o eucariota, debe replicarse con
exactitud una vez por cada divisin celular. Por lo tanto, la iniciacin de la replicacin
compromete a la clula a una divisin posterior. Si se inicia la replicacin, la divisin
consiguiente no debe ocurrir hasta que se haya completado la replicacin y, de hecho el
final de la replicacin puede disparar la divisin celular.

Las bacterias, a diferencia de las clulas eucariotas, son capaces de replicar su ADN a lo
largo de todo su ciclo celular.
MODELOS DE REPLICACION
Modelo Semiconservativo: Cuando Watson y Crick (1953) propusieron el modelo de la
Doble Hlice indicaron que dicho modelo sugera una forma sencilla de replicacin. El
modelo de replicacin propuesto por Watson y Crick supona que el ADN doble hlice
separa sus dos hebras y cada una sirve de molde para sintetizar una nueva hebra
siguiendo las reglas de complementariedad de las bases nitrogenadas. Dicho modelo
recibi el nombre de Semiconservativo, ya que las dos dobles hlices recin sintetizadas
poseen una hebra vieja (una mitad vieja) y otra hebra nueva (mitad nueva).
Frente al modelo Semiconservativo propuesto por Watson y Crick (1953) se postularon
otros posibles modelos de replicacin del ADN, uno de ellos se denomin Modelo
Conservativo y otro Modelo Dispersivo.
Modelo Conservativo: cuando el ADN doble hlice se replica se producen dos dobles
hlices, una de ellas tienen las dos hebras viejas (est intacta, se conserva) y la otra
doble hlice posee ambas hebras de nueva sntesis.Modelo Dispersivo: Cuando el ADN
doble hlice se replica se originan dos dobles hlices, cada una de ellas con hebras que
poseen tramos viejos y tramos de nueva sntesis en diferentes proporciones.
A

El cromosoma bacteriano se replica a partir de un nico origen que se mueve linealmente


A: Semiconservativo B: Conservativo C: Dispersivo
hasta completar la duplicacin total de la molcula, por lo que constituye un replicn (cada
unidad de replicacin del ADN que contiene todos los elementos requeridos para regular

este proceso). Esto facilita la regulacin que est centrada en la etapa de iniciacin; una
vez que la replicacin del cromosoma se inicia en su origen, todo el cromosoma ser
duplicado. El sitio de ADN que se est duplicando, se llama horquilla de replicacin. La
replicacin puede ser unidireccional o bidireccional, segn se formen una o dos horquillas
en el origen. Generalmente, los cromosomas bacterianos tienen replicacin bidireccional,
mientras que algunos plsmidos pueden replicarse unidireccionalmente. En la replicacin
unidireccional, una horquilla sale del origen y progresa a lo largo del ADN. En la
bidireccional, se forman dos horquillas que se alejan del origen en direcciones opuestas
hasta que se encuentran completando la duplicacin. Esto permite a la bacteria duplicar
su ADN ms rpido que si el proceso fuera unidireccional, pudiendo replicar ms de mil pb
por segundo. Es importante destacar que, aunque la velocidad de replicacin es muy
elevada, la fidelidad de la misma tambin es grande, siendo la frecuencia de mutaciones
espontneas del orden de una cada 107 a 1011 pb replicadas.
La replicacin es semiconservativa porque cada molcula de ADN posee una cadena del
ADN original y una nueva. Esto resalta la importancia de la complementariedad de bases
en la estructura del ADN.
Las enzimas encargadas de catalizar el proceso de replicacin, se denominan ADN
polimerasas. Si bien en E. coli se conocen tres tipos distintos, la responsable de la
mayora de los procesos de replicacin es la polimerasa III, mientras que las polimerasas I
y II cumplen principalmente funciones de reparacin de rupturas o de errores en las
molculas de ADN. Tambin participan otras enzimas, como las helicasas responsables
de desenrollar el ADN en el origen o cerca de l, paso indispensable para iniciar la
replicacin.
Esquemticamente, podemos decir que la replicacin consta de tres fases: iniciacin,
elongacin y terminacin. La primera se produce desde el origen del replicn donde se
forma la o las horquillas de replicacin, gracias a la accin de las helicasas que
desenrollan el ADN. De esta forma se constituye una porcin monocatenaria de ADN
que estar en condiciones de formar un complejo con protenas de unin al ADN,
encargadas de estabilizar la cadena sencilla, evitando la formacin de puentes de
hidrgeno. Se sintetiza un corto oligonucletido de ARN con un grupo 3 oxidrilo libre, que
actuar como cebador o primer, en el cual la ADN polimerasa agrega los nucletidos.
La elongacin consiste en el avance de la horquilla de replicacin, conforme se van
agregando nucletidos a la nueva cadena, siguiendo un orden establecido por las reglas

de complementariedad de bases (A con T y C con G), entre la cadena molde y la nueva.


En esta etapa participa fundamentalmente la ADN polimerasa III. Todas las polimerasas
conocidas agregan nucletidos en direccin 5- 3 para el crecimiento de la cadena y
requieren una cadena de ADN molde, un cebador y los nucletidos.
La terminacin se produce despus de que ambas horquillas de replicacin han
atravesado la mitad del cromosoma en direcciones opuestas y se encuentran en la regin
terminal del genoma. En esta regin, existen secuencias de ADN que actan como
bloqueadores para el avance de las horquillas, por lo tanto se asegura que la replicacin
termine en esa pequea porcin del genoma.

MUTACIONES
Mutacin es un cambio hereditario en la secuencia de bases del cido nucleico genmico
de un organismo.
Una cepa que lleva ese tipo de cambio se llama mutante. Por definicin un mutante
difiere de su cepa parental en el genotipo, es decir, la secuencia exacta de nucletidos en
el ADN genmico. Adems su fenotipo tambin puede estar alterado con respecto a la
cepa parental.

BASES MOLECULARES DE LA MUTACION


Las mutaciones surgen en las clulas porque se originan cambios en la secuencia de
bases del material gentico en muchos casos, las mutaciones originan cambios
fenotpicos en el organismo; en la mayor parte de los casos estos son cambios son
perjudiciales, pero ocasionalmente ocurren cambios que son beneficiosos.

Las mutaciones pueden ser espontaneas o inducidas. Las mutaciones espontaneas


ocurren como consecuencia de la accin de la radiacin natural (por ejemplo, rayos
csmicos) que alteran la estructura de las bases del ADN. Durante la replicacin tambin
ocurren mutaciones espontaneas por error en el apareamiento de bases, originando
cambios en el ADN replicado. De hecho, tales errores ocurren con una frecuencia de 10
-7-10 -11 por par de bases de bases durante una ronda replicativa (un gen tiene unos
1000 pares de bases). Por tanto, en un cultivo normal de microorganismos que contenga
unas 108 clulas/ml es probable que exista algn mutante por cada mililitro de cultivo.
Las mutaciones que implican un par de bases se denominan a veces mutaciones
puntuales. Pueden ser el resultado de sustituciones de pares de bases (microinserciones
y microdeleciones). Como en toda mutaciones, el cambio fenotpico derivado de una
mutacin puntual depende de dnde ocurra exactamente la mutacin en el gen, que
cambio de nucletido tuvo lugar, y que producto codifica dicho gen.
Mutaciones por desfase
Como el cdigo gentico se lee desde un extremo en bloques consecutivos de tres bases,
cualquier delecin o insercin de una base origina un desfase en el marco de lectura, y a
la traduccin del gen resulta completamente alterada. A menudo se puede lograr la
restauracin parcial de la funcin del gen mediante insercin de otra base cerca de la
delecionada (una especie de mutacin supresora).
Dependiendo de los aminocidos codificados por la regin defectuosa y la regin de la
protena a la que corresponde, la protena formada puede tener alguna actividad biolgica
o incluso ser completamente normal.

Mutaciones hacia atrs o reversiones


Las mutaciones puntuales son reversibles. Un revertiente se define operativamente como
una cepa en la que aparece restaurado el fenotipo silvestre que se perdi en el mutante.
Los revertientes pueden ser de dos tipos:

Revertientes de un mismo sitio, la mutacin que restaura la actividad ocurre en el


mismo sitio en que ocurri la mutacin original.

Revertientes de segundo sitio, la mutacin ocurre en un sitio diferente en el DNA.


Las mutaciones en un segundo sitio pueden restaurar un fenotipo silvestre debido
a varios tipos de mutaciones supresoras que restauran el fenotipo original. Las
mutaciones supresoras son nuevas mutaciones que compensan el efecto de la
mutacin original.

Mutaciones debidas a muchos pares de bases


Las deleciones son mutaciones en las que se ha eliminado una regin del DNA. Como
hemos comentado, las microdeleciones, que son prdida de una o unas cuantas bases,
son a menudo mutaciones por desface y pueden inactivar un gen. Estas deleciones no se
pueden restaurar por otras mutaciones sino slo a travs de recombinacin gentica.
Las inserciones ocurren cuando se aaden nuevas bases al DNA. Pueden deberse a una
sola base o a muchas. Las microinserciones derivan de errores replicativos, como las
deleciones, pero las inserciones grandes son el resultado de errores que ocurren durante
la recombinacin gentica. Las inserciones inactivan el gen en el que ocurren.
Existen otros tipos de mutaciones a gran escala que tambin parecen implicar
reordenamientos llevados a cabo por errores en la recombinacin. Estos incluyen las
translocaciones, en las que largos trozos de ADN se llevan a una nueva localizacin y las
inversiones, en las que las orientacin de segmentos articulares de ADN resulta invertida
respecto al resto del ADN.

VELOCIDADES DE MUTACIN
Hay una amplia variacin en las frecuencias a las que ocurren las distintas clases de
mutaciones. Algunos tipos de mutaciones ocurren tan raramente que son casi imposibles
de detectar, mientras que otras ocurren tan frecuentemente que a menudo plantean
dificultades a los experimentadores para mantener un cultivo genticamente estable.
Las mutaciones espontaneas en un gen ocurren a frecuencia de cerca de 10

por

generacin lo que significa que hay un probabilidad de uno en un milln de que aparezca
una mutacin en alguna localizacin de un gen dado durante un ciclo celular . Los
fenmenos de transposicin pueden ocurrir ms frecuentemente, aproximadamente a 10.
Por otra parte, la aparicin de una mutacin sin sentido es menos frecuente, 10 - 10,
porque solo unos cuantos codones pueden mutar a codones sin sentido. A menos que el
mutante sea seleccionable, la detencin experimental de sucesos de tal rareza resulta
difcil y gran parte del ingenio del gentico microbiano se aplica a incrementar la eficiencia
de la deteccin de mutaciones. Como se ver en la siguiente seccin, es posible
incrementar significativamente la velocidad de mutacin usando tratamientos mutagnicos

Mutaciones en genomas con cido ribonucleico ARN

Mientras que todas las clulas tienen ADN como material gentico, algunos virus tienen
genomas con ARN. Estos genomas tambin pueden mutar. Notablemente, la velocidad de
mutacin en los genomas ARN es alrededor de 1.000 veces mayor que en genomas ADN.
En parte esto se debe a que las ARN replicasas no parecen tener actividades correctoras
como las de las ADN polimerasas. Adems hay muchos sistemas de reparacin de ADN
que pueden corregir muchos cambios antes de que queden fijados como mutaciones y no
hay mecanismos comparables de reparacin de ARN.

PREVENCIN
Para prevenir las mutaciones es esencial conservar un apareamiento de bases correcto.
Con frecuencia es posible reparar el dao antes de que una mutacin se establezca de
forma permanente. Si se produce un ciclo completo de replicacin del ADN antes de que
se repare la lesin inicial, la mutacin a menudo se vuelve estable y heredable.
MUTAGENOS
Los mutgenos pueden clasificarse de acuerdo con su mecanismo de accin. Cuatro
formas frecuentes de accin de los mutgenos son:
1. Anlogos de bases: son similares a las bases nitrogenadas normales y pueden
incorporarse a la cadena polinucletida en crecimiento durante la replicacin del
ADN. Una vez en posicin, estos compuestos presentan de forma caracterstica
propiedades de apareamiento diferentes de las bases a las que sustituyen, y con
el tiempo tienen la capacidad de provocar una mutacin estable.
Ejemplo: el 5-bromouracilo (5-BU), un anlogo de la timina.
2. El malapareamiento (apareamiento incorrecto) especifico: se produce cuando un
mutgeno cambia la estructura de una base y por lo tanto altera sus
caractersticas de apareamiento. Algunos mutgenos de esta categora son
bastantes selectivos; reaccionan de forma preferente con algunas bases y
producen un tipo especfico de dao del ADN.
Ejemplo: el metil-nitrosoguanidina, una agente alquilante que aade grupos metilo
a la guanina, haciendo que se aparee de forma incorrecta con la timina.
3. Agentes intercalantes: distorsionan el ADN e inducen inserciones y deleciones de
pares de bases de bases nicos. Estos mutgenos son planares y se insertan
(intercalan) entre las bases apiladas de la hlice. Esto conduce a una mutacin,
posiblemente a travs de la formacin de un lazo en el ADN. Entre los agentes
intercalantes se incluyen las acridinas, como la proflavina y la naranja acridina.

4. Obviacin de la replicacin
RECOMBINACIN GENTICA DE LOS MICROORGANISMOS
La recombinacin es el proceso por el que se forma un nuevo cromosoma recombinante,
un cromosoma que tiene un genotipo diferente al de ambos progenitores, mediante la
combinacin del material gentico de los dos organismos que participan en el proceso. La
recombinacin da lugar a un nuevo ordenamiento de los genes o de partes de genes, y
generalmente se acompaa de un cambio fenotpico.
Hasta el ao 1945, el anlisis gentico se centraba principalmente en la recombinacin de
genes de plantas y animales. Los primeros trabajos sobre recombinacin en eucariotas
superiores sentaron las bases de la gentica clsica, pero fue el desarrollo de la gentica
de bacterias y fagos entre 1945 y 1965 el que realmente estimulo el rpido avance de
nuestra comprensin de la gentica molecular.
RECOMBINACIN BACTERIANA: PRINCIPIOS GENERALES
Los microrganismos llevan a cabo diversos tipos de recombinacin:
Recombinacin general es un intercambio reciproco entre un par de secuencias
homologas de ADN.
Caractersticas:
Puede suceder en cualquier sitio del cromosoma
Se debe a la rotura y reunin de la cadena o hebra de DNA, que
conduce el entrecruzamiento
Corre a cargo de la protena recA, que tanta importancia tiene en la
reparacin del ADN.
La recombinacin general corre a cargo de los productos de los genes rec, como la
protena recA, que tanta importancia tiene en la reparacin del DNA. En la transformacin
bacteriana se produce una forma no reciproca de recombinacin general. Una porcin de
material gentico es insertada en el cromosoma mediante la incorporacin de una adenA
nica para formar un segmento de DNA heteroduplex. Un segundo tipo de recombinacin,
de especial importancia en la integracin de los genomas virales en los cromosomas
bacterianos, es la recombinacin replicadora, acompaada a la replicacin de material
gentico y no depende de la homologa de las secuencias. La emplean los elementos
genticos capaces de desplazarse por el cromosoma.
Aunque la reproduccin sexual con la formacin de un cigoto o clula huevo y su
subsiguiente meiosis no existe en las bacterias, puede producirse una recombinacin de

diversas formas tras la transferencia horizontal de genes. En este proceso, los genes se
transfieren de un organismo maduro e independiente a otro. La transferencia horizontal de
genes difiere bastante de la transmisin de genes desde los padres a su descendencia.
En general, una porcin del ADN dador, el exogenote, debe entrar en la clula receptora
y convertirse en una parte estable de su genoma, el endogenote. Existen dos formas de
ADN capaces de desplazarse entre bacterias. Si un fragmento de ADN es el vehculo de
intercambio, el exogenote debe entrar en la clula receptora e incorporarse al endogenote
como porcin de sustitucin sin ser destruido por el husped. Durante la sustitucin de
material gentico del husped, la clula receptora se convierte temporalmente en diploide
para una porcin del genoma, y recibe el nombre de merocigote. En ocasiones, el ADN
existe en una forma tal que no puede ser degradada por las endonucleasas de la clula
receptora. En este caso, el DNA no necesita integrarse en el genoma del husped, sino
que basta con que penetre en el receptor para transferir su informacin gentica a la
clula, el ADN resistente, como el de los plsmidos, suele ser circular y tiene secuencias
que le permiten mantener su independencia respecto del cromosoma del husped. De
esta manera, la recombinacin en las bacterias es una transferencia unidireccional de
dador a receptor. La recombinacin en los eucariotas tiende a ser recproca, es decir, se
conserva todo el ADN de, los gametos que finalmente se originan tras los procesos de
meiosis y recombinacin.
El desplazamiento del ADN de una bacteria dadora al receptor puede producirse de tres
formas:
1. Transferencia directa entre dos bacterias que han establecido contacto fsico
temporal (conjugacin),
2. transferencia de un fragmento de ADN desnudo (transformacin)
3. transporte del ADN bacteriano por bacterifagos (transduccin)
Cualquiera que sea la forma de transferencia, el exogenote solo tiene cuatro destinos
posibles en el receptor.
Cuando el exogenote tiene una secuencia homologa a una secuencia del endogenote,
puede producirse la integracin, es decir, puede aparearse con el ADN receptor e
incorporase para producir un genoma recombinante.
1. El ADN extrao en ocasiones persiste fuera del endogenote y se replica para
producir un clon de clulas parcialmente diploides.
2. El exogenote puede sobrevivir, pero no replicarse, de forma que solo una clula es
un diploide parcial.

3. Las nucleasas de la clula husped pueden degradar el exogenote, un proceso


denominado restriccin por el husped.

CONJUGACION BACTERIANA
Es la transferencia de informacin gentica mediante el contacto directo entre dos clulas.
Jushua Ledelberg y Edward L. Tatum mezclaron dos cepas axtrofas, incubaron el cultivo
durante varias horas en un medio nutritivo y luego lo sembraron en placas con medio
mnimo para reducir la probabilidad de que los resultados se debieran a una simple
reversin. Utilizaron auxtrofos dobles y triple bajo la suposicin de que no se produjeran
a menudo de forma simultnea, Por ejemplo , una cepa requerida bitina (bio),
fenilalanina (fe) y cistena(cis), para su crecimiento y otra necesitaba treonina (tre), leucina
(leu) y tiamina (ti). Tras la incubacin, aparecieron en el medio mnimo colonias
prototrofas recombinantes, por consiguiente los cromosomas de los dos auxtrofos fueron
capaces de asociarse y sufrir un proceso de recombinacin.
Lederberg y Tatum no demostraron de forma directa que fuese necesario el contacto fisco
entre las clulas para que tuviera lugar la transferencia de genes. La demostracin de
este hecho corresponde

a Bernard Davis (en 1950) quin construy un tubo en u

consistente en dos piezas de vidrio tubulares, curvadas, fusionadas por la base para
originar una estructura con forma de u con un filtro de vidrio poroso entre las dos ramas.

El filtro permita el paso de los medios, pero no el de las bacterias. Se llena el tubo en U
con un medio nutritivo y en cada lado se inocul una cepa auxtrofa diferente de E. coli.
Durante la incubacin, el medio se bombe de un lado a otro travs del filtro para
asegurarse de que tena lugar el intercambio de medio entre las dos ramas del tubo.
Despus de 4 horas de incubacin, las bacterias se sembraron en medio mnimo. Davis
descubri que cuando dos cepas auxtrofas se separaban la una de la otra mediante un
filtro fino no poda producirse la transferencia gnica. Por consiguiente, era necesario el
contacto directo para que tuviera lugar la recombinacin observada por Lederberg y
Tatum.

CRUCE F+ C FEn 1952, William Hayes demostr que la transferencia gnica observada por Lederberg y
Tatum era un fenmeno polar. Es decir, haba claramente una cepa dadora (F+) y una
cepa receptora (F-), y la transferencia de genes no era recproca. Tambin comprob que
en el cruce F+ x F- la progenie slo rara vez se modificaba desde el punto de vista del
auxotrofismo ( es decir, los genes bacterianos no se transferan con frecuencia), pero las
cepas F- con frecuencia si se convertan en cepas F+.
Estos resultados pueden explicarse fcilmente en trminos del factor F descrito
previamente. La cepa F+ contiene un factor F extracromosmico que transporta los genes
necesarios para la formacin de pilus y la transferencia de plsmidos. Durante el cruce o
conjugacin F+ x F-, el factor F se replica mediante el mecanismo del rodante (o

mecanismo del crculo rodante), y una copia del factor F se desplaza al receptor. La
cadena entrante se copia para producir DNA de doble cadena (DNA bicatenario). Debido a
que los genes del cromosoma bacteriano rara vez se transfieren con el factor F
independiente, la frecuencia de recombinacin es baja. Todava no se conoce con
exactitud cmo se desplaza el plsmido entre las bacterias. El pilus sexual o conjugativo o
pilus F une el dador y el receptor y puede contraerse para unir ambas clulas. El canal
para la transferencia de DNA podra ser el pilus F hueco o ms bien un puente conjugativo
especial formado tras el contacto.
CONJUGACIN HFR
Debido a que ciertas cepas dadoras transfieren genes bacterianos con gran eficiencia y
no suelen convertir en dadoras a las clulas receptoras, debe existir un segundo tipo de
conjugacin. El factor f es un episoma, y puede integrarse en el cromosoma bacteriano en
diferentes localizaciones mediante recombinacin entre secuencias de insercin
homlogas presentes tanto en el plsmido como en los cromosomas del husped.
Cuando se ha integrado, el opern tra del plsmido F sigue siendo funcional; el plsmido
puede dirigir la sntesis de pili, llevar a cabo la replicacin mediante el mecanismo del
rodante y transferir material gentico a una clula receptora F-. Las cepas dadoras de
este tipo reciben el nombre de cepas Hfr (del ingls high frequency of recombination)
porque presentan una elevada eficiencia de transferencia gnica cromosmica en
comparacin con las clulas F+. La transferencia de DNA comienza con un corte en el
sitio de origen de transferencia del factor F integrado. A medida que se replica, el
cromosoma de desplaza a travs del pilus o puente conjugativo que conecta el dador con
el receptor. Debido a que inicialmente slo se transfiere parte del factor F (la rotura inicial
se produce en el plsmido), el receptor F- no se convierte en F+ a menos que se
transfiera todo el cromosoma. La transferencia tiene lugar en unos 100 minutos en E. coli,
y la conexin suele romperse antes de que este proceso haya concluido. Por lo tanto, en
general no se transfiere un factor F completo, y el receptor sigue siendo F-.
Como se ha mencionado con anterioridad, cuando una cepa Hfr participa con la
conjugacin, los genes bacterianos con frecuencia se transfiere al receptor. La
transferencia gnica puede realizarse tanto en el sentido de las agujas del reloj como en
el contrario, alrededor del cromosoma circular, dependiendo de la orientacin del factor F
integrado. Despus de que el cromosoma replicado del dador penetre en la clula
receptora, puede ser degradado o incorporado en genoma F- mediante recombinacin. La

conjugacin Hfr es quiz el mecanismo natural ms eficiente de transferencia gnica entre


bacterias.

CONJUGACIN F
Debido a que el plsmido F es un episoma, puede abandonar el cromosoma bacteriano
en el que est integrado. Durante este proceso, el plsmido F en ocasiones comete un
error en la escisin, de forma que adquiere una porcin del material cromosmico y se
convierte en un plsmido F. No es infrecuente observar la inclusin de uno o ms genes
en plsmidos F escindidos. La clula F conserva todos sus genes, aunque algunos de
ellos se encuentran en el plsmido, y sigue cruzndose exclusivamente con un receptor
F-. La conjugacin F x F- es prcticamente idntica al cruce F+ x F-. De nuevo, se
transfiere el plsmido, pero habitualmente los genes bacterianos presentes en el
cromosoma no se transfieren. En cambio, los genes bacterianos del plsmido F+ s son
transferidos con l y no necesitan incorporarse al cromosoma receptor para expresarse.
El receptor se convierte en F y es un merocigote parcialmente diploide, puesto que
contiene dos juegos de genes transportados por el plsmido. De esta forma,
determinados genes bacterianos pueden diseminarse rpidamente en una poblacin
bacteriana. Este tipo de transferencia de genes bacterianos recibe a menudo el nombre
de sexduccin.
La conjugacin F es un proceso de gran importancia para el genetista microbiano. El
comportamiento diploide parcial pone de manifiesto si un alelo que porta un plsmido F
es dominante o recesivo para el gen cromosmico. Las formacin de plsmidos F
tambin es de utilidad para cartografiar el cromosoma, puesto que si un factor F adquiere
o secuestra simultneamente dos genes determinados, dichos genes deben ser vecinos
en el cromosoma.
TRANSFORMACIN DEL DNA
El segundo mecanismo por el cual el dna puede movilizarse entre las bacterias es la
transformacin, descubierta por Fred Griffith en 1928. La transformacin consiste en la
captacin por parte de una celula receptora de una molecula o fragmento de dna desnudo
y la incorporacin de esta molcula al cromosoma del receptor en una forma heredable.
En la transformacin natural, el DNA procede de una bacteria dadora. Es un proceso
aleatorio, y puede transferirse entre bacterias cualquier porcin del genoma.

Cundo las bacterias se lisan, liberan unas cantidades considerables de DNA al medio que
las rodea. Estos fragmentos liberados pueden

ser relativamente grandes y contener

diversos genes. Si un fragmento establece contacto con una clula componente, una
clula capaz de captar DNA y ser transformada, dicho fragmento puede unirse a la clula
y ser transportado a su interior. La frecuencia de transformacin de las clulas muy
competentes es de alrededor de 10 -3 para la mayora de los gneros cuando se utilizan
un exceso de DNA. Es decir, aproximadamente una clula de cada mil capta e integra el
gen. La competencia es un fenmeno muy complejo y depende de diversas condiciones.
Es preciso que las bacterias se encuentran en una determinada fase de crecimiento: por
ejemplo S. pneumoniae se vuelve competente durante la fase exponencial, cuando la
poblacin alcanza las 107 o 108 clulas por mL. Cuando una poblacin se vuelve
competente, las bacterias del tipo de los neumococos segregan una pequea protena
denominada factor de competencia que estimula la produccin de 8 a 9 nuevas protenas
necesarias para el proceso de transformacin.

TRANSDUCCIN
Los virus bacterianos o bacterifagos participan en una tercera modalidad de
transferencia gnica bacteriana. Estos virus tienen estructuras relativamente sencillas en
las que el material gentico del virus est incluido dentro de una cubierta externa,
compuesta principalmente o exclusivamente de protenas. La cubierta protege el genoma
y lo transmite entre clulas husped.

Despus de infectar la clula husped, un bacterifago a menudo toma el control y obliga


al husped a fabricar numerosas copias del virus. Finalmente, la bacteria husped estalla
o se lisa y libera los nuevos bacterifagos. Este ciclo reproductor se denomina ciclo ltico
porque concluye con la lisis del husped. Consta de cuatro fases:
1. La partcula viral se fija a un sitio receptor especfico de la superficie bacteriana.
El material gentico del virus, que con frecuencia es ADN bicatenario, penetra
entonces en la clula.
2. Tras Absorcin y penetracin, el cromosoma viral obliga a la bacteria a fabricar
cidos nucleicos y protenas del virus.
3. Luego se la sntesis de los componentes virales. Se ensamblan bacterifagos a
partir de estos componentes. El proceso de ensamblaje puede ser complejo, pero
en todos los casos el cido nucleico se introduce en la cpside proteica viral.
4. Finalmente los virus maduros son liberados al medio ambiente la lisis de la clula
husped.

Los
virus bacterianos que se reproducen mediante un ciclo ltico a menudo se denominan
bacterifagos virulentos porque destruyen la clula husped. Muchos bacterifagos ADN,,
como el bacterifago lambda, tambin son capaces de establecer una relacin diferente
con su husped. Tras la absorcin y la penetracin, el genoma permanece en el interior
de la clula husped y se reproduce junto con el cromosoma bacteriano se origina un clon
de clulas infectadas que puede crecer durante un largo periodo mientras parece ser
totalmente normal. Cada una de estas clulas infectadas es capaz de producir
bacterifagos y lisarse bajo las condiciones ambientales apropiadas. Esta relacin entre el

bacterifago y el husped se denomina lisognicas y se les designa con el nombre de


lisgenas, mientras que los bacterifagos capaces de establecer este tipo de relacin se
denominan fagos atemperados. La forma latente del genoma viral que permanece en el
interior de la clula husped sin destruirla se denomina profago. El profago suele estar
integrado en el genoma bacteriano.
En ocasiones, la produccin de fagos se desencadena en un cultivo lisogenizado
mediante la exposicin a radiacin uv. Este fenmeno se denomina induccin.
La transduccin es la transferencia de genes bacterianos por medio de virus. Se produce
la incorporacin de genes bacterianos al interior de la cpsides de un bacterifago a
consecuencia de errores cometidos durante el ciclo vital del virus. Existen dos tipos de
transduccin:

Generalizada: ocurre durante el siglo ltico de los fagos virulentos y atemperados y


es capaz de transferir cualquier parte del genoma bacteriano. Durante la fase de
ensamblaje. Cuando los cromosomas virales son empaquetados en el interior de
cpsides proteica .pueden quedar encapsidados por error y al azar, fragmentos del
cromosoma bacteriano parcialmente degradado. Puesto que en la cpsides slo
puede contener una cantidad limitada de ADN, el ADN de virus no se incorpora a
la cpsides, y solo queda incluido en ella el ADN bacteriano. La cantidad del ADN
bacteriano transportada depende principalmente del tamao de la cpsides. El
fago P22 de Salmonella typhimurium suele transportar aproximadamente el 2.02.5% del genoma. La partcula viral resultante a menudo inyecta el ADN en otra
clula bacteriana, pero no inicia el ciclo ltico.Este fago se conoce como partcula o
fago de transduccin generalizada, y es simplemente un portador de informacin
gentica desde la bacteria original a otra clula. Al igual que sucede en el proceso
de transformacin, una vez que el ADN ha sido inyectado, debe ser incorporado al
cromosoma de la clula para preservar los genes transferidos. El ADN sigue
siendo bicatenario durante la transferencia, y ambas cadenas se integran en el
endogenote. Aproximadamente el 70-90% del ADN transferido no se integra, pero
con frecuencia es capaz de sobrevivir y expresarse. Los transductantes abortivos
son bacterias que contienen este ADN transducido no integrado y son diploides
parciales.

Especializada: La transduccin especializada difiere de la generalizada en que slo un


limitado set de genes pueden ser transferidos. Estos genes se encuentran
flanqueando la regin en donde el fago temperado o lisognico puede integrarse al
cromosoma bacteriano. Los fagos temperados como el lambda o phi 80 pueden
integrar su material gentico en sitios especficos del genoma bacteriano. Por
ejemplo, el sitio de insercin del fago lambda se encuentra entre los
genes gal y bio. Sin embargo, la integracin de este fago en sitios de adsorcin
secundarios puede llevar a la transduccin de otros marcadores bacterianos.
Estos tipos de fagos sintetizan enzimas de integracin y escisin que catalizan la
integracin del fago en el sitio de adsorcin y su correcta escisin. Pero, en
algunos casos, pueden ocurrir escisiones anormales que llevan a que parte del
genoma del fago lambda se separe junto a genes bacterianos cercanos. Estos
eventos producen fagos que no contienen el genoma lambda completo, fagos
defectivos, debido a que una regin de los genes lambda quedan insertados en el
cromosoma bacteriano. Por otra parte, el cromosoma bacteriano pierde algunos
genes que son llevados por esta anormal escisin. Estos fagos que contienen
genes bacterianos junto al material gentico del fago se denominan fagos o
partculas

de

transduccin

especializada.

Los fagos de transduccin especializada surgen con una frecuencia muy baja. Los
lisados celulares que contienen a los fagos transductores pueden denominarse
lisados

LFT

(Low

Frequency

Transduction-Transduccin

de

Baja

Frecuencia) o lisados HFT (High Frequency Transduction-Transduccin de Alta


Frecuencia). Generalmente, los lisados HFT son obtenidos a partir de una
partcula transductora producida por una lisado LFT y de un fago helper". Este
fago "helper" generalmente es necesario para la integracin, escisin y/o
replicacin del fago transductor cuando este es defectivo, ya que aporta las
enzimas necesarias que el fago transductor no codifica al haber perdido parte de
su genoma. La induccin de estos dobles lisgenos produce lisados HFT que
contienen al fago transductor y al fago "helper", y que pueden ser separados
mediante gradientes de CsCl debido a diferencias en el tamao de ambas
partculas.
.

APLICACIONES EN LA INDUSTRIA
Entre las aplicaciones industriales de la tecnologa del DNA recombinante se encuentra: la
fabricacin de productos proteicos utilizando bacterias, hongos y clulas de mamferos
cultivadas como verduras factoras: la mejora de cepas para bioprocesos ya existentes; y
el desarrollo de nuevas cepas para bioprocesos ya existentes; y el desarrollo de nuevas

cepas para bioprocesos ya adicionales. Como se ha mencionado anteriormente, la


industria farmacutica ya est produciendo diversos polipeptidos de importancia mdica
mediante esta tecnologa. Adems,

existe inters en sintetizar

con bacterias

recombinantes enzimas caras e importantes desde el punto de vista industrial.

IMPORTANCIA:
1. La funcin gentica constituye la base de la funcin celular, y se precisa de la
investigacin bsica en gentica microbiana para comprender cmo funcionan los
microorganismos.
2. Los microorganismos suministran sistemas relativamente simples para el estudio
de fenmenos genticos y son, por tanto instrumentos tiles para intentar descifrar
los mecanismos que subyacen en la gentica de todos los organismos.
3. Los microorganismos se usan para el aislamiento y duplicacin de genes
especficos de otros organismos, mediante una tcnica que se denomina
clonacin molecular.
4. Los microorganismos producen muchas sustancias de valor industrial, como los
antibiticos, y pueden someterse a manipulacin gentica a fin de incrementar los
rendimientos y mejorar los procesos de manufacturacin. Adems, por clonacin
molecular, se pueden transferir los genes de organismos superiores especficos
para la produccin de sustancias particulares.

5. Muchas enfermedades estn causadas por microorganismos y sus mecanismos


de patogeneidad estn regulados genticamente. Conociendo la gentica de los
microorganismos causantes de enfermedades, y asean clulas o virus, podremos
controlarlos ms fcilmente y evitar su crecimiento.
6. Algunos tipos de transferencia gentica que ocurren en procariotas, en particular la
conjugacin, tambin juegan importantes funciones en la distribucin de genes
que confieren propiedades especficas como la resistencia a los antibiticos. El
conocimiento de tales procesos puede ayudar a determinar cmo se transfieren
los genes de un organismo a otro,

CONCLUSION
La gentica bacteriana es un tema muy importante y es un proceso complejo en el que
interviene un gran nmero de protenas y de mecanismos. Estos mecanismos aseguran la
fidelidad de la copia de la informacin gentica, es de mucha ayuda ya que es necesario
aprender a controlar y comprender el funcionamiento de los microorganismos. A pesar de
no poder observar estos microorganismos a simple vista, se nos hace ms fcil
estudiarlos y aprender sobre sus mutaciones, las cuales en algunos casos nos benefician.

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