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PURPOSE
This document (Document 5) provides information to determine whether Reference Procedures or
Acceptable Procedures for the Assay and Impurity tests in the USP Medicines Compendium (MC) are
acceptable. The approach is based on a defined set of Procedure Performance Measures (PPMs)
and associated Procedure Performance Acceptance Criteria (PPACs) and experiments. Further
information is provided in the Appendix. While the concepts in the Guideline are general, it is directed
to chromatographic methods for chemical ingredients and products. Adjustments may be needed for
non-separation methods and ingredients/ products.
PROPSITO
Este documento (Documento 5) provee informacin para determinar si los procedimientos
de referencia o los procedimientos aceptables para las pruebas de ensayo e impurezas en el
compendio de medicinas de la USP (MC) son aceptables. El enfoque se basa sobre una
serie definida de Procedimientos de desempeo de medicin (PPMs, por Procedure
Performance Measures) y asociado a Procedimientos de desempeo de criterios de
aceptacin (PPACs, por Procedure Performance Acceptance Criteria) y experimentos. Se
provee ms informacin en el Apndice. Mientras que los conceptos en la Gua son
generales, esta se dirige a mtodos cromatogrficos para ingredientes qumicos y productos.
Pueden ser necesarios ajustes para la separacin en mtodos e ingredientes / productos.
ASSAY
ENSAYO
Precision and Accuracy
Precisin y exactitud
Samples: Six replicate Standard solutions
Analysis: Determine the Precision value and Accuracy value.
Precision value: Determine the % RSD of the Standard solutions.
Accuracy value: Mean of the percentage content of the Standard solutions corrected for
the stated content of the Reference material.
Muestras: Seis rplicas de las soluciones estndar.
Anlisis: Determine la precisin y exactitud.
Precisin: Determine el coeficiente de variacin de las soluciones estndar.
Limit of Detection
Lmite de deteccin
Control sample: A preparation of reference materials for the impurity(ies) of interest at the
target concentration(s).
Muestra control: Una preparacin de materiales de referencia para las impurezas de
inters en la concentracin indicada.
Test sample 1: A sample of material under test, spiked with reference materials for the
specified impurities at the target concentration, prepared in triplicate.
Muestra prueba 1: Una muestra de material bajo prueba, adicionada con materiales de
referencia para las impurezas especificadas a la concentracin indicada, preparada por
triplicado.
Test sample 2: A sample of material
under test, spiked with reference materials for the
specified impurities 100 (2C0.1505)% of the target concentration for the specified
impurity(ies), prepared in triplicate.
Muestra prueba 2: Una muestra de material bajo prueba,
adicionada con materiales de
referencia para las impurezas especificadas 100 - (2C 0.1505)% de la concentracin indicada
para las impurezas especificadas, preparadas por triplicado.
PPAC: Each Test sample 1 provides a peak response equivalent to or greater than that of
the Control sample. Test sample 2 must provide a peak response that is less than that of the
Control sample. [NOTEThe signal from each sample obtained must show a change from
the value obtained compared to a blank determination.]
PPAC: Cada muestra prueba 1 proveer una respuesta de pico equivalente a o ms grande
que la muestra control. La muestra prueba 2 debe proveer una respuesta de pico que es
menor que la de la muestra control. (NOTA: La seal de cada muestra obtenida debe
mostrar un cambio del valor obtenido comparado contra un blanco].
Specificity: The procedure must be able to unequivocally assess, with acceptable Accuracy
and Precision (see previous sections), each specified impurity in the presence of
components that may be expected to be present, including other specified impurities, the
parent compound counter-ions, sol-vent fronts, and matrix components.
Especificidad: El procedimiento debe tener la habilidad de evaluar sin equivocarse, con
exactitud y precisin aceptable (ver las secciones previas) cada impureza especificada en la
presencia de componentes que pueda esperarse estn presentes, incluyendo otras
impurezas especificadas, contraiones del compuesto principal, frentes de solvente y
componentes de la matriz.
Where specified impurities are separated by a resolution of greater than 1.5, then the
procedure has acceptable specificity
Donde las impurezas especificadas sean separadas por una resolucin ms grande
de 1.5, entonces el procedimiento tiene una especificidad aceptable.
Where specified impurities are not well-resolved, then a spike and recovery study
of the closely eluting peaks is completed. If the specified impurity of interest
meets the previous Precision requirements while in the presence of interfering
peak, then the procedure is acceptable.
Donde las impurezas especificadas no estn bien resueltas, entonces se
PRECISION
PRECISIN
Repeatability
Repetibilidad
Test samples: Six independent samples of material under test, spiked with appropriate
reference materials for the specified impurities at the indicated levels
Muestras de prueba: Seis muestras independientes de material bajo prueba,
adicionadas con materiales de referencia apropiados para las impurezas especificadas a
los niveles indicados.
PPAC
Relative standard deviation: NMT C0.1505%; where C is the concentration fraction of the
impurity
PPAC
Desviacin estndar relativa: No ms de C0.1505%; donde C es la fraccin de concentracin
de la impureza.
RUGGEDNESS
ROBUSTEZ
The effect of random events on the analytical precision of the method must be established.
Acceptable experiments for establishing intermediate precision include performing the
Repeatability analysis
Debe establecerse el efecto de eventos aleatorios sobre la precisin analtica del mtodo.
Los experimentos aceptables para establecer la precisin intermedia incluyen el desempeo
de la Repetibilidad de los anlisis.
On different days
With different instrumentation, or
With different analysts.
Note that executing only one of the three experiments listed is required in order to
demonstrate intermediate precision.
Observe que se requiere la ejecucin de slo uno de los tres experimentos enlistados
para demostrar la precisin intermedia.
PPAC
Relative standard deviation: NMT 2C0.1505%; where C is the concentration fraction of the
impurity
PPAC
Desviacin estndar relativa: No ms de 2C0.1505%; donde C es la fraccin de
concentracin de la impureza.
SPECIFICITY
ESPECIFICIDAD
The procedure must be able to unequivocally assess each specified impurity in the
presence of components that may be expected to be present, including other specified
impurities, the parent compound counter-ions, solvent fronts, and matrix components.
El procedimiento debe tener la habilidad de evaluar sin equivocarse cada impureza
especificada en la presencia de componentes que se espera estn presentes, incluyendo
otras impurezas especificadas, contraiones del compuesto principal, frentes de solvente y
componentes de la matriz.
Where specified impurities are separated by a resolution of greater than 1.5, then the
procedure has acceptable specificity.
Donde las impurezas especificadas sean separadas por una resolucin ms grande de 1.5,
entonces el procedimiento tiene una especificidad aceptable.
Where specified impurities are not well-resolved, then a spike and recovery study of the
closely eluting peaks is completed. If the specified impurity of interest meets the previous
Precision requirements while in the presence of interfering peak, then the procedure is
acceptable.
Donde las impurezas especificadas no estn bien resueltas, entonces se completa un
estudio de adicionado y recuperado de los picos eluyendo cercanamente. Si las impurezas
especificadas de inters cumplen los requerimientos de precisin previos con la presencia
del pico interfiriendo, entonces el procedimiento es aceptable.
Limit of Quantitation, Range, and Linearity
Lmite de Cuantificacin, Rango y Linealidad
Demonstrated by meeting the Accuracy requirement.
Demostrado por el cumplimiento de los requerimientos de Exactitud.
monographs test procedures each have terms, measures, and assumptions that are used to
describe critical information about acceptability of the procedure itself. These method-specific
terms and measures may not align well with the PPMs necessary to define an acceptable
procedure. Additional approaches are thus needed to determine acceptability of a
monographs procedure. These approaches are termed PPMs.
<1225> define los parmetros crticos de la validacin (CVP, por critical validation
parameters) necesarios para validar un procedimiento. Los CVPs pueden tambin ser
considerados como los PPMs para la determinacin de la aceptabilidad de los
procedimientos. Los mtodos (cromatogrficos, espectrofotomtricos, gravimtricos, etc.)
usados en los procedimientos de prueba de una monografa tiene cada uno sus trminos,
medidas y los supuestos que se usan para describir la informacin crtica acerca de la
aceptabilidad del mismo procedimiento. Estos trminos y medidas especficas del mtodo
pueden no alinearse bien con los PPMs necesarios para definir un procedimiento aceptable.
Por lo tanto, son necesarios enfoques adicionales para determinar la aceptabilidad del
procedimiento de una monografa. Estos enfoques son llamdos PPMs.
Chromatographic Assay
Ensayo cromatogrfico
The validation parameters for a chromatographic assay are defined as; accuracy, precision,
specificity, linearity, and range. There are thousands of experts practicing chromatography
throughout the pharmaceutical industry and these individuals have all come to a general,
unwritten agreement as to what an adequate procedure would entail. Most of these
individuals would describe the resolution, peak shape, co-elution, baseline drift, dead volume
and other chromatographically relevant terms. However, all of these terms are specific
measures that describe the features of a separation, but do not parallel the CVPs defined
above. For example, the specificity of a procedure can be described in part by the resolution
of critical pairs of peaks, and partially by the likelihood of co-elution and also by the number
and height of theoretical plates, and several others. Each of these measures help an analyst
describe the goodness of their procedure. However, these measures cannot adequately
describe an acceptable procedure in isolation. What is needed is an approach that allows an
analyst to quickly and decisively determine that their procedure is acceptable. The acceptable
values have been included in general chapter Chromatography 621 using the rationale that
follows.
Los parmetros de Validacin para ensayo cromatogrfico se definen como: exactitud,
precisin, especificidad, linealidad y rango. Hay miles de expertos practicando cromatografa
a travs de la industria farmacutica y estos individuos han llegado a un acuerdo no escrito
en cuanto a lo que conllevara un procedimiento adecuado. La mayora de estos individuos
describira la resolucin, la forma del pico, co-elucin, deriva de la lnea base, el volumen
muerto y otros trminos relevantes cromatogrficamente. Sin embargo, todos estos trminos
son medidas especficas que describen las caractersticas de una separacin, pero no son
paralelos a los CVP definidas anteriormente. Por ejemplo, la especificidad de un
procedimiento puede ser descrito, en parte, por la resolucin de pares crticos de los picos, y
en parte por la probabilidad de co-elucin y tambin por el nmero y la altura de platos
tericos, y varios otros. Cada una de estas medidas ayuda a un analista a describir la
"bondad" de su procedimiento. Sin embargo, estas medidas no pueden adecuadamente
describir un procedimiento aceptable en forma aislada. Lo que se necesita es un enfoque
que permite a un analista para determinar con rapidez y decisin que su procedimiento es
aceptable. Los valores aceptables se han incluido en el captulo Cromatografa General
621 usando la lgica que sigue.
Figure 1. Bias%CV Tradeoff, 98%102% Limits, True Value = 100, Probability Passing 0.95.
For the 98%120% case, a user could simply plot the values of Bias and %CV. If the point
described by a procedures accuracy and precision falls in the shaded area of Figure 1, then
the procedure will (with a 95% probability) provide a passing value when the true value
passes. Because this is a statistical evaluation and not a chemical determination, the results
are conclusive.
Para el caso de 98% -102%, un usuario puede simplemente imprimir los valores del sesgo
y %CV. Si el punto descrito por un procedimiento de exactitud y precisin cae en el rea
sombreada de la figura 1, entonces el procedimiento proveer un valor pasable (con un 95%
de probabilidad) cuando el valor verdadero pase. Debido a que esto es una evaluacin
estadstica y no una determinacin qumica, el resultado es conclusivo.
Although the Assay acceptance criteria of 98%102% is the most prevalent in USPNF,
there are many other criteria in use. For the CVP approach to determining the acceptability of
a procedures accuracy and precision to be applied to cases other than the default, it is
necessary to calculate a new boundary line for each case. The development of a new
boundary line is not difficult, but is time consuming. However, there is another approach.
Because the boundary line is based on the statistical evaluation of a normal distribution, it is
possible to solve for the probability of the precision and accuracy values providing the correct
answer. When the calculated probability is less than 0.95, then the precision and accuracy
are acceptable. One way to speed the calculation is to use a program such as Microsoft
Excel. When using Excel, the probability would be calculated using the following equations:
Aunque el criterio de aceptacin del ensayo es de 985 102% es que ms prevalece en la
USP-NF, hay muchos otros criterios en uso. Para el enfoque CVP para determinar la
Figure 2. Guard Band for a CRM Labeled as 100% 0.06% Applied to Figure 1.
2. Where the acceptance criteria are asymmetric around 100%, but the entirety of the
range is between 97% and 103% (includes about 85%* of monographs in USPNF)
then:
The same equation is used, but the Lower and/or Upper value would be changed to describe
the smallest symmetric range having a mean of 100%.
2. Donde los criterios de aceptacin son asimtricas alrededor de 100%, pero la totalidad
del rango es de entre 97% y 103% (incluye aproximadamente el 85%* de las monografas
de USP-NF) entonces:
Se utiliza la misma ecuacin, pero el valor inferior y / o superior sera cambiado para
describir el rango simtrica ms pequeo que tiene una media de 100%.
3. Where the acceptance criteria are asymmetric mean other than 100%, and the value
of 100% is not included in the range, then calculate:
3. Si los criterios de aceptacin son asimtricos otra media que 100%, y el valor del 100%
no est incluido en el rango, entonces calcule:
Result = NORMDIST(Upper - Cert, Mean, SD, TRUE) - NORMDIST(Lower + Cert, Mean,
SD, TRUE)
Upper = upper limit of the Acceptance Range
Cert
= measurement uncertainty of the Standard used (= 0 for Standards with
unknown measurement uncertainty)
Mean = target content = (Upper + Lower)/2
SD
= standard deviation
TRUE = logical operator
Lower
= lower limit of the Acceptance Range
4. Where the range is larger than 97%103% and is not centered on 100%, the
determination of the intended mean and range need to be considered prior to
calculating the acceptable value. The details of these very rare cases are still being
considered. The problem of intent can be illustrated using an example acceptance
criteria of 85%103%. This criteria could be considered in two different ways:
4. Donde el rango es ms grande que 97% - 103% y no est centrado en 100%, la
determinacin se necesita considerar la determinacin de la media y el rango previsto
antes de calcular el valor aceptable. Todava se estn estudiando los detalles de estos
casos muy raros. El problema de la intencin se puede ilustrar usando un ejemplo los
criterios de aceptacin de 85% - 103%. Este criterio puede ser considerado de dos
maneras diferentes:
detection system being employed is capable of measuring the analyte and other materials
likely to be present. Resolution is the most effective measure of a separation. Generally
speaking, a resolution value of 2 would be described as being baseline separated and a
resolution of 0 would indicate no separation. Complete (baseline) separation is preferred, but
may represent much longer chromatographic run times, difficult chromatographic conditions,
or may be unattainable. Therefore, it is necessary to determine what resolution is necessary
to provide an adequate separation of two close eluting peaks. One way to quantify the effect
of resolution upon a chromatographic procedure is by the evaluation of the error caused by a
co-eluting or over-lapping peak.
La habilidad para describir una separacin adecuada de un analito crtico de las
interferencias es actualmente medido usando varios enfoques incluyendo: resolucin,
factores de separacin, factores de capacidad, forma del pico (coleo y fronteo), altura y
nmero de platos tericos, tiempos de retencin y varios otros. Todas estas medidas de
separacin asumen que el sistema de deteccin que est siendo empleado es capaz de
medir el analito y otros materiales comnmente presentes. La resolucin es la medida ms
efectiva de una separacin. Generalmente hablando, una resolucin de 2 podra describirse
como siendo separada en la lnea base y una resolucin de 0 indicara que no hay
separacin. Se prefiere la separacin completa (lnea base) pero puede representar corridas
cromatogrficas mucho ms largas condiciones cromatogrficas difciles, o no se puede
obtener. Por lo tanto, es necesario determinar qu resolucin es necesaria para proveer una
separacin adecuada de dos picos eluyendo muy cerca. Una forma de cuantificar el efecto
de resolucin sobre un procedimiento cromatogrfico es mediante la evaluacin del error
causado por un pico coeluyendo o traslapado.
SPECIFICITY ERROR
ERROR DE ESPECIFICIDAD
The signal (peak height or peak area) used to measure chromatographic response is
susceptible to error due to peak height or area shifts caused by co-elution of analytes.
Most detectors do not allow the differentiation of chemical entities present in a measured
peak. The exceptions are multi-dimensional detectors with deconvolution algorithms.
Where peaks overlap, there are many different ways to estimate the approximate
individual component concentrations and each has a related error.
La seal (altura o rea del pico) usada para medir la respuesta cromatogrfica es
susceptible de error debido a los cambios de rea o altura causada por coelucin de
analitos. Muchos detectores no permiten la diferenciacin de entidades qumicas
presentes en un pico medido. Las excepciones son los detectores multidimensionales con
algoritmos de deconvolucin. Donde los picos se traslapan, hay muchas maneras de
estimar la concentracin aproximada del componente individual y cada uno tiene un error
relacionado.
From a purely theoretical perspective, it is possible to calculate the percentage error caused
by overlapping peaks by evaluating the effect of secondary Gaussian peak with differing
sizes on a primary peak. The error is directly related to the size of the secondary peak, the
width of the peaks, and the distance between their peak values (retention time). Because
peak width and retention times are the critical variables in calculation of resolution, then
resolution and error are also directly linked. That relationship is described in Figure 3. The
values in Figure 3 are the area counts obtained by the traditional extending the sides of the
peak to baseline approach described in general chapter Chromatography 621 with and
without overlapping peaks. The size of the minor overlapping peaks range from 0.1% to 5%
of the primary peak.
Desde una perspectiva puramente terica, es posible calcular el error de porcentaje causado
por el traslape de picos mediante la evaluacin del efecto del pico secundario Gaussiano con
diferentes tamaos sobre un pico primario. El error es directamente relacionado al tamao
del pico secundario, el ancho de los picos, y la distancia entre sus valores de picos (tiempo
de retencin). Debido a que el ancho de pico y tiempo de retencin son las variables crticas
en el clculo de la resolucin, entonces la resolucin el error tambin est directamente
ligadas. La relacin se describe en la Figura 3. Los valores en la Figura 3 son el conteo de
reas obtenidas por el tradicional enfoque de extendiendo los lados del pico a la lnea base
descrito en el captulo general de Cromatografa <621> con y sin picos traslapados. El
tamao de los picos traslapados van desde 0.1% hasta 5% del pico principal.
The generally accepted rule of thumb for chromatographers is that a resolution of 1.25 is
sufficient to adequately quantify overlapping peaks but that 1.5 is preferred. Based on Figure
3, the rule of thumb appears to be correct. A resolution of 1.25 contributes significantly more
error to a determination than a resolution of 1.5, but with more sophisticated analytics (i.e.,
better peak area approximations) it is possible to reduce that error further. It is also clear that
below a certain level the presence of a small impurity will contribute an insignificant error in
the quantification of the primary component. The size of an insignificant impurity is directly
linked to the Precision and Accuracy evaluation discussed in the previous section. Please
note that the presence of impurities in a drug substance is not desirable, but for the purposes
of assaying the content of the active ingredient, small impurities or undetectable impurities
may not need consideration. The determination of these impurities will be considered
separately
La regla de oro generalmente aceptada para cromatgrafos es que una resolucin de 1.25
es suficiente para cuantificar adecuadamente los picos traslapados, pero se prefiere 1.5.
Basado en la figura 3, la regla de oro parece ser correcta. Una resolucin de 1.25 contribuye
significativamente ms error para una determinacin que una resolucin de 1.5, pero con
anlisis ms sofisticados (es decir, mejores aproximaciones de rea de los picos) es posible
reducir an ms el error. Tambin es claro que debajo de cierto nivel la presencia de una
impureza insignificante contribuir con un error insignificante en la cuantificacin del
componente primario. El tamao de una impureza insignificante est ligada directamente a la
evaluacin de la Precisin y Exactitud discutida en la seccin anterior. Por favor observe que
la presencia de impurezas en un frmaco no es deseable, pero para los propsitos de
ensayo del contenido del ingrediente activo, las pequeas impurezas o impurezas no
detectables pueden no ser consideradas. La determinacin de estas impurezas se considera
aparte.
ASSIGNABLE BIAS
SESGO ASIGNABLE
1. If an impurity that co-elutes with the principal peak is considered a component of the Bias
(assignable bias) in the analysis, then the likelihood of the presence of that impurity impeding
the quantification of the primary component can be calculated. The assignable bias is the
known concentration of the impurity presented as a percentage of the total primary
component concentration. The calculation is the same as given previously, but with the
assignable bias added to the accuracy value.
1. Si una impureza que coeluye con el pico principal se considera un componente del sesgo
(sesgo asignable) en el anlisis, entonces la probabilidad de que la presencia de esta
impureza impida la cuantificacin del componente principal puede calcularse. El sesgo
asignable es la concentracin conocida de la impureza presentada como un porcentaje de la
concentracin total del componente principal. El clculo es el mismo que se dio
anteriormente, pero con el sesgo asignable adicionado al valor de exactitud.
Range: The acceptability of a range is evaluated by calculating the precision and accuracy
values for each of the pre-pared solution concentrations described previously. Although these
solutions are prepared in triplicate and the acceptance values calculated in the Precision and
Accuracy section are based on 6 measurements, the calculations provide an adequate level
of confidence in the acceptability of the measurements. If all of the five solution triplicates
yield a value of 0.95 or greater, then the range of the instrument is adequate for the
measurement.
Rango: La aceptabilidad de un rango se evala calculando los valores de precisin y
exactitud para cada una de las concentraciones preparadas descritas anteriormente.
Aunque esas soluciones son preparadas por triplicada y los valores de aceptacin
calculados en la seccin de Precisin y exactitud se basan en las seis mediciones, los
clculos proveen un adecuado nivel de confianza en la aceptabilidad de las mediciones. Si
las cinco mediciones por triplicado dan un valor de 0.95 o ms grande, entonces el rango de
los instrumentos es adecuado para la medicin.
Linearity: Typically linearity is evaluated by comparing the signal to the concentration.
However, the slope and intercept of the linear regression of that line is of little consequence
as long as it is not too vertical or too horizontal. In addition, there are a number of detection
systems in development and use that provide unique capabilities but require non-linear
relationships between signal and concentration that can be modeled. Therefore, the best
manner to assess the linearity of a system is not to evaluate the signal-response curve, but
instead to evaluate the calculated concentration-known concentration curve. This approach
provides a means to assess the entire system including sample preparation, injection,
separation, detection, and post-processing. The calculated versus know concentration curve
should be very linear, and pass through the origin. However, as random error is introduced
into the system, there is a direct effect on the R 2 value of the linear regression. This effect is
illustrated in Figure 4. This plot represents the results of a linear regression on data that
ranged from 80% to 120% at known values with a random noise of a known percentage
added. As the amount of noise is increased, the variability of the R 2 value increases and the
centers of the ranges de-crease.
Linealidad: Tpicamente la linealidad se evala comparando la seal contra la
concentracin. Sin embargo, la pendiente y el intercepto de la regresin lineal de esta lnea
es de poca importancia, siempre y cuando no sea demasiada vertical ni demasiada
horizontal. Adems, hay un nmero de sistemas de deteccin en desarrollo y uso que
proveen capacidades nicas que requieren relaciones no lineales entre la seal y la
concentracin que puedan ser modelados. Por lo tanto, la mejor manera de evaluar la
linealidad de un sistema no es evaluar la curva de seal respuesta, sino evaluar la curva
de concentracin calculada contra la concentracin conocida. Este enfoque provee un medio
para evaluar el sistema entero, incluyendo la preparacin de la muestra, inyeccin,
separacin, deteccin, y post procesamiento. La curva de la concentracin calculada contra
la concentracin conocida debe ser lineal, y pasar a travs del origen. Sin embargo, como se
introduce error aleatorio dentro del sistema, hay un efecto directo sobre el valor de la R de
la regresin lineal. Este efecto se ilustra en la figura 4. Esta grfica representa los resultados
de una regresin lineal sobre los datos que van desde 80% a 120% en los valores conocidos
con un ruido aleatorio de un porcentaje conocido adicionado. A medida que aumenta la
cantidad de ruido, la variabilidad de los valores de R aumenta y los centros de los rangos
disminuyen.
Viewed another way, the error captured as the % RSD of the data when compared to the
square
of the residuals indicates a strong relationship (see Figure 5). This plot suggests that
a R2 value of greater than 0.994 and 0.990 would de-scribe an acceptable procedure for
98%102% and 97%103% acceptance ranges, respectively.
Visto de otra manera, el error capturado como el RSD% de los datos en comparacin con
el cuadrado de los residuos indica una relacin fuerte (vase la figura 5). Este grfico
sugiere que un valor R2 mayor que 0.994 y 0.990 describiran un procedimiento aceptable
para rangos de aceptacin de 98% -102% y 97% -103%, respectivamente.
In summary, it is clear that the precision and accuracy of an analytical procedure are
pivotal to defining the acceptability of a procedure. The specificity, linearity, and range are
also necessary that ensure the results of a procedure having acceptable precision and
accuracy will provide a meaningful approximation of the true value of an unknown sample.
When taken together, it is possible to describe an acceptable procedure using measures
that are in-dependent of chromatographic figures of merit typically used to describe a
procedure.
En resumen, est claro que la precisin y exactitud de un procedimiento analtico son
fundamentales para definir la aceptabilidad de un procedimiento. La especificidad, linealidad,
y rango tambin son necesarios para asegurar los resultados de un procedimiento teniendo
una precisin y exactitud aceptables proporcionar una aproximacin significativa del valor
verdadero de una muestra desconocida. Cuando se toman juntos, es posible describir un
procedimiento aceptable usando mediciones que son independientes de figuras
cromatogrficas de mrito usadas tpicamente para describir un procedimiento.
Chromatographic Analysis of Impurities
Anlisis cromatogrfico de impurezas
Organic impurities in drug substances are chemical species that should not be present. Their
presence may pose a health risk or may simply indicate a lack of quality. The acceptance
criteria for individual impurities are evaluated by the regulatory agencies prior to the
acceptance of a drug product for use in humans. Impurities are evaluated for safety and
those that show toxicity or have the potential to be a health risk are termed toxic impurities
and are specifically limited to low levels by the regulatory agency. Those organic impurities
that are not toxic at expected levels represent quality issues alone. International standard
setting groups have determined that non-toxic impurities present at less than 0.10% need not
be quantified and those of less than 0.05% may be ignored. Individual regulatory agencies
may lower these limits to better represent the drug substance being approved, but for a
public standard, the levels selected by the international body form an acceptable impurity
level. The acceptability of a procedure to evaluate non-toxic impurities in a drug substance is
directly linked to the CVPs defined by general chapter Validation of Compendial Procedures
1225. The validation chapter subdivides impurity procedures into those used in a semiquantitative limit test and those intended to be quantitative. The requirements for each are
significantly different; however, the requirements described for a limit test are insufficient for
the determination of acceptable limit tests. The means to demonstrate the acceptable limit
test are included in the following Chromatographic Limit Tests subsection. Fortunately,
determining the acceptability of a procedure. The major complication concerns the ability of
the detection systems to differentiate a measurand from background noise. The ability to
differentiate is determined through measurement of the LOD, but the conclusion that a
procedure with sufficient LOD has the differentiating power capable of presenting a true result
is unfounded. Instead, it is important to examine the precision of the measurement. The
relationship between the analytical concentration and the acceptable level of variability was
extensively explored by William Horowitz in the 1980s. He found that as the content of the
measurand decreases, the amount of variability from measurement to measurement
increases, regardless of the procedure used. Through the examination of a large body of
data, he developed an empirical relationship for laboratory-to-laboratory reproducibility. The
most common form of that relationship is:
Precisin: A diferencia del anlisis de un analito que es un constituyente principal en un
frmaco, la evaluacin de los componentes menores de concentracin indeterminada crea
complicaciones para determinar la aceptabilidad de un procedimiento. La principal
complicacin se refiere a la capacidad de los sistemas de deteccin para diferenciar un
mesurando del ruido de fondo. La capacidad de diferenciarse se determina mediante la
medicin de la LOD, pero la conclusin de que un procedimiento con suficiente LOD tiene el
poder diferenciador capaz de presentar un resultado verdadero es infundada. En cambio, es
importante examinar la precisin de la medicin. La relacin entre la concentracin analtica
y el nivel aceptable de variabilidad fue ampliamente explorada por William Horwitz en la
dcada de 1980. Se encontr que a medida que el contenido de la magnitud a medir
disminuye, la cantidad de variabilidad de medicin a medicin aumenta, independientemente
del procedimiento utilizado. A travs del examen de una gran cantidad de datos, desarroll
una relacin emprica para la reproducibilidad entre laboratorios. La forma ms comn de
esa relacin es:
Predicted % RSD = 2 (1 0.5 log C)
where C is the concentration as a dimensionless fraction (see Table 1).
Donde C es la concentracin como una fraccin adimensional (ver Tabla 1).
When this equation is extended to concentrations of 100 ppb (100 ng/g) or lower, the
relationship becomes constant. This observation was published by Thompson, et.al. , leading
to the Horowitz-Thompson equation used by the Association of Official Analytical Chemists
(AOAC) and by the Codex Alimentarius to describe acceptable procedures. This relationship
is typically called the Horowitz ratio or HORRAT in these publications. Subsequently, Massart
showed that the Horowitz ratio appears to be approximately twice that found in the evaluation
of repeatability. The Horowitz relationship is plotted in Figure 6 for reproducibility and
repeatability.
Cuando la ecuacin se extiende a concentraciones de 100 ppb (100 ng/g) o ms bajas, la
relacin llega a ser constante. Esta observacin fue publicada por Thompson, et al. dejando
la ecuacin Horwitz-Thompson usada por la Asociacin de Qumicos Analticos Oficiales
(AOAC, por Association of Official Analytical Chemists) y por el Codex Alimentarius para
describir procedimientos aceptables. Esta relacin es llamada tpicamente la relacin Horwitz
o HORRAT, en estas publicaciones. Subsecuentemente, Massart mostr que la relacin
Horwitz parece ser aproximadamente dos veces que la encontrada en la evaluacin de
Figure 6.
Concentration of Concentration of
Analyte
Analyte
(%)
(ppm)
100%
1%
10,000 ppm
0.1%
1000 ppm
0.05%
500 ppm
0.01%
100 ppm
0.001%
10 ppm
0.0001%
1 ppm
0.00001%
100 ppb
<0.00001%
<100 ppb
Concentration
with w/w Units
1000 g/g
10 mg/g
1 mg/g
500 g/g
100 g/g
10 g/g
1 g/g
0.1 g/g
<0.1 g/g
HorowitzHorowitz-Massart
Thompson
Repeatability
Reproducibility
Concentration
Value
Value
Fraction
(RSD)
(RSD)
1.0
1%
2%
0.01
2%
4%
0.001
2.8%
5.7%
0.0005
3%
6%
0.0001
4%
8%
0.00001
5.7%
11%
0.000001
8%
16%
0.0000001
11%
22%
<0.0000001
11%
22%
Limit of detection: The LOD is a PPM that is intended to assure that a procedure is
capable of detecting an impurity if it is present. There is agreement in the literature that the
best way to determine the LOD is through evaluating serial dilutions until a peak is no longer
detected. This is often a long and tedious process that yields a definitive answer.
However, too often analysts fall back on the 3 times noise rule of thumb that often obtains
results similar to the serial dilution approach. However, for a limit test, neither of these
approaches is optimal. Instead it is important to know that a procedure can differentiate
between a passing and a failing result. The interval between passing and failing must be
linked to the capabilities of the procedure. The best measure of the capability is the precision
of the measure. The PPAC for precision has been defined by the Horowitz equation. To
determine if the procedure has sufficient resolving power to determine whether a procedures
passes or fails, it is necessary to first demonstrate that the peak obtained from a spiked
measurand yields a peak area equal to or greater than the Standard solution at the limit.
Then a solution that has an x% lower than the limit is measured. The x% is defined by the
Horowitz equation. This solution must give a passing result, thereby demonstrating an
acceptable level of detection and an acceptable accuracy of that determination.
Lmite de deteccin: El LOD es un PPM que est destinado a asegurar que un procedimiento
es capaz de detectar si una impureza est presente. Hay un acuerdo en la literatura que el
mejor camino para determinar el LOD es a travs de la evaluacin de una serie de diluciones
hasta que el pico ya no sea detectado. Este frecuentemente es un proceso largo y tedioso
que dar una respuesta definitiva.
Sin embargo, frecuentemente los analistas recurren a la regla de tres veces el ruido que a
menudo obtiene resultados similares al enfoque de dilucin en serie. En cambio, es
importante saber que un procedimiento puede diferenciar entre un resultado que pasa y uno
que falla. El intervalo entre pasa y falla debe estar vinculada a la capacidad del
procedimiento. La mejor medida de la capacidades la precisin de la medida. El PPAC para
la precisin ha sido definido por la ecuacin Horwitz. Para determinar si el procedimiento
tiene suficiente poder de resolver para determinar si un procedimiento pasa o falla, es
necesario primero demostrar que el pico obtenido de una serie de mesurandos adicionados
produce un rea de pico igual o ms grande que la solucin estndar en el lmite. Entonces
se mide una solucin que tiene una x% ms baja que el lmite. La x% se define por la
ecuacin de Horwitz. Esta solucin debe dar un resultado de pasa demostrando un nivel
aceptable de deteccin y exactitud de esta determinacin.
CHROMATOGRAPHIC QUANTITATIVE TESTS
PRUEBAS CROMATOGRFICAS CUANTITATIVAS
Many of the considerations for the CVP described in the Chromatographic Limit Tests
section also apply to the quantitative test. However, due to the need to provide a specific
numerical content of the impurity (measurand) in an article (drug substance or product), a
more exhaustive evaluation of accuracy, precision, and linearity is necessary.
Muchas de las consideraciones para el CVP descritas en la seccin de Pruebas Lmites
Cromatogrficas tambin aplican para las pruebas cuantitativas. Sin embargo, debido a la
necesidad de proveer un contenido especfico numrico de la impureza (mesurando) e un
artculo (frmaco o medicamento), es necesaria una evaluacin ms exhaustiva de
exactitud, precisin y linealidad.
Accuracy: The accuracy of a procedure is defined as the ability to obtain the true value for
a known measurement. In the case of an impurity measurement, like that for a content assay,
the precision and accuracy are very closely related. As the concentration of the measurand
decreases in relation to the concentration of the major component, the ability to accurately
and precisely measure the impurity also decreases as described by the Horowitz equation.
Generally speaking, the accuracy of a procedure is linked to systematic error of a
measurement. The systematic error is independent of the number of analyses and is
generally fixed or varies in a predictable manner. The systematic error so described is also
called the systematic bias. The evaluation of bias is best completed using spike recovery
studies over the range of values that a measurand is expected to be present. The accuracy
or bias of a measurement should not be described by the precision of that measurement, but
should be negligible. However, the term negligible has little meaning without a frame of
reference. For the determination of an acceptable procedure, negligible can be defined as
having a bias that is smaller than the acceptable precision of a measurement. Once again,
the Horowitz/Massart repeatability value describes the acceptable precision relative to the
relative concentration of the measurand.
Exactitud: La Exactitud de un procedimiento se define por la habilididad de obtener el valor
verdadero para una medida conocida. En el caso de una impureza medida, como la de un
ensayo de contenido, la precisin y exactitud estn cercanamente relacionadas. Como la
concentracin del mesurando decrece en relacin a la concentracin del componente
principal, la habilidad de medir exacta y precisamente la impureza tambin decrece como se
describe en la ecuacin de Horwitz. Generalmente hablando, la exactitud de un
procedimiento est ligado a errores sistemticos de una medicin. El error sistemtico es
independiente del nmero de anlisis y est generalmente establecido o vara de una
manera predecible. El error sistemtico as descrito es tambin llamado sesgo sistemtico.
La evaluacin del sesgo es mejor completado usando estudios de recobro adicionado sobre
el rango de valores que se espera est presente el mesurando. La exactitud o sesgo de
una medida no debe ser descrita por la precisin de esta medida, pero debe ser
insignificante. Sin embargo, el trmino insignificante tiene poco sentido sin un marco de
referencia. Para la determinacin de un procedimiento aceptable, insignificante puede
definirse como que tiene un sesgo que es ms pequeo que la precisin aceptable de una
medida. Una vez ms, el valor de Repetibilidad Horwitz/Massart describe la precisin
aceptable relativa a la concentracin relativa del mesurando.
Precision: The precision of a measurement can be split into three different types:
repeatability, intermediate precision, and reproducibility. The first evaluates instrumental and
sample preparation sources of variability, the second examines variability caused by
deliberate changes to the measurement environment, and the third examines the variability
typically found through interlaboratory studies. In the determination of an acceptable
procedure an understanding of all sources of variability does not need to be individually
determined. Instead it is possible to model the types of variability likely to be encountered in
reproducibility through the deliberate changes from the intermediate precision studies.
Precisin: La precisin de la medicin se puede dividir en tres tipos diferentes: repetibilidad,
precisin intermedia y reproducibilidad. La primera evala fuentes de variabilidad de
preparacin de la muestra e instrumentales, el segundo examina la variabilidad causada por
cambios deliberados en el entorno de medicin, y de la tercera examina la variabilidad
normalmente encontrado a travs de estudios entre laboratorios. En la determinacin de un
procedimiento aceptable no necesita determinarse individualmente la comprensin de todas
las fuentes de variabilidad. En cambio, es posible modelar los tipos de variabilidad que es
probable encontrar en la reproducibilidad a travs de los cambios deliberados de los
estudios de precisin intermedia.
RepeatabilityThe repeatability portion of a quantitative procedure validation is
conducted by preparing six spiked sample solutions, each containing one or more
of the impurities of interest at the analytical significant concentration. The relative
standard deviation of these measurements is then compared to the HorowitzMassart value appropriate for the concentration of the measurand(s).
Repetibilidad-La parte de repeticin de un procedimiento de validacin cuantitativa
se lleva a cabo mediante la preparacin de seis soluciones de muestra
adicionadas, cada uno con una o ms de las impurezas de inters en la
concentracin significativa analtica. La desviacin estndar relativa de estas
mediciones se compara entonces con el valor apropiado Horowitz-Massart para la
concentracin del mesurando.
Where it is not possible to spike the analyte with a standard for the measurand,
then the use of a retention time and relative response factor can be used. Although
this approach is not optimal, it may be the only way to evaluate unstable or
transient degradation products. Alternatively, a reference standard with the critical
impurities already present of developed in situ could be used. The knowledge of
the actual concentration of these impurities is impaired, but the materials could be
used to complete the validation of the procedure. Wherever possible, a pure
standard of the degradation product or process impurity is preferred.
Donde no sea posible adicionar el analito con un estndar para el mesurando,
entonces se puede usar el tiempo de retencin y el factor de respuesta relativa.
Aunque este enfoque no es el ptimo, puede ser la nica manera de evaluar
productos de degradacin inestables o transitorios. Alternativamente, se puede
usar un estndar de referencia con las impurezas crticas presentes o
desarrolladas in situ.
El conocimiento de la concentracin actual de estas impurezas se ve afectada,
pero los materiales se podran utilizar para completar la validacin del
procedimiento. Siempre que sea posible, se prefiere un estndar puro del
producto de degradacin o impureza del proceso.
Intermediate precisionThe evaluation of the intermediate precision may be
determined by repeating the Repeatability measurements previously described
after a controlled deliberate change is made to the testing environment. The types
of changes that are most useful for the determination of an acceptable procedure
include different days, different instrumentation, different analysts, and using
different instrumental conditions. The first three are particularly useful because
they link the variability to the Horowitz-Thompson equation. The evaluation of
variability caused by all four specified conditions is not necessary because the
information provided by more than one condition does not generally provide any
additional information. Therefore, the analyst should determine which conditions to
be pursued. The result of the two sets of data (this should be 12 individual
measurements) should be compared to the Horowitz ratio appropriate for the
concentration of the measurement(s).
Precisin Intermedia La evaluacin de la precisin intermedia se puede
determinar mediante la repeticin de las mediciones de Repetibilidad descritas
anteriormente despus de un cambio deliberado controlado en el entorno de
pruebas. Los tipos de cambio que son ms tiles para la determinacin de un
procedimiento aceptable incluye diferentes das, diferentes instrumentos,
Specificity: The requirements of the specificity in a quantitative procedure are the same as
those described above for a limit test.
Especificidad: Los requerimientos de la especificidad en un procedimiento cuantitativo son
las mismas descritas para una prueba lmite.
Linearity: The linearity of the procedure is intended to assure the analyst that the procedure
being validated is capable of determining an accurate and precise quantity for the measurand
over the range that a typical unknown measurement will be made. The accuracy and
precision requirements described for a quantitative impurity test also provides this assurance.
By determining the precision at several points across the analytical concentration range
appropriate to the measurand, the need for a separate linearity requirement is eliminated.
Linealidad: La linealidad de un procedimiento est destinado para asegurar al analista que
el procedimiento que est siendo validado es capaz de determinar una cantidad exacta y
precisa para el mesurando sobre el rango que se realizar en una medicin desconocida
tpica. Los requerimientos de exactitud y precisin descritos para una prueba de impureza
cuantitativa tambin provee esta seguridad. Mediante la determinacin de la precisin en
varios puntos a travs del rango de la concentracin analtica apropiada para el mesurando,
se elimina la necesidad de un requerimiento separado de linealidad.
Limit of quantification and range: The limit of quantification and the range are values that
are evaluated to ensure that the analytical procedure is appropriate for the evaluation of a
measurand at an unknown value. In the case of a compendial procedure, the value of the
measurand is known before a procedure is validated. Typically, an impurity procedure will
define the maximum concentration that an impurity may be present in a sample. By
completing the accuracy requirement, the analyst knows that the procedure is capable of
quantifying the measurand at half of the maxi-mum acceptable value for the impurity. The
accuracy requirement will also ensure that a procedure will provide acceptable results at
twice the maximum acceptable concentration of the impurity. Successful completion of the
accuracy requirements will provide sufficient confidence in the procedures adequacy, and
therefore no additional evaluation of these characteristics is required to define an acceptable
procedure.
Lmite de cuantificacin y rango: El lmite de cuantificacin y el rango son los valores que
se evalan para asegurar que el procedimiento de anlisis es adecuado para la evaluacin
de una magnitud a medir en un valor desconocido. En el caso de un procedimiento
compendial, el valor de la magnitud a medir se conoce antes de validar un procedimiento.
Tpicamente, un procedimiento de impureza definir la concentracin mxima que una
impureza puede estar presente en una muestra. Al completar el requisito de precisin, el
analista sabe que el procedimiento es capaz de cuantificar la magnitud a medir a la mitad del
valor mximo aceptable para la impureza. El requisito de exactitud tambin se asegurar de
que un procedimiento proveer resultados aceptables al doble de la concentracin mxima
aceptable de la impureza. Completar con xito los requisitos de precisin proporcionar
suficiente confianza en la adecuacin del procedimiento, y por lo tanto no se requiere una
evaluacin adicional de estas caractersticas para definir un procedimiento aceptable
The Meaning of Acceptability
Up to this point, this document has focused on describing an acceptable procedure from a
purely empirical and approachable manner. To that end, the CVPs have been defined and
the performance criteria for each of these CVPs has been described. However, the
fundamental question of the adequacy of the CDP has yet to be discussed. Comprehensive
descriptions of the types of equivalence should be considered when comparing an analytical
procedure with a compendial procedure. The first, and in many ways most appropriate,
approach is that of an acceptable procedure. This is a procedure that with pre-defined
performance criteria that describe a procedure adequate to achieve an approximation of the
true value of an unknown without previously defining the procedure itself.
El significado de la aceptabilidad
Hasta este punto, este documento se ha centrado en la descripcin de un procedimiento
aceptable de una manera puramente emprica y accesible. A tal fin, los CVP han sido
definidos y han sido descritos los criterios de desempeo para cada uno de estos CVP. Sin
embargo, la cuestin fundamental de la adecuacin del CDP an no se ha discutido.
Descripciones completas de los tipos de equivalencia deben ser consideradas cuando se
compara un procedimiento analtico con un procedimiento compendial. El primer enfoque, y
en muchos aspectos el ms apropiado, es el de un "procedimiento aceptable". Este es un
procedimiento que con criterios de desempeo pre-definidos que describen un
procedimiento adecuado para lograr una aproximacin del valor real de un desconocido sin
definir previamente el procedimiento en s.