ACTIVITATEA HIDROLAZELOR LIZOZOMALE RENALE

N INTOXICAIA CU ETILENGLICOL I INFLUENA UNOR

COMPUI BIOLOGICI ACTIVI AUTOHTONI
Olga Tagadiuc, Emil Ceban, Veronica Sardari, Olga trba, Lilia Andronache
Laboratorul Biochimie, USMF Nicolae Testemianu
Summary
The activity of renal lysosomal hydrolases in ethylene glycol intoxication
and the influence of some new local biologically active compounds
The influence of some new local biologically active compounds (BAC) on renal lysosomal
hydrolases (RLH) in ethylene glycol (EG) poisoning was investigated. The tested BAC
demonstrated a pronounced tropic effect on lysosomes, influencing in different ways the activity
of RLH and modifying the functional status of lysosomal apparatus. The complex compounds
CMD-4, CMD-8 and CMJ-23, remedies BioR and BioR-Ge significantly reduced the
functionality of cathepsins B, H and of elastase. CMJ-23 decreased the activity of cathepsin G,
-glucosidase, arylsulfatases A, B and C, which showed the high responsiveness of these
hydrolases to the action of BAC. CMD-8 increased the activity of cathepsin D, -glucosidase
and of N-acetyl--D-glucosaminidase. The remedy BioR normalized the activity of elastase,
while BioR-Ge increased the acid phosphatase. The increased activity of RLH in the
administration of the tested BAC, can be considered as a reaction of compensation-adaptation of
the body, aimed to enhance the biodegradation of damaged molecules resulted from the toxic
action of EG and of its metabolic products.
Rezumat
S-a cercetat influena unor compui biologici activi (CBA) autohtoni noi asupra activitii
hidrolazelor lizozomale renale (HLR) n intoxicaia cu etilenglicol (EG). CBA testai au
demonstrat un lizozomotropism pronunat, fiind capabili s influeneze n mod diferit activitatea
HLR i s modifice starea funcional a aparatului lizozomal. Compuii compleci CMD-4,
CMD-8 i CMJ-23, remediile BioR, BioR-Ge au redus pregnant nivelul funcional al
catepsinelor B, H i elastazei. CMJ-23 a diminuat activitatea catepsinei G, -glucozidazei,
arilsulftazelor A, B i C., fapt ce a demonstrat sensibilitatea nalt a acestor hidrolaze la aciunea
CBA. CMD-8 a majorat activitatea catepsinei D, -glucozidazei i N-acetil--D-glucozaminidazei. Remediul BioR a normalizat enzimoactivitatea elastazei, iar BioR-Ge a crescut
fosfataza acid. Intensificarea activitii HLR la administrarea CBA cercetate, poate fi apreciat
ca o reacie compensatoare de adaptare a organismului, ce tinde s intensifice biodegradarea
moleculelor defectuoase ce se formeaz n rezultatul aciunii toxice a EG i a produilor lui de
metabolizare.
Actualitatea temei
Patologiile renale continu s rmn una din cele mai dificile probleme ale medicinei
contemporane att n aspectul diagnosticului i tratamentului, ct i n aspectul elucidrii
mecanismelor intime, moleculare ale apariiei i dezvoltrii lor, cunoaterea crora este
indispensabil diversificrii abordrilor terapeutice i profilactice.
Datele privind rolul hidrolazelor lizozomale n dezvoltarea proceselor patologice, inclusiv
celor renale sunt incomplete i deseori contradictorii, acestor enzime atribuinduli-se att efecte
nocive potente, ct i un rol esenial n procesele ce asigur adaptarea organului i regenerarea
tisular [1, 4, 8, 14, 16].
n condiii fiziologice hidrolazele lizozomale sunt verigi reglatoare importante ale
diferenierii celulare, angiogenezei, renovrii esuturilor prin degradarea elementelor matricei
extracelulare i distrugerea celulelor mbtrnite sau deteriorate, etc. [2, 6, 15]. Totodat,
endopeptidazele lizozomale sunt responsabile de inducia proceselor distructive, apoptotice n

rinichi, inductori ai activitii apoptotice a catepsinelor considerndu-se produsele oxidrii

peroxidice ale lipidelor [6].
Etilenglicolul (EG) reprezint o substan toxic, fiind cel mai simplu diol. Este un lichid
incolor, hidrosolubil, care se folosete ca dizolvant pentru vopsele, mase plastice i substane
farmaceutice, precum i la fabricarea fluidelor hidraulice, lichidelor pentru curat parbrize,
antigelului i a preparatelor decongelante. Ptrunderea etilenglicolului sau a soluiilor lui n
organismul uman poate conduce la modificri ireversibile i chiar la deces [3, 13].
Efectele toxice sunt determinate att de compusul per se, ct i de metaboliii lui. EG se
metabolizeaz n organism prin oxidare cu formarea aldehidei i acidului glicolic, acidului
glioxalic i acidului oxalic, care manifest aciune citotoxic la nivel renal. Acidul oxalic se
combin cu ionii de calciu din snge, formnd precipitate de oxalat de calciu, care se pot
depozita n toate esuturile, ndeosebi la nivelul tubilor renali, determinnd leziuni interstiiale,
tubulare renale i blocaj renal [9, 11]. Acidul oxalic poate precipita sub form de cristale de
oxalat de calciu la nivel cerebral, renal, cardiac, pulmonar, pancreatic i urinar. n literatura de
specialitate au fost relevate mai multe efecte negative ale EG asupra proceselor metabolice din
organism hiperosmolaritatea, acidoza metabolic, hipocalcemia, hiperpotasiemia. Deasemenea,
au fost nregistrate dereglri ale funciei diferitor organe i sisteme [7].
Publicaiile tiinifice, la care am avut acces, nu ne-au furnizat informaii despre existena
unor studii detaliate privind implicarea aparatului lizozomal renal la obolanii intoxicai cu
etilenglicol, precum i influena compuilor biologic activi (CBA) autohtoni (baze Schiff noi,
combinaiile lor cu metale tri-d) i remediilor de origine cianobacterian asupra acestuia.
Elucidarea aspectelor noi ale activitii compuilor menionai i ale mecanismelor
biochimice de aciune asupra aparatului lizozomal este actual i de perspectiv pentru
diversificarea arsenalului de remedii eficiente, necesare pentru corecia dereglrilor ce apar n
afeciunile renale, precum i n alte patologii.
Scopul cercetrii const n elucidarea influenei compuilor compleci CMD-4, CMD-8 i
CMJ-23 i a remediilor cianobacteriene BioR i BioR-Ge asupra activitii proteazelor
lizozomale catepsinelor B, D, G, H i a hidrolazelor N-acetil--D-glucozaminidazei (NAG),
leucinaminopeptidazei, elastazei, fosfatazei acide, -glucozidazei, -galactozidazei,
arilsulfatazelor A, B i arilsulfatazei C n esutul renal la obolanii intoxicai cu etilenglicol.
Materiale i metode
Compuii compleci CMD-4, CMD-8 i CMJ-23 au fost oferii de academicianul, prof.
univ., d.h.ch. Gulea Aurelian (Catedra Chimie anorganic, Universitatea de Stat din Moldova),
iar bioremediile BioR i BioR-Ge de academicianul A a R. Moldova, prof. univ., d.h.b., Rudic
Valeriu (Institutul de Microbiologie al A a R. Moldova).
Activitatea biologic a compuilor menionai mai sus a fost evaluat n experiene pe un
lot de 34 obolani albi masculi aduli, fr pedigriu cu masa 160-180 g, divizai n 7 loturi a cte
5-6 animale n fiecare. Primul lot martorul, a fost constituit din 6 animale, ntreinute la un
regim obinuit alimentar de vivariu i crora li se injecta intramuscular soluie fiziologic timp
de 30 zile. Animalelor din loturile experimentale 2-7 li s-a administrat per os etilenglicol zilnic
n doz 1 g/kg mas corporal pe parcursul a 30 de zile. Lotul 2 l-au format animalele cu
nefropatie experimental, crora n decursul a 30 zile li se injecta i/m soluie fiziologic.
Animalele din loturile 3-7 au fost supuse tratamentului cu CMD-4, CMD-8 i CMJ-23 i
remediile cianobacteriene BioR i BioR-Ge.
La 24 ore dup ultima injectare animalele au fost sacrificate sub narcoz uoar cu eter
sulfuric. Rinichii au fost extrai i s-a preparat omogenatul renal n soluie de 0,1 M tampon
fosfat, ce coninea 1 mM EDTA, pH 7,4, astfel ca diluia final a omogenatului s constituie
1:10. Pentru distrugerea complet a membranelor celulare omogenatul a fost prelucrat cu triton
X-100 n concentraia final 0,1%. Ulterior, omogenatele tisulare au fost supuse centrifugrii
timp de 15 min la 3000 tur/min, iar supernatantul a fost transferat n eprubete curate i pn la

examinare pstrat n congelator la t=400C. ntreg procesul de preparare a omogenatelor tisulare

se execut n condiii regulamentare pentru aprecierea activitii enzimatice.
Activitatea hidrolazelor lizozomale catepsinelor B, D, G, H, precum i a N-acetil--Dglucozaminidazei, leucinaminopeptidazei, elastazei, fosfatazei acide, -glucozidazei, -galactozidazei, arilsulfatazelor A, B i arilsulfatazei C a fost determinat n omogenate conform
procedeelor descrise anterior [5, 10].
Toate procedeele de determinare a activitii enzimelor i a coninutului de substane au
fost executate dup tehnici, adaptate pentru aplicarea la riderul hibrid multi-modal cu microplci
Synergy H1 (Hydrid Reader) (BioTek Instruments, SUA).
Rezultatele obinute au fost evaluate statistic conform criteriului nonparametric U MannWitney cu ajutorul programului StatDirect.
Cercetarea a fost aprobat de Comitetul de Etic a Cercetrii a USMF Nicolae
Testemianu (aviz pozitiv din 20 iunie 2011).
Rezultate i discuii
Rezultatele cercetrii atest c, intoxicarea cu etilenglicol determin o cretere neveridic a
activitii catepsinei B i o tendin de diminuare a catepsinelor D, G i H fa de lotul
animalelor intacte (tabelul 1).
Tabelul 1
Activitatea catepsinelor lizozomale n esutul renal la animalele supuse intoxicaiei cu
etilenglicol i la administrarea unor compui biologic activi (CBA) autohtoni
Grupurile de
Cat B
Cat D
Cat G
Cat H
studiu
(nM/s.g.prot)
(nM/s.g.prot)
(nM/s.g.prot)
(nM/s.g.prot)
Martor
4,390,68
0,6570,068
4,430,26
9,490,61
(100%)
(100%)
(100%)
(100%)
EG
5,250,88
0,5680,117
3,660,28
8,120,95
(120%)
(86%)
(83%)
(86%)
EG+BioR
2,050,095**#
0,3910,064*
4,140,27
6,730,65*
(47%)
(60%)
(93%)
(71%)
EG+BioR-Ge
2,770,206
0,6680,069
4,290,32
7,280,64
(63%)
(102%)
(97%)
(77%)
EG+ CMD-4
1,640,184*#
0,5520,199
3,830,29
6,680,62*
(37%)
(84%)
(86%)
(70%)
EG+ CMD-8
1,710,18*#
0,9360,065*
3,610,33
6,100,59**
(39%)
(142%)
(81%)
(64%)
EG + CMJ-23
1,240,22*
0,6860,190
2,810,30*
4,950,58*#
(28%)
(104%)
(63%)
(52%)
NOT: * - diferen statistic semnificativ cu lotul-martor, p<0,05; ** - p<0,01; *** - p<0,001;
#
diferen statistic semnificativ fa de lotul cu etilenglicol, p<0,05; ## p<0,01; ### - p<0,001.

Administrarea CBA luai n studiu determin reducerea concludent statistic a funciei

catalitice a catepsinei B cu 53%-72%, a catepsinei H cu 29%-48% n raport cu nivelul atestat la
animalele intacte, exceptnd doar biopreparatul BioR-Ge care scade neveridic statistic
enzimoactivitatea catepsinelor nominalizate cu 23%-37%. n acelai timp compusul BioR-Ge
readuce potenialul funcional al catepsinelor D i G pn la valorile normale.
Utilizarea remediului BioR induce suprimarea evident a activitii proteinazei aspartilice
catepsinei D cu 40% (p<0,05) n comparaie cu valorile lotului-martor. n acelai timp compusul
CMD-4 menine enzimoactivitatea catepsinei D la valori similare celor nregistrate la animalele
intoxicate cu etilenglicol, CMJ-23 o readuce ctre valorile normale, iar CMD-8 crete
funcionalitatea catepsinei D cu +42% (p<0,05) fa de valorile specifice martorului. Creterea
activitii catepsinei D sub aciunea compusului CMD-8 denot o inducie selectiv a
3

fermentului. Aceasta poate influena esenial asupra procesului de iniiere a proteolizei, deoarece
la degradarea proteinelor de ctre enzimele lizozomale prima lovitur este dat anume de
catepsina D, iar peptidele mari rezultate sunt scindate apoi de alte proteaze [12]. Aparinnd
clasei proteinazelor aspartilice, catepsina D ndeplinete rolul proteolizei intralizozomale.
n cazul catepsinei G doar compusul CMJ-23 scade semnificativ statistic cu 37% (p<0,05)
enzimoactivitatea n raport cu valorile animalelor intacte.
Modificrile acivitii leucinaminopeptidazei (LAP) i N-acetil--D-glucozaminidazei
(NAG) la animalele intoxicate cu etilenglicol au fost minimale i practic nu se deosebeau de
valorile martorului (tabelul 2). Medicaia cu bioremediile testate a condus la schimbri a
activitii LAP fr relevan statistic.
Administrarea compuilor compleci CMD-4 i CMD-8 se soldeaz cu sporirea statistic
concludent a activitii NAG att fa de martor, ct i fa de lotul de animale supus intoxicaiei
cu etilenglicol. Spre deosebire de LAP i NAG, nivelul funcional al elastazei scade statistic
semnificativ cu 11% (p<0,05) fa de valorile specifice lotului martor. Pe fundal de intoxicaie cu
etilenglicol doar remediul BioR exercit un efect modulant asupra enzimoactivitii elastazei,
amploarea funcional fiind net superioar cu 23% (p<0,05) n raport cu valorile animalelor
intoxicate.
Medicaia cu BioR-Ge i compuii compleci CMD-4, CMD-8, CMJ-23, dimpotriv,
determin o reducere elocvent, sugestiv statistic a activitii elastazei, att fa de lotul martor,
ct i n comparaie cu animalele intoxicate, aceasta constituind 47%-57% din nivelul relevat n
lotul martor.
Cercetrile efectuate demonstreaz c, pe fundal de intoxicaie medicaia cu bioremediul
BioR-Ge induce creterea statistic semnificativ a activitii fosfatazei acide cu 43% (p<0,05) n
raport cu nivelul atestat la animalele intacte, pe cnd majorarea produs de compusul CMD-4 cu
44% s-a dovedit a fi fr relevan statistic.
Tabelul 2
Influena unor CBA autohtoni asupra hidrolazelor lizozomale n esutul renal la animalele
intoxicate cu etilenglicol i la administrarea unor compui biologic activi (CBA) autohtoni
Fosfataza
Grupurile de
LAP
Elastaza
NAG
acid
studiu
(nM/s.g.prot)
(nM/s.g.prot)
(nM/s.g.prot)
(nM/s.g.prot.)
Martor
1689,0978,95
27,860,47
17,210,82
1,670,12
(100%)
(100%)
(100%)
(100%)
EG
1788,58113,33
25,021,07*
17,401,22
1,770,10
(106%)
(89%)
(101%)
(106%)
#
EG+BioR
1623,7961,51
30,741,65
20,981,36
1,880,18
(96%)
(110%)
(122%)
(113%)
##
EG+BioR-Ge
1722,7321,51
13,130,36**
20,290,96
2,380,24*
(102%)
(47%)
(118%)
(143%)
#
##
EG+ CMD-4
1819,6352,99
13,971,53*
21,920,50**
2,400,33
(108%)
(50%)
(127%)
(144%)
##
#
EG+ CMD-8
1448,45146,24
15,990,86**
20,200,55*
1,410,20
(86%)
(57%)
(117%)
(84%)
#
EG+ CMJ-23
1304,93203,67
13,270,88*
16,760,98
1,740,19
(77%)
(48%)
(97%)
(104%)
NOT: LAP- leucinaminopeptidaza; NAG - N-acetil--D-glucozaminidaza;
* - diferen statistic semnificativ cu lotul-martor, p<0,05; ** - p<0,01; *** - p<0,001.
#
diferen statistic semnificativ fa de lotul cu etilenglicol, p<0,05; ## p<0,01; ### - p<0,001.

Tabelul 3
Activitatea hidrolazelor lizozomale n esutul renal la animalele intoxicate cu etilenglicol
i la administrarea unor compui biologic activi (CBA) autohtoni
Grupurile de
AS A i B
AS C
-glucozidaza
-galact
studiu
(nM/s.g.prot.)
(nM/s.g.prot.)
(nM/s.g.prot.)
(nM/s.g.prot)
Martor
0,4380,007
2,410,24
4,250,11
12,280,55
(100%)
(100%)
(100%)
(100%)
EG
0,4490,012
2,230,36
4,010,26
10,970,83
(103%)
(93%)
(94%)
(89%)
EG +BioR
0,9070,269
1,900,19
4,140,27
12,500,92
(207%)
(79%)
(97%)
(102%)
EG +BioR-Ge
0,4820,023
2,640,19
4,290,32
11,850,48
(110%)
(110%)
(101%)
(96%)
EG l+ CMD-4
0,4670,037
2,180,24
3,830,29
11,710,86
(107%)
(90%)
(90%)
(95%)
EGl+ CMD-8
0,4930,019*
2,120,22
3,610,33
11,961,08
(113%)
(88%)
(85%)
(97%)
#
EG + CMJ-23 0,3140,024*
1,540,14
2,810,30*
7,551,43*
(72%)
(64%)
(66%)
(61%)
NOT: -galact - -galactozidaza; AS arilsulfataza;
* - diferen statistic semnificativ fa de lotul-martor, p<0,05; ** - p<0,01; *** - p<0,001;
#
diferen statistic semnificativ fa de lotul cu etilenglicol, p<0,05; # # p<0,01; ### - p<0,001.

Rezultatele de evaluare a activitii hidrolazelor lizozomale -glucozidazei, galactozidazei, arilsulfatazelor A, B i arilsulfatazei C n esutul renal la animalele cu nefropatie
indus cu etilenglicol i la aciunea unor CBA studiai sunt reprezentate n tabelul 3. Astfel, la
animalele intoxicate cu etilenglicol modificrile enzimelor nominalizate au fost neimportante,
meninndu-se practic n limitele valorilor normale.
Medicaia cu biopreparatul BioR suscit o cretere dubl statistic neveridic a activitii glucozidazei fa de valorile de referin.
Utilizarea compuilor compleci CMD-8 i CMJ-23 conduce la majorarea concludent
statistic a -glucozidazei cu 13% (p<0,05) comparativ cu parametrii de referin i reducerea
elocvent cu 28% (p<0,05) n raport cu nivelul atestat la animalele intacte i cu 30% (p<0,05)
fa de animalele intoxicate.
Modificrile activitii -galactozidazei sub influena tratamentului cu CBA studiai au fost
diverse: de la o scdere cu 36% indus de CMJ-23, pn la o devansare cu 10% produs de
BioR-Ge comparativ cu valorile martorului, dar schimbrile fiind fr relevan statistic.
Totodat, n rezultatul medicaiei cu compuii cercetai, numai CMJ-23 a reuit s suprime
sugestiv statistic funcionalitatea arilsulftazelor A, B i C cu 34%-39% fa de nivelul atestat la
animalele martor, pe cnd celelalte preparate practic menin enzimoactivitatea arilsulfatazelor n
limitele valorilor normale.
Rezultatele obinute relev implicarea potent a hidrolazelor lizozomale n rspunsul
rinichilor la aciunea etilenglicolului ca parte component a mecanismului de adaptare a
organismului la aciunea xenobioticelor. Rinichii, fiind principalul organ de excreie sunt
permanent supui agresiunilor, att a xenobioticelor, ct i a produilor intermediari i/sau finali
ai metabolizrii lor. Gradul diferit de modificare a activitii enzimelor atest, probabil, nivelul
implicrii acestora n remedierea dereglrilor metabolice i structurale n rinichi.
Astfel, compusul CMD-8 majoreaz activitatea catepsinei D, iar CMD-4, CMD-8 sporesc
funcionalitatea NAG. Remediul BioR normalizeaz enzimoactivitatea elastazei, BioR-Ge crete
fosfataza acid, CMD-8 induce -glucozidaza..

Compuii compleci testai CMD-4, CMD-8 i CMJ-23, remediile BioR, BioR-Ge reduc
pregnant nivelul funcional al catepsinelor B, H, elastazei, iar CMJ-23 scade statistic concludent
activitatea catepsinei G, -glucozidazei, arilsulftazelor A, B i C. Dinamica divers a activitii
catepsinelor lizozomale demonstreaz, probabil, sensibilitatea lor diferit la substanele
menionate.
Gradul de interferen a remediilor cu activitatea proteazelor lizozomale variaz, fiind
influenat de mai muli factori particularitile conformaionale ale diferitor enzime, raportul
dintre activatori i inhibitori, stabilitatea membranelor lizozomale, valoarea pH mediului,
inducia i suprimarea la nivel genetic i alte momente.
Aciunea modulatoare a bioremediilor testate asupra activitii enzimelor lizozomale renale
prezint oportuniti de utilizare n scopul ameliorrii efectelor agresiunii substanelor alogene
asupra esutului renal, adaptrii i remanierii structural-metabolice a organului, precum i a
restabilrii homeostaziei renale.
Astfel, compuii testai demonstreaz un lizozomotropism semnificativ, fiind capabili s
influeneze activitatea proteazelor lizozomale renale i s modifice starea funcional a aparatului
lizozomal.
Concluzii:
1. Compuii testai demonstreaz un lizozomotropism pronunat, fiind capabili s influeneze n
mod diferit activitatea hidrolazelor lizozomale renale i s modifice starea funcional a
aparatului lizozomal.
2. Compuii compleci CMD-4, CMD-8 i CMJ-23, remediile BioR, BioR-Ge reduc pregnant
nivelul funcional al catepsinelor B, H i elastazei. CMJ-23 scade activitatea catepsinei G, glucozidazei, arilsulftazelor A, B i C, fapt ce demonstreasz sensibilitatea nalt a acestor
hidrolaze la aciunea acestor substane.
3. Compusul CMD-8 majoreaz activitatea catepsinei D, iar CMD-4, CMD-8 sporesc
funcionalitatea N-acetil--D-glucozaminidazei. Remediul BioR normalizeaz enzimoactivitatea elastazei, BioR-Ge crete fosfataza acid, CMD-8 induce -glucozidaza.
4. Intensificarea activitii enzimelor lizozomale la administrarea remediilor cercetate, poate fi
apreciat ca o reacie compensatoare de adaptare a organismului, ce tinde s intensifice
biodegradarea moleculelor defectuoase ce se formeaz n rezultatul aciunii toxice a EG i a
produilor lui de metabolizare.
Bibliografie
1. Baricos W. H., Cortez S. L., Le Q. C., et al. Glomerular basement membrane degradation by
endogenous cysteine proteinases in isolated rat glomeruli. Kidney Int. 1990;38(3):395-401.
2. Benes P., Vetvicka V., Fusek M. Cathepsin D-many functions of one aspartic protease. Crit
Rev Oncol Hematol. 2008;68(1):12-28.
3. Carnevali O., Maradonna F. Exposure to xenobiotic compounds: looking for new biomarkers.
Gen Comp Endocrinol 2003;131(3):203-208.
4. Conus S., Simon H. U. Cathepsines: key modulators of cell death and inflammatory
responses. Biochem Pharmacol. 2008;76(11):1374-82.
5. Gudumac V., Tagadiuc O., Rvneac V. et al. Investigaii biochimice. Elaborare metodic.
Micrometode. Vol. II. Ch.: Elena V.I. SRL, 2010. 104 p.
6. Ivanova S., Repnik U., Bojic L., Petelin A., Turk V., Turk B. Lysosomes in apoptosis.
Methods Enzymol. 2008;442:183-99.
7. Jacobsen D., McMartin K.E. Methanol and ethylene glycol poisonings. Mechanisms of
toxicity, clinical course, diagnosis, and treatment. Medical Toxicology, 1986;1:309334.
8. Kos J., Jevnikar Z., Obermajer T. The role of cathepsin X in cell signaling. Cell Adh Migr.
2009;3(2):164-166.

9. Lamb J.A., Maronpot R.R., Gulati D.K., Russell V.S., Hommel-Barnes L., Sabharwal P.S.
Reproductive and developmental toxicity of ethylene glycol in the mouse. Toxicology and
Applied Pharmacology, 1985;81:100-112.
10. Metode de cercetare a metabolismului hepatic. Elaborare metodic / Gudumac V., Rvneac
V., Tagadiuc O., Sardari V., Rvneac E., Andronache L., trba O., Pantea V., Popa V. Sub
red. Valentin Gudumac; Univ. de Stat de Medicin i Farmacie Nicolae Testemianu. Ch.:
S.n., 2012 (Tipogr. Tehnica-Info). 162 p.
11. Riley J.H., OBrien S., Riley M.G. Urine and tissue oxalate and hippurate levels in ethylene
glycol intoxication in the dog. Veterinary and Human Toxicology, 1982;24:331-334.
12. Tappel A.L. Lysosomal enzymes and other components. Lysosomes in Biology and
Pathology. Amsterdam, 1969;2:207-245.
13. Tennant I., Crawford-Sykes A., Ward L.., Thesiger C Ethylene glycol poisoning following
ingestion of brake fluid, West Indian Med. J. 2006;55(4):286-7.
14. Vashishta A., Ohri S. S., Vetvicka V. Pleiotropic effects of cathepsin D. Endocr Metab
Immune Disord Drug Targets. 2009;9(4):385-91.
15. . ., . ., . . . D
.
, 2009;3:3-5.
16. .., .., .. . :
.
. , 2008;54(2):210-218.