Guía para El Desarrollo Del Componente Práctico - Laboratorios

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD
ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGIA E INGENIERIA

GUIA COMPONENTE PRCTICO DEL CURSO: 201504 MICROBIOLOGA
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

GUA COMPONENTE PRCTICO
201504 MICROBIOLOGA
MERY LILIANA LPEZ MARTNEZ
Director Nacional
PASTO
ENERO DE 2016

2. ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO

La primera versin de las guas que se proponen para el componente prctico del curso
de Microbiologa, fueron diseadas en el ao 2004 por la Dra. Carmen Eugenia Pia
Lpez, docente de la UNAD, Doctora en Tecnologa Instruccional y Educacin a Distancia,
Universidad NOVA en Estados Unidos. M.Sc. Ciencias Biolgicas, Universidad Estatal de
Jarkov (Ucrania). M.Sc. Docencia Universitaria, Universidad de la Salle. Especialista en
Nutricin Animal Sostenible, UNAD. Especialista en Informtica y Multimedios, Fundacin
Universitaria Los Libertadores.
El contenido didctico de este componente prctico ha sido apoyado por las Dras.
Anglica Yara y Roco Gmez y ha tenido actualizaciones a partir de su creacin
desarrolladas por la Ing. Marta Cecilia Vinasco Guzmn, tutora del CEAD Pitalito, y por la
Dra. Yurby Salazar docente de la UNAD, quienes han apoyado el proceso de revisin de
estilo e hizo aportes disciplinares, didcticos y pedaggicos.
La ltima versin de este componente prctico ha sido revisado y actualizado por Mery
Liliana Lpez Martnez, Docente de la UNAD en el CEAD de Pasto, Magster en
Ingeniera Ambiental de la Universidad Mariana de Pasto, Especialista en Microbiologa de
la Universidad Catlica de Manizales y Biloga de la Universidad Nacional de Colombia,
quien actualmente se desempea como directora nacional del curso de Microbiologa.

3. INDICE DE CONTENIDO
Pg.
2. Aspectos de propiedad intelectual y versionamiento
3. ndice de contenido
4. Caractersticas Generales
5. Descripcin de las prcticas
Prctica 1. Normas generales de bioseguridad
Prctica 2. Preparacin de medios de cultivo
Prctica 3. Microorganismos en el ambiente
Prctica 4. Tcnicas de tincin
Prctica 5. Siembra de microorganismos
Prctica 6. Factores que afectan el crecimiento de los microorganismos
Prctica 7. Pruebas bioqumicas en algunas bacterias
Prctica 8. Control de microorganismos por medio de factores fsicos y
qumicos.
6. Fuentes Documentales

4. CARACTERSTICAS GENERALES
La microbiologa estudia los microorganismos u organismos
generalmente microscpicos, aunque algunos pueden ser
observados a simple vista.
Introduccin
Justificacin
Su estudio comprende la identificacin y clasificacin de los

microorganismos, su origen y evolucin, la dinmica del
crecimiento, el rol interactivo de los microorganismos con el sistema
inmunolgico, las enfermedades que pueden producir y su
importancia en la produccin industrial.
El curso de Microbiologa hace parte del Campo de Formacin
Disciplinar Comn, constituyndose en herramienta fundamental de
los procesos de desarrollo cientfico y que posibilitan la insercin de
nuestro pas en las dinmicas globales del desarrollo. Por lo tanto,
su objetivo primordial es comprender y reconocer la importancia de
los microorganismos en la vida del planeta, conocer su morfologa,
fisiologa, bioqumica, distribucin y sus efectos beneficiosos y/o
perjudiciales para el hombre.
Propsitos:
Intencionalidades
formativas
Diferenciar los diferentes grupos de microorganismos de acuerdo

a su morfologa, fisiologa y mecanismos de reproduccin.
Identificar los protocolos de observacin experimental, cultivo,
aislamiento y control de las poblaciones microbianas.
Analizar el papel que juegan los Microorganismos para deducir
los efectos beneficiosos y/o perjudiciales que pueden causar al
hombre.
Objetivos:
Conocer, comprender y aplicar los conceptos y procedimientos
relacionados con la microbiologa, en el contexto de su vida
cotidiana.
Manejar adecuadamente las tcnicas bsicas de manejo de los
microorganismos en un laboratorio.
Conocer y aplicar los fundamentos de los mtodos de
bioseguridad que deben considerarse en un laboratorio.
Interpretar los resultados obtenidos en un laboratorio de
4

Microbiologa.
Metas:
Intencionalidades
formativas
Desarrollar la totalidad de las prcticas que se presentan en esta

gua.
Competencias:
El estudiante interpreta las implicaciones polticas, econmicas,
cientficas y religiosas de los descubrimientos y avances de la
microbiologa en la historia de la humanidad.
El
estudiante
categoriza
los
diferentes
grupos
de
microorganismos de acuerdo a sus caractersticas morfolgicas,
fisiolgicas y mecanismos de reproduccin.
El estudiante implementa apropiadamente los mtodos y
protocolos
de
cultivo,
aislamiento
e identificacin
de
microorganismos, para el anlisis experimental con poblaciones
microbianas.
El estudiante aplica la metodologa de los estudios
epidemiolgicos para la toma de decisiones en la prevencin de
transmisin de enfermedades.
El estudiante explica los agentes infecciosos como causa de
morbi-mortalidad entre las poblaciones humanas y animales.
Prctica 1: Normas generales de bioseguridad.
Prctica 2: Preparacin de medios de cultivo.
Prctica 3: Microorganismos del ambiente.
Denominacin de
practicas
Prctica 4: Tcnicas de Tincin

Prctica 5: Siembra de microorganismos
Prctica 6: Factores
microorganismos.
que
afectan
el
crecimiento
de
los
Prctica 7: Pruebas bioqumicas en algunas bacterias

Prctica 8: Control de microorganismos por medio de factores
fsicos y qumicos.

Nmero de horas
16 horas
Porcentaje
150 Puntos.
Curso Evaluado
por proyecto
SI X
Seguridad
industrial
Normas de Bioseguridad para un laboratorio tipo I.
NO__

5. DESCRIPCIN DE PRCTICAS
PRACTICA No. 1 NORMAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD

Tipo de practica
Presencial X Autodirigida
Otra Cul
Porcentaje de evaluacin
Horas de la practica
Temticas de la prctica
Intencionalidades
formativas
Remota
12,5%
2 horas
Equipos y bioseguridad en un laboratorio de
microbiologa.
Propsito:
Conocer los principales equipos con los cuales se
trabaja en un laboratorio de microbiologa y conocer
y aplicar las normas de bioseguridad que se deben
tener en un laboratorio.
Objetivo:
Establecer normas y principios
comportamiento en el laboratorio.
bsicos
de
Fundamentacin Terica
La bioseguridad es un conjunto de medidas preventivas encaminadas a reducir el riesgo
de transmisin de enfermedades infecciosas, las plagas de cuarentena, las especies
exticas invasoras, organismos vivos modificados.
Cuando se trabaja en laboratorio con microorganismos se deben poner en prctica varias
normas de bioseguridad para evitar accidentes y adquirir enfermedades.
Descripcin de la practica
A continuacin encuentra las normas de bioseguridad bsicas de cualquier laboratorio y
los cuidados que se deben tener al lavar material del vidrio. Por favor realice una buena
7

lectura pero principalmente ponga en prctica todas las recomendaciones.

Normas generales de bioseguridad.
Mantener una actitud responsable, no se permite hacer bromas, jugar, correr o
gritar.
No se permite el ingreso de personas ajenas al laboratorio y/o que no porten sus
implementos de bioseguridad adecuados.
No se permitir el ingreso de personas bajo efectos de bebidas alcohlicas o
sustancias psicoactivas.
Para el ingreso a los laboratorios, prstamo de material
presentar el carnet vigente.
o equipo se debe
Todas las superficies de trabajos se limpiaran y desinfectaran diariamente y

siempre que se produzca un derrame.
Usar bata de manga larga con puos, la cual debe estar completamente cerrada.
Usar guantes de nitrilo, tapabocas, gorro, gafas de seguridad y todos los
elementos de seguridad solicitados dependiendo del riesgo.
Evitar tocar sus ojos o piel con las manos enguantadas.
Usar cabello recogido, calzado cerrado y bajo, no usar falda, joyas, manillas, reloj
o elementos que puedan entorpecer la manipulacin de los materiales o equipos.
Bajo ninguna circunstancia se permitir comer, beber o fumar en el laboratorio.
Bajo ninguna circunstancia, se debe tocar, oler o probar las sustancias qumicas o
biolgicas utilizadas en el desarrollo de las prcticas.
No trabajar nunca solo en el laboratorio.
No pipetear sustancias con la boca.
Cuando en el desarrollo de las prcticas se utilice cido y agua en diluciones,
agregue el cido sobre el agua.
No devolver reactivos a los frascos, as no hayan sido utilizados.
Siga fielmente todas las recomendaciones dadas por el docente responsable del
laboratorio.
Al calentar los tubos de ensayo en el mechero dirija la boca donde nadie corra

peligro de quemarse.
Los residuos y muestras de procedimientos de microbiologa que van a ser
incinerados fuera del laboratorio deber ser sometidos a desactivacin en
autoclave.
Como norma general no se podr verter ninguna sustancia peligrosa para el
medio ambiente por el desage.
Al culminar el trabajo, dejar limpio y ordenado el mesn, devolver los elementos y
materiales perfectamente limpios, asegrese de dejar cerrado el gas, agua y
lavarse las manos.
Para la eliminacin de los residuos se deben utilizar los recipientes destinados
para este fin siguiendo las indicaciones del docente responsable del laboratorio.
Cualquier accidente por pequeo que sea debe comunicarse al docente
responsable del laboratorio.
Trabajo con material de vidrio
No se debe calentar recipientes de vidrio comn.
No calentar directamente al mechero de gas ni colocar recipientes de vidrio vacos
o hmedos por fuera en la parrilla elctrica.
Cuando utilice cubreobjetos, se deben revisar los mesones y evitar que queden
sobre ellos.
Comprobar la temperatura del material de vidrio.
No forzar el cierre del material.
Comprobar cuidadosamente la temperatura de los recipientes que hayan estado
sometidos a calor antes de tomarlos directamente con las manos.
No lavar los elementos de vidrio de laboratorio con medios abrasivos que al rayar
la superficie debilitan el vidrio.
Al lavar el material utilice guantes y gafas de seguridad y no deje residuos.
Al lavar la vidriera de laboratorios no se debe someter a cambios brusco de
temperatura.
Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)
Folleto de normas de bioseguridad, folleto de disposicin de residuos slidos.

Software a utilizar en la prctica u otro tipo de requerimiento para el desarrollo de

la prctica
Estudiar la teora sobre normas de bioseguridad.
Seguridad Industrial
Normas de Bioseguridad.
Metodologa
Deben llevar al laboratorio un pre informe donde resuelvan las siguientes preguntas:
Qu es bioseguridad?
Cules son las normas bsicas de bioseguridad en el laboratorio de microbiologa?
En el laboratorio seguir claramente las instrucciones dadas por el docente.
Para el informe deben entregar un documento donde se especifique el procedimiento
desarrollado en el laboratorio, los resultados obtenidos y la discusin y anlisis de los
resultados.
Sistema de Evaluacin
El pre informe tiene un peso del 20%, el desarrollo del laboratorio un peso del 40% y el
informe tiene un peso del 40%
Informe o productos a entregar
Pre informe e informe de laboratorio
10

Rbrica de evaluacin
ACTIVIDAD
VALORACIN
BAJA
VALORACIN
MEDIA
VALORACIN
ALTA
Pre informe
No lleva el pre
informe al
laboratorio o lo
lleva pero no
cumple con lo
solicitado en la
gua.
Desarrolla las
preguntas del
pre informe pero
alguna no es
correcta.
Desarrolla de
forma correcta
todas las
preguntas del
pre informe
(0 puntos)
(10 puntos)
(20 puntos)
No se presenta
a la prctica.
Llega tarde a la
prctica o no
presenta un
comportamiento
adecuado.
Cumple con
todos los
objetivos
planteados para
la prctica.
(15 puntos)
(40 puntos)
No presenta el
informe.
Desarrolla el
informe pero se
encuentra
incompleto
Desarrolla
correctamente
el informe de
laboratorio.
(0 puntos)
(20 puntos)
(40 puntos)
Desarrollo de
la prctica
(0 puntos)
Informe de
laboratorio
MXIMO
PUNTAJE
20 puntos
40 puntos
40 puntos
Retroalimentacin
11

PRACTICA No. 2 PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

Tipo de practica
Otra Cul
Intencionalidades
formativas
Remota
12,5%
2 horas
Preparacin de medios de cultivo, medios de cultivo
selectivo, diferenciales, medios de cultivo slido,
semi slidos y caldos.
Propsito:
Conocer los principales medios de cultivo, la forma
de preparacin y presentacin.
Objetivo:
Aprender la preparacin y manipulacin de los
medios de cultivo.
El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento
de los microorganismos. La composicin precisa depender de la especie que se quiera
cultivar, porque las necesidades nutricionales varan considerablemente. Hay
microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio
normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias
como vitaminas, suero o sangre para crecer.
Revise las etiquetas de los recipientes de diferentes medios de cultivo, anote el nombre,
la composicin y forma de preparacin.
En las instrucciones de forma de preparacin le dicen la cantidad en gramos de medio
deshidratado que se necesitan para disolver en un litro de agua. En muchas ocasiones
no es necesario preparar un litro de medio, por lo tanto mediante un clculo matemtico
12

sencillo ustedes pueden preparar una cantidad menor.

Supongamos que desean preparar 325 mililitros de medio de cultivo, al leer las
instrucciones de preparacin en la etiqueta dice que para preparar 1 litro (1000 ml) de
medio se necesitan 20 gramos medio deshidratado.
Para hacer el clculo se realiza un regla de tres simple:
20 gr.
1000 ml
X gr.
325ml
X= (20 gr.x 325ml)/1000= 6.5 gr.
Esto quiere decir que se necesitan 6,5 gramos de medio deshidratado para preparar 325
ml de medio de cultivo. Para preparar el medio se hace el siguiente procedimiento:
Pese 6.5 gramos del agar deshidratado. Mida 325 mililitros de agua destilada con una
probeta. De esos 325 mililitros de agua destilada coloque la mitad en un erlenmeyer
previamente lavado con agua destilada, para eliminar residuos de otras sustancias. El
erlenmeyer debe ser de volumen superior a la cantidad que se va a preparar. Agregue los
6.5 gramos de agar deshidratado al agua contenida en el erlenmeyer y posteriormente
adicione el resto del agua destilada. Mezcle con el agitador.
A continuacin lleve la preparacin a disolver en la plancha de calentamiento, agite
constantemente con ayuda de la varilla de vidrio hasta que ebulla para lograr la
disolucin total del Agar.
Tape la boca del erlenmeyer papel aluminio. Si las normas de preparacin no indican otra
cosa, la esterilizacin se lleva a cabo en autoclave, a 121 grados centgrados, durante 15
minutos.
Esterilizado el medio deje enfriar aproximadamente a 45C.
Proceda a servir el medio en presencia del mechero y en cajas de Petri, previamente
esterilizadas. Las burbujas de aire en la superficie de la placa se eliminan abanicando
brevemente la superficie con la llama no luminosa de un mechero Bunsen. Deje enfriar
hasta que solidifique.
Los medios de cultivo lquidos se preparan de la misma forma y se sirven en tubos con
tapa rosca. Posteriormente lleve los tubos con caldo a esterilizar en autoclave. No olvide
que cuando se va a esterilizar medios directamente en los tubos estos no deben tener la
tapa ajustada. Finalmente tenga en cuenta que para preparar Agar inclinado en tubo, solo
cambia el momento en que se pone a solidificar ya que los tubos deben colocarse sobre
una pipeta para lograr que se forme el pico de agar inclinado.
Tome un medio de cultivo al azar y realice los clculos para preparar volmenes de 356
13

ml, 1567 ml, 131 ml y 24 ml.

Experimentalmente prepare 20 ml de medio de cultivo slido y srvalo en 2 cajas de Petri
Recipientes con diferentes medios de cultivo, Elenmeyer, Probeta, Agua destilada, Cajas
de petri, balanza, papel aluminio, estufa, autoclave, cmara de flujo.
la prctica
Estudiar la teora sobre medios de cultivo
Metodologa
Qu es un medio de cultivo; de qu estn compuestos principalmente; cmo se clasifican
segn su proporcin de Agar y segn su suministro de nutrientes?
Cul es la utilidad de los medios de cultivo y qu diferencia un caldo de un medio
slido?
En qu momento se esteriliza un medio de cultivo y por qu?
resultados.
Rbrica de evaluacin
ACTIVIDAD
VALORACIN
VALORACIN
VALORACIN
MXIMO
14

Pre informe
Desarrollo de
la prctica
BAJA
MEDIA
ALTA
No lleva el pre
informe al
laboratorio o lo
lleva pero no
cumple con lo
solicitado en la
gua.
Desarrolla las
preguntas del
pre informe pero
alguna no es
correcta.
Desarrolla de
forma correcta
todas las
preguntas del
pre informe
(0 puntos)
(10 puntos)
(20 puntos)
No se presenta
a la prctica.
Llega tarde a la
prctica o no
presenta un
comportamiento
adecuado.
Cumple con
todos los
objetivos
planteados para
la prctica.
(15 puntos)
(40 puntos)
No presenta el
informe.
Desarrolla el
informe pero se
encuentra
incompleto
Desarrolla
correctamente
el informe de
laboratorio.
(0 puntos)
(20 puntos)
(40 puntos)
(0 puntos)
Informe de
laboratorio
PUNTAJE
20 puntos
40 puntos
40 puntos
Retroalimentacin
PRACTICA No. 3 MICROORGANISMOS EN EL AMBIENTE

Tipo de practica
15

Otra Cul
Intencionalidades
formativas
Remota
12,5%
2 horas
Ubicuidad de los microorganismos, caractersticas de
las bacterias, protistos y hongos.
Propsito:
Cultivar microorganismos de diferentes ambientes y
realizar una descripcin macroscpica de las colinas
que crezcan.
Objetivos:
Explicar cmo se puede demostrar la presencia de
microorganismos en diferentes sitios.
Describir las caractersticas macroscpicas de las
colonias bacterianas.
En esta prctica se va a demostrar la presencia de microorganismos en el ambiente que
nos rodea. Con este fin se toman muestras de diferentes sitios y se las siembra en un
medio de cultivo que contiene las sustancias nutritivas que las bacterias necesitan para
desarrollarse, se las lleva a incubar a la temperatura apropiada y se las deja el tiempo
necesario para que crezcan y se puedan observar las colonias a simple vista y as
determinar las caractersticas macroscpicas de esas colonias.
Marcar cada caja de Petri que se va a utilizar con los siguientes datos: Nombre, Sitio del
cual se tom la muestra, Fecha de la prctica.
Tome cajas de Petri que contengan agar nutritivo y tome muestras de los diferentes sitios
que se relacionan a continuacin:
Deje una caja de Petri abierta durante 30 minutos en el sitio del laboratorio que
16

desee.
Pase un copito sobre la superficie del mesn en el cual est trabajando y siembre
en una caja de Petri.
Pase sus dedos por el cabello y rasque suavemente para que el producto que
salga caiga sobre la caja de Petri.
Toque con sus dedos la superficie de una caja de Petri.
Tosa o estornude sobre una caja de Petri.
Introduzca un copito en su odo y siembre en una caja de Petri.
Siembre una muestra tomndola del sitio que desee.
Todas las cajas llvelas a incubar durante 24-48 horas a 37 Grados.
Para sembrar hongos tome 2 cajas de Petri que contengan Agar PDA, destpelas y
djelas al aire libre durante 30 minutos en el sitio que desee y luego tpelas. Djelas a
temperatura ambiente y en las oscuridad durante 48- 72 horas.
4. Resultados
Observe las colonias y basndose en la figura 1, llene los datos de la tabla describiendo
las caractersticas de las colonias y la cantidad de crecimiento (mucho, abundante,
regular, poco). Describa 2 colonias de cada caja teniendo en cuenta las siguientes
caractersticas:
Tamao
Forma: circular, irregular, extendida
Color: pigmentada, incolora
Textura: Granular, friable, hmeda, seca, membranosa.
Superficie: suave, spera, rugosa, opaca, resbalosa.
Elevacin: Plana, convexa, Umblicada.
Borde: irregular, aserrado, discreto, regular, entero ondulado,
Olor: inodora, aromtica desagradable.
17

TABLA 1. CARACTERSTICAS DE LAS COLONIAS

SITIO DE TOMA DE
LAS MUESTRAS
CANTIDAD DE
CRECIMIENTO
CARACTERSTICAS
DE LAS COLONIAS
Superficie del mesn

Cabello
Figura 1. Forma, elevacin y borde de las colonias microbianas
Fuente: Valencia (2004) Manual de prcticas de microbiologa bsica. Coleccin Notas de Clase.
Editorial UNIBIBLIOS. Universidad Nacional de Colombia.
18


Para un grupo:
7 Cajas de Petri con agar nutritivo
2 Cajas de Petri con agar PDA
Equipos en general para el laboratorio
Incubadora
Hisopos
la prctica
Estudiar la teora sobre las caractersticas de los diferentes grupos de microorganismos.
Metodologa
Consulte la composicin de los medios de cultivo empleados y regstrelos en su informe
Qu es un medio de cultivo selectivo y un medio de cultivo no selectivo?
En ciertos procesos industriales se requiere de reas blancas. Qu significa el trmino
anterior?
resultados.
Rbrica de evaluacin
19

ACTIVIDAD
VALORACIN
BAJA
VALORACIN
MEDIA
VALORACIN
ALTA
Pre informe
No lleva el pre
informe al
laboratorio o lo
lleva pero no
cumple con lo
solicitado en la
gua.
Desarrolla las
preguntas del
pre informe pero
alguna no es
correcta.
Desarrolla de
forma correcta
todas las
preguntas del
pre informe
(0 puntos)
(10 puntos)
(20 puntos)
No se presenta
a la prctica.
Llega tarde a la
prctica o no
presenta un
comportamiento
adecuado.
Cumple con
todos los
objetivos
planteados para
la prctica.
(15 puntos)
(40 puntos)
No presenta el
informe.
Desarrolla el
informe pero se
encuentra
incompleto
Desarrolla
correctamente
el informe de
laboratorio.
(0 puntos)
(20 puntos)
(40 puntos)
Desarrollo de
la prctica
(0 puntos)
Informe de
laboratorio
MXIMO
PUNTAJE
20 puntos
40 puntos
40 puntos
Retroalimentacin
PRACTICA No. 4 SIEMBRA DE MICROORGANISMOS

Tipo de practica
20

Otra Cul
Intencionalidades
formativas
Remota
12,5%
2 horas
Tcnicas de siembra
Propsito:
Conocer y aplicar las diferentes tcnicas de siembra
que existen.
Objetivo:
Determinar las condiciones necesarias para realizar
la siembra de microorganismos
Reconocer los distintos sistemas de siembra y su
utilidad.
Sembrar es colocar una muestra de inculo, en un medio de cultivo para obtener el
crecimiento de los microorganismos. Para ello se extiende la muestra sobre caja de Petri,
que contiene un medio compuesto por las sustancias que necesitan los microorganismos
para crecer. A veces se aaden otras clases de sustancias; por ejemplo, para impedir el
crecimiento de otras bacterias que podran contaminar el cultivo. La siembra se puede
hacer en otros tipos de medios de cultivo, como tubos de vidrio con gel, frascos con
lquidos nutritivos para los microorganismos.
Si el cultivo bacteriano tiene xito, crecern "colonias" de bacterias en el medio de
cultivo. Estas colonias tienen caractersticas de color, forma, tamao etc. propias de cada
bacteria y esto nos ayuda a identificarlas. Tambin se puede someter a las bacterias de
las colonias a pruebas bioqumicas o de otro tipo para lograr su identificacin. Algunas
bacterias son muy difciles de cultivar, otras tardan mucho tiempo en crecer y algunas,
finalmente, no se han conseguido cultivar.
1. Siembra de medio lquido a medio lquido
21

Marque correctamente los tubos con el nmero del grupo, sistema de siembra utilizado y
la fecha.
Para crear un ambiente de esterilidad encienda el mechero y trabaje siempre al lado de
l.
Esterilice un asa recta a la llama de un mechero y djela enfriar.
Tome el tubo que contiene la muestra a sembrar, retire la tapa del tubo, flamee la boca
del tubo. Introduzca el asa en tubo sin tocar las paredes y tome un poco de colonia del
cultivo, flamee nuevamente la boca del tubo, tpelo y djelo en una gradilla. Tome el tubo
de caldo nutritivo estril en el cual va a colocar la muestra, destpelo, flameando la boca
el tubo con el mechero e introduzca el asa con la muestra obtenida.
Realice movimientos de rotacin con el asa para emulsionar con el caldo las paredes del
tubo. Retire el asa, flamee la boca del tubo y tape.
Esterilice el asa en el mechero despus de usarla.
Incube los tubos a 37C por 24 horas.
Observar el crecimiento obtenido. Si no hay crecimiento el caldo queda transparente
2. Siembra de medio lquido a slido
Proceda en la misma forma que en la siembra anterior e introduzca el inoculo con el asa
recta hasta el fondo del medio con un solo movimiento y teniendo cuidado de hacer el
mismo trayecto de entrada que de salida.
3. Siembra de medio slido a slido
Proceda de la misma forma que en la siembra anterior pero utilizando el asa de argolla.
Los medios slidos contienen agar en proporcin de 1.5 a 2.0% y se emplean para
obtener colonias aisladas. Las placas de agar se pueden inocular mediante varios
mtodos: como estras, agotamiento y rejilla con el fin de lograr un cultivo puro.
a. Siembra por agotamiento
Tome una placa de agar, divida la base de la caja de Petri en cuartos y mrquelos con los
nmeros 1, 2 y 3. Coloque la muestra a sembrar en el nmero 1, realice estras hasta la
mitad de la caja. Esterilice el asa y gire la caja hasta el nmero 2, tome las dos ltimas
estras y siga estriando hasta el nmero 3. Gire la caja y termine de estriar, tenga cuidado
de no tocar las estras ya hechas.
b. Siembra por estras
22

Marque la caja en 6 puntos. Coloque la muestra en el punto nmero uno, realice estras
hasta el nmero 2. Esterilice el asa, tome las dos ltimas estras y extindalas hasta el
nmero 3, tome las dos ltimas estras y extindalas hasta el nmero 4 y as
sucesivamente hasta llegar al nmero 6.
5. Siembra en agar inclinado
Esta se realiza por estra. Extienda el inoculo sobre el agar inclinado deslizando
suavemente el asa por la superficie en forma de zigzag.
No olvide flamear la boca del tubo antes y despus de la siembra.
Evalu la presencia de crecimiento en el agar por la formacin de una pelcula o por el
crecimiento de colonias en la superficie.
6. Siembra en profundidad
Marque la caja de Petri estril con el nmero de grupo, la fecha y siembra en
profundidad. Abra ligeramente la caja de Petri cerca del mechero.
Abra un tubo con cultivo de bacterias y con ayuda de una pipeta de Pasteur plstica,
transfiera 1 ml de ste cultivo a la base de la caja de Petri estril. Descarte la pipeta en el
frasco de boca ancha con clorox.
Vierta un poco de agar nutritivo en la caja de Petri, tape la caja y luego realice
movimientos suaves sobre el mesn, en el sentido de las agujas del reloj, luego al
contrario, en forma de L y L invertida, y por ltimo en forma de 8. Esto garantiza una
distribucin homognea de las bacterias en todo el agar para facilitar su posterior
recuento.
Envuelva las cajas de Petri y los tubos con cinta de enmascarar, mrquelos con el
nmero de grupo, la fecha. Luego incube 37 c por 48 horas.
Para un grupo:
1 Tubo de ensayo con caldo nutritivo y S. aureus en crecimiento
1 Tubo de ensayo con caldo nutritivo
1 Tubo de ensayo con agar nutritivo
1 Caja de Petri con agar nutritivo y S. aureus en crecimiento
2 Cajas de Petri con agar nutritivo
1 Tubo de ensayo con agar nutritivo inclinado
1 Caja de Petri estril sin agar
10 ml de Agar nutritivo caliente
Mecheros
23

Incubadora
Asas de punta recta y argolla
Pipetas Pasteur
la prctica
Estudiar la teora sobre tcnicas de siembra
Metodologa
Qu es una unidad formado de colonia?
Qu tcnicas existen para hacer una cuantificacin del crecimiento de los
microorganismos?
Los microorganismos pueden vivir de forma indefinida en un medio de cultivo? Sustente
su respuesta.
resultados.
Rbrica de evaluacin
24

ACTIVIDAD
VALORACIN
BAJA
VALORACIN
MEDIA
VALORACIN
ALTA
Pre informe
No lleva el pre
informe al
laboratorio o lo
lleva pero no
cumple con lo
solicitado en la
gua.
Desarrolla las
preguntas del
pre informe pero
alguna no es
correcta.
Desarrolla de
forma correcta
todas las
preguntas del
pre informe
(0 puntos)
(10 puntos)
(20 puntos)
No se presenta
a la prctica.
Llega tarde a la
prctica o no
presenta un
comportamiento
adecuado.
Cumple con
todos los
objetivos
planteados para
la prctica.
(15 puntos)
(40 puntos)
No presenta el
informe.
Desarrolla el
informe pero se
encuentra
incompleto
Desarrolla
correctamente
el informe de
laboratorio.
(0 puntos)
(20 puntos)
(40 puntos)
Desarrollo de
la prctica
(0 puntos)
Informe de
laboratorio
MXIMO
PUNTAJE
20 puntos
40 puntos
40 puntos
Retroalimentacin
PRACTICA No. 5 TCNICAS DE TINCIN
25

Tipo de practica
Otra Cul
Intencionalidades
formativas
Remota
12,5%
2 horas
Tcnicas de siembra
Propsito:
Realizar diferentes tipos de tinciones para identifcar
microorganismos.
Objetivo:
Preparar frotis de bacterias para observaciones
microscpicas
Observar las bacterias teidas al microscopio y
clasificarlas por su forma y su reaccin a la
coloracin de Gram.
La observacin microscpica de las bacterias se facilita cuando han sido coloreadas. Se
acostumbra fijar las bacterias en la lmina portaobjetos para poder teirlas con facilidad.
La fijacin puede hacerse con solventes o con calor.
deshidratar la clula y coagularla con protenas.
En cualquier caso se trata e
Las coloraciones pueden ser simples cuando se utiliza un solo colorante o compuestas
cuando se utilizan 2 ms colorantes. Tambin se puede hacer una coloracin negativa
en la cual se tie el fondo, adems de la bacteria, para poder observar la cpsula.
1. Coloracin Simple
Para la coloracin simple se utiliza azul de metileno y se trabaja con Staphylococcus
26

aureus. Se toma una pequea muestra del microorganismo y se fija con calor,
posteriormente se aade una gota pequea de azul de metileno, se coloca la laminilla o
cubre objetos y se observa al microscopio en un aumento de 100x.
2. Tincin de Gram
La tincin de Gram se realiza en cultivos de Staphylococcus aureus, y Escherichia coli.
La tincin de Gram. Es una coloracin compuesta porque en ella se utilizan 2 colorantes,
uno primario: cristal violeta o violeta de genciana y uno de contraste, safranina o fucsina
de Gram. Es una tincin diferencial porque segn la composicin qumica de la pared
celular las bacterias quedan teidas con el cristal violeta o la safranina, como mordiente o
sustancia fijadora del color se utiliza lugol.
El agente diferenciador, es decir, el que acta de modo diferente sobre la pared celular de
las Gram. Positivas y las Gram negativas es la solucin alcohol cetona alcohol- cido.
Los pasos de la tincin de gran son los siguientes:
Fijar la muestra al calor
Aadir el violeta de genciana o cristal violeta y dejarlo actuar durante 1minuto
Lavar con agua para eliminar el exceso de colorante
Aadir lugol y dejarlo actuar durante 1 minuto
Aadir alcohol- cido y dejarlo actuar durante 15 segundos y lavar rpidamente
con agua
Aadir fucsina y dejar actuar durante 1 minutos
Secar al aire libre o con una toalla absorbente segn las indicaciones del profesor
Observar en el microscopio a un aumento de 100x.
Observe todas las bacterias con las diferentes coloraciones, determine su morfologa y
trate de identificar sus partes, determine si son bacterias Gram. Positivas bacterias gran
negativas. Dibuje lo observado.
3. Coloracin de Hongos.
Observe la morfologa del hongo del pan Rhizopus sp y Penicillium sp.
Examine el
hongo a simple vista, fjese en el color, consistencia, textura y apariencia general.
27

Tome con un asa una muestra de hifas y colquela en portaobjetos, tala con azul de
lactofenol y observe al microscopio. Dibuje lo observado y describa.
Para un grupo:
Cajas de Petri con Agar nutritivo y cultivos de E. coli y S. aureus.
Rhizopus sp. Cultivo en agar sabouraud
Penicillium sp. Cultivo en agar sabouraud
Porta Objetos
Cubre Objetos
1 Microscopios
2 ml de violeta de genciana o cristal violeta
2 ml de lugol
2 ml de alcohol- cido
2 ml de fucsina
2 ml de azul de metileno
2 ml de azul de Lactofenol
1 microscopio
Mechero
Pinzas
Aceite de Inmersin
Asas
la prctica
Estudiar la teora sobre tcnicas de tincin.
Metodologa
Establezca las diferencias entre una coloracin simple y una coloracin de gram
Investigue que coloracin se debe utilizar para observar las endoporas o esporas
bacterianas, y para observar la cpsula.
resultados.
28

Rbrica de evaluacin
ACTIVIDAD
VALORACIN
VALORACIN
VALORACIN
MXIMO
29

Pre informe
Desarrollo de
la prctica
BAJA
MEDIA
ALTA
No lleva el pre
informe al
laboratorio o lo
lleva pero no
cumple con lo
solicitado en la
gua.
Desarrolla las
preguntas del
pre informe pero
alguna no es
correcta.
Desarrolla de
forma correcta
todas las
preguntas del
pre informe
(0 puntos)
(10 puntos)
(20 puntos)
No se presenta
a la prctica.
Llega tarde a la
prctica o no
presenta un
comportamiento
adecuado.
Cumple con
todos los
objetivos
planteados para
la prctica.
(15 puntos)
(40 puntos)
No presenta el
informe.
Desarrolla el
informe pero se
encuentra
incompleto
Desarrolla
correctamente
el informe de
laboratorio.
(0 puntos)
(20 puntos)
(40 puntos)
(0 puntos)
Informe de
laboratorio
PUNTAJE
20 puntos
40 puntos
40 puntos
Retroalimentacin
PRACTICA No. 6 FACTORES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO DE LOS

MICROORGANISMOS
30

Tipo de practica
Otra Cul
Intencionalidades
formativas
Remota
12,5%
2 horas
afectan el crecimiento
Factores que
de los
microorganismos
Propsito: Que el estudiante conozca los aspectos
fsicos que afectan el crecimiento microbiano
Objetivo:
Evaluar el efecto de los factores intrnsecos y
extrnsecos sobre el crecimiento bacteriano.
Conocer
tcnicas
de
microorganismos basados
metablica.
identificacin
de
en su capacidad
Los aspectos fsicos que influyen de manera determinante en el crecimiento microbiano
son: la temperatura, el pH y la presin osmtica. Los qumicos son: el agua, las fuentes
de carbono y de nitrgeno, los minerales, el oxgeno y los factores orgnicos del propio
microorganismo.
Procedimiento:
A. Influencia de la temperatura
Marque 3 tubos de caldo nutritivo con los siguientes datos:
Tubo 1: No. de grupo, fecha, no. de bacteria y 4C Nevera
Tubo 2: No. de grupo, fecha, no. de bacteria y 20C Ambiente
31

Tubo 3: No. de grupo, fecha, no. de bacteria y 37C Incubadora

Esterilice el asa recta o curva y djela enfriar
Recoja con el asa estril la bacteria indicada y siembre en los tubos marcados.
Esterilice el asa.
Separe los tubos de nevera y temperatura ambiente, entrguelos al coordinador del
laboratorio para que los incube a 4c y 18c.
Los otros tubos envulvalos en cinta de enmascarar, mrquelos con el nmero del grupo
y entrguelos al coordinador para incubarlos a 37C
Cumplido el tiempo de incubacin observe en cada tubo la presencia de crecimiento en
este caso la bacteria. Establezca que tipo de bacteria es de acuerdo a sus rangos
ptimos de adaptacin a la temperatura
B. Influencia del pH
Marque 3 tubos de caldo nutritivo con los siguientes datos:
Tubo 1 pH 3.0: No. de grupo, fecha, no. de bacteria y pH 3.0
Esterilice el asa recta o curva y djela enfriar.
Esterilice el asa.
Incube los tres tubos a temperatura de 37 C por 24 a 48 horas.
Cumplido el tiempo de incubacin observe la presencia de turbidez en los tubos, lo cual
indica que hay crecimiento. Cul fue el pH ptimo para el crecimiento de la bacteria en
estudio.
C. Influencia de la Tensin de oxgeno
Marque los tubos de la siguiente manera:
Tubo de Tioglicolato: No. del grupo, fecha, no. de bacteria y tioglicolato y microaerofilo
(recuerde que el tioglicolato se usa para el cultivo y aislamiento de anaerobios estrictos y
facultativos de microorganismos microaerofilos
Tubo de Caldo Nutritivo: No. del grupo, fecha, no. de bacteria y aerobio.
Tubo de Caldo Nutritivo: No. del grupo, fecha, no. de bacteria y anaerobio.
Esterilice el asa recta o curva y djela enfriar
Esterilice el asa.
Adicione 2 ml de aceite mineral estril a los tubos de tioglicolato y a el anaerobio para
crear un ambiente de anaerobiosis.
Incube los tubos a 37C por 24 a 48 horas.
Cumplido el tiempo de incubacin observe la presencia de crecimiento en los tubos.
Determine en qu ambiente creci la bacteria.
Procedimiento para la lectura (Consignar estas observaciones en su informe de prctica)
32

Solicite los tubos de temperatura ambiente, nevera e incubadora al coordinador de

laboratorio.
Colquelos en orden por temperatura, pH, y disponibilidad de oxgeno.
Observe si se presenta crecimiento (turbidez) y si el crecimiento es escaso, moderado o
abundante.
Anote sus observaciones y si el crecimiento microbiano es igual o diferente para las
diversas condiciones de pH, temperatura y Tensin de oxgeno.
De acuerdo con lo analizado clasifique el microorganismo segn su necesidad de
oxgeno en aerobio, anaerobio, micro aeroflico, anaerobio facultativo. Segn la
temperatura ptima de crecimiento en psicrfilo, mesfilo o termfilo y cul es el pH ideal
para su ptimo desarrollo.
Cul es la utilidad de la anterior evaluacin?
Qu factores intrnsecos y extrnsecos afectan el crecimiento de los microorganismos?
Una vez termine sus observaciones, envuelva los tubos en cinta de enmascarar,
entrguelos al grupo encargado de la esterilizacin
Tubos con caldo nutritivo estril, tubo con Tioglicolato, 1 tubo con caldo nutritivo pH 3.0, 1
tubo con caldo nutritivo pH 7.0, 1 tubo con caldo nutritivo pH 11.0, aceite mineral estril,
asas bacteriolgicas, pipeta estril, gradilla, incubadora, nevera, tubo con cepa
bacteriana, mechero Bunsen.
la prctica
Estudiar la teora sobre control del crecimiento microbiano y factores que afectan el
crecimiento de los microorganismos.
Metodologa
1. Dentro de los factores que afectan al crecimiento bacteriano, define:
a. El efecto de la temperatura en bacterias psicrfilas, mesfilas, termfilas.
b. Efecto del pH.
33

c. Disponibilidad del agua.

d. Halfilos.
e. Oxgeno.
resultados.
Rbrica de evaluacin
ACTIVIDAD
VALORACIN
BAJA
VALORACIN
MEDIA
VALORACIN
ALTA
Pre informe
No lleva el pre
informe al
laboratorio o lo
lleva pero no
cumple con lo
solicitado en la
Desarrolla las
preguntas del
pre informe pero
alguna no es
correcta.
Desarrolla de
forma correcta
todas las
preguntas del
pre informe
MXIMO
PUNTAJE
20 puntos
34

gua.
Desarrollo de
la prctica
(0 puntos)
(10 puntos)
(20 puntos)
No se presenta
a la prctica.
Llega tarde a la
prctica o no
presenta un
comportamiento
adecuado.
Cumple con
todos los
objetivos
planteados para
la prctica.
(15 puntos)
(40 puntos)
No presenta el
informe.
Desarrolla el
informe pero se
encuentra
incompleto
Desarrolla
correctamente
el informe de
laboratorio.
(0 puntos)
(20 puntos)
(40 puntos)
(0 puntos)
Informe de
laboratorio
40 puntos
40 puntos
Retroalimentacin
PRACTICA No. 7 PRUEBAS BIOQUMICAS EN ALGUNAS BACTERIAS
Tipo de practica
Otra Cul
Intencionalidades
Remota
12,5%
2 horas
Pruebas bioqumicas, metabolismo microbiano
Propsito: El estudiante comprende las estrategias
35

formativas
metablicas de los microorganismos.

Objetivo:
Conocer
tcnicas
de
microorganismos basados
metablica.
identificacin
de
en su capacidad
Utilizar los agares para el aislamiento microbiano
El metabolismo microbiano es el conjunto de procesos por los cuales un microorganismo
obtiene la energa y los nutrientes (carbono, por ejemplo) que necesita para vivir y
reproducirse. Los microorganismos utilizan numerosos tipos de estrategias metablicas
distintas y las especies pueden a menudo distinguirse en base a estas estrategias. Las
caractersticas metablicas especficas de un microorganismo constituyen el principal
criterio para determinar su papel ecolgico, su responsabilidad en los ciclos
biogeoqumicos y su utilidad en los procesos industriales.
Para iniciar el desarrollo de la prctica debe previamente realizar un estudio atento de la
teora sobre: Medios de cultivo, realice una revisin de los fundamentos, forma de
actuacin e interpretacin de los siguientes medios de cultivo: Lisina hierro agar, Triple
azcar hierro, Citrato de Simmons agar, SIM, Caldo Lactosado bilis verde brillante,
Eosina azul de Metileno agar, Agar Salmonella Shigella, sus componentes, inhibidores,
indicadores de pH. Observe los vdeos: Metabolismo microbiano parte 1 , parte 2
Realice una descripcin de todos los medios de cultivo antes de ser inoculados.
Para iniciar el proceso de identificacin de cultivo que le correspondi, realice una
tincin de Gram de la bacteria entregada, observe al microscopio e identifique la
morfologa bacteriana
Marque muy bien todos los medios con el No. de la cepa, No. del grupo y nombre del
medio de cultivo, luego proceda a inocular todos los medios como se describe a
continuacin:
Esterilice el asa, djela enfriar para luego tome un poco de la muestra de bacterias y
luego inocule los medios de la siguiente manera:
Tubos con agar inclinado TSI, LIA, CIT realice una puncin en el fondo del tubo y una
estra en la superficie.
Tubo con medio semislido agar SIM: se inocula con una puncin hasta el fondo del
36

tubo.
Tubos con medio lquido BRILLA, CN: tome un poco de la muestra y suspndala
directamente en el caldo, homogenice.
Cajas de agar nutritivo AN, EMB, SS: utilice el sistema de siembra de rejilla para
obtener unidades formadoras e colonias individuales. .
Una los tubos y cajas con cinta de enmascarar, mrquelos con el nmero del grupo y
llvelas a incubar a 37 C durante 24 a 48 horas.
Cumplido el tiempo de incubacin observe los resultados obtenidos, interprete los
resultados.
El agar LIA se debe leer en la superficie y el fondo del tubo. En el medio se evala la
decarboxilacin de lisina que se evidencia en el fondo del tubo por el viraje a violeta del
indicador prpura de metacresol. Tambin se evala la deaminacin de la lisina la cual
ocurre en la parte superior del tubo y se evidencia con un color violeta-rojizo. La
Fermentacin de la glucosa produce acidificacin del medio y un cambio de color del
indicador de violeta a amarillo. Eventualmente se puede observar la Produccin de cido
sulfhdrico (H2S) por la presencia de color negro.
El agar Citrato Si se utiliza el citrato como fuente de carbono, se incrementa el pH del
medio y el indicador vira de verde a azul. Cuando no se utiliza el citrato, el indicador de
ph azul de bromotimol permanece de color verde
El agar TSI En el tubo TSI debe leerse siempre la superficie y el fondo. La fermentacin
de glucosa se observa en el fondo del tubo por el cambio de color del indicador de rojo a
amarillo. Tambin puede observarse la fermentacin de lactosa y sacarosa en la
superficie del tubo, por el cambio del indicador de rojo a amarillo. La produccin de H2S
se observa por la aparicin de un precipitado negro, debido a las sales de hierro
presentes
Agar Sim La motilidad se observa por la turbidez difusa del medio de cultivo alrededor
del canal de la picadura. La no motilidad se caracteriza por el crecimiento producido
exclusivamente a lo largo de dicho canal. En este medio tambin puede observarse la
formacin de H2S por el ennegrecimiento del medio.
Caldo Brila Se observa la fermentacin de la lactosa con formacin de gas, en las
campanas de Durham. Para la determinacin del Nmero Ms Probable de
microorganismos, se observan cada uno de los tubos que tienen presencia de gas y el
nmero de estos se relaciona en la tabla del Nmero Ms Probable.
En el caldo nutritivo se realiza la prueba de Indol la cual determina la produccin de
Triptofanasa por el microorganismo. Cumplido el tiempo de incubacin agregar 1 ml del
reactivo de Kovacs sobre el caldo de cultivo. Cuando hay molculas de Indol libre se
produce un anillo de color rojo en la superficie del medio de cultivo.
37

En el Agar McConkey las bacterias que degradan lactosa producen cidos orgnicos,
formando colonias color rojo con un halo turbio debido al descenso de ph provocado por
los cidos biliares.Las bacterias que no fermentan lactosa, no bajan el ph, por lo tanto se
observan colonias incoloras.
En el Agar Eosina azul de metileno- lactosa-sacarosa, Las bacterias fermentadoras
forman colonias de color rojo o negras brillantes.Las bacterias No fermentadoras
producen colonias incoloras. Las bacterias Gram positivas, especialmente, resultan
inhibidas en su crecimiento, por los colorantes presentes en el medio EMB.
En el agar SS (Salmonella - Shiguella) . Las colonias de grmenes Lactosa positivos
son rosadas hasta rojas las colonias de grmenes lactosa negativos son incoloras. Las
colonias de microorganismos formadores de H2S presentan un centro negro.
Tubos con los siguientes medios de cultivo inclinados estriles
Lisina Hierro Agar LIA
Triple azcar hierro TSI
Citrato CIT
SIM
Tubos con los siguientes medios lquidos estriles
Caldo lactosado BRILLA con campana de Durham
Caldo nutritivo CN
Cajas de petri con los siguientes medios estriles
Agar nutritivo AN
Eosina azul de metileno agar EMB
S.S. agar SS
Microscopio, asas bacteriolgicas, mechero de bunsen, incubadora, bacterias
la prctica
Estudiar la teora sobre Medios de cultivo y metabolismo microbiano.
38

Metodologa
Cules son las bacterias auttrofas, hetertrofas, quimioauttrofas, organtrofos,
littropos, organtrofos, fottrofos?
resultados.
Rbrica de evaluacin
ACTIVIDAD
VALORACIN
BAJA
VALORACIN
MEDIA
VALORACIN
ALTA
Pre informe
No lleva el pre
informe al
laboratorio o lo
lleva pero no
cumple con lo
solicitado en la
gua.
Desarrolla las
preguntas del
pre informe pero
alguna no es
correcta.
Desarrolla de
forma correcta
todas las
preguntas del
pre informe
MXIMO
PUNTAJE
20 puntos
39

Desarrollo de
la prctica
(0 puntos)
(10 puntos)
(20 puntos)
No se presenta
a la prctica.
Llega tarde a la
prctica o no
presenta un
comportamiento
adecuado.
Cumple con
todos los
objetivos
planteados para
la prctica.
(15 puntos)
(40 puntos)
No presenta el
informe.
Desarrolla el
informe pero se
encuentra
incompleto
Desarrolla
correctamente
el informe de
laboratorio.
(0 puntos)
(20 puntos)
(40 puntos)
(0 puntos)
Informe de
laboratorio
40 puntos
40 puntos
Retroalimentacin
PRACTICA No. 8 CONTROL DE MICROORGANISMO POR MEDIO DE FACTORES

FISICOS Y QUIMICOS
Tipo de practica
Otra Cul
Intencionalidades
formativas
Remota
12,5%
2 horas
Tcnicas de siembra
Propsito:
Se va a demostrar en la siguiente serie de experimentos
que los mtodos que se utilizan para eliminar los
microorganismos no son igualmente efectivos de igual
forma se va a comparar la efectividad
de varios
40

desinfectantes que se utilizan comnmente.
Objetivo:
Explicar la diferencia entre los resultados obtenidos al
utilizar diferentes mtodos de esterilizacin de bacterias.
Explicar cmo se hace un ensayo comparativo de la
eficiencia de varios desinfectantes.
Se define esterilidad a la condicin de ausencia de cualquier microorganismo. Significa
destruccin de toda forma de vida microbiana incluyendo esporas. Los mtodos de
esterilizacin ms usados en el laboratorio son calor seco, calor hmedo, flameado,
utilizacin de soluciones qumicas.
La desinfeccin se refiere a la reduccin de los organismos patgenos (organismos que
ocasionan enfermedades). Los desinfectantes de acuerdo a su composicin qumica se
clasifican en: Fenoles, Hipocloritos (cloro), Yodoformos (yodo Povidona), Amonio
Cuaternario, Formaldehdos, Perxidos. Los desinfectantes pueden ser de bajo nivel, de
nivel intermedio o de alto nivel.
Los desinfectantes de bajo nivel (Fenoles, amonio cuaternario) pueden destruir la mayor
parte de las formas vegetativas bacterianas, tanto grampositivas como gramnegativas,
algunos virus (virus con envoltura lpidica) y hongos (levaduras), pero no Mycobacterium
spp, ni las esporas bacterianas.
Los desinfectantes de nivel intermedio consiguen inactivar todas las formas bacterianas
vegetativas, incluyendo Mycobacterium tuberculosis, la mayora de los virus (virus con y
sin envoltura) y hongos filamentosos, pero no destruyen necesariamente las esporas
bacterianas.
En cambio, los desinfectantes de alto nivel (formaldehdos, perxidos, hipocloritos)
consiguen destruir todos los microorganismos, excepto algunas esporas bacterianas.
1. Primero se va a determinar el efecto de la esterilizacin sobre las bacterias :
Marque 4 tubos de ensayo estriles del 1 al 4
Marque 4 tubos de ensayo con caldo nutritivo del 1 al 4
Los nmeros del 1 al 4 corresponden a los siguiente:
41

1.
2.
3.
4.
Autoclave
Agua hirviendo
Agua a 60oc
No tiene tratamiento
15 minutos
30 minutos
Una hora
Coloque 1 ml del cultivo de E. coli en cada uno de los tubos de ensayo

vacos y llvelos al tratamiento indicado anteriormente.
Una vez terminado el tratamiento trmico, siembre una asada de cada uno
de los tubos sometidos a la accin del calor y el control en los tubos
correspondientes con caldo nutritivo.
Llvelos a los tubos inoculados a la incubadora a 37o C por 24 horas
Anote los resultados en la tabla 1
2. Accin de los desinfectantes sobre las bacterias
Tome una serie de desinfectantes y coloque 5 ml. en un tubo de ensayo
Por cada desinfectante que utilice marque 4 cajas de petri con agar nutritivo as: 15,
30, 45 y 60 segundos
Aada 1 ml. de cultivo de Staphylococcus aureus a cada uno de los tubos con
desinfectante
De acuerda los tiempo marcados en la caja de agar nutritivo vaya tomando una
muestra de cada uno de los tubos de desinfectante ms bacteria y simbrela en la
caja de agar nutritivo correspondiente.
Incube la caja a 37 o C por 24 horas
Anote los resultados obtenidos en la tabla 2
TABLA 1
TRATAMIENTO
CRECIMIENTO
Control
Autoclave
Agua hirviendo durante 30
Agua a 60 grados por una hora
El signo + indica crecimiento y el que no hubo crecimiento.
42

TABLA 2
Desinfectante
15 Segundos
30 Segundos
45Segundos
60Segundos
Tiempo
FENOL
HIPOCLORITO
HIDROXIDO
SODIO
DE
ALCOHOL
ISODINE

Cultivos de Staphylococcus aureus, y Escherichia coli. en caldo nutritivo
Pipetas
Tubos de ensayo estriles
Tubos de ensayo con caldo nutritivo
Cajas de petri con Agar nutritivo
Hidrxido de sodio al 2%
Fenol al 1%
Solucin de hipoclorito de sodio 2ppm
Alcohol antisptico
Isodine
Autoclave
Bao de agua a 60oC
Bao de agua hirviendo
la prctica
Estudiar la teora sobre Control del crecimiento de los microorganismos
Metodologa
Qu es bioseguridad?
43

Cules son las normas bsicas de bioseguridad en el laboratorio de microbiologa?

En el laboratorio seguir claramente las instrucciones dadas por el docente.
resultados.
Rbrica de evaluacin
ACTIVIDAD
VALORACIN
BAJA
VALORACIN
MEDIA
VALORACIN
ALTA
Pre informe
No lleva el pre
informe al
laboratorio o lo
lleva pero no
cumple con lo
solicitado en la
gua.
Desarrolla las
preguntas del
pre informe pero
alguna no es
correcta.
Desarrolla de
forma correcta
todas las
preguntas del
pre informe
(0 puntos)
(10 puntos)
(20 puntos)
No se presenta
a la prctica.
Llega tarde a la
prctica o no
presenta un
comportamiento
adecuado.
Cumple con
todos los
objetivos
planteados para
la prctica.
Desarrollo de
la prctica
MXIMO
PUNTAJE
20 puntos
40 puntos
44

(15 puntos)
(40 puntos)
No presenta el
informe.
Desarrolla el
informe pero se
encuentra
incompleto
Desarrolla
correctamente
el informe de
laboratorio.
(0 puntos)
(20 puntos)
(40 puntos)
(0 puntos)
Informe de
laboratorio
40 puntos
Retroalimentacin
6. FUENTES DOCUMENTALES
APHA, AWWA. WPCF. 1989. Standar Methods for the examination of water
and wasterwater.
GARCES, Emira. 2003. Morfologa y Clasificacin de los hongos. Notas de
clase Universidad Nacional de Colombia. Editorial UNIBIBLIOS.
GRANT Y LONG. 1999. Microbiologa Ambiental. Editorial Acriba. Espaa.
MADIGAN, M.T., MARTINKO, J.M. Y PARKER,J. 2003. Brock: Biologa de los
Microorganismos, Prentice Hall.
MONTOYA, Olga Ines. 2004. Manual de Microbiologa. Universidad Nacional
de Colombia Sede Medelln.
45

PELCZAR, M.J. y Reid, R.A. 1984. Elementos de Microbiologa. McGraw-Hill,

Ed.
SALDARRIAGA, Yamil y PINEDA, Fabio.
Aplicada. Editorial Universidad de Antioquia.
2001.
Manual de Micologa
SANCHES, Marina, MARMOLEJO, Fernando y BRAVO, Nelson. 2000.

Microbiologa Aspectos Fundamentales. Universidad Nacional de Colombia, sede
Palmira. Feriva S.A.
VALENCIA. Hernando. 2004. Manual de Prcticas de microbiologa bsica.
Notas de clase Universidad Nacional de Colombia. Editorial UNIBIBLIOS.
46

Guía para El Desarrollo Del Componente Práctico - Laboratorios

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PRACTICA No. 6 FACTORES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO DE LOS

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