Los objetives cultivo in vitro son: MEstudios basicos de _ fisiologia, genética, bioquimica, y ciencias afines. MBioconversion y produccién de compuestos Utiles 3 Incremento de la variabilidad genética MObtencién de plantas libres de patogenos. 3¢ Propagacién de plantas. yConservacién e intercambio de germoplasma. I. SISTEMAS DE APLICACION A CORTO PLAZO Propagacién clonal masiva B. Estrategias de Propagacién clonal masiva 1. Multiplicacién de brotes 7. Cultivo de embriones y esporas. “) (|C. Obtencién de especies libres de patégenos D. Conservacién de germoplasma =) i. SISTEMAS DE APLICACION A MEDIANO PLAZO A. Mejoramiento Genético = B. Cultivo de anteras para produccién de haploide C. Rescate de embriones para recuperacién de hibridos D. Variacién somacional E. Mutagénesis Ill. SISTEMAS DE APLICACION A LARGO PLAZO° LL Mezcla de sustancias. Sustancias organicas: N, P, K, Ca , Mg, Cl, Na, Cu, Zn, Mn, Fe, Bo, Mo, Co yL Suplementos orgdénicos complejos: leche de coco, extracto de levadura Reguladores de crecimiento. — Auxinas Citoquininas, AG3, etc. Fuente de carbono sacarosa: azucar Medio: semi-solido- solido- liquido_ CUADRON°1 FUENTES Y FUNCION DE LOS MACRONUTRIENTES JN VITRO E} LAS PLANTAS MACROEL | FUENTES DEL ELEMENTO ROL DETERMINADO EMENTOS | PARA ADICIONAR AL ‘MEDIO DE CULTIVO Nitrégeno | —Nitsto (NO), Amenio (NH,) | Importante en la formacién de protenas o = Nitrto de Amonio (NH.NO,) | Estnmla el crecimiento de la planta, Elemento conmespondiente de fa cloofila,alaloides, écidos nucteicos, algunas fitchormonas y aminoécidos. Fésforo (P)_| ~Fosfito de Potasio (KH,PO,) | Esta presente en forma abundante en Ins células meristematicas (componente de la ~ Cloruro de Potasio (KCI) | lectinay dcidos nucleicos). Ex nccesario para ciertos procesos enzimaticos como la formaciéa de alcohol a partic de anicares y ls transformaciones de azicares en amidén y viceversa. otasio (K) | -Nitrato de Potato (KNO,) ‘Actia como catalizador de vanas enzimas siendo necesano para los siguientes - Fosfito de Potsio (RH.PO,) | procesos = Cloruro de Potasio (KCI) | - Sinesis de aicares y almidén. Reduccién de nitratos. ~ Siatesis de coral y satesis de proteins. = Divisiin normal de fa cal Calcio(Ca) |- Clomuro de Calcio | Elemento constitutivo dela paredes celulares en fomna de pectato de calcio. (CC) 24,0 Tnfluye en Ta permeabilidad de la membrana celular, facifitendo el movimiento de = Nitro de Calcio | carbohidratos ¥ de aminoicidos en toda la planta. [caQNO,2.48,0] Proasueve al desallo de la sai. Maznesio |- Sulfato de Magnesio | - Formn pate importanc dela molécula de corolla. (Me) (MeS0,.7H,0) ~ Esta presente en el cloroplasto actuando como co-factor enzimético en una sesie depH Después de afiadir todos sus componentes, se procede a ajustar el P final al valor deseado, ahadiendo OHNa oa N 0 HCl oN al medio. Optimo. 5.25.8. © Valores bajos, inferiores a 3.5 impiden la solidificacién del agar enlos medios sélidos © Sila evolucién del pH del medio lo hace bajar por debajo de 3.5 se puede producir su licuacién. © Elvalor del pH puede afectar a la solubilidad de algunos componentes del medio de cultivo © Elvalor del pH puede afectar a la absorcién de determinados nufrientes por parte del explanto (p.e. la absoreion de iones NO3-aumenta con la acidez del medio) * Elvalor del pH del medio puede afectar al pH del citoplasma y como consecuencia a la actividad de muchos enzimas éQué medio elegir? © De Fossard (1976) sugirié un experimento de amplio espectro utilizando 4 grupos de los componentes mas frecuentemente vitales en el medio nutritivo: © Sacarosa:1-2- 4% © Macro-sales (de acuerdo con Murashige y Skoog,1962): Diluida 1/4 -3/2-1/2 © Auxina (p.e., IBA): 0,01- 0,5 - 5 mg © Citoquinina (p.e., BA): 0,01 - 0,5 - 5 mg1> Las combinaciones de las tres concentraciones de cada grupo producen un total de 3+ = 81 medios diferentes, de los que se elige el optimoMATERIAL DE PARTIDA: PLANTA MADRE Genotipo: Facil regeneracién en dicotiledéneas (solandceas, cruciferas) que en monocotiledéneas. Edad : Partes juveniles mejor que las adultas Estado del organo o tejido: No lenosos Estado fisiolégico: Partes vegetativas(generativas). Estado sanitario: Las mas saludables y vigorosas Afio: Material proviene de campo (inviernos severos 6 veranos secos) Condiciones de crecimiento: Diferente respuesta si campo o invernadero. Posicién del explanto: Gradiente de regenezacién en la planta. Tamafio del explanto: A mayor tamafo mayor capacidad regenerativa. El hipoclorito de calcio en. polvo en una concentracién | de 35-100 g/Ise puede usar. El material vegetal debe | permanecer sumergido entre 5-30 minutos y ser enjuagado | con aguaestézil al finalizar,PROPAGACION RAPIDA “ MICROPROPAGACION | | 4 + NN PERMITELA RESCATEDE ESTABLECE. ELIMINACION DE. ESPECIES EN BANCOS DE PATOGENOS EXTINCION GERMOPLASMA