OPERACIONES UNITARIAS II

CROMATOGRAFA EN PAPEL
INTRODUCCIN
La cromatografa en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar
anlisis cualitativos ya que pese a no ser una tcnica potente no requiere de ningn
tipo de equipamiento. La fase estacionaria est constituida simplemente por una tira
de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas de
la disolucin y evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase
mvil se hace ascender por capilaridad. La separacin se realiza en funcin de la
afinidad de los solutos con las dos fases, las ms solubles en agua se quedarn cerca
del punto donde se aplic la muestra, y las menos solubles en agua y ms solubles en
el disolvente llegarn ms lejos. Las sustancias separadas se identifican mediante
diversos procedimientos fsicos o qumicos.
La cromatografa en papel es una tcnica utilizada para anlisis inorgnico cualitativo,
permite llevar a cabo la separacin e identificacin de iones, trabajando con
cantidades mnimas de sustancia. Pertenece al tipo de Cromatografa de particin se
fundamenta en que las sustancias problema, pueden tener diferentes coeficientes de
reparto en dos disolventes de inmiscibilidad limitada, uno permanece fijo en la
superficie del papel fase estacionaria generalmente en agua, la fase mvil constituida
generalmente por una mezcla de disolventes parcialmente miscibles en ella. Hay
varios tipos de cromatografa, la ascendente (papel hacia arriba), descendente (papel
invertido), radial y de separacin de zonas y sectores.
Al entrar en contacto con los disolventes empieza su fase de movilidad lo que produce
unas manchas caractersticas sobre el papel, generalmente, estas no son coloreadas y
se revelan con una lmpara fluorescente, los contornos se marcan con lpiz. Como
medida en cromatografa sobre papel se emplea el Rf (Retention factor), el cual se
define como el cociente de dividir el recorrido de la sustancia por el disolvente, esto es,
la distancia media desde el origen hasta el centro de la mancha (X) dividida por la
distancia que media desde el origen hasta el frente del disolvente (S).
En la cromatografa en papel se utiliza como fase estacionaria una hoja de papel de
celulosa de elevada pureza recubierta de una capa de agua asociada a las fibras de
celulosa. La fase mvil, en la que ir disuelta la muestra, se forma por disolventes
cuya naturaleza se elige en funcin de los componentes que se pretenden separar.

OBJETIVOS

Conocer las caractersticas y aplicaciones de la cromatografa en papel.

Conocer los fundamentos bsicos de la cromatografa como tcnica
instrumental de separacin.

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METODOLOGA
1) Reactivos

Agua
Alcohol etlico al 96
Acetona
Cloroformo
Hexano

2) Materiales

Pliegos de papel filtro de 8.4 x 2.5 cm

1 Lpiz HB con punta fina
Tijeras
Tintas/Bolgrafos de colores (Negro, Azul, Verde y Rojo)
Regla de acero de 30 cm

3) Mtodos
Los siguientes procedimientos fueron realizados en la prctica.
3.1. Seleccin de la fase mvil (use guantes)
Corte con las tijeras los pliegos requeridos de papel filtro (8.4 x 2.5 cm como
dimensiones), segn la cantidad de eluyentes que vaya a utilizar. En cada pliego, trace
una lnea media en posicin vertical con el lpiz HB. En espacios de 1 a 2 cm de
separacin, marque con su bolgrafo las 4 tintas (negro, azul, verde y rojo, en ese
orden). Aada una o dos gotas del
eluyente que quiera evaluar.
Deje actuar el eluyente hasta que
aprecie corrimiento de las tintas y
seque el papel a temperatura
ambiente. Realice el procedimiento
anterior con otro eluyente y un papel
nuevo. Por ltimo, compare los
eluyentes a partir del corrimiento de
las tintas y seleccione el mejor en
base a este criterio para su utilizacin
en el siguiente paso.
Goteo del eluyente sobre las marcas de las tintas trazadas

3.2. Separacin por capilaridad

En un pliego nuevo de papel con las mismas dimensiones, realice un trazo con el lpiz
HB en forma horizontal a un centmetro de su extremo (a esta se le conoce como
Origen). De esta manera, realice otro trazo en el extremo opuesto del origen a un
centmetro del borde del papel (a este se le llama frente). Despus, marque
ligeramente debajo el origen (en direccin al borde del papel) 4 puntos separados
entre 0.5 a 1 cm (esto ayudar a diferenciar el origen del frente). Luego, marque con el

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bolgrafo las 4 tintas (negro, azul, verde y rojo, en ese orden) sobre cada punto (dentro
del origen).
Mientras, en un vaso de precipitado (no mayor a 50 ml), aada el eluyente que actuar
como fase mvil hasta una altura de 0.5 cm (que no supere al origen). Despus,
introduzca el papel filtro (el origen debe estar en la parte inferior) en posicin diagonal
y de frente para visualizar el corrimiento. Tape el vaso de precipitado con un vidrio de
reloj para evitar la evaporacin del eluyente. Deje actuar a la fase mvil por unos
minutos hasta que ascienda por capilaridad totalmente (debe visualizarse el
corrimiento de las tintas). Por ltimo, recoja el papel filtro y deje secar a temperatura
ambiente. Obtenga las mediciones de la distancia recorrida de las tintas y el eluyente y
la anchura de las manchas para realizar los clculos correspondientes. Si cuenta con
otro eluyente, realice todo este procedimiento anterior en un nuevo papel filtro.

RESULTADOS Y DISCUSIONES
1.1. Seleccin de la fase mvil
En esta primera parte de la prctica, se realiz la seleccin de la fase mvil a partir de
los eluyentes disponibles, siendo en este caso Agua y Alcohol etlico al 96. Cada
eluyente se le someti a una prueba cromatogrfica al aadirlo en un pliego de papel
filtro, marcado previamente con un trazo del lpiz HB con las 4 tintas del color Negro,
Azul, Rojo y verde, en ese orden, pertenecientes a la marca de bolgrafos Bazic, para
despus dejarlo correr en posicin horizontal por un breve lapso de tiempo. Eso se
realiz con el de fin de determinar cul de los dos eluyentes generaba un menor
corrimiento de las tinta.
En el caso del agua, debido a su alta polaridad con respecto al alcohol etlico, no se
observa separacin del lugar donde se mantiene adsorbido. Esto se debe a que los
componentes de las tintas son de naturaleza polar, hacindolos poco o nada solubles
en este eluyente y esto no genera un proceso de corrimiento sobre el papel, por tanto
se descarta su utilizacin como fase mvil en los siguientes procedimientos.
En el caso del alcohol etlico al 96, tuvo una mejor respuesta, provocando una
separacin ms notoria de las tintas con respecto al papel filtro, logrando correrse
unos pocos milmetros de su posicin original. El alcohol etlico obedece un principio
qumico que dice que semejante disuelve a semejante, es decir al agregar este
eluyente apolar, el adsorbente arrastrara los compuestos con l, de esta manera,
ciertos componentes de la tinta que son polares se adsorben en la fase estacionaria
en el lugar de origen, y a medida que se produce la elucin, van siendo desplazados y
solubilizados los componentes apolares junto el disolvente de la fase mvil,
provocando as la separacin. Su concentracin es crucial (96), debido a que entre
ms puro llegue a ser, favorecer el corrimiento de muestras apolares. Por lo tanto, se
utiliza este eluyente como fase mvil durante el desarrollo de la prctica.
1.2. Separacin por capilaridad
Al tener seleccionado al alcohol etlico al 96 como nuestra fase mvil, se procedi a
realizar la separacin de la tintas por capilaridad. Al realizar los procedimientos
correspondientes, se coloca el pliego de papel marcado por las 4 tintas (Negro, azul,
rojo y verde, en ese orden) en forma diagonal dentro del vaso de precipitado que
contena la fase mvil previamente seleccionada. A continuacin se obtuvieron los
siguientes resultados.

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Pliego de prueba con agua como fase mvil

1 Pliego de prueba con alcohol etlico al 90

1.2.1. Corrimiento de las tintas

Inmediatamente, el alcohol etlico al entrar en contacto con el papel filtro, ascendi
rpidamente por capilaridad, provocando el corrimiento de las tintas tambin de
manera ascendente. Las 4 tintas experimentaron corrimientos provocados por la fase
mvil pero no de la misma forma, esto se debe a que cada tinta presenta una afinidad
distinta con respecto con la fase mvil. Esto se debe a que cada tinta es un vehculo
de naturaleza lquida que transporta diversos tipos de pigmentos y aditivos y por tanto,
la afinidad de los mismos por otros compuestos es muy variada.
La tinta que present un mayor corrimiento fue la roja del bolgrafo, presentando un
corrimiento de 5.7 cm con respecto a la lnea de origen y 3.7 cm de ancho con
respecto su primera banda separada. La tinta roja se compone principalmente de
eosina, un compuesto cido que presenta afinidad con los compuestos alcalinos. En
este caso el alcohol etlico, disolvi de manera favorable la eosina presente en la tinta,
provocando su solubilizacin y corrimiento sobre el papel debido a la alta afinidad que
posee con respecto a la fase mvil, provocando que haya una dispersin incluso casi
al final de la distancia recorrida solo por el eluyente. Sin embargo, este no se realiza
de manera uniforme y la mancha termina por desplazarse hacia otra direccin con
respecto a su punto de partida, a tal grado de que supera la lnea frente del pliego de
papel.
La segunda tinta con mayor corrimiento fue la negra, presentando un corrimiento de
5.4 cm con respecto a la lnea de origen y 3.4 cm de ancho con respecto la primera
banda separada. La tinta negra se compone principalmente de resina pretratada con

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minerales y solventes. Este componente es de origen vegetal, de consistencia pastosa

y es soluble en alcohol. Su corrimiento (al igual que la eosina) ocurre debido a la
afinidad que posee este componente con respecto a la fase mvil, logrando
solubilizarse en el mismo. Sin embargo, debido a su naturaleza oleosa, no llega a
correr tan rpido como la eosina pero si se realiza la separacin correspondiente.
La tercera tinta en correr fue la azul presentando un corrimiento de 4.8 cm con
respecto a la lnea de origen y 3.8 cm de ancho con respecto la primera banda
separada. La tinta azul se compone de Trifenilmetano azul, pero cabe destacar que
este compuesto al ser una patente, no se tiene informacin concisa con respecto a sus
propiedades. Sin embargo, el componente original, Trifenilmetano, comparte ciertas
caractersticas, entre ellas su alta polaridad. La afinidad de este compuesto con la fase
mvil permite su corrimiento y su separacin con respecto al punto de origen.

Tintas Negra, Azul, Roja y Verde (de izq. a der.) 5.4cm 5.7cm 4.8cm 3.3cm

Corrimiento inicial de las tintas.

La ltima tinta en correr fue la verde, presentando un corrimiento de 3.3 cm con

respecto a la lnea de origen y 1.8 cm de distancia con respecto la primera banda
separada. El componente principal de la tinta verde es ftalocianina, un colorante que
se estable a condiciones extremas como calor y luz. En esta separacin, realiza un
corrimiento muy lento debido a la poca afinidad que tiene con la fase mvil,
provocando que su separacin sea ms lenta a comparacin de las otras tintas.
1.2.2. Parmetros para determinar la separacin cromatogrfica

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Una vez realizo el proceso de separacin, se dej secar el pliego de papel, para
despus obtener las medidas mencionadas anteriormente con el fin de calcular los
parmetros que se muestran a continuacin.
1) Tiempo de respuesta (Rf)
Una vez obtenido esto podemos encontrar el factor de retencin o el tiempo de
respuesta (Rf) el cual se define como la relacin entre la velocidad de desplazamiento
del soluto y la del disolvente medidas ambas por el avance hacia un frente (Burriel
Mart, Lucena conde, Arribas Jimeno, & Hernndez Mndez, 1998)1. A partir de este
parmetro podemos definir la competencia que se establece entre los colorantes que
se separaron y la fase mvil al retenerse a la fase estacionaria. Cabe destacar que
tanto la distancia recorrida del disolvente y de la fase mvil fueron tomados a partir de
la lnea de origen. Estos fueron los resultados:
Rf tinta negra = 5.4 cm 6.6 cm = 0.81
Rf tinta azul = 4.8 cm 6.6 cm = 0.72
Rf tinta roja = 5.7 cm 6.6 cm = 0.863
Rf tinta verde = 3.3 cm 6.6 cm = 0.5
Al calcular estos parmetros, podemos verificar que hay un mejor tiempo de respuesta
entre ms alto sea el Rf. En el caso de los compuestos que presentaron mayor
corrimiento (tinta roja, negra y azul) tuvieron un Rf ms debido naturaleza apolar,
permitiendo que reaccionarn de manera inmediata con el alcohol etlico, logrando as
un desplazamiento ms rpido de manera ascendente hacia el frente del papel,
indicando que estos son separados ms rpido gracias a la afinidad que tuvieron con
la fase mvil. En el caso de la tinta verde, tuvo el Rf ms bajo, esto se debe a que
posee una baja afinidad con la fase mvil debido a que los dos son de naturaleza polar
y por ende su tiempo de respuesta es menor, logrando separarse lentamente.
2) Selectividad
La selectividad se define como el grado de preferencia de la fase mvil por un
compuesto con respecto a la distancia de la primera mancha ms cercana al origen.
Selectividad tinta roja = 3.3 cm 5.7 cm = 0.5789
Selectividad tinta negra = 3.3 cm 5.4 cm = 0.611
Rf tinta azul = 3.3 cm 4.8 cm = 0.687
Las tres muestras de tintas presentan parmetros regulares muy parecidos en cuanto
a la selectividad de la fase mvil. Con esto podemos demostrar que la separacin no
presenta anomalas y que los compuestos presentaron un corrimiento apto a la
polaridad que poseen.
CONCLUSIN
En el desarrollo de esta prctica se comprendi que la movilidad de los componentes
de una muestra que se desee separar, depende de la afinidad que tenga con la fase
mvil y la polaridad que presente est ltima, ya que es el factor crucial para que
pueda realizarse una separacin cromatogrfica apta. A pesar de que es una tcnica
muy sencilla de realizar, existen inconvenientes que alteran los resultados de la
misma, ya sea la sobre distribucin de las muestras sobre el papel (en este

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caso,afectando a otras tintas en su corrimientos) o los factores ambientales (p. ej.

calor y la falta de una cmara cromatogrfica) que afectan a la fase mvil,
disminuyendo su cantidad al vaporizarse o el deterioro de la fase estacionaria. Sin
embargo, controlando estos factores, esta tcnica puede desarrollarse y arrojar
resultados favorables. Como futuros qumicos, es importante conocer y desarrollar los
mtodos cromatogrficos, y en base a las competencias obtenidas, realizarlos de la
manera adecuada para aplicaciones en el rea profesional, ya sea en el sector clnico,
industrial e investigacin.
CUESTIONARIO
1. En este sistema cul es la fase mvil y cul la estacionaria?
R= La fase mvil es el alcohol etlico al 96 y acta por afinidad con los compuestos de
las muestras, separando aquellos que sean apolares. La fase estacionara es el papel
filtro, debido que acta como una fase rgida que permite la adsorcin de las tintas y
permite su separacin en la misma.
2. Se us soporte? Cul es la funcin de la cmara? R= No es necesario el uso de
soporte en esta cromatografa. La cmara aporta tanto a la fase estacionaria como a la
mvil condiciones climatolgicas y ambientales con el fin de que se desarrolle sin
problema alguno el proceso de separacin.
3. Cul es la composicin qumica de la fase estacionaria y de la mvil? R= La fase
mvil se compone de etanol, un compuesto alcohlico conformado por dos carbonos
simples con un radical OH
La fase estacionaria (papel) se compone de celulosa, un biopolmero compuesto de
molculas de -glucosa.
4. Todas las tintas corrieron igual? Cules son las que mostraron ms manchas?
R= La mayora (excepto la tinta verde) tuvo un corrimiento de tinta muy parecido
debido a que estos presentaban una alta afinidad con respecto a la fase mvil. La tinta
verde present corrimiento pero fue poco notorio. Ninguna de las tintas de las
muestras no present ms de una mancha.
5. Cul es el Rf de las tintas negras? Entre las tintas negras hubo manchas que se
repitieran?
R= En el caso de esta prctica solo de determin una tinta negra, dando un Rf de
0.81. No se pudo determinar manchas porque solo se determin una sola tinta de este
color.
6. Hubo manchas que se repitieran entre las tintas del mismo color?
R= No, debido a que solo se determin una muestra por cada tinta en nuestro papel
filtro.
7. Podras mejorar la separacin cromatogrfica?
R= Esta cromatografa puede realizarse mejor si cambamos las dimensiones de la
fase estacionaria para permitir un corrimiento ms prolongado y notorio. Las
condiciones de las mismas pueden controlarse si la realizamos en una cmara
cromatogrfica.

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8. Calcula la eficiencia de separacin de las muestras que tuvieron dos manchas o

ms. Qu podras hacer para mejorar la eficiencia de la separacin?
R= Debido a que no hubo ms de dos manchas en las muestras, solo se determin la
eficiencia de las que fueron obtenidas.
= 16 ( 5.4 3.4 2 ) = 50.72
= 16 ( 4.8 3.8 2 ) = 54.85
= 16( 5.7 3.7 2 ) = 49.29
= 16 ( 3.3 1.8 2 ) = 58.66
El nmero de platos tericos en las 4 muestras es demasiado pequeo a comparacin
del lmite mnimo aceptado en la cromatografa de este tipo (mayor a 300). Esto se
debe a que solo se tom en cuenta una mancha por cada muestra para realizar es
clculo, dando como conclusin que las muestras no migraron completamente debido
a la falta de espacio en el papel filtro.
9. Calcula la resolucin de las muestras que tuvieron dos manchas o ms. Qu
podras hacer para mejorar la resolucin de la separacin? R= Debido a la falta de
ms de dos manchas en cada muestras, no pudo determinarse este parmetro para
esta separacin.
10. Cul es la naturaleza qumica de los colorantes utilizados en los bolgrafos?
R= Las estructuras de las tintas negra, azul y roja comparten una afinidad apolar con
respecto a la fase mvil, permitiendo que se solubilicen en el mismo y generen su
corrimiento ascendente por el papel. Mientras que la tinta verde presentaba poca
afinidad debido a que en su estructura presentaba mayor afinidad polar y tuvo un
corrimiento ms lento.

BIBLIOGRAFIA
https://www.sites.google.com/site/equipoquimicaexperimental6/pactica-6destilacion-simple-y-cromatografia-en-papel
http://webdelprofesor.ula.ve/ciencias/rmhr/Index_archivos/Cromatografia_de_p
apel.pdf
http://es.slideshare.net/CarlosIbal/reporte-de-prcticas-de-cromatografa
http://revistareduca.es/index.php/biologia/article/viewFile/843/858