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23/8/2016

histoplasmosisdiagnosticodelaboratorio

DiagnsticodeHistoplasmosis

Eldiagnsticodehistoplasmosissebasaen:
1)estudiomicolgico
2)estudioinmunolgico

Metodologadiagnstica
Consisteenelhallazgodelagenteetiolgicoenlaslesiones,medianteunestudio
directodelasmismasyeldesarrollodelhongoenmediosdecultivoapropiados.
Eventualmentepuederealizarseinoculacinanimal.
Lasmuestrasanalizadasdependerndelasmanifestacionesclnicasquepresenteel
paciente.Podrnserpiel,expectoracin,fluidodelavadobronquioalveolar,biopsia
sea,etc.
Silalesinesdepielomucosa,seefectuarunatomadelalesinconbistur
estril,extrayendoabundantematerial.Silalesinfueracostrosa,sedeber
descostrarlamismaantesderealizarlatoma.
Enelcasodequesesospechehistoplasmosisvisceral,elmaterialaestudiarpuede
corresponderaexpectoracin,biopsiasdeganglioslinfticos,lavados
broncoalveolares,puncinmedular,puncinheptica,etc.Esimportantedestacar
quelarecoleccindelmaterialqueserprocesadodeberealizarseenunrecipiente
estrilsinformol.Entodosestosmateriales,serealizarelprocesamientoadecuado
acadaunodeellos,parainiciarlabsquedadelagenteetiolgico.

A)Examenmicolgicodirecto
ComoHistoplasmacapsulatumesunalevaduraintracelulardepequeotamao,es
importantequesubsquedaydiagnsticosiempreseanefectuadosporpersonal
debidamenteentrenado.
Unavezprocesadalamuestra,serealizarnimprontasenlminasportaobjetos,las
quesernteidasconlatcnicadeGiemsa.Laobservacinserealizacon
microscopiopticoentre400y1000aumentos.Sedebebuscarlapresenciade
macrfagosomonocitoslosquepuedentenerensuinteriorlevadurasovoidesde
unos35micrmetrosdetamao,congemacinpolaryunatpicatincinen
casquete.Alrededordelalevaduraexisteunhaloclaroquesemejaunacpsulay
correspondealaretraccindelcitoplasma,dedondederivaelnombrede
capsulatum.Elcitoplasmaseobservadecolorcelesteyelncleocomounpunto
rojodifuso.Otrastincionesquepuedenutilizarseson:PAS,GomoriGrocott,o
hematoxilinaeosina.(microfotografas)
B)Cultivo
Elaislamientodelhongoenlosmediosdecultivocertificaeldiagnstico.Serla
primeramanipulacinarealizarseunavezpreparadoelmaterialaprocesar,para
evitarposiblescontaminacionesconhongosambientales.
Histoplasmacapsulatumesunhongodimorfo,condosformasmorfolgicamente
diferentes:a28C(temperaturaambiente),sedesarrollaenformafilamentosa,con
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morfologamicroscpicacaractersticademicroconidiosymacroconidios
verrucososterminales,siendostalaformadedesarrollosaproftico.(FOTO).
Cuandoparasitaa37C,lohaceenformadelevadura.
Paraeldiagnsticoetiolgicoserealizancultivosendistintosmedios(agar
Sabouraud,micobiotic,etc.)quesemantienena28C.stossonobservadosen
formaperidicaysemantienenenellaboratorioporlomenosunmesantesde
descartarlos.
Paraconfirmareldimorfismosecultivaa37Cenagarcerebrocoraznoagar
sangre,desarrollndosealllaformalevadura.

C)Inoculacinaanimales
Consisteenlainoculacindelmaterial(previamenteprocesadoyhomogeneizado
conunasuspensindeantibiticos)porvaintraperitonealaratonesdelaboratorio
(Musmusculus),losquesesacrificanalos2meses.Posteriormenteseestudianlas
lesionesyseprocesanelhgadoyelbazodemanerasimilaralasbiopsiasdelos
pacientes.
Estemtodoseefectaenlaboratoriosdereferencia,yaqueesnecesarioteneruna
reservaimportantederatones,siendosuusoreservadoparaestudios
experimentales.

Diagnsticoinmunolgico
Losmtodosinmunolgicossonempleadosparaladeteccindeanticuerpos
especficosoparaladeteccindeantgenoscirculantes,apartirdediferentes
fluidoscorporales.Enelcasodeestamicosis,lasmsutilizadasparalabsqueda
deanticuerpossonlastcnicasdeinmunoprecipitacin.Esutilizadaladoble
difusin,quecomienzaapositivizarsedosatressemanasdespusdelaexposicin
alhongo.LosprimerosanticuerposprecipitantesaparecencontralafraccinMdel
hongo(demicelio).LosqueprecipitancontralafraccinH(asociadaala
histoplasmosisactiva),sonmstardos,pudiendoestarausentes.Esteestudio
constituyeunodelospilaresdiagnsticosenlospacientesinmunocompetentes,
perdiendovalorenlosinmunodeprimidos.
Otraspruebasinmunolgicasqueseutilizanson:aglutinacindeltexyELISA.La
deteccindeantgenoscirculantesporalgunadeestastcnicasadquiererelevancia
enlospacientesinmunodeprimidos.

Bibliografa:
1TorresRodrguez,J.M.Histoplasmosis.En:Monografasclnicasen
EnfermedadesInfecciosas.MicosisSistmicas.EdicionesDoyma.Barcelona,1991.
2TorresRodrguez,J.M.Histoplasmosis.En:MicologaMdica.Ediciones
Masson.Barcelona,1993.
3Rippon,J.W.Histoplasmosis.En:TratadodeMicologamdica.Editorial
Interamericana.Terceraedicin,1990.

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4Midgley,GClayton,Y&Hay,R.Diagnosisincolor.MedicalMycology.
EditorialMosbyWolfe,1997.
5Mackinnon,JuanE.Histoplasmosis

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