Manual de Normas y Procedimientos para El Diagnóstico de Parásitos Intestinales

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Manual de Normas y Procedimiento para Fecha: Enero del 2006

el Diagnostico de Parsitos Intestinales Archivo: POEPI
Primera Edicin
INDICE
Pagina
1. Introduccin____________________________________________________________ 2
2. Aspectos generales de Parasitologa__________________________________ 3
2.1. Infecciones Parasitarias Intestinales______________________________________ 5
3. Mtodo de Laboratorio usado para diagnstico de enfermedades Parasitarias_______ 5
3.1. Base indispensable de conocimientos para solicitud de exmenes_____________ 6
3.2. Muestras para examen Parasitolgico
3.3. Muestras que se deben enviar en determinadas Infecciones Parasitarias
3.4. Recoleccin de la muestra de heces
3.5. Organizacin en el Laboratorio de Parasitologa
4. Procedimiento de Laboratorio para el diagnostico Parasitologico
4.1. Examen directo macroscpico
4.2. Examen directo microscpico
5. Mtodos de Concentracin
5.1. Mtodo de Sedimentacin en tubo
5.2. Mtodo de Sedimentacin rpida (concentracin por sedimentacin sin centrfuga)
5.3. Mtodo de Flotacin por Sweater
5.4. Mtodo de Kato-Katz
5.4.1. Estimado de la Intensidad de la Infeccin; cuenta de huevos de Nematodos
Transmitidos por el Suelo.
5.4.2. Interpretacin de los datos del recuento de huevos de Geohelmintos
5.5. Mtodo de Graham ; (mtodo de la cinta transparente adhesiva)
5.6. Mtodo de flotacin por sulfato de zinc.
5.7. Mtodo de formol-eter
5.8. Mtodo de Harada mori
5.8.1. Tcnica en tubo de ensayo
5.8.2. Variacin en caja de petri
5.9. Mtodo de Baerman
5.10. Digestin artificial de Larvas
Manual de Normas y Procedimiento de Parasitologa
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5.11. Mtodo de concentracin y coloracin segn Weber
5.12. Examen cuantitativo de Stoll.
6. Mtodos de tincin para Protozoos en las heces
6.1. Tincin permanente de frotis fecal
6.2. Tincin tricrmica examen directo
6.3. Tincin de Hematoxilina ferrica
6.4. Tcnica de ziehl-neelsen modificado
7. Teniasis- Cisticercosis
7.1. Taenia solium
7.2. Cisticercosis
8. Utilizacin de coproantigenos y coproanticuerpos en helmintologa
8.1. Ventajas de estos mtodos
9. Red de laboratorios
9.1. Estructura de la red de laboratorios
9.2. Funciones especificas de los laboratorios de diferentes niveles
9.3. Supervisin
9.4. Supervisin directa
9.5. Informe de la Supervisin directa
9.6. Supervisin indirecta
10. Control de Calidad
10.1. Evaluacin Externa del Desempeo
10.2. Elaboracin de paneles para el Control de Calidad
10.3. Envi de panales
10.4. Instrumento y flujo de la informacin de los panales
10.5. Anlisis y retroalimentacin de los paneles
11. Definiciones y abreviaturas
12. Bibliografa
13. Anexos
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1- INTRODUCCIN.
Las infecciones por helmintos y protozoos son causa importante de morbilidad y mortalidad a nivel
mundial, donde miles de personas pobres en todo el mundo adquieren diariamente enfermedades
transmisibles prevenibles y mueren a causa de ellas. Este hecho explica la diferencia en las tasas de
mortalidad y morbilidad entre los pases desarrollados y en vas de desarrollo.
La presencia de factores desfavorables para la salud de la comunidad como el fecalismo al aire libre, el
deficiente saneamiento ambiental, la pobreza y el bajo nivel educativo, permiten la presencia y
expansin de Parsitos intestinales, principalmente en nios.
Los parsitos intestinales son protozoos y helmintos que en sus estadios evolutivos pueden
encontrarse en las heces, secreciones, fluidos y frotis perianal de las personas. Estos parsitos afectan
el desarrollo intelectual y nutricional de esta poblacin convirtindose en otro factor en contra de su
economa, El examen general de heces es uno de los estudios mas solicitado por los clnicos, por eso
es de gran importancia que el personal de Laboratorio, conozca perfectamente cada uno de los
procedimientos utilizados en un anlisis de heces, con el fin de brindar un servicio confiable y preciso.
El Manual de Normas y Procedimientos para el Diagnstico de los parsitos Intestinales, es una

recopilacin de los mtodos ms usados y contiene tcnicas fciles, confiables, accesibles en
materiales y reactivos, incluye fundamentos, procedimientos de mtodos parasitologicos, coloraciones,
preparacin de reactivos, control de calidad y ciclos de vida, que son usadas frecuentemente, y deben
ser cumplidas por el personal de laboratorio, responsable por el diagnostico de Parasitismo Intestinal
en toda actividad a realizarse, desde el recibo de muestras, procesamientos de las mismas, hasta los
pasos a cumplir en la entrega de los resultados, se espera que sea una ayuda inmediata y sencilla
para el personal tcnico y profesional que trabaja en la Red Nacional de Laboratorios. Adems puede
ser usada como una herramienta de capacitacin.
Aunque el procedimiento de cada mtodo es de fcil manejo, se prefiere que el usuario posea una
base firme de trabajo en el Laboratorio.
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2- ASPECTOS GENERALES DE PARASITOLOGIA:
La proporcin de helmintiasis intestinal en la carga de morbilidad general de los pases en
desarrollo es muy alta. La Repblica de Honduras, no es ninguna excepcin. La prevalencia
mundial de helmintiasis intestinal se calcula en miles de millones de personas. La poblacin
en riesgo de padecer estas infecciones es aproximadamente 2 mil millones de personas, o la
tercera parte de la poblacin humana. Se estima que 20% a 30% de los habitantes de las
Amricas podran estar infectados por scaris lumbricoides, Trichuris trichiura o uncinarias,
solas o en combinacin. Los nios entre 2 y 14 aos pertenecen al grupo de edad ms
vulnerable y son los que tienen ms probabilidades de ser afectados por este grupo de
parsitos.
Estos Parsitos compiten por los nutrientes, causando anemia y alterando el crecimiento y
desarrollo normal de los nios. Adems de las consecuencias directas de las helmintiasis
intestinales en la salud, el ausentismo y el desempeo escolares son una consecuencia
prevista de los cuadros agudos y crnicos de este grupo de parsitos. Los factores de riesgo
bien conocidos que se asocian con la propagacin de los helmintos intestinales son; factores
ambientales y socioeconmicos. Las condiciones tropicales y subtropicales favorecen la
transmisin de estos Parsitos. Aunque hay riesgos para la salud inherente al ambiente, hay
otros como la contaminacin ambiental por heces humanas, el uso del contenido de las
letrinas para irrigar los jardines familiares, la falta de agua limpia, el piso de tierra de las
viviendas, el hacinamiento, la falta de calzado y el analfabetismo que son resultado patente de
las actividades humanas, adems de los riesgos producidos por la combinacin de ambos
factores. Las uncinarias son un ejemplo de tal combinacin.
En ltimo trmino, todos estos riesgos influirn en la salud de la poblacin, su desempeo en
sus actividades diarias, y sus perspectivas de gozar de una mejor calidad de vida en las
comunidades rurales y las zonas urbanas econmicamente oprimidas en toda Amrica.
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2.1. Infecciones Parasitarias Intestinales:
Los protozoos y helmintos pueden colonizar o infectar los tractos gastrointestinal y urogenital de los
humanos. Los ms comunes de estos parsitos son las amebas, los flagelados y los nematodos, sin
embargo tambin es posible encontrar infecciones por trematodos, cestodos, ciliados, coccidios y
Microsporidium.
En las infecciones intestinales y urogenitales resultan muchas veces inadecuadas las preparaciones
directas de heces con solucin salina y lugol, con frecuencia son necesarias muestras repetidas para
optimizar la deteccin de organismos presentes de forma intermitente o en nmeros variables, quiz se
requieran tcnicas de concentracin de las muestras mediante sedimento y flotacin para detectar las
cantidades pequeas de huevos (helmintos) o quistes (protozoos) presentes en las muestras de heces.
En ocasiones, se deben examinar muestras distintas a las de heces, la deteccin optima de ciertos
patgenos del intestino delgado, como Giardia lamblia o Strongyloides stercoralis, pueden requerir
aspiracin del contenido intestinal o incluso biopsia intestinal.
La toma de muestra en la piel perianal tiene utilidad para recuperar huevos de Enterobius vermicularis
(oxiuros) o Taenia sp.
3. MTODOS DE LABORATORIO USADOS PARA L DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES

PARASITARIAS.
A. Mtodo Directo: Identificar parsitos o sus productos de reproduccin, ejemplos
Examen Macroscpico.
Examen Microscpico; Examen directo: solucin salina y lugol
Tincin permanente
Concentracin de heces
B. Mtodo Indirecto: Obtener con pruebas serologas y de otro tipo resultados que, unido a la
clnica y a otras consideraciones, dan un diagnostico probable, ejemplos:
Serologia: Respuesta de anticuerpos, deteccin de antigenos
Sondas De cidos Nucleicos: Deteccin, Identificacin.
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Regla De Oro En Parasitologa: Recobrar, identificar y demostrar el parsito, para poder

determinar la etiologa del proceso de infeccin o enfermedad.
3.1. Base indispensable de conocimientos para solicitud de exmenes:
Ciclo de vida de los parsitos
Hbitat del hospededero, usual y ectopica
Manifestaciones clnicas mas especificas o probables
Manera de transmisin.
3.2. Muestras para examen Parasitolgico:

Comprende las siguientes muestras: heces, bilis o jugo duodenal, esputo, secrecin, biopsia o
preparaciones histolgicas, siendo heces, la ms frecuente.
Muestra de Heces
1) Caractersticas de la muestra:
a. Cantidad : 3 - 6 gramos
b. Condiciones ptimas: No estar mezclado con orina, que no exista el antecedente de haber
ingerido bario u otros productos de contraste, y llevar la muestra al laboratorio en corto
tiempo (de 2 - 4 horas de su obtencin.
c. Recipiente o Frasco con boca ancha y con tapa de rosca.
2) Registro de datos:
a.
Se debe consignar la siguiente informacin: Nombre, edad, sexo, ocupacin, sntomas y

signos, fecha de inicio de sntomas y diagnstico presuntivo.
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3) Procesamiento de la muestra:
a. Debe realizarse lo antes posible y en un lugar apropiado que no le llegue la luz directa. Las
muestras diarreicas y las que contienen sangre, deben examinarse en forma macroscpica y
microscpica inmediatamente al llegar al laboratorio.
b. Los reactivos y colorantes empleados en el procesamiento deben estar en envases adecuados,
mantenerse fuera de los rayos del sol o luz, etiquetados (con nombre y fecha de preparacin),
sometidos a un control peridico y con una preparacin proporcional a la demanda.
c. Reporte de resultados Escribir el nombre completo de los parsitos, indicando el estadio
evolutivo y su densidad en la muestra.
3.3. Muestras que se deben enviar en determinadas Infecciones Parasitarias:

Cuadro #. 1
Muestras
Parsitos Encontrados
Orina
Schistosoma
Pneumocystis carinii, Paragonimus.
Cryptosporidium
Esputo
LCR
Aspirados duodenal
Sangre
Acanthamoeba, tripanosomas, Angiostrongylus

cryptosporidium sp
Isospora belli
Giardia lamblia
Strongyloides stercoralis
Plasmodium, Tripanosomas,
Babesia, Filarias.
Leishmania,
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3.4. Recoleccin de la muestra de heces:
a. Las muestras de heces se recolectarn en un bote limpio, impermeable y de boca ancha, con
tapadera de cierre hermtico para asegurar y mantener una humedad adecuada.
b. Las muestras no deben ser contaminadas con agua, tierra u orina; el agua y la tierra contienen
a veces organismos de vida libre que pueden ser confundidos con parsitos humanos y la orina
puede destruir trofozoitos mviles y provocar eclosin de los huevos de helmintos.
c. Las muestras de heces no deben contener bario, bismuto ni medicamento a base de aceite
mineral, antibiticos, antipaldicos u otras sustancias qumicas que pudieran comprometer la
deteccin de parsitos intestinales.
d. La recoleccin de la muestra se debe de retrasar de 5 a 10 das para permitir la eliminacin de
bario, y durante por lo menos dos semanas para dar tiempo a que los parsitos intestinales se
recuperen de los efectos txicos de antibiticos como la tetraciclina.
e. Las heces formadas sin conservantes deben llegar al Laboratorio antes de dos horas de su
emisin. Si las heces son liquidas, es probable que contengan trofozoitos, el retrazo hasta la
recepcin al Laboratorio debe ser inferior a 30 minutos. Las heces blandas o sueltas se deben
examinar antes de una hora.
3.5. Organizacin en el Laboratorio de Parasitologa:
a. Ordenar las muestras de heces de acuerdo a su consistencia; en primer lugar se colocan las
heces lquidas, diarreicas con moco y sangre; en segundo lugar las heces blandas; por ltimo
las heces formadas y duras.
b. Verificar que las muestras de heces correspondan con la boleta de identificacin con los datos
del paciente.
c. Enumerar el frasco y la boleta, con el cuidado de no hacerlo en la tapa.
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d. Realizar el examen macroscpico y anotar la consistencia de la muestra, el color, la presencia

de moco y/o sangre. Si hay Helmintos o porciones de ellos deben ser reportados.
e. Realizar el examen microscpico. Las muestras anormales se examinan primero pues pueden
contener elementos que sufran cambio y se vuelvan difciles de reconocer, como trofozotos de
protozoos y leucocitos.
f.
Reportar los hallazgos en la muestra del paciente con rapidez y pertinencia.
g. Descartar el material utilizado (portaobjetos y cubreobjetos separadamente) para el examen en

una solucin desinfectante con agua y cloro al 0.5%, y en el basurero las muestras de heces
previamente descontaminadas con cloro; limpiar el rea de trabajo.
4. PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNSTICO PARASITOLGICO.
4.1. Examen Directo Macroscpico

Fundamento: Permite observar directamente las caractersticas morfolgicas de los parsitos adultos,
enteros o fraccionados, as como los cambios en las caractersticas organolpticas de las heces
eliminadas, (Color, presencia de sangre y/o moco, consistencia, etc.
Materiales.
- Suero fisiolgico o solucin salina.
- Aplicador de madera sin algodn.
- Pinza de metal.
- Coladera de plstico o malla metlica.
Procedimiento.
- Agregar Solucin Salina en cantidad suficiente para homogeneizar la muestra.
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- En caso de presencia de parsitos adultos, tamizar o colar la muestra.
Observacin.
Observar las caractersticas organolpticas de las heces, tiles para la ayuda diagnstica
(consistencia, color, presencia de moco, sangre, alimento sin digerir), as como la presencia de
gusanos cilndricos, anillados o aplanados (enteros o parte de ellos)
Resultado.
En caso que la muestra no sea normal, es decir, contenga informacin til para el diagnstico (ejemplo:
presencia de glbulos rojos, fibras musculares no digeridas, mucus, etc.), se debe adicionar al informe
del examen parasitolgico las caractersticas macroscpicas de las heces.
4.2. Examen Directo Microscpico

Fundamento: Buscar, principalmente en muestras frescas, la presencia de formas evolutivas mviles
de parsitos de tamao microscpico (trofozotos, quistes de protozoos: Entamoeba histolytica, Giardia
lamblia, Balantidium coli, etc.; as como larvas o huevos de helmintos: Strongyloides stercoralis,
Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Trichostrongylus sp. , Paragonimus, Fasciola, etc.
Materiales
- Lminas portaobjetos.
- Laminillas cubreobjetos.
- Aplicador de madera sin algodn.
- Marcador para vidrio.
- Solucin Salina
- Solucin de lugol o MIF.
- Aceite de inmersin.
- Papel lente.
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Equipo:
a. Microscopio ptico con objetivos 10x, 40x, 100x.
Procedimiento.
a. Colocar en un extremo de la lmina portaobjeto una gota de Solucin Salina (suero fisiolgico) y
con ayuda de un aplicador, agregar 1 a 2 mg de materia fecal, emulsionarla y cubrirla con una
laminilla cubreobjeto.
b. Colocar en el otro extremo de la lmina portaobjeto una gota de lugol o MIF y proceder a la
aplicacin de la muestra fecal, como en el prrafo anterior.
c. Con la Solucin Salina, los trofozotos y quistes de los protozoarios se observan en forma natural, y
con lugol, las estructuras internas, ncleos y vacuolas.
d. Observar al microscopio con Objetivos de 10x, 40x y 100x. El conteo de huevos de Helmintos se
hace con el objetivo de 10x, y para reportar las estructuras de los protozoos, usar el objetivo de
100x.
e. Recorrer la lmina porta objeto siguiendo un sentido direccional, ejemplo: de derecha a izquierda, o
de arriba a abajo.
Resultado
En un formato de reporte y en el cuaderno de registro diario, se anotar el nombre de la especie del
parsito y su estado evolutivo, indicando la densidad (nmero de formas parasitarias por campo
microscpico) expresado en cruces.
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5. MTODOS DE CONCENTRACIN
Los trofozotos, quistes, ooquistes, larvas y huevos, pueden concentrarse por diversos procedimientos,
lo cual permite corroborar el hallazgo del mtodo directo y conocer la intensidad del enteroparasitismo.
Estos procedimientos de concentracin pueden ser: flotacin, sedimentacin, o por combinacin
ambos mtodos. La eleccin de cada procedimiento depender de las facilidades del Laboratorio, el
adiestramiento del personal, la procedencia de la muestra (zona geogrfica), el conocimiento de la
prevalencia de los parsitos, y la especie del parsito que se desea investigar.
5.1. Mtodos de Sedimentacin En Tubo.

1- Tcnica De La Sedimentacin Espontnea En Tubo (Tcnica de concentracin por sedimentacin,
sin centrifugacin):
a. Fundamento.
Se basa en la gravidez que presentan todas las formas parasitarias para sedimentar
espontneamente en un medio menos denso y adecuado como la solucin fisiolgica. En este
mtodo es posible la deteccin de quistes, trofozoitos de protozoarios, huevos y larvas de
helmintos.
b. Materiales.
Tubos de vidrio o plstico de 13x100mm, 16x150mm, o tubos de 50 mL de capacidad que
Terminen en forma cnica.
Lminas portaobjetos.
Laminillas de celofn recortadas adecuadamente (22 x 22 mm 22 x 30 mm.).
Solucin fisiolgica.
Pipetas de vidrio o plstico.
Agua destilada, hervida o de lluvia.
Gasa recortada en piezas de 9 x 9 cm.
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c. Procedimiento.
Tomar una porcin de heces (1 - 2 g) y homogeneizar con Solucin Salina en un tubo limpio o en el
mismo recipiente en que se encuentra la muestra.
Colocar una gasa, hundindola en la abertura del tubo y sujetndola con una liga alrededor de ella.
Filtrar el homogeneizado a travs de la gasa, llenando el tubo hasta la cuarta parte de su

contenido.
Agregar Solucin Salina hasta 1 cm por debajo del borde del tubo.
Cubrir la abertura del tubo con una tapa, parafilm o celofn.
Agitar enrgicamente el tubo por 15 segundos aproximadamente.
Dejar en reposo de 30 a 45 minutos. En caso que el sobrenadante est muy turbio, eliminarlo y
repetir la misma operacin con solucin salina o agua destilada.
Aspirar la parte media del tubo con una pipeta y colocar 1 2 gotas en una lmina portaobjeto.
Aspirar el fondo del sedimento con una pipeta y depositar 1 2 gotas del aspirado en los extremos
de la otra lmina portaobjeto.
Agregar 1 2 gotas de solucin lugol a una de las preparaciones.
Cubrir ambas preparaciones con un cubre objeto y observar al microscopio
d. Observacin.
Examinar primero la preparacin con solucin salina para observar formas mviles y de menor
peso especfico (trofozoitos, quistes y larvas) y luego la preparacin con lugol para observar sus
estructuras internas, de estos y de otros parsitos de mayor peso especfico (huevos, larvas.
e. Resultado.
Informar la presencia de las formas evolutivas de los parsitos.
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5.2. Mtodo de Sedimentacin Rpida (Concentracin por sedimentacin sin centrifugacin)
a. Fundamento.
Se basa en la gravidez de los huevos que, por su tamao y peso sedimentan rpidamente
cuando se suspenden en agua.
b. Materiales
Copa o vaso de vidrio o plstico, cnico de 150 a 200 ml
Coladera de malla metlica o plstico.
Placas Petri o lunas de reloj.
Aplicador de madera sin algodn.
Pipeta Pasteur.
Gasa.
Agua destilada.
Microscopio.
Guantes
c. Procedimiento:
Homogenizar 3 a 6 g de heces con unos 10 a 20 mL de agua destilada
Colocar la coladera y dos capas de gasa en la abertura del vaso y a travs de ella, filtrar la
muestra.
Retirar la coladera y llenar la copa con agua destilada hasta 1 cm. debajo del borde, esto es 15 a
20 veces el volumen de la muestra.
Dejar sedimentar la muestra durante 30 minutos.
Decantar las 2/3 partes del contenido del vaso y agregar nuevamente agua.
Repetir los pasos anteriores cada 5 a 10 minutos por 3 a 4 veces, hasta que el sobrenadante
quede limpio.
Transferir el sedimento a una placa petri, por incorporacin o con ayuda de una pipeta Pasteur.
Observar al estereoscopio o microscopio, a menor aumento.
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d. Observacin
Observar la presencia de huevos. Este mtodo es especialmente til para la bsqueda de Fasciola
hepatica, Paragonimus sp. y nematodos como Ascaris lumbricoides (huevo fecundado o no
fecundado), Trichuris trichiura, Hymenolepis nana, Diphyllobothrium sp. etc.
e. Resultado.
Informar de la presencia de huevos o larvas de parsitos.
Preparacin De Reactivos:
Solucin Salina Fisiolgica

1.
Cloruro de sodio
8.5 gr
2.
Agua destilada
1000 ml
Mezclar y guardar en frasco rotulado y tapado. Para usar dispensar en frascos goteros rotulados.
Solucin De Lugol. Solucin Madre

1.
Yodo en cristales
2.5 gr
2.
Ioduro de potasio
5.0 gr
3.
Agua destilada
50 ml
Mezclar en un matraz hasta disolucin completa de los cristales. Guardar en frasco oscuro rotulado
solucin madre (Stock) de lugol.
Para utilizar diluir 0.5 ml de esta solucin Stock en 5.0 ml de agua destilada y mantener en frasco
gotero color mbar rotulado.
Procedimiento:
Coloque una gota de solucin salina en el extremo izquierdo del portaobjetos y una gota de un
colorante temporal como lugol o MIF en el extremo derecho.
Con un aplicador, tome una pequea porcin de la muestra de heces y haga una suspensin en
solucin salina y la otra en lugol o MIF.
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En solucin salina la preparacin no debe ser ni muy gruesa ni muy fina. Se calcula como ideal 2
mg de heces y para lograr un buen estimado de esta cantidad se coloca la lmina sobre un papel
impreso y las letras deben verse pero no claramente a travs de la lmina ya preparada.
La suspensin fecal para MIF o lugol debe hacerse homognea y ms delgada que la anterior por
lo que debe emplear una gota ms pequea.
Coloque los cubreobjetos y observe al microscopio
Observe en primer lugar la preparacin en solucin salina con el objetivo de 10x. Se estudia
sistemticamente, sin dejar un solo campo microscpico sin observar.
Seguidamente observe la preparacin con coloracin temporal. Enfoque en 10x y pase al objetivo
de 40x para la observacin sistemtica y localice posibles protozoos. Cuando se ha localizado
algn protozoo se coloca una gota muy pequea de aceite de inmersin y se cambia al objetivo de
100x, una vez enfocado se procede a identificarlo.
Descartar las preparaciones (portaobjetos y cubreobjetos separadamente) en una solucin

desinfectante con cloro al 0.5%
Resultados
En las preparaciones con Solucin Salina, Los trofozoitos Mviles y los quistes de Amebas,
Flagelados y Ciliados, se observan en su color Natural.
En la Preparacin tratada con Lugol o MIF, La sustancia cromatnica se destaca sobre el

citoplasma pardo amarillento, y es posible distinguir la estructura nuclear, y tie de un color
caoba, ms o menos oscuro, las masas de glucogeno que se encuentran dentro de los quistes.
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5.3. Mtodo de Flotacin por Sweater
Fundamento:
Se basa en la flotacin de quistes, ooquistes y huevos de parsitos en una solucin de azcar que posee
mayor densidad que ellos. Esta tcnica es til para la concentracin de quistes y ooquistes de protozoos y
huevos de helmintos y se usa como mtodo preferencial en el diagnstico de los coccidios:
Cryptosporidium, Cyclospora, Isospora, etc.
El hallazgo de Isospora belli requiere informe inmediato al mdico.
Materiales Y Reactivos:
Solucin concentrada fenolada de azcar
Vasitos de vidrio para preparar suspensin
Portaobjetos ( 3x1 pulgada o 3x2 pulgadas)
Cubreobjetos (22 x 22 mm)
Marcador
Aplicadores de madera sin algodn
Frasco con desinfectante
Guantes
Solucin concentrada fenolada de azcar

1) Azcar en cristales
500g
2) Agua destilada
320ml
3) Fenol en cristales
6.5g
Disolver el azcar en el agua destilada, usando calor sin dejar llegar a ebullicin, dejar enfriar. Filtrar
por gasa, agregar el fenol y agitar hasta disolucin, guardar en frasco tapado y rotulado.
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Tcnica:
Identificar los portaobjetos con la muestra a examinar
Agregar la solucin concentrada hasta la mitad del vasito de vidrio
Hacer una suspensin de una pequea porcin de heces(1gr) con la ayuda de un aplicador
Llenar el vasito con la solucin azucarada hasta el borde
Colocar un portaobjeto o cubreobjeto previamente rotulado sobre el vasito de vidrio y dejar reposar por
30 minutos.
Remover el portaobjeto o cubreobjeto cuidadosamente y cubrir con el cubreobjeto o portaobjeto
Examinar la muestra en objetivo de 10x
5.4 Mtodo de Kato Katz :

Frotis fecal grueso en celofn
Fundamento:
Este mtodo es til para estimar la intensidad de la infeccin. Se utiliza para la elaboracin de encuestas
de helmintos intestinales
Presenta algunas ventajas como el no diluir las heces, utiliza materiales accesibles, una vez preparado
puede transportarse en el campo y puede guardarse por varios meses
Aplicadores de madera.
Rejilla de acero inoxidable, nylon o plstico.
Plantilla de acero inoxidable, plstico o cartn. La plantilla de 1 mm de espesor con un agujero de 9

mm suministra 50 mg de heces, la de 1.5 mm de espesor con un agujero de 7 mm, 41.7 mg de
heces y la de 0.5 mm de espesor con un agujero de 6.5 mm, 20 mg de heces. Las plantillas deben
estar estandarizadas en el pas. Siempre se debe utilizar el mismo tamao a fin de que los datos
de prevalencia e intensidad sean comparables y reproducibles.
Esptula de plstico.
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Portaobjeto (75x 25 mm)
Tiras de celofn hidrfilo de 25x30, o 25x35 y 50-50 de espesor
Tarro de fondo plano con tapa
Pinzas
Papel higinico o absorbente
Papel de peridico
Solucin de glicerina-verde de malaquita o de glicerina-azul de metileno
Guantes
Tcnica:
Deposite una pequea cantidad de heces sobre un papel de peridico u otro papel ordinario y
colquese encima la rejilla, haciendo presin para que parte de las heces pase a travs y aparezca
en la parte superior (fig. 3)
Rspese la superficie de la rejilla con una esptula plana para recoger las heces que han pasado a
travs de aquella. (fig. 4)
Colquese la plantilla agujereada en el centro de un portaobjeto y depostese el material fecal de la

esptula en el agujero hasta llenarlo por completo (fig. 5) Elimnese el material que sobresalga
pasando sobre el agujero el borde de la esptula (tanto sta como la rejilla, pueden desecharse
luego o si se lavan cuidadosamente, volver a utilizarse)
Retrese con cuidado la plantilla, de manera que el material fecal quede sobre el portaobjeto
formando un pequeo cilindro.
Cbrase el material fecal con una tira de celofn humedecida con glicerina (fig. 6). El celofn debe
estar muy hmedo si las heces son secas y no tanto si las heces son blandas (si hay un exceso de
solucin de glicerina en la cara superior de la tira, emppese con papel higinico). En los climas
secos el exceso de glicerina retrasa pero no impide la desecacin.
Invirtase el portaobjetos y comprmase bien la muestra fecal contra la tira de celofn hidrfilo
sobre otro portaobjeto o alguna otra superficie lisa (por ejemplo un azulejo o piedra plana). El
material fecal deber quedar uniformemente extendido entre el portaobjeto y la tira de celofn (fig.
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Primera Edicin
7). Una vez aclarado, los caracteres de imprenta de peridico deben ser visibles a travs del frotis.
(Fig. 8).
Retrese el portaobjeto, deslizndolo con suavidad hacia un lado para que no se desprenda el
celofn, o levantndolo cuidadosamente. Colquese el portaobjeto sobre la mesa con el celofn
hacia arriba. El agua se evapora mientras la glicerina aclara las heces.
Salvo si se trata de huevos de Ancylostoma, djese el portaobjeto durante 30 0 60 minutos a

temperatura ambiente para aclarar el material fecal antes de examinarlo al microscopio. Para
acelerar la aclaracin y el examen, djese la muestra al sol o en una estufa a 40 C durante
algunos minutos.
Los huevos de Ascaris y Trichuris permanecen visibles y reconocibles durante muchos meses en
las preparaciones de este tipo. Los huevos de anquilostoma se aclaran rpidamente y dejan de ser
visibles al cabo de 30 a 60 minutos. Los de Schistosoma pueden ser reconocibles durante varios
meses, pero en las zonas endmicas es preferible examinar las preparaciones en las primeras 24
horas.
Hay que examinar sistemticamente el frotis y notificar los recuentos de huevos de cada especie. A
continuacin multiplquese por el nmero apropiado para obtener la cifra de huevos presentes por
gramo de heces (20 si la plantilla es de 50 mg; 50 si es de 20 mg; y 24 si es de 41.7 mg). Cuando
el recuento de huevos es de cifras ms altas, aplquese una metodologa rigurosa reduciendo el
tiempo de lectura y utilizando de preferencia la tcnica de dilucin cuantitativa de Stoll con 0.1
mol/litro de NaOH.
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Figura # 1
TCNICA DE KATO-KATZ
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5.4.1. Estimado de la Intensidad de Infeccin; Cuenta de Huevos de Nemtodos Transmitidos por
el Suelo:
Propsito:
Estimar la intensidad de una infeccin intestinal por Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, uncinarias del
humano en forma prctica, en una cantidad conocida de heces.
Evaluar la efectividad de tratamiento teraputico. Se asume que la produccin de huevos estar en relacin
directa con el nmero de hembras fecundas que deponen huevos.
Una variable importante para determinar el propsito para determinar esta intensidad puede ser: clnica,
para encuestas, evaluacin teraputica, etc.
Mtodos:
Los ms utilizados son:
Mtodo directo, en frotis (2mg) de heces
Mtodo de concentracin por Kato- Katz en 41.7 mg de heces
Cuenta directa de gusanos adultos expulsados despus del tratamiento
Mtodo de dilucin de Stoll, en 1 gr.. de heces.
5.4.2. Interpretacin de los datos del recuento de Huevos de Geohelmintos:

Estimados de intensidad de infecciones son muy variables y dependern de la edad, estado nutricional y
dieta del individuo parasitado, duracin de la infeccin, nmero de gusanos, especie de uncinaria,
presencia de otros parsitos, fibra, grasa, moco, eficiencia tcnica del examinador.
Para fines clnicos; cualquier tipo de infeccin por Ascaris debe tratarse; infecciones por Trichuris y Necator
con cuentas de 5 huevos/2 mg de heces o menos no tienen importancia clnica (leves); una cuenta de 5
huevos/2mg de heces para Ancylostoma ya podra ser importante clnicamente; cuentas de mas de 25
huevos/2 mg de heces o 2500 huevos/gr para Necator y 40 huevos/2mg o 20,000 huevos/gr para Trichuris
(severas) producen sntomas clnicos importantes. La tendencia actual es tratar todas las infecciones.
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5.4.3. Interpretacin del Recuento de Huevos de Geohelmintos segn Mtodos de Laboratorio.
Umbrales de intensidad para la clasificacin de la infeccin de nemtodos transmitidos por el suelo (NTS) o
geohelmintos por el mtodo de kato-Katz huevos por gramo de heces.
Cuadro #. 2
Especie
Infeccin Leve
Infeccin Moderada
Infeccin Severa
A. lumbricoides
1-4,999 hpg
5,000-49,999 hpg
>50,000 hpg
T. trichiura
1-999
hpg
1,000-9,999
hpg
>10,000 hpg
Uncinarias*
1-1,999 hpg
2,000-3,999
hpg
>4,000
hpg
*Depende de la especie de Uncinaria del humano

hpg= Huevos por gramo de heces
5.5. Metodo de Graham ; (Mtodo de la Cinta Transparente Adhesiva)

Fundamento:
Recobrar los huevos de Taenia sp. O de Enterobius vermicularis de la regin anal y perianal de individuos
infectados.
Preparacin Del Paciente:
La muestra debe tomarse antes que el paciente se lave, bae o defeque, durante la noche o
inmediatamente al levantarse por la maana.
En ocasiones se pueden ver los gusanos adultos al separar los glteos o sobre las heces al defecar. Si
esto sucede, debern llevarse al laboratorio para la confirmacin morfolgica.
Materiales:
Portaobjeto de 7.5x2.5 cm
Bajalenguas o palillas de madera
Cinta transparente adhesiva de 2 cm de ancho
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Xilol
Etiquetas
Pipetas Pasteur y bulbo o perilla de goma
Tcnica:
Colocar una tira de cinta adhesiva sobre un portaobjeto limpio y seco, dejando un extremo doblado
por debajo de la lamina y en el otro pegar una etiqueta y escribir la identificacin del paciente
Al momento de tomar la muestra, pegar la cinta suavemente al portaobjeto, tomndola por la parte
etiquetada
Colocar el portaobjeto sobre un baja lenguas o palilla de madera y doblar la cinta sobre un extremo
de este, con la parte adhesiva hacia fuera
Con el paciente en decbito, apartar los glteos con una mano y apretar la cinta adhesiva
firmemente a un lado y otro de los pliegues perianales.
Volver a colocar la cinta sobre el portaobjetos y descartar el baja lenguas
Para examinar, desprender la cinta hasta la parte expuesta, agregar 1-2 gotas de Xilol a la lamina y
apretar de nuevo la cinta en su lugar.
Examinar inmediatamente al microscopio
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5.6. Metodo de Flotacin con Sulfato de Zinc
Fundamento:
Concentrar huevos de ciertos helmintos y quistes de protozoos cuando las infecciones son muy leves y no
se detectan en preparaciones directas
Solucin de sulfato de zinc
Gasa
Embudos de 5 cm
Aplicadores
Tubos de ensayo con tapn de rosca, o vasos plsticos pequeos para hacer una suspensin de
heces
Portaobjeto, 7.5x2.5 cm
Cubreobjetos 22x22 mm
Solucin de lugol
Asa bacteriolgica de 5-7 mm de dimetro
Gradilla para tubos
Solucin salina fisiolgica
Preparacin Del Reactivo
Solucin de sulfato de zinc

Disolver 330g de cristales de sulfato de zinc en 670 ml de agua destilada
Tcnica
Identificar la muestra con el vaso y el tubo de ensayo a trabajar
Con un aplicador tomar 1-1.5gr de heces y hacer una suspensin en unos pocos ml de solucin
salina en un vaso o tubo
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Primera Edicin
Filtrar a travs de gasa humedecida a un tubo de ensayo
Centrfugar a 1500-2000 rpm por 2 minutos
Decantar el sobrenadante
Agregar 2-3 ml de solucin de sulfato de zinc y agitar con un aplicador hasta suspender totalmente
el sedimento. Agregar ms solucin de sulfato de zinc hasta 1 cm abajo del borde del tubo de
ensayo, sin dejar de agitar.
Centrfugar a 2000 rpm, por 2 minutos. Los tubos deben tener posicin vertical en la centrfuga
Con mucho cuidado sacar el tubo de la centrfuga, remover varias asadas de la pelcula superficial
y colocarlas sobre un portaobjetos. Esterilizar el asa por flameo.
Cubrir con un cubreobjeto, examinar sistemticamente la preparacin, para colorear los quistes,
remover con cuidado el cubreobjeto y agregar una gota de lugol.
Para identificar los quistes se procede a examinarlos con el objetivo de 100x, para lo cual debe
colocarse una gota de aceite de inmersin
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Figura #2.
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5.7. Metodo de Formol-Eter
Fundamento:
Concentrar huevos y larvas de helmintos, ooquistes y quistes de protozoos en las heces. Se recurre a este
mtodo cuando en el examen directo no se observan parsitos.
Vasitos de plstico o cartn
Tubos cnicos 13x100 mm
Aplicadores de madera sin algodn.
Embudos de 5 cm
Gasa
Parafilm o tapones de hule
Solucin de formalina al 10%
Eter o acetato de etilo
Portaobjetos 7.5x2.5 cm
Cubreobjetos
Gradilla para tubos
Pipeta graduada de 5 ml
Solucin de lugol
Guantes
Formalina al 10%:
Formaldehdo
10 ml
Solucin salina 0.85%
90 ml
Mezclar y guardar en frasco tapado

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Tcnica:
Rotular frascos, tubos y laminas con la muestra a examinar
Transferir 1-2 gr de heces a un vaso de plstico o cartn y agregar 10 ml de formalina.
Suspender completamente las heces con ayuda de aplicadores y dejar fijar por 30 minutos
Filtrar con gasa a un tubo cnico
Centrfugar a 1500 rpm por 2 minutos
Agregar mas formalina al sedimento agitando este con un aplicador, hasta la mitad del tubo
Agregar 2-3 ml de ter
Tapar el tubo y agitar vigorosamente por 15 segundos
Centrfugar a 1500 rpm por 2 minutos
Destapar con cuidado y con un aplicador desprender el tapn de detritus de las paredes del tubo y
decantar el sobrenadante de un solo movimiento
Transferir el sedimento a un portaobjetos, cubrir con un cubreobjetos y examinar toda la

preparacin con objetivo de 10x, 40x y 100x.
Para colorear quistes, agregar una gota de lugol
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Figura #. 3
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5.8. Metodo de Harada Mori
Fundamento:
Estudiar la distribucin regional o geogrfica de las uncinarias en humanos, Necator americanus y
Ancylostoma duodenale; Para la diferenciacin entre larvas de uncinaria y de los huevos parecidos a los de
uncinarias; en la diferenciacin entre larvas de uncinaria y otras larvas, para determinar la viabilidad de los
huevos y/o larvas en estudios sobre efectividad antihelmntica, para cultivar estadios de vida libre de
Strongyloides, para embrionar huevos de trematodos y de cestodos.
Materiales:
Tubos de ensayo de preferencia cnico, de 15 ml de capacidad, en su defecto, tubos de ensayo de

25 x 75 mm
Tiras de papel filtro cortadas 2 mm menos anchas que el dimetro del tubo y 2 cm mas largas, con
un extremo mas afinado.
Agua destilada, en una pizeta
Baja lenguas, palos de paleta o aplicadores de madera
Gradilla o soporte para tubos
Guantes
Lente de aumento o lupa de mano
Pipetas Pasteur
Perilla para pipetas
Lpiz de grafito
Cajas de petri de 5 cm de dimetro
Portaobjetos de 7.5x2.5 cm
Cubreobjetos 22x22 mm
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5.8.1. Tcnica En Tubo De Ensayo
Con un lpiz grafito, escribir la identificacin de la muestra en el extremo mas delgado de la tira de
papel filtro
Con un aplicador tomar y extender 0.5-1 gr de heces sobre el tercio medio de la tira
Insertar esta tira en el tubo de ensayo. Quedara una porcin extendida fuera del tubo por la que
pasaran elementos solubles de las heces
Con cuidado agregar agua destilada hasta que el nivel llegue por debajo del extendido de heces.
No mojar las heces
Colocar los tubos en una gradilla y mantenerlos a temperatura ambiente
Revisar diariamente el nivel del agua. Reemplazar el agua perdida por evaporacin
Tomar una porcin del sedimento con una pipeta Pasteur, colocarlo en una caja petri y observar al
microscopio o estereoscopio
Para estudiar la morfologa diferencial, aspirar larvas con la pipeta y colocarlas entre porta y cubre,
calentar suavemente o agregar solucin de lugol para inmovilizarlas; observar al microscopio
ptico.
5.8.2. Variacin en Caja de Petri:
Extender las heces sobre la tira de papel, la que se coloca sobre el portaobjeto o soporte
Colocar esta preparacin en la caja de Petri soportada en un extremo por aplicadores o por una
varilla de vidrio para lograr una inclinacin
Agregar agua destilada a la caja de Petri asegurando que el agua ascienda por capilaridad en la
tira de papel con heces
Tapar y dejar a temperatura ambiente por 2-3 das. Asegurar que la preparacin no se seque
Colocar la preparacin en el microscopio o estereoscopio y buscar larvas en el agua
Si no se observan, con una pipeta Pasteur obtener una porcin del agua de la caja y colocarla
entre porta y cubre y observar en el microscopio ptico, o bien, verter el lquido en un tubo de
ensayo, Centrfugar y recobrar las larvas del sedimento. Identificarlas segn caractersticas
morfolgicas especificas
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Primera Edicin
Figura #.4
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5.9. Metodo de Baermann :
Fundamento:
Este es un mtodo para la concentracin de larvas rabditoides y filariformes.
Es un mtodo muy conveniente para hacer una buena concentracin de larvas; se utiliza en Microbiologa
agrcola para obtener larvas de nemtodos de plantas y de vida libre; en parasitologa mdica se utiliza
para concentrar larvas de Strongyloides y Uncinarias, as como tambin las larvas de Trichinella spiralis,
despus de la digestin de msculo infectado.
Agua de la llave
Lugol
Vaso de precipitados de 100 ml
Tubos de centrifuga de 13x100 mm
Portaobjeto de 25x75 mm
Cubreobjeto de 22x40 mm
Embudo de vidrio o polietileno de 7.5 cm de dimetro
Termmetro graduado de 0 C a 100 C
Microscopio ptico
Centrifugas
Mechero
Pinzas de mohr
Gasa cortada en cuadros de 12 cm de lado
Baja lenguas
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Primera Edicin
Tcnica:
Se arma el dispositivo
Se llena el embudo con agua, que previamente se calent a 50 C de tal manera que la malla y la gasa
Se mojen.
Se coloca la materia fecal sobre la malla y la gasa.
Se deja reposar durante 2 horas para que las larvas pasen al agua del embudo.
Pasadas las dos horas, se abre la pinza, dejando salir el agua y se recibe en el vaso de precipitados.
Con una pipeta Pasteur, se toma una gota del agua y se coloca entre porta y cubre y se examina con
El microscopio.
Si la muestra esta positiva, el agua que se encuentra en el vaso de precipitados se centrifuga durante 5
minutos a 1500 rpm y se toman los sedimentos y se buscan las larvas. De encontrarse son muy mviles,
por lo que se recomienda agregar una gota de lugol para facilitar la observacin.
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Primera Edicin
Figura #.5
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5.10. Digestin Artificial de Larvas
Fundamento:
Recobrar larvas y adultos de helmintos o quistes tisulares de protozoos de tejidos humanos o animales, por
un proceso que utiliza un lquido parecido al jugo gstrico, el cual digiere los tejidos y deja libres los
parsitos
Materiales:
Pinzas
Bistur
Cajas de Petri
Liquido de digestin artificial
Gasa
Balanza
Frascos de boca ancha
Incubadora 37C
Agua destilada
Pipetas Pasteur con perilla de hule
Vasos de sedimentacin
Varilla de vidrio
Frascos con desinfectante
Liquido De Digestin Artificial

-
Pepsina en polvo 5 grs.
cido clorhdrico (HCl) puro. . 7 ml
Agua destilada. 1000 ml
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Primera Edicin
Mezclar primero el HCl con el agua destilada; Agregar la pepsina y mezclar hasta disolucin completa.
Utilizar inmediatamente; si se guarda en refrigeracin, puede durar unos pocos das solamente
Tcnica
Pesar el tejido en cuestin para determinar la cantidad de liquido digestin necesario
Desmenuzar el tejido o cortarlo en pedazos con bistur (bien puede licuarse)
Agregar el lquido de digestin artificial, 20-30 ml por gramo de tejido. Licuar
Verter en un frasco de vidrio e incubar a 37 C varias horas o toda la noche, o, a 45 C, 30

minutos, agitando peridicamente con varilla de vidrio
Sacar de la incubadora, diluir con 2 3 volmenes de agua destilada a 37 C y verter en un vaso

de sedimentacin de capacidad adecuada
Esperar que sedimente como mnimo 1 hora
Para examinar el sedimento, obtener una muestra del fondo del vaso con una pipeta Pasteur y
colocar este en una caja petri, esperar 1 minuto
Examinar con el microscopio o estereoscopio. Para identificar larvas a nivel de especie, tomar
algunas con una pipeta, colocar entre porta y cubreobjeto y examinar al microscopio ptico,
reconociendo morfologa caracterstica
Si se desea recobrar todas las larvas, centrifugar todo el sedimento y recobrarlas de fondo del
centrifugado
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Primera Edicin
5.11. Mtodo de Concentracin y Coloracin segn Weber
Fundamento:
Proveer una mejor sensibilidad en la deteccin de ooquistes de Cryptosporidium sp en toda muestra de
heces. Esta nueva tcnica descarta grasas de las heces, separa ooquistes del resto de las heces,
proporciona un sedimento con ooquistes concentrados, con el cual se preparan lminas para colorear
Materiales:
Formalina al 10%
Acetato de etilo
Aplicadores de madera sin algodn
Pipetas Pasteur con perilla de hule o pipetas plsticas desechables
Tubos cnicos de 15 ml de capacidad
Solucin saturada de Cloruro de Sodio
Porta y cubreobjeto
Agua desionizada
Batera de coloracin cido resistente modificada
Balanza de 2 platos para equilibrar tubos
Frasco con desinfectante para descartar material
Solucin saturada de Cloruro de Sodio (NaCl)
Mezclar suficiente NaCl en agua destilada hasta obtener una solucin saturada. O bien, medir
con un hidrmetro la gravedad especifica de 1:20
Tcnica
Identificar tubos y lminas con la muestra a examinar
Suspender una pequea cantidad de heces en formalina al 10% y emulsionar bien
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Primera Edicin
Mezclar 4 ml de esta suspensin de heces, 6 ml de formalina 10% y 3 ml de acetato de etilo en el

tubo cnico previamente identificado. Equilibrar.
Mezclar vigorosamente por agitacin durante 30 segundos
Centrifugar a 500 rpm por 5 minutos
Decantar las 3 primeras capas formadas
Resuspender el sedimento en 5 ml de agua desionizada
Verter 5 ml de solucin saturada de NaCl en otro tubo cnico
Colocar el sedimento SOBRE la solucin saturada de NaCl por medio de una pipeta. Equilibrar
Centrifugar a 500 rpm durante 10 minutos
Descartar los primeros 3.5 4 ml de la capa lquida superior
El resto del sobrenadante y 0.5 ml de la siguiente capa se sacan con una pipeta y se agregan 13
ml de agua desionizada. Equilibrar.
Centrifugar a igual velocidad por 10 minutos
Hacer preparaciones con el sedimento obtenido para observar al microscopio, luego de cubrir con
el cubreobjeto.
NOTA: Para asegurar la identificacin deber hacerse coloracin cido resistente modificada
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Figura #. 6
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5.12. Examen Cuantitativo de Stoll
Fundamento:
Las bondades del mtodo lo han hecho popular y til en todo tipo de helmintiasis en que se necesita hacer
Una evaluacin de la intensidad. Su fundamento es bsicamente aritmtico, los clculos son muy simples
Tomando en consideracin las dificultades empleadas.
Material:
Hidrxido de sodio qumicamente puro (QP)
Agua destilada
Probeta graduada de 100 ml con tapn esmerilado
Pipeta de 1 2 ml graduadas en centsimas
Portaobjetos de 38x75 mm
Cubreobjetos de 22x40mm
Varillas de vidrio de 20 cm de longitud
Perlas de vidrio de 3mm de dimetro
Microscopio ptico
Solucin 0.1N de Hidrxido de sodio

-
Hidrxido de sodio
Agua destilada
4 gr
1000 ml
En un matraz volumtrico de un litro se coloca el hidrxido de sodio, inmediatamente despus de pesado,

se agregan de 100 a 200 ml de agua y se disuelve perfectamente, s afora el matraz a la marca. Se
guarda la solucin en un frasco con tapn de caucho. NO SE DEBE UTILIZAR FRASCO CON TAPON
ESMERILADO.
Tcnica:
En la probeta se poner 56 ml de la solucin de hidrxido de sodio.
Se aade materia fecal hasta el nivel de 60 ml, ayudndose para esto con la varilla de vidrio.
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Primera Edicin
Se aaden de 15 a 20 perlas de vidrio y se tapa la probeta.
Colocando uno o dos dedos sobre el tapn esmerilado y tomando firmemente la probeta con el resto
De la mano, se agita vigorosamente durante un minuto, hasta formar una suspensin homognea.
En cuanto cesa la agitacin, los restos fecales y huevos comienzan a irse hacia el fondo; se toman
inmediatamente la pipeta Pasteur y se introduce hasta la parte media de la suspensin.
Se toman 75 150 l y se colocan sobre el portaobjeto y se cubre.
Se observa la preparacin con el microscopio con objetivo 10x y 40x.
Se observaran absolutamente todos los campos de la preparacin contando los huevos encontrados.
Para esto se sigue siempre una rutina que pueda ser de arriba hacia abajo o de un lado a otro.
Forma De Reportar:
l numero de huevos o larvas contadas en todos los campos de la preparacin se multiplicaran por los
siguientes factores, segn se haya tomado 75 150 l de la suspensin y tambin tomado en
consideracin la consistencia de la muestra de materia fecal.
Cuadro #. 3
HECES
MUESTRA
FACTOR
Duras
75 l
50
Pastosas
75 l
100
Liquidas
75 l
200
Duras
150 l
100
Pastosas
150 l
200
Liquidas
150 l
400
El resultado se expresa en huevos o larvas por milmetro de heces; por ejemplo, si la materia fecal es
pastosa y se encontraron en todos los campos 4 huevos de uncinarias.
4 x 200 = 800
Se reportar as: 800 huevos de uncinaria por ml de heces.
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Primera Edicin
6. MTODOS DE TINCIN PARA PROTOZOOS
6.1. Tincin permanente de frotis Fecales:
6.2. Tincin Tricrmica:

Permite colorear las estructuras internas de los protozoos para su caracterizacin. Esta tcnica
Utiliza muestras de heces frescas, preservadas con PVA (Polivinil alcohol = alcohol polivinlico.
O fijadas con SAF (Schaudinn) Es un mtodo rpido y de utilidad en el estudio de Entamoeba,
Giardia, Balantidium, Cyclospora y otros protozoarios.
Materiales:
Lminas portaobjetos.
Laminillas cubreobjetos.
Asa de platino.
Estilete curvo o pinza curva.
Agua destilada.
Tintura de Yodo
Cytoseal o blsamo de Canad.
Alcoholes 85%, 90% y 95% y absoluto.
Xilol.
Colorante chromotrope Acido actico.
Solucin Schaudinn
Frascos coplin o placas Petri.
Procedimiento:
Preparar un set de placas Petri 15 x 150 mm con los reactivos correspondientes, sujetar la laminilla
Con el porta-laminillas y con el estilete o pinza curva hacer el frotis fino de la muestra sobre la
laminilla.
Fijar la muestra con solucin Schaudinn por 2 a 5 minutos.
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Primera Edicin
Pasar por alcohol 70% con 2 3 gotas de tintura de yodo.
Pasar por un minuto por alcohol 70%.
Pasar por el colorante chromotrope de 8 a 15 minutos.
Pasar por alcohol 90% con cido actico al 1% de 10 a 15 segundos y ver tono de coloracin.
Pasar por alcohol 95% y alcohol absoluto durante 3 minutos.
Pasar por xilol de 1 a 5 minutos. No debe verse opaco.
Realizar el montaje con resina, blsamo de Canad o Permount.
Observacin.
Observar con objetivo de inmersin 100X. El citoplasma de los parsitos se tien de color verde y
el ncleo de color rosado
6.3. Hematoxilina Ferrica

Uso: Excelente colorante para frotis fecales frescos o conservados con PVA o SAF (Schaudinn)
Preparacin:
Solucin madre A: Disulvase 1gr de cristales de hematoxilina en 100 ml de alcohol al 95%,
djese la solucin expuesta a la luz durante una semana y fltrese.
Solucin madre B: Mzclese 1gr de sulfato ferroso de amonio, 1gr de sulfato frrico de amonio y 1
ml de cido clorhdrico en 97 ml de agua destilada.
Preprese una solucin de trabajo combinando 25 ml de la solucin madre A y 25 ml de la solucin
madre B tres o cuatro horas antes (por lo menos) de la tincin. Preprese solucin de cido pcrico
para decolorar aadiendo 25 ml de cido pcrico acuoso saturado a 25 ml de agua destilada.
Mtodo de tincin:
Sumrjanse los portaobjetos en alcohol al 70% durante cinco minutos
en alcohol al 50% durante dos minutos
en agua del grifo durante cinco minutos
en solucin de trabajo de hematoxilina durante diez minutos
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Primera Edicin
en agua destilada durante un minuto
en solucin de cido pcrico durante 1 minuto
en agua del grifo, dejndola correr, durante diez minutos
en alcohol al 70% con una gota aadida de amonaco durante cinco minutos
en alcohol al 95% durante cinco minutos
Deshidratar por medio de etanol al 100% y xileno o de mezcla carbol-xileno.
Montar con resina y cubrir el frotis con un cubreobjeto.
6.4. Tcnica de Ziehl-Neelsen Modificada (Tincin Acido Resistente)

Uso: Para la deteccin de Cryptosporidium, Cyclospora y otras infecciones por coccidios.
Reactivos:
-
Carbol-fucsina,
formol,
solucin de HCl-etanol,
solucin de glicerina-verde de malaquita (o azul de metileno),
Solucin de HCl-metanol.
Mtodo de tincin:
1. Preprese un frotis fino de heces
2. djese secar al aire y fjese en metanol durante 2-3 minutos
3. Tase de carbol-fucsina fra durante 5-10 minutos
4. Lavar con agua del grifo.
5. Difernciese en HCl-etanol al 1% hasta que ste deje de salir coloreado
6. Lavar con agua del grifo
7. Hgase una tincin de contraste con verde de malaquita al 0.25% (o azul de metileno) durante
30 segundos.
8. Enjuguese con agua del grifo
9. Escrrase o squese con papel absorbente.
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Primera Edicin
7. TENIASIS-CISTICERCOSIS
7.1. Taenia:
Pertecenece al phylum Platyhelminthes, a la clase Cestodo y al orden Taenidae. Taenia solium y Taenia
saginata son dos especies de cestodos o solitaria que en su forma adulta parasitan al humano. Ambas
especies requieren de hospederos intermediarios para poder complementar el ciclo de vida, cerdos para T.
Solium y bovinos para T. Saginata. En estos animales se desarrolla la forma larval, conocida como
cisticerco, luego de la ingestin de huevos de las heces o del pasto. El ciclo se completa en el humano con
la ingestin de cisticercos en la carne cruda o mal cocinada de cerdo o de bovino formndose nuevamente
el adulto que habita el intestino.
Este es un parsito exclusivo del ser humano, mientras que el cisticerco (semilla) se desarrolla en
varios mamferos principalmente en el cerdo y los seres humanos. Cuando un individuo consume
carne de cerdo cruda o semicocida que contiene cisticercos o semilla, este enferma de teniasis.
Caractersticas del Parsito de Tnia solium:
Mide de 2 a 7 metros.
Tiene una cabeza con 4 ventosas y doble corona de ganchos.
Es aplanado dorsoventralmente.
Color blanquecino.
Carece de boca y aparato digestivo.
Es Hermafrodita (tiene genitales masculinos y femeninos)
Esta formado por segmentos llamados proglotides.
Tiene un estado larvario llamado Cisticerco.
El hombre y otros mamferos enferman de Cisticercosis por ingerir huevecillos directa o indirectamente
(por no lavarse las manos, comer verduras o frutas contaminadas con huevos del parsito o por auto
infeccin al ser portador de Taenia solium)
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7.2. Cisticercosis:
Solamente los huevos de T. Solium pueden infectar al humano con formacin de cisticerco en sus tejidos,
lo que se conoce como cisticercosis humana, es decir, el humano en estos casos funciona como un
husped intermediario accidental. Los huevos que infectan al humano proceden de sus propias heces, si la
persona tiene una infeccin por T. solium, o de la ingestin de alimentos contaminados con heces de otras
personas que tienen la infeccin y los manipulan sin lavarse las manos.
La Cisticercosis en el humano se desarrolla principalmente en el sistema nervioso central (enfermedad
conocida como Neurocisticercosis), ojo, msculo esqueltico y tejido subcutneo de los seres
humanos. En el cerdo se infectan todos los tejidos a excepcin del tejido subcutneo.
Los cisticercos localizados en el cerebro humano muestran dos tipos morfolgicos: celulosos y
racemosos, el primero se aloja en el tejido cerebral y el segundo crece libremente en el lquido
cefalorraqudeo de los ventrculos y conductos cerebrales.
El hombre es el nico responsable de la dispersin de los huevos del parsito, siendo la
defecacin al aire libre la primera prctica de riesgo. En segundo lugar una crianza de cerdos que
tolere o promueva el contacto de estos con el excremento humano. La falta de control sanitario de
la carne de cerdo y los hbitos de alimentacin que incluyen el consumo de esta carne poco
cocida o cruda, tambin son prcticas que contribuyen a la infeccin de teniasis por el ser humano.
La falta de higiene personal, especialmente los hbitos relacionados con el inadecuado lavado de
manos antes de comer y despus de ir al bao, el consumo de agua sin hervir, alimentos sin
lavar y la exposicin de los mismos a los agentes que dispersan los huevos son practicas que
permiten la ingestin de estos parsitos al hombre y por consiguiente contraer la Cisticercosis.
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7.3. Medidas de Prevencin y Control:

Dado que la contaminacin fecal del suelo es lo que mantiene la endemia de los parsitos intestinales, el control y la
erradicacin efectiva en una comunidad, dependern en gran medida de la instalacin y el uso universal de
saneamiento en todas las partes de la comunidad.
Es bueno recordar medidas tan simples como ser:
Lavado de manos con abundante agua y jabn antes de comer y despus de defecar.
Lavado de frutas y verduras con agua clorada antes de consumirlas.
Evitar la defecacin al aire libre.
Comer carne de cerdo bien frita o bien cocida (Se previene la infeccin con taenia)
7.4. ELISA para Cisticercosis; identificacin de Anticuerpos
Fundamento:
Permite la deteccin cualitativa o la medicin cuantitativa de antgeno o anticuerpo.
Depende de una enzima conjugada con un anticuerpo.
Reacciona con un sustrato incoloro para generar un producto de color (sustrato cromgeno y
fosfatasa alcalina).
Se usan microplacas de PVC ( polyvinyl chloride) como soportes para la adsorcin de los
diferentes estractos antignicos.
Se utiliza como antigeno, liquido de vescula de Cisticercus cellulosae a una concentracin de
10ug/ml ( microgramos/ mililitros) y se revela con conjugado Peroxidasa-Anti IgG, humana.
Tipo de muestra:
Suero y LCR (liquido cefalorraqudeo)
Materiales y reactivos:
microplacas de fondo plano
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Micropipetas de 50,10 y 200 microlitros
Puntas para micropipetas
Beaker
Pipetas de 1, 5 y 10 ml
Papel toalla
Inmunoglobulina Anti humana IgG marcada con peroxidasa
Buffer fosfatado (BPS) PH 7.4
Solucin de carbonato (Co3Na2/Co3Na) PH 9.5
Polyoxiethylene Sorbitol Mano laurate (Tween 20) 0.05
Orto-phenylendeamina (OPD)
Peroxido de hidrgeno 0.012%
cido Sulfrico 4 N
Albmina Bobina
cido. Ctrico 0.1m
Agua destilada
Lector de ELISA
Guantes
Incubadora
Procedimiento:
1. En un beaker de 50 ml mezclar de 20 a 50 microlitros de antigeno(segn la
concentracin de protenas que contenga el liquido de vescula) y 10 ml de
solucin de carbonato.
2. para sensibilizar la placa, colocar 100 microlitros de la preparacin anterior en una
microplaca, llenando todos los pocitos, incubar por una hora a 37 C.
3. preparar 400ml de PBS con 300l Tween 20, colocarlo en frasco de vidrio de3
500ml.
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4. servir 150l de PBS/tween 20 en cada pocito de la microplaca diferente a la que
se esta sensibilizando, y luego agregar 100l
de muestra (blanco, control
positivo, control negativo, sueros y lquidos cefalorraqudeo)

5. hacer 6 diluciones consecutivas de cada muestra
6. Lavar la placa sensibilizada, 3 veces con PBS cada 5 minutos
7. decantar el liquido y luego sacudir la placa en papel toalla para eliminar los restos
de PBS en cada lavado
8. De la microplaca no sensibilizada tomar sexta, quinta y cuarta dilucin si es suero
y si es LCR tomar tercera, segunda y primera dilucin y pasarlas una por una a la
placa sensibilizada.
9. incubar la microplaca por 30 minutos a 37 C.
10. Repetir paso 6 y7.
11. Colocar en cada pocito de la microplaca ya seca, 100l de albmina bobina al 1N,
incubar 30 minutos a 37 C, luego lavar 3 veces.
12. Preparar el conjugado: en 10 ml de PBS sin tween 20, agregarle 25l de
conjugado concentrado, mezclar y luego servir 100l en cada pocito, incubar 30
minutos a 37 C.
13. Lavar 3 veces rpidas y luego otras 3 lavados de 5 minutos cada una, para eliminar
el exceso de liquido
14. Preparar el sustrato: mezclar 12.15 ml de solucin A ( fosfato de sodio dibasico) y
12.85 ml de solucin B ( cido ctrico) llevar a 50ml con agua destilada.
15. tomar 35ml de la solucin preparada en el paso anterior y agregarle 35l de
peroxido de Hidrgeno y 25mg de OPD, mezclar y luego servir 100 l en cada
pocito incubar por 30 minutos a temperatura ambiente, en un lugar protegido de la
luz (Lugar oscuro)
16. agregar 50 l de cido sulfrico a 4N a cada pocito como solucin de parada
17. Leer en lector de ELISA a 490 nm.
Resultado:
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Los resultados se obtienen como valores de absorbancia, se considera como positiva
una muestra con valores de absorbancia mayor de 0.1 que es la medida mas 3 veces la
desviacin estndar de los valores de una poblacin sana para suero y de una
poblacin de individuos neurolgicos no-cisticerco 0.05 para LCR.
Valores de referencia:
Ttulos mayores: ttulos mayores de o iguales a 1:1024 es sospechoso y debe ser
confirmado con LCR.
Cualquier titulo en LCR es Positivo
8. UTILIZACION DE COPROANTIGENOS Y COPROANTICUERPOS EN HELMINTOLOGIA

El ensayo inmunoenzimtico ELISA, se basa en el uso de antgenos o anticuerpos marcados con
una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunolgica como
enzimtica.
Al estar uno de los componentes (antgeno o anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado
sobre un soporte inmunoadsorbente, la reaccin antgeno-anticuerpo queda inmovilizada y puede
ser fcilmente revelada mediante la adicin de un substrato especfico que podr actuar con la
enzima produciendo un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de tcnicas
calorimtricas y espectrofotomtricas.
En lo referente a la Helmintologa tanto la deteccin de coproantgenos como de coproanticuerpos
resultan una alternativa interesante cuando los mtodos de diagnstico de los que se disponen
para ciertas parasitosis no son lo suficientemente adecuados y eficientes para la implementacin
de campaas de control y vigilancia epidemiolgica.
En el caso de la enfermedad zoontica Hidatidosis, la deteccin de coproantgenos en muestras
fecales pertenecientes a caninos utilizando anticuerpos anti-Echinococcus granulosus resulta de
alta sensibilidad y de gran valor en estudios epidemiolgicos y monitoreo en programas de control
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de la enfermedad. Otro suceso significativo para un diagnstico temprano que presenta esta
tcnica, es la posibilidad de detectar reacciones ELISA-positivas dentro del perodo prepatente de
la enfermedad. Canes experimentalmente infectados con Echinococcus granulosus revelaron
reacciones positivas entre los 10 y 20 das post infeccin
Otros de los cestodos en los que se describieron tcnicas de deteccin de coproantgenos son
Taenia hidatigena, Echinococcus multilocularis, Taenia solium, Taenia pisiformis e Hymenolepis
diminuta.
En 1992 Gasser y Colaboradores evaluaron la sensibilidad y especificidad de un tes. De ELISA
para la deteccin de coproanticuerpos en sueros caninos contra Echinococcus granulosus. Para
ello utilizaron antgenos excreto-secretorios y antgenos somticos de protoescolex, las reacciones
a ambos fueron comparadas y por Western-Blot se identificaron en ellos componentes antignicos
moleculares.
8.1. Ventajas de estos Mtodos:
Mayor sensibilidad y especificidad que otros mtodos diagnsticos empleados.
La posibilidad de cuantificacin.
Permiten diagnosticar gran cantidad de individuos a corto plazo.
Es una valiosa herramienta epidemiolgica para la determinacin de prevalencia de

anticuerpos en poblaciones animales
La posibilidad de detectar parasitosis dentro del perodo prepatente.
El monitoreo de sucesos en campaas de control de enfermedades zoonticas y de

importancia en produccin animal.
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Primera Edicin
9. RED DE LABORATORIOS:
9.1. Estructuracin de la Red de Laboratorios:

Una Red provee una estructura en la cual varios Laboratorios trabajan en diferentes niveles y estn unidos
por objetivos comunes, informacin, suministros, programas, supervisin, evaluacin y sistema de control
de calidad.
La conformacin de la Red de Laboratorios en el pas es necesaria, para tener un mejor sistema de
informacin, sobre el diagnostico de Parsitos Intestinales
A su vez, la Red de Laboratorios suministra datos provenientes de todos los niveles, as provee
informacin requerida para la planificacin y evaluacin de la situacin real del Parasitismo en el Pas.
Los servicios de Laboratorio estn organizados en tres niveles:
1. Nivel Central: representado por el Laboratorio Nacional de Vigilancia, que es de referencia
Nacional.
2. Nivel Intermedio: constituido por los laboratorios Regionales Departamentales.
3. Nivel local: Comprendido por los Laboratorios de Hospitales y Centros de salud.
9.2. Funciones Especficas de los Laboratorios de diferentes Niveles
Laboratorio Nacional de Vigilancia:

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
Servir como Laboratorio de referencia Nacional.

Establecer las normas referentes a mtodos y tcnicas.
Controlar la calidad de los resultados de los Laboratorios de la Red.
Formar al personal nuevo y capacitar al antiguo en las tcnicas normadas.
Coordinar las actividades con los Laboratorios Departamentales, Intermedios y Locales.
Ejercer supervisin directa e indirecta a los laboratorios de la Red Nacional.
Recopilar, consolidar y analizar informacin estadstica
Realizar o coordinar investigaciones de inters en Salud Pblica.
Participar en Programas de Control de Calidad Internacional
Suministrar los insumos a los Laboratorio, adquiridos a travs del nivel Central.
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Laboratorios Regionales Departamentales:
1. Realizar examen General de Heces y concentrados en estudios de Investigacin o Vigilancia
Epidemiolgica.
2. Capacitar al personal en el diagnostico de parsitos intestinales.
3. Coordinar con el nivel Local en lo que respecta a la referencia de muestras y supervisar dicho
procedimiento.
4. Recopilar y consolidar la informacin estadstica, provenientes de los Laboratorios Locales
5. Preparacin de reactivos y distribucin de los insumos necesarios para el nivel Local.
6. Enviar informes mensuales al nivel central.
Laboratorios Locales:
1.
2.
3.
4.
5.
Realizar exmenes solicitados en su establecimiento y los de su rea de influencia.

Remitir informes al nivel regional
Manejo de los consolidados para el sistema de informacin.
Participar en investigacin de brotes.
Apoyar las investigaciones operativas.
9.3 Supervisin:
Es un proceso educativo y motivador reciproco, permanente, regulador y planificado, que permite
desarrollar los conocimientos y la capacidad del personal, crear aptitudes respecto al trabajo y contribuir a
mantener la eficacia y eficiencia de una Red de Laboratorios organizados, para el diagnostico de Parsitos
Intestinales.
La supervisin se aplicar en dos modalidades directa e indirecta.
9.4. Supervisin Directa:

Es una evaluacin formalizada efectuada por el nivel superior (Laboratorios Nacional a Laboratorios
Regionales Departamentales y estos a los Laboratorios Locales) Este tipo de evaluacin permite medir la
adecuacin del sistema de calidad con respecto a la poltica de calidad de la Secretaria de Salud y a sus
objetivos en la Red de Laboratorios.
Es una forma de observacin directa del desempeo por medio de visitas programadas y peridicas al
personal de los laboratorios de la Red, para observar directamente las condiciones de trabajo, as como
los procedimientos tcnicos y administrativos.
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Por el contacto personal, es efectiva y rpida, ya que nos permite tomar decisiones oportunas, durante la
supervisin directa se realizaran entrevistas al personal encargado de procesar las muestras de
Parasitologa (Tcnicos de Laboratorio, Microbilogos) para conocer directamente las condiciones de
trabajo, procedimientos tcnicos administrativos, as como los problemas que se presentan en los
Laboratorios, para recomendar soluciones apropiadas de acuerdo a los recursos locales.
9.4.1. Informe de la Supervisin Directa:

Al finalizar, realizar una reunin informativa para discutir la situacin encontrada, hacer las
sugerencias necesarias y recomendaciones.
Posteriormente elaborar un informe escrito, breve y concreto con los compromisos
adquiridos tanto del personal supervisado como del supervisor.
El Laboratorio supervisor conjuntamente con el supervisado debern disear un plan de
intervencin y cronograma para periodos de 3 6 meses.
9.5. Supervisin Indirecta:

Se ejercer a travs de la revisin y anlisis de los resultados del Laboratorio en los respectivos informes
Mensuales.
El nivel central analizara informacin provenientes de los niveles intermedios y estos a su vez sern
responsables por analizar la informacin de los niveles locales.
Como resultado de la supervisin indirecta se dictaran recomendaciones, as tambin se podr tomar
decisiones tendientes a corregir errores detectados.
10. CONTROL DE CALIDAD

El control de calidad de la Red de Laboratorios se efectuara bajo las modalidades de Evaluacin Externa
del Desempeo.
10.1. Evaluacin Externa del Desempeo (EED)
La EED se realizar en todos los niveles de la Red de Laboratorios. Compete esencialmente al Laboratorio
Nacional la elaboracin de paneles, envo de los mismos y anlisis de resultados. El Laboratorio Nacional
de Parasitologia, ser objeto a su vez, de un control de calidad externo realizado por un Laboratorio
Internacional reconocido para tal fin.
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10.2. Elaboracin de paneles para Control de Calidad:
El Laboratorio Nacional de Parasitologa tendr la responsabilidad de preparar los paneles con muestras
preservadas de heces con diferentes parsitos, el cual podr apoyarse en los Laboratorios de los otros
niveles para la elaboracin de los paneles, para Los cual el Laboratorio Nacional establecer una
metodologa rigurosa a seguir para garantizar la calidad del material.
10.3. Envo de Paneles
a. Se recomienda que los paneles sean enviados del Laboratorio Nacional de Parasitologa a los
Laboratorios de la Red cada seis meses.
b. A cada Laboratorio se le asignar un cdigo de identificacin
c. El envo cumplir con las normas de bioseguridad bsicas.
10.4. Instrumentos y flujo de Informacin de Paneles de Control de Calidad

a. Cada panel de lminas deber incluir los siguientes instrumentos:
b. Protocolo que incluya detalles metodolgicos y objetivos de la evaluacin y plazo para la
respuesta
c. Descripcin de casos clnicos correspondientes
d. Formulario para la respuesta
e. El plazo de respuesta deber ser no mayor a un mes despus de recibido el material.
10.5. Anlisis y Retroalimentacin del Panel
El Laboratorio Nacional de Parasitologa analizar resultados de evaluacin con base en los siguientes
criterios:
a. Concordancia en resultado
b. Concordancia en especie
c. Concordancia en parasitemia
El anlisis de le EED tomar en cuenta la situacin global de los laboratorios evaluados, la gravedad de los
errores (resultado, especie), la repeticin de los mismos, el grado de complejidad del panel, el numero de
muestras.
El Laboratorio Nacional de Parasitologia mantendr una base de datos para automatizar el manejo de
informacin, y deber elaborar un informe para cada laboratorio con los resultados de la evaluacin
individual y global y recomendaciones.
Medidas correctivas
El Laboratorio supervisor disear un plan de supervisin directa y capacitacin que incluya los
Laboratorios con deficiencias.
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11. DEFINICIONES Y ABREVIATURAS
1. AFA: fijador conteniendo alcohol, formol y cido actico.

2. Antgeno: sustancia generalmente de naturaleza proteica, capaz de provocar una respuesta del
sistema inmunitario.
3. Anticuerpo: inmunoglobulina que es capaz de reaccionar con antgenos y provocar su
neutralizacin o modificacin.
4. Bioseguridad: conjunto de medidas de proteccin contra cualquier tipo de accin que ponga en
peligro la salud del ser humano.
5. Cestodo: gusano o helminto platelminto de forma acintada.
6. Centrifugacin: sedimentacin del contenido de una suspensin mediante la fuerza centrfuga.
7. Colorante vital: colorante que permite ver la estructura interna del parsito vivo.
8. Copro-antgeno: antgeno presente en las heces.
9. Cristal de Charcot - Leyden: cristales de protenas provenientes de los grnulos de eosinfilos,
que se destruyen en el intestino.
10. Diagnstico parasitolgico: demostracin directa o indirecta de alguna forma o estadio evolutivo
del parsito.
11. Enteroparsito: parsito que tiene por hbitat el tubo digestivo, especialmente el intestino.
12. Espora: esporoquiste aislado.
13. Esporoquiste: quiste con cubierta definida que contiene esporozoitos
14. Estrbila: porcin del cuerpo de las tenias o cestodos formadas por una cadena de progltidos.
15. Fijacin: conservacin de la estructura del parsito.
16. Heces: mezcla de productos de excrecin y secrecin que se eliminan por el intestino.
17. Helminto: ser pluricelular con exoesqueleto flexible, ausencia de apndices y con movimientos
reptantes.
18. hpg: nmero de huevos por gramo de heces.
19. Huevo: producto de la fecundacin con potencialidad de desarrollar un nuevo ser.
20. Invasivo(a): agente infectante que tiene capacidad de invadir tejidos.
21. Larva: estadio evolutivo de algunos seres vivos como los helmintos y los artrpodos en quienes
an no se han desarrollado los aparatos genitales.
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22. MIF: fijador que contiene merthiolate, yodo y formol.
23. Nematodo: gusano o helminto de forma cilndrica.
24. Ooquiste: quiste que contiene el huevo o cigote.
25. Organolptico: caractersticas orgnicas de una sustancia (consistencia, color, olor, etc)
26. PAF: fijador y/o conservador conteniendo fenol, alcohol y formol para muestras con parsitos,
sobre todo protozoarios.
27. PVA: alcohol polivinlico, fijador para conservar los parsitos en muestras fecales.
28. Parsito: ser vivo de escala zoolgica inferior que vive a expensas de otro de escala superior.
29. Patogenicidad: capacidad de producir dao.
30. Protozoario: ser unicelular.
31. Progltide: segmento o anillo de la estrbila de las tenias o cestodos y que puede ser inmaduro,
maduro o grvido, segn el estado de desarrollo de sus aparatos genitales.
32. Quiste: forma de resistencia de los protozoos, los cuales se rodean de una membrana dura e
impermeable
33. Solucin sobresaturada: solucin en la cual el soluto est en su mxima concentracin.
34. Trofozoito: forma vegetativa, libre y en movimiento de los protozoos.
35.
Trematodo: gusano aplanado o platelminto, que presenta su cuerpo indivisible.
59
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Primera Edicin
11.
REFERENCIAS:
1. Atlas Of. Medical Parasitology with 434 colour illustrations 1 St Edicion

Prayong radomyos , chukiat sirivichaya kul, Jitra Waikagul, srivicha krudsood, Somei Kojima,
Sornchai Looareesuwan.
2. Cisticercosis Humana
Ana Flisser , Ignacio Madrazo , Hctor Delgado,
Manual Moderno.
3. Fourth Edition
Diagnostic Medical Parasitology
Linne Shore Garca , Ms. F(AAM)
4. Instituto de Enfermedades Infecciosas y Parasitologa Antonio Vidal. Manual de Manejo de
Enfermedades Parasitarias Prioritarias en Honduras. Instituto de Enfermedades Infecciosas y
Parasitologa Antonio Vidal / Organizacin Panamericana de la Salud, Tegucigalpa, 2005.
5. Kaminsky RG. Manual de Parasitologa. Mtodos para laboratorios de atencin primaria de salud.
2da Edicin, 2003.
6. Lucha Contra las Helmintiasis en los nios en edad escolar

Gua para los administradores en los Programas de Lucha
Antonio Montresor, David W.T Crompton, Theresa W. Gyorkos, LKorenzo Savioli.
Organizacin Mundial de la Salud Ginebra.
7. Marco de Referencia d un programa Regional Para el control de las helmintiasis y esquistosomosis
en las Amricas
Santo Domingo Republica Dominicana 2 6 de Junio de 2003
8. Manual De Parasitologa
Mtodos Para Laboratorios de Atencin Primaria de salud
Segunda Edicin 2003
Rina Girard de Kaminsky, M.Sc
9. Manual De Procedimientos De Laboratorio Para El Diagnstico De Los Parsitos
Intestinales Del Hombre, Serie de Normas, Tcnicas N 37
Lima 2003.
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Primera Edicin
10. Medios Auxiliares Para el Diagnostico de las Parasitosis Intestinales
Organizacin Mundial de la salud
Ginebra.
11. Microbiologa Medica
Segunda Edicin
Patrick R. Murray , George S. Kobayashi , Miochael A. Pfaller , Ken S. Rosenthal
12. Monitoreo de los Programas de Control de Helmintiasis
Organizacin Mundial de la Salud
Washington D.C. E.U.A
Marzo del 2001
13. Parasitologa Medica,
Primera reimpresin: mayo 1999,
Dr. Antonio Atias
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Primera Edicin
ANEXOS
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Primera Edicin
1. PRINCIPALES PARSITOS INTESTINALES DEL HOMBRE
Protozoarios: Formas Evolutivas De Diagnstico, Tipo De Muestra Y Patogenecidad
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Primera Edicin
2. Helmintos: Formas Evolutivas De Diagnstico, Tipo De Muestra Y Patogenicidad
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Primera Edicin
3. ALGORITMOS PARA EL EXAMEN PARASITOLGICO
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Primera Edicin
4. ALGORITMO PARA MUESTRAS FRESCAS DE HECES
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Primera Edicin
5. ELEMENTOS QUE SE PUEDEN CONFUNDIR CON LOS PARSITOS INTESTINALES
En el examen microscpico, adems de encontrarse formas parasitarias en los fluidos, secreciones
o material fecal, se puede encontrar elementos no parasitarios que pueden confundirse con los
parsitos:
1. Elementos O Clulas Humanas
a. Macrfagos
Los macrfagos son clulas grandes, mononucleares y fagocticas, que se parecen a trofozotos de
E. histolytica. Las siguientes diferencias se deben considerar:
b. Neutrfilos polimorfonucleares (PMNS)
Generalmente son encontrados en casos de disentera bacteriana o amebiasis. Sus diferencias
son:
c. Eosinofilos:
Estas clulas, generalmente redondeadas, tienen un dimetro similar al de los PMNS, y se

caracterizan en las tinciones, por la presencia de grandes grnulos rojo prpura, adems
que suelen presentar su
Ncleo segmentado (1-2)
d. Cristales de Charcot-Leyden
Son cristales alargados con extremos en punta, que con coloracin tricrmica se tien de rojo
prpura. Ellos son producto de los eosinfilos destruidos en la mucosa intestinal, son frecuentes de
observarse en lminas que contienen Entamoeba histolytica. Tambin suelen encontrarse en
muestras de esputo, como consecuencia de la destruccin de los eosinfilos en la mucosa
pulmonar.
e. Glbulos Rojos:
Los glbulos rojos tienen un dimetro de 7,5 m. Su presencia en las heces puede indicar
ulceracin a nivel del tacto intestinal u otro problema hemorrgico.
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f.
Clulas Epiteliales:
Las clulas epiteliales o clulas escamosas pueden estar presente en las heces, ms an si la
Muestra se obtiene por sigmoidoscopa. El tamao de estas clulas son semejantes al de las
amebas, la coloracin es verde plido con apariencia uniforme no granular cuando se les colorea
on Trichome-Gomori.
g. Elementos Vegetales o Animales:
Levaduras:
Clulas ovoides de 4 a 6 m y que pueden encontrarse en forma de levaduras o hifas.
Pelos o tricomas
Los pelos de las hojas o races se encuentran y podran confundirse con larvas de nematodos
Figura E1)
Clula vegetal
Pueden observarse en forma no digerida (Figuras E2-E4)
Fibra muscular no digerida

Se reconoce por las estras (Figuras E5 y E6)
Clula coloidal o de grasa

Se tien con yodo, pudiendo confundirse con huevos (Figura E7 y E8)
Existen otras estructuras que pueden parecerse a larvas o huevos de helmintos y que son
convenientes tenerlas en cuenta (Figuras E9-E14)
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Primera Edicin
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Primera Edicin
6. CICLO DE VIDA DE TRICHUIRIS TRICHIURA
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Primera Edicin
7. CICLO DE VIDA DE CRYPTOSPORIDIUM
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Primera Edicin
9. CICLO DE VIDA DE UNCINARIA
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Primera Edicin
10. CICLO DE VIDA DE STRONGYLOIDES
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Primera Edicin
11. CICLO DE VIDA DE HISTOLYTICA
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Manual de Normas y Procedimientos para El Diagnóstico de Parásitos Intestinales

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Manual de Normas y Procedimiento para Fecha: Enero del 2006

Manual de Normas y Procedimiento de Parasitologa

El Manual de Normas y Procedimientos para el Diagnstico de los parsitos Intestinales, es una

Manual de Normas y Procedimiento de Parasitologa

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3. MTODOS DE LABORATORIO USADOS PARA L DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES

Examen Microscpico; Examen directo: solucin salina y lugol

Serologia: Respuesta de anticuerpos, deteccin de antigenos

Sondas De cidos Nucleicos: Deteccin, Identificacin.

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Regla De Oro En Parasitologa: Recobrar, identificar y demostrar el parsito, para poder

3.1. Base indispensable de conocimientos para solicitud de exmenes:

Ciclo de vida de los parsitos

Hbitat del hospededero, usual y ectopica

Manifestaciones clnicas mas especificas o probables

3.2. Muestras para examen Parasitolgico:

Se debe consignar la siguiente informacin: Nombre, edad, sexo, ocupacin, sntomas y

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3.3. Muestras que se deben enviar en determinadas Infecciones Parasitarias:

Acanthamoeba, tripanosomas, Angiostrongylus

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3.4. Recoleccin de la muestra de heces:

3.5. Organizacin en el Laboratorio de Parasitologa:

d. Realizar el examen macroscpico y anotar la consistencia de la muestra, el color, la presencia

Reportar los hallazgos en la muestra del paciente con rapidez y pertinencia.

g. Descartar el material utilizado (portaobjetos y cubreobjetos separadamente) para el examen en

4. PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNSTICO PARASITOLGICO.

4.1. Examen Directo Macroscpico

4.2. Examen Directo Microscpico

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5.1. Mtodos de Sedimentacin En Tubo.

Tubos de vidrio o plstico de 13x100mm, 16x150mm, o tubos de 50 mL de capacidad que

Terminen en forma cnica.

Laminillas de celofn recortadas adecuadamente (22 x 22 mm 22 x 30 mm.).

Pipetas de vidrio o plstico.

Agua destilada, hervida o de lluvia.

Gasa recortada en piezas de 9 x 9 cm.

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Filtrar el homogeneizado a travs de la gasa, llenando el tubo hasta la cuarta parte de su

Cubrir la abertura del tubo con una tapa, parafilm o celofn.

Agitar enrgicamente el tubo por 15 segundos aproximadamente.

Agregar 1 2 gotas de solucin lugol a una de las preparaciones.

Cubrir ambas preparaciones con un cubre objeto y observar al microscopio

Informar la presencia de las formas evolutivas de los parsitos.

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Copa o vaso de vidrio o plstico, cnico de 150 a 200 ml

Coladera de malla metlica o plstico.

Placas Petri o lunas de reloj.

Aplicador de madera sin algodn.

Homogenizar 3 a 6 g de heces con unos 10 a 20 mL de agua destilada

Dejar sedimentar la muestra durante 30 minutos.

Observar al estereoscopio o microscopio, a menor aumento.

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Informar de la presencia de huevos o larvas de parsitos.

Solucin Salina Fisiolgica

Solucin De Lugol. Solucin Madre

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Coloque los cubreobjetos y observe al microscopio

Descartar las preparaciones (portaobjetos y cubreobjetos separadamente) en una solucin

En la Preparacin tratada con Lugol o MIF, La sustancia cromatnica se destaca sobre el

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