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Qumica Biolgica
TP 6 CIDOS NUCLEICOS
.
Introduccin
Los cidos nucleicos son polmeros de alto peso molecular cuyas unidades monomricas son los
nucletidos unidos por enlaces fosfodiester. Los nucletidos presentan una pentosa, un grupo
fosfato y una base nitrogenada cuya naturaleza es responsable del cdigo gentico. Existe dos
tipos de acidos nucleicos: el acido ribunucleico (RNA) y el acido desoxirribonucleico (DNA) La
principal diferencia entre ambos es la pentosa puede ser ribosa en el caso del RNA o
desoxirribosa en DNA.
Parte experimental
Objetivos
- Extraer e identificar DNA en material biolgico
- Observar microncleos en muestras de mejilln.
Actividades
Extraccin de DNA
Pelar y rallar una cebolla mediana con rallador o procesador hasta picarla finamente.
Pesar 15 g de cebolla rallada
Adicionar 25 ml de solucin de lisis (0,1 % de SDS en 25 mM EDTA pH 8) y esperar 20 min.
Filtrar en gasa y recoger en probeta.
Transferir 4 ml de filtrado a un tubo de ensayo.
Adicionar 8 ml de etanol 95% procurando no mezclar las dos soluciones.
En la interfase observar la formacin de una fina hebra.
Retirar la interfase con pipeta Pasteur y separarla en un tubo.
Resuspender en 2 ml de agua destilada y calentar suavemente.
Caracterizacin de DNA
Una hidrlisis cida remueve todas las bases pricas (hidrlisis de uniones N-glicosdicas entre
pentosa y las bases pricas) sin afectar las uniones fosfodiester del esqueleto nucleotdico, por lo
tanto obtenemos como producto cidos nucleicos sin bases pricas.
Las desoxipentosas debido a la hidrlisis cida sufren deshidratacin dando aldehdos -hidroxilevulnicos. Estos reaccionan con difenilamina dando un producto de color azul. As, la reaccin
de difenilamina servir para caracterizar, indirectamente, la presencia de DNA en clulas de
cebolla.
Actividades
Preparar los siguientes tubos
Dejar reposar 5 minutos
Observar e interpretar los resultados
Agua destilada
Ribosa
Extracto
Rvo difenilamina
Tubo 1
1 ml
Tubo 2
Tubo 3
-
1 ml
2 ml
1 ml
2 ml
Identificacin de la pentosa
La pentosa del DNA y RNA puede evidenciarse por la reaccin con orcinol, en este caso la
desoxirribosa. El cido sulfrico hidroliza las uniones fosfodiester y N-glicosdicas, liberando
ribosa, bases pricas, pirimidnicas y cido fosfrico.
La ribosa en medio cido se deshidrata originando furfural que reacciona con el orcinol dando
un producto verde que demuestra la presencia de RNA.
Pentosas del RNA HCl cc y calor------- furfural + orcinol ----Cl3Fe---- color VERDE
Test de microncleos
Los microncleos son pequeos cuerpos de DNA que aparecen cerca del ncleo
principal durante la interfase como resultado de una divisin celular defectuosa, la que
es el resultado de daos cromosmicos estructurales y numricos inducidos por agentes
contaminantes qumicos y orgnicos. Los microncleos se forman durante la transicin
metafase-anafase de la mitosis por daos en el huso mittico, generando fragmentos de
cromosomas retrasados durante la migracin y durante la interfase pueden observarse
como pequeas masas citoplasmticas de cromatina.
Actividades
Tomar los mejillones y abrirlos realizando un corte en el msculo abductor. Extraer las
branquias y realizar un frotis de la misma. Dejar secar y luego fijar con con Carnoy
(etanol actico 3:1) y se deja secar nuevamente. Teir los preparados con Giemsa 4 % y contar
500 clulas registrando el nmero de anormalidades.
Actividades complementarias
1.
2.
3.
4.