Qumica Forense

TOXICOLOGIA FORENSE

Orfila escreveu em 1813 o primeiro trabalho completo na rea da

Toxicologia Forense. Considerado o pai da Toxicologia
VENENOS
Um veneno qualquer substncia a qual tomada, ou formada no corpo
destri a vida ou prejudica a sade. Qualquer substncia capaz de ser
prejudicial se dada em doses elevadas incluindo as essenciais vida tal
como sal, gua ou oxignio.
Ex. Um adolescente que tomou ecstasy e quase
morreu porque bebeu 6 litros de gua rapidamente.
All substances are poisons; there is none which is
not a poison. The right dose differentiates a poison
from a remedy
Paracelsus (1493-1541)

4 aula

Mathieu Orfila

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Se uma substncia ou no um veneno est relacionado com a
dose administrada do que com a substncia envolvida.

Os venenos podem ser de origem:

Mineral (arsnio ou mercrio, por exemplo);
Vegetal (a cicuta ou algumas plantas venenosas, por exemplo;
as plantas medicinais, como a Atropa belladona, contm substncias
txicas que so venenos em determinadas quantidades);
Animal (veneno de serpentes, abelhas, aranhas por exemplo);
Artificial (muitas das substncias sintetizadas pelo Homem na
indstria, por exemplo, como o cido sulfrico, ou o monxido de
carbono do escape dos automveis).

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TIPOS E EXEMPLOS DE VENENOS

Os venenos podem ser agrupados em diferentes classes dependendo da sua

composio qumica, propriedades e os efeitos que provocam. Algumas
subdivises bsicas so as seguintes:

Venenos corrosivos
Incluem-se aqui cidos, bases e outras substncias as quais provocam
corroso de tecidos atravs do contacto. Tomadas oralmente provocam
danos graves e visveis nos tecidos moles da boca, esfago, estmago e
intestino.

Venenos sistmicos
So o grupo maioritrio de venenos e incluem substncias que actuam
directamente em processos bioqumicos dentro das clulas. Chegam ao seu
lugar de aco via sistema circulatrio. Exemplo so o muito conhecido
alcalide estricnina, venenos inorgnicos tais como cianeto, monxido de
carbono, pesticidas e drogas.
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Venenos irritantes
Incluem-se aqui metais e compostos inorgnicos tais como chumbo,
mercrio ou compostos de arsnio. Tomados oralmente provocam irritao
gastro-intestinal

severa

com

vmitos,

clicas,

diarreia

naseas

dependendo da substncia usada. So absorvidos pelo sistema digestivo e

transportados pela circulao sangunea aos orgos do corpo. Estes
compostos no podem ser metabolizados e por isso depositam-se por
exemplo nos ossos.

Toxinas
Substncias de ocorrncia natural produzidas por organismos vivos so
usualmente referidas como toxinas e no venenos. Exemplos:
- venenos de cobras e insectos
- bactrias tais como salmonela
- certas algas

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Factores que afectam a dose txica de uma substncia

Ateno:

para

algumas

substncias a parte terminal da

curva de dose comea a subir
outra vez assim que se aproxima
do zero dando uma forma um U
(ex. Metais e vitaminas os quais
devem estar presentes na dieta.
Quer muito, quer pouco pode ser
perigoso)
No existe uma dose fatal especfica para uma droga ou outra substncia. Pode
depender de factores tais como tamanho e idade da vitima (crianas vs adultos),
estado de sade e histria de exposio (dependentes de herona) e reaces
paradoxais (reaces adversas a certos medicamentos, ex. benzodiazepinas).
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Vias de administrao

Oral
Intravenosa
Inalao
Membranas mucosas

Drogas e substncias podem ser introduzidas no corpo

por variadssimas formas o que vai afectar:
- A velocidade com que vo actuar no corpo
- A fraco da droga que absorvida e capaz de atingir o stio de aco
da substncia (biodisponibilidade)
- A concentrao final da droga num tecido particular do corpo
- Os efeitos experimentados pela pessoa que recebe a substncia
Estas so muitas vezes questes postas em tribunal a que o toxicologista
forense tem que dar resposta.
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Vias de excreo

Metabolismo das substncias

Eliminao de excessos pelo
corpo

As drogas desaparecem do corpo por vias diferentes o que vai afectar:

-O perodo de tempo no qual a substncia se mantm activa no corpo
-Os mtodos pelos quais o corpo inactiva ou desintoxica biologicamente
materiais activos
- A seleco de amostras para anlise
-O perodo de tempo no qual a substncia pode ser detectada
Principais vias de excreo:
Atravs dos rins para a urina
Atravs do fgado para o canal biliar e para o intestino ( a substncia pode
ser reabsorvida na circulao no intestino)
Atravs da pele
Atravs dos pulmes (expirao)
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Os processos metablicos servem para inactivar ou destoxificar materiais
exgenos antes da sua excreo do corpo. O fgado tem aqui um papel
principal apesar de o sangue ter tambm capacidades metablicas capazes
de quebrar comida e nutrientes para fornecer energia ao corpo.
Uma via metablica envolve ligar molculas de acar tornando os
metabolitos mais solveis em gua e assim fceis de serem eliminadas na
urina (estes compostos so chamados conjugados).
Ex: A cannabis pode ser detectada
at semanas depois de um nico
cigarro ter sido fumado pois entra
num circuito de intestino fgado,
do fgado para o canal biliar e do
canal biliar novamente para o
intestino.

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Reaco com o cido glucornico

ROH
O

COOH
O
OH
OH

NH

O
O
O P O P O
OH O
O

c.
glucornico

+ UDP

OH

ROH - Morfina

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OH OH

COOH
O ROH
OH
OH

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Questes postas pelo tribunal a que um toxicologista forense tem que
dar resposta:
Como que ocorreu a absoro?
Quanto tempo foi preciso para que a substncia fosse absorvida pelo corpo?
Que quantidade foi verdadeiramente absorvida?
Quo rapidamente foi a substncia eliminada do corpo?
Qual foi a concentrao num determinado momento antes da morte?
So precisos grficos tais como os do acetato 8 para responder a estas
perguntas.
A velocidade de eliminao do sangue usualmente especificada em termos
de tempo de meia-vida no sangue (tempo que leva a que a concentrao de
uma substncia caa para metade do valor inicial).
Ex. O tempo de meia-vida da morfina de 3 horas. Isto significa que 1mg de
morfina cai para 0.5 mg em 3 horas e depois para 0,25 noutras 3 horas e
assim por diante.
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Diferentes tipos de amostras

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Amostras analticas
Medicamentos e outros materiais prximos do corpo
Caixas de comprimidos vazias ou quase vazias perto de um corpo d uma
pista vlida sobre o que procurar em primeiro lugar. H um erro comum, que
passar muito tempo a identificar cada cpsula ou comprimido encontrado na
cena (podem no ter nada a haver com o acontecimento ou terem sido
colocados para desviar a ateno). No entanto, uma tentativa rpida de
identificao antes da anlise de fluidos corporais pode ser vlida.
Outros materiais podem incluir recipientes de produtos de limpeza de casa ou
industriais (agentes de limpeza, desinfectantes, pesticidas, etc). O contedo
obvio pelo rtulo. Caso se encontre alguma seringa faz sentido analisar
qualquer contedo residual.

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Resduos de comida e bebida perto do corpo

A prioridade dada a este aspecto depende da histria do caso, mas uma
examinao rpida num estgio inicial muitas vezes til.

Fluidos corporais
Uma srie de testes preliminares devem ser levados a cabo para confirmar
ou excluir os agentes txicos mais comuns.

Urina
Teste frequentemente empregues:
Teste de Trinder para salicilatos,
teste de cresol-amnia para paracetalmol,
reagente de cido ntrico- cido perclrico- cloreto de ferro(III) (FPN) para
fenotiazinas
teste de Fujiwara para compostos triclorados.
O contedo de lcool pode ser determinado por GC.
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Estmago
Observao visual da cor e contedo procurando resduos de cpsulas e
comprimidos ou excipientes (muitas vezes maizena).
Registo do odor pois pode indicar a presena de lcoois, aldedos e
cetonas, fenis, cianetos, nicotina, etc. Teste frequentemente empregues:
Teste de Trinder para salicilatos,
teste de cresol-amnia para paracetalmol,
reagente de FPN para fenotiazinas
teste de Fujiwara para compostos triclorados
teste de difenilamina para agentes oxidantes.
Adicionalmente pode ser realizado o
teste de Reinsch para metais pesados.

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Sangue
Screnning e quantificao do lcool por GC e deteco e quantificao de
monxido de carbono por espectrofotometria. A visualizao imediata do
sangue pode indicar o envenenamento por monxido de carbono (amostra
vermelho-cereja

brilhante)

sangue

castanho

como

resultado

de

metahemoglobina pode indicar envenenamento por agentes oxidantes tais

como clorato.
A ordem para realizar estes testes depende da informao disponvel, mas
muitas vezes so feitos simultaneamente. Mesmo quando a evidncia
aponta para outro tipo de envenenamento (por ex. Cianeto) a anlise para
lcool tem que ser feita para em tribunal poder provar que a vitima no
estava dopada ou embriagada antes da administrao.
Um bom toxicologista deve estar atento a estas situaes. Por exemplo nem
todos os casos de monxido de carbono so acidentais, mesmo que as
evidncias apontem para a causa da morte no-criminal.
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Fgado
A anlise do fgado essencial quando no se consegue obter um conjunto
de fluidos corporais alargado ou se a anlise destes fluidos falharam a dar
uma resposta. A anlise do fgado assim uma rotina em casos post
mortem.
Por ex: a concentrao no sangue de algumas drogas (ex. tioridazina) no
significativamente maior do que as concentraes teraputicas. Isto no se
verifica nas concentraes no fgado onde em anlises post mortem se
verifica ser a concentrao 10 vezes superior do que as obtidas em paciente
sujeitos a doses teraputicas.
Outra razo para analisar o fgado para contornar problemas de
interpretao de concentraes no sangue onde ocorreu a distribuio post
mortem de material txico.
Tioridazina - antipsictico fenotiaznico usado no tratamento de psicoses, incluindo esquizofrenia, e no
controle do comportamento severamente perturbado ou agitado
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Cabelos e tecidos musculares

A anlise de cabelo ou de tecidos musculares pode ser o mais
apropriado em corpos exumados ou em decomposio ou quando a
vitima sobreviveu vrios dias aps a ingesto do veneno. Nestes casos
pode no ser possvel a analise de rotina de amostras (contedo do
estmago, sangue e urina) e se existem podem no levar a resultados
significativos.
Contem um perfil da exposio do indivduo a drogas durante a vida.

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Modelo fisiolgico com muitos compartimentos,

parties, equilbrios e constantes de velocidade.
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Menos tpicas: Necessrias quando o material biolgico usual no suficiente

para responder s questes forenses. O tipo de toxina que pode estar envolvida
e o estado do corpo ditam que tipo de material atpico deve ser submetido. Se
exposto a uma toxina voltil necessrio amostra do pulmo; se o corpo est
decomposto ou queimado, cabelo, ossos ou insectos associados pode ser o
que resta para analisar.
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Mtodos de Anlise

Pr-tratamento da amostra envolve manipulaes fsicas e qumicas da

amostra (por exemplo filtrao da urina, centrifugao do sangue,
homogeneizao de tecidos, ajustamento do pH).
Extraco as drogas e outras substncias esto em geral presentes em
quantidades mnimas muitas vezes menos de 1 parte por milho (i. 1 mg
por litro de sangue ou quilo de tecidos). O grosso da matriz contendo o
analto tem que ser extrada. O processo de extraco pode usar um
solvente orgnico tal como ter ou clorofrmio ou um absorvente slido.
Purificao do extracto purificao do extracto bruto inicial para remover
o mais possvel substncias que interferem.
Procedimento analtico final O extracto purificado analisado por uma ou
mais tcnicas baseadas em espectrometria, cromatografia ou
imunoensaios.
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Para propsitos forenses, pelo menos dois mtodos no-correlacionados de

identificao so necessrios (HPLC, GC ou GC/MS).

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Interpretao

Resultados qualitativos
Obtidos de mtodos analticos tais como, imunoensaios, cromatografia em
camada fina e testes de cor ou de anlises de amostras onde a
concentrao no de significado diagnstico. Neste ltimo caso incluemse as amostras de contedos do estmago (a concentrao de material no
estmago menor do que a quantidade total presente) e urina.

Resultados quantitativos
A

interpretao

destes

resultados

tem

por

objectivo

relacionar

as

concentraes com os efeitos no doador da amostra. As concentraes de

substncias na urina est sujeita a mal interpretaes e equvocos. As
concentraes na urina variam mais do que no sangue devido a que o volume
de urina excretado depende da hidratao do corpo. O volume tambm
afectado por alimentos tais como caf e drogas tais como diurticos.
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Nos USA estabelecem-se valores limiares (valores cut-off) para drogas de
abuso na urina e se uma droga detectada e o seu valor abaixo do valor
cut-off ento a amostra considerada negativa. Estes valores de cut-off
so estabelecidos para lidar com problemas de exposio inadvertida e
metodologias analticas. No entanto em muitos laboratrios da Europa e UK
no se usam.

Problemas especficos de interpretao

A interpretao de resultados deve ser feita com cuidado pois pode sempre
haver explicaes alternativas. Algumas drogas podem ser encontradas em
amostras mas que vm de fontes legtimas e no de material ilcito.

Exemplos
O uso de sementes de papoila no fabrico do po pode levar a traos de morfina
detectados na urina devido s quantidades mnimas de pio nas sementes
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Alguns casos foram reportados nos USA onde o ch estava misturado com
folhas de coca Health Inca Tea dando origem a um teste positivo para
cocana na urina.
O analista tem que ter cuidado ao analisar amostras para anfetaminas para
evitar falsos positivos devido presena de substncias semelhantes tais
como efedrina um constituinte de remdios ou ch ginseng.
Tambm o fumo passivo pode levar a resultados positivos se a pessoa estiver
na mesma sala ou ambiente que um fumador de cannabis ou carck (cocana).
A presena de morfina uma indicao de um abusador de herona pois esta
rapidamente metabolizada a morfina no organismo.
A concentrao de droga pode tambm variar de acordo com a amostra de
sangue e pode mudar depois da morte devido a processos fsicos passivos
ou difuso entre rgos. A amostra de sangue retirada numa autpsia deve
ser escolhida com cuidado para minimizar estes efeitos.
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Aproximao analtica geral

Se o veneno no conhecido, o teste de venenos um problema para o qumico

porque no existe um mtodo nico de anlise capaz de detectar todos os
vrios venenos.
A toxicologia forense exige um sistema analtico geral que permite excluir ou
indicar a presena de um qualquer veneno em cada um dos grupos qumicos
apresentados na figura

Um esquema sistemtico de anlise

que cubra todos os venenos
extremamente caro.
Pelo

menos

sete

esquemas

analticos

diferentes so necessrios para excluir os

4 aula

venenos mais frequentemente encontrados.

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Pistas para a excluso de grupos de venenos mais provveis:

Se os sintomas ocorreram em menos de uma hora e no h vestgios de
material injectvel ento as amostras devem ser examinadas para gases e
venenos volteis antes de outros grupos.
Vmitos e diarreia indicam possivelmente envenenamento por metais.
A idade e ocupao da vtima ou o stio do incidente podem guiar a escolha
para o screening do primeiro grupo empregue.
Por exemplo, poucas pessoas de idade iro recorrer ao uso de solventes.
Agricultores ou trabalhadores do campo tm acesso fcil a pesticidas e
um envenenamento numa fbrica de electrogalvanizao requer que o
cianeto seja eliminado.

4 aula

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A informao requerida
para cada tipo de caso
difere e vrias formas
foram sugeridas para
formulrios. Exemplos:

Historial mdico

sintomas

Amostras necessrias

Informao a ser submetida

com as provas, em todos os
casos onde se suspeite de
envenenamento.
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Teste para os principais

grupos de venenos
Grupo 1: Gases
A presena deste grupo de venenos
usualmente

indicado

pelas

circunstncias (desde que tenham

sido

registadas

analista).

em

detalhe

identidade

do

pelo
gs

envolvido muitas vezes dada por

evidencia circunstancial. No existe
nenhum teste simples monofsico ou
mtodo analtico para este grupo.
A figura dada pelo nmero de compostos a ser excludo uma
estimativa do n total de venenos dentro desse grupo particular.
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ATENO INVESTIGAO. Por exemplo um aquecimento que retirado do
quarto onde ocorreu a morte.
Por exemplo, uma me que transportou um aquecimento defeituoso porttil a
leo para aquecer o quarto do filho antes de este se levantar e depois
transportou o mesmo para a casa de banho. Foi encontrado morto no quarto
sem vestgios visveis de monxido de carbono no quarto e assim foi pedido
ao laboratrio para fazer analises apenas a drogas. (O teste da pele cor de
rosa nem sempre aparente). Felizmente um teste de rotina para monxido
de carbono estabeleceu a causa da morte antes que se passasse muito tempo
a procurarem-se drogas. O analista deve sempre questionar se foi tentada a
reanimao com oxignio ou respirao artificial pois estas medidas podem
provocar uma reduo significativa da concentrao de carboxihemoglobina.
Como resultado a carboxihemoglobina pode ser encontrada em amostras
post-mortem em concentraes no-fatais (mas ninguem se lembrou de
informar o analistas das ajudas prestadas com os primeiros cuidados).
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Os mtodos usados para detectar gases a temperatura e presso normal
incluem GC head-space. possvel detectar no sangue: butano, etano,
oxido nitroso, propano e outros fluorocarbonetos de baixo ponto de
ebulio.
Apenas dois venenos deste grupo requerem excluso de rotina: cianeto e
monxido de carbono.
Monxido de carbono
Detectado em amostras de sangue (mortes associadas a incndios, carros
ou caravanas).
O mtodo mais rpido para detectar e quantificar CO por mtodos
espectrofotomticos preferencialmente usando um Co-oximetro.
Cianeto
Detectado muitas vezes pelo seu cheiro a amndoas amargas.
Teste de cor para amostras de sangue ou tecidos usa-se o mtodo
quantitativo de clulas microdifusso de Conway
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Monoxido de carbono (CO)

Gs incolor e inodoro, que resulta da combustao incompleta de materiais ricos

em carbono.
CO combina-se reversivelmente com a hemoglobina (Hb) para formar a
carboxiemoglobina (COHb). A afinidade do CO pela Hb e cerca de 210 vezes
maior que a do oxigenio, o que faz com que uma pequena quantidade de CO
consiga saturar uma grande quantidade de moleculas de Hb.
Deteco:
por co-oximetria e o mtodo mais rpido para detectar e quantificar o CO.
O co-oximetro utiliza a espectrofotometria com mltiplos comprimentos de onda
para medir a concentrao dos diferentes tipos de Hb no sangue (espectros de
absorvncia caractersticos para as diferentes estruturas moleculares assumidas
pelo grupo heme nas diferentes espcies de Hb).
com os tubos colorimtricos Drager (tcnica mais dispendiosa). A concentrao
do veneno e determinada pela intensidade da cor desenvolvida
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HCN

O cianeto de hidrogenio (HCN) e os sais de potassio (KCN)

e sodio (NaCN) do acido cianidrico sao venenos classicos.

Outros materiais txicos no sangue que podem ter tido origem em

incndios: HCN, produzido pelo efeito do calor em materiais contendo
azoto tais como poliuretano, poliacrilonitrilo. A sua aco ocorre nos
tecidos biolgicos onde bloqueia a respirao celular ao nvel dos
citocromos (inibe a enzima responsvel pela fixao do oxignio; liga-se
hemoglobina)
Os sintomas do envenenamento por cianeto incluem tontura,
enxaquecas, dor no peito, confuso, cambalear, diminuio da
velocidade de batimento do corao e da respirao, inconscincia,
coma e morte.

4 aula

0,25 mg l-1 nvel normal no sangue

0,5 mg l-1 nvel em fumadores

Cianeto de hidrognio (HCN) um gs

cido ciandrico (ou prssico) uma soluo aquosa de HCN

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Deteco: HS-GC, geralmente acoplado a um detector

de azoto/fosforo (HS-GC/NPD)

A analise por microdifusao (clula de Conway) permite um isolamento rpido e

deteco de venenos volteis, incluindo o cianeto.
Clula de Conway que consiste num pequeno disco de porcelana com dois
compartimentos separados, em que o primeiro esta rodeado pelo segundo,
tendo uma parede em comum.
No compartimento externo e colocada a amostra (sangue, urina ou tecido
homogeneizado). Ao compartimento interno e adicionado um reagente ou
solvente no qual as substancias volateis se dissolvem. Posteriormente, a
clula e selada e mantida a temperatura ambiente ou ligeiramente aquecida.
Os venenos volteis difundem da amostra para a atmosfera do disco, ficando
aprisionados pela soluo adsorvente, que consiste frequentemente num teste
de cor. A medida que o veneno sai da amostra o toxicologista observa a
mudana de uma cor no compartimento interno.

Clula de Conway. Compartimento interno

(A); Compartimento externo (B); tampa de
vidro fixa com um stopper metalico (C).
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Testes espectrofotomtricos

Esquema reaccional para a identificao

do cianeto pelo mtodo colorimtrico da
piridina-pirazolona.

Testes

espectrofotomtricos

usualmente

utilizados para identificar e quantificar o

cianeto so baseados na reaco de Konig.
O

cianeto

reage

com

cloramina-T,

produzindo o cloreto de cianogenio (CNCl). A

espcie reactiva CN+, reage com a piridina,
produzindo um intermedirio que hidrolisa a
um

dialdeido

conjugado.

pirazolona

condensa com o grupo aldedo, resultando

num composto conjugado de cor azul. Pela
absorvncia da soluo e aplicao da lei de
Lambert-Beer,

concentrao

pode

obtida atravs de uma recta de calibrao.

4 aula

ser

Qumica Forense
Grupo 2: Compostos volteis
Conjunto de ataques rpidos de sintomas seguido de doena sria ou morte
a indicao mais precisa para este grupo de compostos. A identidade
provvel do veneno dada pelo conjunto de sintomas.
Importante a evidncia fsica na cena (i. ., garrafas, resduos em copos,
tubos de adesivos e sacos de plstico com cheiros caractersticos)
frequentemente deixa poucas dvidas sob a natureza do intoxicante, se o
material for submetido dentro de 48 horas.
Se a morte foi adiada por internamento num hospital imperativo conseguir
uma anlise ante mortem.

4 aula

Qumica Forense

GC head space a tcnica mais

usada para o screnning de venenos
volteis.
importante associar uma boa base de
dados pois os viciados viram agora a
sua ateno para uma srie de
solventes industriais.

Teste Fujiwara - soluo de piridina e hidrxido

de sdio. Uma resposta positiva indicada por
um vermelho ou cor-de-rosa na soluo de
piridina resultado da oxidao por cloro ou
halogneos

4 aula

Qumica Forense
Grupo 3: drogas
(solveis em solventes)

Anlise de tecidos
Extraco directa com solvente ou
extraco em fase slida antes ou
depois da digesto enzimtica o
mtodo
empregue

mais
de

frequentemente
preparao

amostras. Segue-se anlise por

GC-MS

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de

Qumica Forense

Digesto enzimtica
em geral a melhor escolha para um screnning geral de tecidos slidos.
simples, rapidamente adaptado e d um filtrado livre de protena do qual
qualquer droga presente pode ser extrada.
Procedimento mais apropriado:

Macerar

10g

de

fgado

ou

outro

tecido

com

40

mL

de

1M

tris(hidroximetil)metilamima.

Adicionar 10 mg de Subtilicin A e incubar num banho de gua a 50-60C
durante cerca de 1 h, sem agitao.

Filtrar o digesto para remover qualquer tecido de ligao no dissolvido
Mtodo til para analisar marcas de tecido onde se verificou a infeco. Se a
injeco intramuscular e de origem recente, a concentrao de droga deve
ser superior do que num tecido normal. Se a injeco intravenosa esta
distino no pode ser feita.
4 aula

Qumica Forense

Amostras de sangue e urina devem ser sempre obtidas neste tipo de

investigao: quando a amostra de sangue pequena a possibilidade de
detectar e confirmar traos residuais de qualquer antidepressivo ou droga
estimulante quase zero. Se no h amostra de urina, fazer um prscrenning por mtodos de imunoensaios pode ser essencial para
fornecer uma indiao analtica para a natureza de qualquer droga
presente na amostra de sangue.
Para propsitos forenses, pelo menos dois mtodos no-correlacionados
de identificao so necessrios (HPLC, GC ou GC-MS).
Os imunoensaios fornecem boa evidncia por excluso de partes mas
pobre confirmao por identidade apesar de serem essenciais para a
deteco de insulina, cido lisrgico e cannabinoides.

4 aula

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Grupo 4: Metais

Historicamente tm sido muito usados porque so potentes, no tm sabor,

rapidamente disponveis e produzem sintomas similares a muitas doenas
comuns. A suspeita quando aparece j em geral muito tarde.
Ex: a substituio de duas
cpsulas prescritas de um remdio
qualquer por xido de arsnio pode
ter resultados fatais com tudo a dar
indicao de um suicdio por
overdose. Uma anlise para o
screen de drogas neste caso uma
total perda de tempo e como
resultado...., um analista perplexo.

4 aula

Qumica Forense
Este grupo de venenos deve ser verificado se forem notados sintomas de
vmitos e diarreia independentemente de outros venenos que sejam
sugeridos pela opinio mdica ou evidncia circunstancial

Teste de Reinsch

detecta apenas 7 metais txicos mas pode ser

aplicado a quase qualquer material (fluidos corporais, tecidos

homogeneizados, bebidas e comida) sem grande preparao prvia.
Bastante sensvel. Falha com bastantes metais para ser considerado um
mtodo de excluso. (Antimnio, arsnio, selnio, bismuto, tlio e mercrio)

Teste de Gutzeit para arsnio

Os mtodos mais frequentemente empregues para a anlise de metais em
fluidos biolgicos so colorimtricos, electroqumicos (voltametria andica),
espectrometria de absoro atmica electrotrmica, de chama e ICP.
4 aula

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Teste de Reinsch
Dissolver fluido corporal tecido em soluo de cido clordrico
Inserir uma tira de cobre na soluo.
O aparecimento de um revestimento prateado no cobre pode indicar a
presena de mercrio
Um revestimento escuro indicativo da presena de um dos outros metais.
Confirmao por outra tcnica analtica adequada para inorgnicos.
Teste de Gutzeit
No teste Gutzeit, AsH3 gerado pela reduo de compostos de arsnio com
Zn, na presena de H2SO4. O gs formado, AsH3 depois exposto a AgNO3
slido ou em soluo. Com AgNO3 slido forma-se Ag4AsNO3 amarelo ao
passo de que na reaco de AsH3 com solution de AgNO 3 forma-se Ag3As
preto.
4 aula

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Grupo 5: Pesticidas (solveis em solventes)

Os pesticidas podem ser classificados em: insecticidas, herbicidas, rodencidas,

moluscocidas e acaricidas dependendo do seu uso.
Podem ter vrias origens quimicas: organofosforosos, carbamatos,
hidrocarbonetos clorados, ureias substituidas)

A deteco de pesticidas tem sido acompanhada por testes presuntivos de cor como testes
preliminares seguido de um procedimento de screening por meio de TLC, GC. O GC-MS
4 aula
reconhecido como uma tcnica padro para confirmar a identidade.

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Grupo 6: Anies

Envenenamento por este grupo muito

raro. A sua identificao decorre de casos
atpicos

nos

quais

os

sintomas

circunstncias no do pistas usuais.

A dose txica para os qumicos neste
grupo relativamente grande cerca de
duas colheres de ch. Da no serem muito
caractersticos em homicdios.
Deve ser analisada a alimentao, bebidas,
vmito, lavagens de estmago aspiraes
gstricas e urina.
Teste difenilamina para oxidantes
Sensibilidade de 1ppm e se negativo exclui
muitos dos anies txicos deste grupo.
4 aula

Qumica Forense

Estgios no movimento
de uma droga atravs do
Farmacologia
corpo, comeando com a
Farmacologia estuda como as substncias qumicas
ingesto
de
um
ou seus metabolitos interagem com os sistemas
xenobitico
biolgico.
Farmacodinmica o estudo do efeito de drogas no
tempo e est relacionado com a interaco de uma
droga com o seu alvo.
Farmacocintica estudo do movimento de uma droga
e seus produtos metablicos atravs do corpo. Em
aplicaes forenses a farmacocintica de maior
interesse.
Os princpios da farmacocintica so princpios
qumicos familiares de cintica e equilbrio aplicada
ao ambiente biolgico.
A cintica envolve passos de partio mltiplos, consideraes de
solubilidade, complexos ligados com protenas e metabolismo enzimtico
que converte a droga original ou toxinas em novos compostos.
4 aula

Qumica Forense

FARMACOCINTICA

A farmacocintica estuda o movimento de uma droga ou substncia

estranha (um xenobitico) por diviso nos estgios seguintes: no primeiro
caso em absoro, distribuio e o segundo em metabolismo e eliminao
(processo este referido pelas inicias ADME).

A linha divisora (a tracejado) o

tempo aps a ingesto na qual a
concentrao Cp (p de plasma) na
corrente

sangunea

atinge

mximo
O C pode indicar a concentrao
em qualquer fluido corporal a
discusso
plasma.
4 aula

presente

incide

no

Qumica Forense
Para uma droga injectada intravenosamente isto acontece muito rapidamente
pois no h barreiras de fase a serem atravessadas.
Para uma droga tomada oralmente a situao mais complexa pois est
envolvida uma membrana lipofilica.
A velocidade de remoo de uma droga segue em geral uma
cintica de 1 ordem.
Em qualquer processo de primeira ordem, a velocidade da reaco depende
apenas da concentrao da droga. O tempo de meia-vida obtido
comeando com a equao geral para um processo de primeira ordem:

Onde: K a constante da velocidade de eliminao, C0 a concentrao

inicial mxima no sangue da droga, e Ct a concentrao no tempo t.
4 aula

Qumica Forense
Aps um ciclo de meia-vida a concentrao Ct = C0 e:

importante referir que o tempo de meia-vida deve ter uma etiqueta tal
como t1/2 plasma para clareza (o decrscimo da concentrao no plasma
no significa que a droga foi removida do corpo mas apenas que est
noutro compartimento).
4 aula

Qumica Forense

Modelo dos compartimentos

O modelo de um compartimento baseado num nico compartimento aqui o
plasma tambm referido como compartimento central. Uma constante de
velocidade de primeira ordem Ka determina a quantidade da droga absorvida
na corrente sangunea enquanto uma constante da velocidade de eliminao
de primeira-ordem Kel descreve a velocidade com que a droga removida.
A constante da velocidade especificada como a constante da velocidade de
eliminao Kel.
Uma equao de 1 ordem pode ser representada do seguinte modo para
permitir os clculos da concentrao em funo do tempo:

ln(Ct) = - kt + ln(C0)

4 aula

Qumica Forense

ABSORO E DISTRIBUIO

A distribuio de uma droga em tecidos determinada por consideraes

semelhantes s governadas pela absoro. Dependendo desses factores, a
droga pode residir preferencialmente no sangue, em tecidos adiposos ou em
outras localizaes tais como o fgado.
O volume de distribuio uma expresso quantitativa e dada por:

Onde D a dose da droga; Cp a concentrao no plasma assim que o

equilbrio atingido mas antes de a eliminao da droga ter comeado a
acontecer e k o peso da pessoa em quilogramas. Apesar de ser usada a
concentrao no plasma, Vd pode ser calculado para qualquer fluido corporal e
deve ser especificado.
4 aula

Qumica Forense
Vd depende da lipofilicidade da droga, do grau de ionizao (pKa), da
associao da droga a protenas e de muitos outros parmetros fsicos e
qumicos.
Vd fornece uma medida da partio relativa da droga entre o plasma e outros
tecidos.
Em geral quanto maior Vd mais lipofilica a droga.
Se a droga administrada oralmente, o valor de Cp tem que ser ajustado na
base da biodisponibilidade.
Se dois compostos apresentam o mesmo grau de ligao a protenas do
plasma, o composto com maior afinidade de associao ao tecido ter a
maior Vd relativamente ao composto com maior afinidade para o plasma.
Compostos lipofilicos tambm tm tendncia a ter maiores valores de Vd.
4 aula

Qumica Forense
A ligao a protenas afecta a Vd, pois impede que a droga atravesse para
dentro de tecidos. Quanto mais uma substncia se liga a protenas do
plasma, mais ela tem tendncia para ficar no plasma.
Os toxicologistas forenses podem usar valores de Vd para estimar a
quantidade total de uma droga que est presente.
A equao seguinte d a dose D (mg/Kg) de uma droga presente no
plasma em termos do seu volume de distribuio Vd, e a concentrao Cp
de uma droga

D = Vd X Cp

4 aula

Qumica Forense

Problema: A concentrao
teraputica da morfina para
um homem pesando 81,65 kg
0,05 mg/L. Assumindo que
Vd para a morfina 4L/Kg e a
biodisponibilidade 25%,
calcule as doses orais e
injectveis necessrias para
obter a concentrao no
plasma desejada.

4 aula

Qumica Forense

Problema: A concentrao
teraputica da morfina para
um homem pesando 180 lb
0,05 mg/L. Assumindo que Vd
para a morfina 4L/Kg e a
biodisponibilidade 25%,
calcule as doses orais e
injectveis necessrias para
obter a concentrao no
plasma desejada.

4 aula

Qumica Forense

Problema: A concentrao
teraputica da morfina para
um homem pesando 180 lb
0,05 mg/L. Assumindo que Vd
para a morfina 4L/Kg e a
biodisponibilidade 25%,
calcule as doses orais e
injectveis necessrias para
obter a concentrao no
plasma desejada.

4 aula

Qumica Forense
Problema: Uma mulher pesando 61,2 Kg tomou 2 comprimidos de codena
de 20 mg cada, receitadas pelo seu dentista para aliviar a dor associada
cirurgia dental. Assumindo que o pico da concentrao no plasma
atingido ao fim de uma hora, Vd da codena 3,0L/Kg, F = 50% e t1/2 para a
codena no plasma 3.0h, complete as seguintes tarefas:
1. Calcular a concentrao mxima no plasma
2. Estabelea uma curva ADME
3. Calcular a concentrao no plasma 2 horas depois da mulher ter tomado
os comprimidos
4. Determine quando a concentrao no pasma da codena ser pequena
demais para ser detectada por espectrometria de massa como um
LOD/LOQ de 1 ppb. Assumir que a amostra de sangue injectada
directamente no instrumento.

4 aula

Qumica Forense

1. Calcular a concentrao mxima no plasma

2. Estabelea uma curva ADME

4 aula

Qumica Forense
3. Calcular a concentrao no plasma 2 horas depois da mulher ter
tomado os comprimidos

4 aula

Qumica Forense
4. Determine quando a concentrao no pasma da codena ser pequena
demais para ser detectada por espectrometria de massa como um
LOD/LOQ de 1 ppb. Assumir que a amostra de sangue injectada
directamente no instrumento.

4 aula

Qumica Forense

METABOLISMO

O objectivo principal do metabolismo a desactivao e eliminao da

substncia xenobitica e em geral quanto mais lipofilico for um composto mais
provvel ser alterado metabolicamente
O metabolismo de drogas ocorre em duas fases. Na fase I o metabolismo
envolve alterao de um grupo funcional da molcula enquanto que na fase II
ocorre conjugao com uma substncia de ocorrncia natural no corpo (uma
substncia endgena).
Algumas vias metablicas no implicam a fase I, converso antes da
conjugao.

4 aula

Qumica Forense
Os processos metablicos podem envolver consequncias impensveis tais
como a criao de metabolitos que so mais txicos do que a molcula me.

4 aula

Qumica Forense
A tabela seguinte apresenta parmetros toxicolgicos de dois
compostos: aspirina e morfina.

4 aula

Qumica Forense
A aspirina com um valor negativo de logP hidroflica e lipofbica comparada
com a morfina anfotrica.
F (biodisponibilidade) definida como a razo da droga que estar disponvel
depois

da

injeco,

comparada

com

aquela

disponvel

depois

da

administrao oral. expresso em percentagem e quanto maior for F, menor

a perda da forma activa da droga para as mudanas que ocorrem no
primeiro passo metablico.
Nenhum valor de F registado para a aspirina pois ela apenas tomada
oralmente e no por via intravenosa. A morfina pode ser tomada de qualquer
um dos modos.

4 aula

Qumica Forense
Os valores de Vd e de ligao a protenas fornece informao acerca da
partio da droga entre o plasma e outros tecidos, quantidades que tambm se
relacionam com o valor de logP o qual mede a lipofilicidade.
No

surpreendentemente,

morfina mais lipofilica tem um

valor de Vd maior e um tempo de
meia-vida

maior

no

plasma

devido sua associao forte

com tecidos lipoflicos de que
resulta o seu retardar no plasma
comparada com a aspirina a qual

rapidamente

cido saliclico.
4 aula

hidrolisada

Qumica Forense

ELIMINAO

Em geral, quanto mais lipofilico for um composto mas provvel estar

sujeito a processos metablicos que podem resultar num aumento da
velocidade de desaparecimento relativamente a uma entidade menos
lipofilica.

fundamental conhecer as vias metablicas e as velocidades de reaco

para determinar o tempo de ingesto.

4 aula

Qumica Forense
Uma
amostra
de
sangue tirada uma
hora aps a ingesto
pode
no
mostrar
nenhuma herona mas
uma razo distinta de
6-MAM e morfina que
pode ser usada para
estimar a quantidade e
tempo de ingesto
inicial.
Se uma droga metabolizada, um decaimento na concentrao do composto me
corresponde a um aumento na concentrao do metabolito.
a representa a concentrao no plasma da herona (t1/2 ~3 min)
b o metabolito 6-monoacetilmorfina (t1/2 ~20 min)
c a morfina (t1/2 ~2,5 hr)
4 aula

Qumica Forense
Os toxicologistas podem considerar tecidos ou fluidos diferentes nos quais
uma droga ou metabolito pode ser encontrado.
A concentrao de uma
droga ou metabolito pode
decair num tecido e
aumentar noutro.

A figura fica ainda complicada com a adio de metabolitos que tambm

podem sofrer partio entre diferentes fluidos e tecidos.
4 aula

Qumica Forense
Via metablica de algumas benzodiazepinas

4 aula

Qumica Forense
Resumo:
A farmacocintica tem um papel importante no desenvolvimento de drogas
ao poder estabelecer a dose apropriada de um frmaco.
Em toxicologia forense, o conhecimento dos parametros farmacocinticos
podem permitir estimar o tempo e dose administrada.
So usadas eq. matemticas para descrever mudanas na concentrao de
uma droga ou outro xenobitico que ocorrem no tempo em diferentes
partes do corpo.
Na ausncia de mais informao, o volume de distribuio e dose pode ser
usado para prever a concentrao no plasma de tal modo que por exemplo,
ensaios de calibrao podem ser preparados num intervalo de
concentrao apropriado.

4 aula

Qumica Forense

4 aula

Qumica Forense

ALGUNS CASOS FAMOSOS DE ENVENENAMENTOS

Bagos de uma erva-moira,

Atropa belladonna. A atropina, a
hiosciamina e a hioscina,
alcalides venenosos podem ser
extrados desta planta.
4 aula

Qumica Forense
Ex: o arsnio pode ser detectado no cabelo e unhas, especialmente em
casos de envenenamento crnico. Como ambos crescem a um ritmo
regular, a deteco pode ajudar a determinar os momentos e o perodo
durante o qual o veneno foi administrado. So precisos 103 dias para que
uma dose de arsnio desaparea da ponta da unha de um polegar.
Explorador americano Charles Hall morreu a 7 de Novembro de 1871 a
bordo do Polaris no decurso de uma expedio ao Plo Norte.
Durante um sculo existiram dvidas quanto s circunstncias da sua
morte teria sido envenenado pelo cientista da expedio Dr. Emil Bessels?
Agosto de 1986, o Professor Chauncey Loomis (Dratmouth College, New
Hampshire) e o patologista Dr. Franklin Paddock exumaram o corpo que estava
enterrado na costa gelada de Thank God Harbor, a cerca de 500 milhas do Polo.
Uma unha foi submetida a anlise por activao de neutres e na ponta o
contedo de arsnio era de 24,6 ppm e na base 76,6 ppm. O solo envolvendo o
corpo continha 22 ppm (a absoro a dar-se ocorreria uniformemente em toda a
4 aula

unha).

Qumica Forense

1962 adolescente ingls de 14 anos admitiu ter assassinado a madrasta e

ter tentado envenenar o seu pai e irmo. Foi preso numa instituio para
criminosos inimputveis por insanidade mental declarado curado e
libertado em 1971.
Passou a trabalhar como assistente de loja numa companhia de manufactura
de lentes fotogrficas. Assassinou vrios colegas. Na fbrica utilizavasse tlio
que ele dava aos colegas em chvenas de caf.
Chamou ateno quando sugeriu equipa de investigao que os sintomas
das vtimas podiam ser atribudos a envenenamento por tlio. Tinha cadastro.
Foi tambm encontrado um dirio com todos os registos dos seus feitos e uma
amostra do produto nas suas roupas.
4 aula

Qumica Forense

1984
Genene Jones ama de crianas em San Antnio,
Texas. Foi responsvel pela morte de mais de 30
crianas. Sentia muita excitao ao ressuscitar
bebs que sofriam de sbitas paragens cardacas
quando lhes injectava a succinilcolina. Esta droga
conhecida como o curare sinttico, relaxa e
paralisa as fibras musculares o que resulta na
incapacidade de respirar.

4 aula

Qumica Forense
Gs Zyklon B usado nos campos de extermnio das SS. Marca registrada de um
pesticida a base de cido ciandrico. Provocava o sufocamento nas cmaras de
gs, era ativado em contato com o ar.
Zyklon B foi desenvolvido inicialmente nos anos 1920 por Fritz Haber, um judeu
alemo que foi obrigado a emigrar em 1934 .

1978
Caso mais recente massacre de
Jones ville. Sob as ordens do
Reverendo Jim Jones, 900 membros
da Igreja do Povo deram Koolaid (uma
bebida com sabor a uva) misturada
com cianeto de potssio aos seus
filhos e os pais formaram filas para
receberem injeces de cianeto.
4 aula

Qumica Forense

Gs dos nervos
1995

membros

da

seita

Aum

Shirikyo libertaram o gs sarin em 3

estaes do metropolitano de Tquio.
O atentado matou 12 pessoas tendo
mais de 5000 pessoas sofrido os seus
efeitos.
Este

gs

age

pelo

bloqueio

da

transmisso de impulsos nervosos

do crebro para o resto do corpo
podendo causar rapidamente a morte.

Classificada pelas Naes Unidas como

arma de destruio macia
4 aula

Qumica Forense

ENVENENAMENTOS POR AGENTES BIOLGICOS

1916, Artur Waite aguardando julgamento
em
Nova Iorque. Foi acusado do
assassnio dos seus sogros atravs da
utilizao de culturas bacterianas de
difteria e gripe, tendo sido executado na
cadeira elctrica em Sing Sing em 1917.
ANTRAZ bacilo que mata o gado e
rebanhos mas pode formar esporos que
sobrevivem em condies secas, durante
pelo menos 40 dias. Por essa razo
surgiram casos fatais entre trabalhadores
do comrcio de couros e ls.

4 aula

1998 - dois homens foram presos em Las Vegas alegadamente por

transportarem um contentor com antraz. Um dos homens j havia sido
condenado em 1995 por receber 3 frascos de cultura de peste bubnica.

Qumica Forense
Em 1978, o jornalista blgaro refugiado, Georgi Markov, foi assassinado
em Londres, presumivelmente pelos Servios Secretos Blgaros, com um
pequeno projctil disparado por uma arma a gs escondida dentro de um
guarda-chuva. O projctil continha ricina ( uma protena presente nas
sementes da mamona (Ricinus communis L.), considerada a mais potente toxina
de origem vegetal) um extracto do leo de ricino de uma toxicidade fatal de
cerca de 2 milionsimos do peso do corpo.

Artur Ford, Inglaterra, desenvolveu uma absesso por uma colega de

trabalho. Roubou da companhia um frasco de cantaridina (extracto de
besouro seco que gozava da falsa reputao de ser afrodisaco) que
adicionou a uma embalagem de gelado. No s a visada, mas tambm
outra colega morreram a seguir a ficarem indispostos e o prprio Ford que
tinha adoecido, teve mais sorte e no chegou a
morrer, Deu-se por culpado foi condenado a 5
4 aula

anos de priso.

Qumica Forense

Alexander Litvinenko
Espio russo que trabalhou ara a KGB e que se tornou
mais tarde dissidente.
Litvinenko acusou o presidente russo Putin de ter sido
envenenado a mando deste, no dia 1 de novembro, de
2006 quando investigava o assassinato de uma jornalista
russa. Morreu passado 3 semanas.

Consequncias do envenenamento: queda de cabelo, garganta inchada,

sistemas
imunolgico
e
nervoso
seriamente
comprometidos.
Contaminado por Polnio-210, um istopo radioactivo altamente txico.
Num avio da BA que transportou Litvinenko (de Moscovo para
Londres) foram encontrados traos de radioactividade, que
representaram risco mnimo para a sade dos passageiros
transportados
4 aula

Qumica Forense

Mtodos espectroscpicos permitem a

determinao das estruturas orgnicas

O que a espectroscopia?

E = h

= c/

Resposta molecular a estimulo radiativo quantizado

Raios-X - d o comprimento e ngulos de ligao
RMN - d uma ideia do esqueleto de carbono da molcula
Infravermelho d uma ideia acerca do tipo de ligaes numa molcula
(grupos funcionais).
Espectrometria de massa d-nos a massa molecular e a composio atmica.
A absoro de radiao electromagntica pelas molculas pode ocorrer
quer por excitao electrnica (UV-Visvel) quer por variaes das
energias vibracionais ou rotacionais (IV), ou ainda por alterao do
estado de spin (nuclear ou electrnico) (RMN ou EPR).
6 aula

Qumica Forense ESPECTRO ELECTROMAGNTICO

kcal mol-1

6 aula

continuao
Qumica
Forense

6 aula

Qumica Forense

ESPECTROSCOPIA DE INFRAVERMELHO (IR)

A espectroscopia de infravermelho (IR) permite determinar grupos funcionais

pois detecta a deformao e o alongamento das ligaes. Particularmente til
na deteo de ligaes no simtricas de grupos funcionais tais como OH, C=O,
NH2, and NO2.

Espectro de IV no mais do que um espectro de absoro. A amostra

exposta radiao infravermelha e o comprimento de onda (cdo) variado
ao longo do espectro (4000-600cm-1).
6 aula

Qumica Forense
Sempre que a energia correspondente a um determinado cdo absorvida, a
intensidade da radiao que atinge o detector decresce momentaneamente e isto
registado num espectro.
O espectro de infravermelho usualmente registado usando uma medida de
frequncia chamada numero de onda (
, cm-1) que o inverso do cdo ()
) em cm,
para dar uma escala mais conveniente.
c
E = h
= h __

c
since = __

1
= _

h = cont. Planck, = frequncia,, = comprimento de onda electromagntica;

c = velocidade da luz no vcuo,
A energia necessria para excitar por vibrao uma ligao pode ser expressa
pelo cdo ou frequncia . Cdo e frequncia so apenas dois modos de medir a
mesma coisa.
Uma ligao mais forte precisa de mais energia para alongar e isso pode ser visto
na equao; maior E significa maior numero de onda (cm-1) e menor cdo (cm).

6 aula

Qumica Forense
Importante:
A frequncia de uma ligao deve aumentar com o aumento da fora de ligao
Logo, para o mesmo tipo de vibrao, a frequncia de vibrao para as
ligaes simples, duplas e triplas aumenta neste sentido:

da mesma maneira

6 aula

Qumica Forense
As ligaes podem vibrar de seis modos: estiramento simtrico, estiramento
assimtrico, tesoura, toro (twist), balano (wag) e rotao,

6 aula

Qumica Forense

6 aula

Qumica Forense

%T = 100 - %A

ALCANO

Regio Fingerprint

6 aula

Qumica Forense

ALCENO

6 aula

10

Qumica Forense

LCOOL

6 aula

11

Qumica Forense

CETONA

6 aula

12

Qumica Forense

cido carboxlico

Duas bandas importantes: O-H = 2500-3300 cm-1, C=O = 1710 cm-1

6 aula

13

Qumica Forense

N-H
6 aula

Aminas

estiramento:

3300-3500 cm-1

Uma banda amina primria, duas bandas amina secundria

14

Qumica Forense

6 aula

15

Qumica Forense

RESSONNCIA MAGNTICA NUCLEAR

O RMN difere do IV e do UV nos seguintes aspectos:

1) Estuda ncleos no modos vibracionais das molculas
2) Requer um campo magntico assim como uma fonte de
radiaco electromagntica e
3) Usa radiaco de baixa frequncia (radiofrequncia)
O RMN de proto permite-nos detectar ncleos
atmicos de hidrognio e dizer em que tipo de
ambiente eles esto na molcula.
O RMN de carbono permite-nos detectar carbonos
diferentes na molcula.

6 aula

Qumica Forense

O princpio do RMN
Muitos tomos (por ex. 1H, 13C, 15N, 31P) comportam-se com se o ncleo
carregado positivamente estivesse a rodar sobre um eixo.
Uma carga a rodar cria um campo magntico.
Quando aplicado sobre um campo magntico externo, o ncleo magntico
tenta alinhar-se (tal como a agulha de uma bssola quando sujeita ao campo
magntico da terra).
Como o ncleo roda tem um momento angular, ento o efeito exercido pelo
campo externo num movimento circular chamado precesso (tal como um
pio no campo gravitacional da Terra).
A velocidade de precesso proporcional ao campo magntico externo e
fora do magnete nuclear.
Onde:
o a velocidade de precesso em hertz,
a fora do magnete nuclear (the magnetogyric ratio), e
Bo a fora do campo magntico externo.
6 aula

Qumica Forense

O que a E em RMN?
O ncleo comporta-se como pequenos
magnetes (orientao aleatria).
Num campo magntico H0, estes organizam-se a favor
(, menor energia) ou contra (, maior energia) o
campo.

E = h0 frequncia de ressonncia:
A frequncia que combina exactamente com a
diferena de energia.

6 aula

Qumica Forense

Na ausncia de um campo magntico

Na presena de um campo magntico

Razo : ~ 1:1
6 aula

Qumica Forense

5
6 aula

Qumica Forense

Tendo em ateno a equao

E2-E1 = h

A diferena de energia envolvida entre dois estados de spin

do ncleo muito pequena e na ordem de 10-5 Kcal/mol.

Todos os ncleos atmicos de qualquer elemento do origem ao

efeito de ressonncia?
Muitos ncleos atmicos comportam-se como se estivessem a
rodar. De facto, qualquer ncleo atmico que possua quer, massa
impar ou n atmico impar ou ambos tem um momento angular de
spin quantizado e um momento magntico.
Ex:
O n de nveis de energia disponveis
2
13
14
19
N
F
H
C
para um ncleo de spin I dado por
1
6
7
9
2I + 1
No caso do 1H ou 13C, o n quntico de
spin I = 1/2

6 aula

Qumica Forense

7
6 aula

Qumica Forense
Porque que os protes numa molcula aparecem em zonas distintas do
espectro?

Porque a densidade
electrnica volta do
ncleo do proto afecta o
campo que o ncleo sente.

H fortemente blindados campo alto

H fracamente blindados campo baixo
6 aula

Qumica Forense
Blindagem diamagntica; depende da densidade electrnica na vizinhana

Causa blidagem, i.e.,

Picos movem-se para
a direita
Mudanas na distribuio de electres volta de um ncleo afecta:
O campo magntico que o ncleo sente
A frequncia qual um ncleo ressoa
A qumica da molcula nesse tomo
A variao da frequncia conhecida como desvio qumico. O smbolo
9
6 aula

Qumica Forense
Considerando H+: sem e-, sem blindagem, pico mais distante para a
esquerda.
Mas:

H
H C H

Os electres causam blindagem: Pico movese campo alto (para a direita).

H
Quando adicionamos um grupo electroatractor:

+
ex., CH3

Cl,

causa desblindagem
(para a esquerda).

O desvio qumico d uma indicao do

ambiente electrnico volta de cada H.
6 aula

Qumica Forense

Porque que o RMN a tcnica espectroscpica mais

importante?
Desvio qumico, (tipo de proto)
Integrao (n de protes)
Multiplicidade (vizinhana)

6 aula

Qumica Forense

O Desvio Qumico

A posio do pico relativamente a um padro interno.

O mais comum o
Tetrametilsilano: (CH3)4Si ou TMS, o ponto zero
do espectro.
O desvio qumico, , em partes por milho (p.p.m.) de um determinado ncleo
numa amostra definido em termos de frequncia de ressonncia como:

independente do equipamento (90, 300 MHz, etc.)

TMS (Si(CH3)4, fortemente blindado; TMS = 0,0 ppm
12
6 aula

Qumica Forense

Aplicao do
O mais desblindado de todos

CH3CH2Br

2 H diferentes;
2 sinais
BrCH

2CH2Br

O mais desblindado de todos

CH3CHBr2

QOG
6 aula

2 H diferentes;
2 sinais

H com
vizinhanas
iguais; 1 sinal

13

Qumica Forense

1-2

2+

3-4

Varivel
6 aula

14

Qumica Forense

INTEGRAO
Integrao

rea sobre o pico = n protes

associados.
Clculo-computacional automtico.

(CH3)3CCH2OH

9:2:1

CH3OCH2CH2OCH3
6 aula

3:2
15

Qumica Forense

Acoplamento spin-spin
Regra n+1
(multiplicidade
de banda
espectral)

Constante de
acoplamento
J (Hz)

n hidrognios adjacentes equivalentes (i.e. em carbonos

vizinhos) do origem a (n+1) picos.
ex., dupleto (d), tripleto (t), quarteto (q), quinteto (quin), etc.
16
6 aula

Qumica Forense

Porqu ?
d

Cl

Ha Hbd

C O

CH2

CH3

Cl

OCH2CH3

Num
campo
magntico,
todos os Hs existem como
H:H ~ 1:1.

Ha v dois tipos de Hb vizinhos (atravs da ligao): Hb

e Hb
Hb refora o H0 volta de Ha: desblindagem
Hb enfraquece o H0 volta de Ha: blindagem
Resultado: duas linhas (de razo 1:1, d) em vez de
uma. A distncia entre elas em Hz a constante de
acoplamento J.
6 aula

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dupleto (1:1)

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18

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Mesmo valor

Ha e Hb esto separados cada um com uma J de 7 Hz.

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19

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Constante

de acoplamento

J independente do campo: A mesma a 90, 300, etc. MHz

Gama: 1-18 Hz.

Para mais do que um vizinho: o H v todas as

combinaes , dos vizinhos. Assim, dois Hs vizinhos:

Dois Hs vizinhos:
, , , 1:2:1 tripleto
Trs Hs vizinhos:

, , , , , , ,
1:3:3:1 quarteto
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tringulo de Pascal

20

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tripleto
1:2:1
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21

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quarteto
1:3:3:1

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22

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Resumo
1. Protes equivalentes no mostram desdobramento
(splitting).
2. J independente do H0.

3. Hs no adjacentes J ~ 0.

H
X

4. Regra (N+1). Razes do tringulo de Pascal.

5. O splitting mtuo. Se h um pico de
separao, ter que haver (no mnimo) outra.

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25

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27

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Protes pontes H /Acdicos:

-OH, -SH, -NH

varivel (dependente
concentrao e humidade) e sem
acoplamento!
Porqu? Rpida permuta de H+
(H e H trocam posies)
hidrognios desacoplados.

O acoplamento restituido com arrefecimento, porque a permuta

de protes gelada (na escala de tempo do RMN).

CH3OH
O pico OH muitas vezes
largo; desaparece com a
adio amostra de D2O
(H/D permuta).
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Varivel

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The benzene ring current causes

large shifts for aromatic protons
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Serologia

Tipos de sangue: classificao do sangue ABO

O sangue uma mistura complexa de clulas, fragmentos de clulas
(plaquetas), protenas e ies inorgnicos suspensos ou dissolvidos num
liquido

amarelado

plido

chamado

plasma.

Os

componentes

mais

importantes do ponto de vista da classificao so s clulas vermelhas

(RBCs), as clulas responsveis pelo transporte de oxignio dos pulmes
para as clulas atravs do corpo. A cor vermelha devido hemoglobina
com o Fe(III).
A superfcie das clulas vermelhas coberta com uma variedade
muito grande de molculas.
Sr. V.; 323, 415, 278, 199, 301, 894, 111, 300, 793, 232, 109
Sr. W.: 323, 489, 278, 199, 301, 894, 771, 300, 443, 232, 109
Cada nmero representa uma molcula diferente.
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As RBCs diferem entre indivduos e sempre que um indivduo recebe um
sangue diferente o seu sistema imunitrio comea a trabalhar para destruir
estes invasores.
Estas molculas que atacam so os anticorpos. Para cada molcula
especifica no familiar para o sistema imunitrio de uma pessoa molculas
conhecidas como antigenes o sistema imunitrio produz um anticorpo
especifico. Cada anticorpo liga-se a um antigene especfico numa interao
tipo Chave/fechadura

A natureza qumica dos antigenes responsveis pelos tipos de

sangue que os classifica nos grupo ABO foram pela primeira
vez descobertos em 1953 pelos bioqumicos ingleses, Walter
Morgan (1900-2003) e Winifred Watkins (1924-2003).

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Todos os 3 antigenes tm estruturas similares: uma molcula simples de
glucose (Glu) ligada a uma molcula de galactose (Gal), uma molcula de
N-acetilglucosamina (Nag), outra molcula de galactose e uma molcula de
fructose (Fru)
Nesta conformao a estrutura
-cauda lipidica-Glu-Gal-Nag-Gal-Fru actua como antigen O
Se uma molcula da Nag adicionada ao terminal galactose a estrutura actua
como antigen A. Se uma molcula de galactose adicionado ao terminal Gal e
actua como um antigen B

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Uma pessoa classificada com um sangue tipo A significa que a superfcie
das suas clulas RBCs tm o antigen A. Tal pessoa tm tambm anticorpos
que no reconhecem e por isso atacam clulas do tipo B. Eles so os
anticorpos anti-B.
Se a uma pessoa com sangue A
dado sangue tipo B o seu sistema
imunitrio no reconhece as
clulas tipo B e os seus anticorpos
anti-B comeam a atacar o sangue
da transfuso.

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A tabela seguinte indica qual o tipo de sangue que uma pessoa pode
doar ou receber.

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O processo fsico de testar os tipos de sangue para ABO muito simples e
necessita de apenas dois reagentes, serum anti-A e serum anti-B. A amostra a
ser analisada testada com cada um dos reagentes separadamente uma de
cada vez.
A tabela seguinte apresenta os resultados esperados e qual a informao que
fornece:
Se o teste positivo (produz
aglutinao) com o serum anti-A mas
negativo (nenhuma aglutinao) com o
serum anti-B, o sangue considerado
de tipo A.
Um resultado negativo com o serum
anti-A e um resultado positivo com o
serum anti-B, indica que o sangue de
tipo B.
Finalmente resultados positivos e
negativos com ambos os reagentes
indicam a presena do tipo AB ou O
12 aula
respectivamente.

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Caracterizao de manchas de sangue

A caracterizao de uma mancha de sangue refere-se ao processo de

identificao de uma mancha como, sangue humano ou no, e depois no
reconhecimento de outras propriedades essenciais do sangue tal como o
grupo sanguneo e protenas polimrficas e isoenzimas que possam estar
presentes.
O primeiro passo verificar se uma mancha aparente de sangue sangue e
no tinta vermelha, ketchup ou outro material.
Primeiro teste foi desenvolvido em 1904 por Oskar e
Rudolf Adler. Fazia uso da benzidina (p-diaminodifenilo).
Este teste de benzidina baseava-se no facto da hemoglobina do sangue se
comportar como se fosse uma enzima peroxidase. As peroxidases so
enzimas que aumentam a eficincia do perxido de hidrognio na oxidao
de certas substncias tais como fenis e aminas aromticas.
Quando benzidina e H2O2 adicionado ao sangue ocorre uma reaco de
oxidao/reduo na qual a benzidina convertida a um produto
12 aula polimrico com cor azul-esverdeada conhecido como corante diazo.

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Teste de Kastle-Meyer. feito misturando hidrxido de potssio,
fenoftaleina e p de zinco. Quando o H2O2 e o zinco so adicionados ao
sangue catalisam a converso de fenoftaleina a uma configurao rosa
profundo.
A fenoftaleina reduzida por dois electres (do zinco) fenoftalin que fica
dissolvida na soluo alcalina. A cor rosa caracterstica da fenoftaleina
passa a amarelo claro/incolor. esta forma que est presente nos teste de
Kastle-Meyer. Para dar novamente a cor rosa tem que haver uma oxidao
da fenoftalin o que acontece na reaco do perxido de hidrognio com
hemoglobina.
HOOH + Fe3+[heme] Fe4+=O[heme] + OH + H+

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Outro teste presuntivo para manchas de sangue envolve o uso de Hemastix
(produto Bayer)
Hemastix so tiras de celulose que contm uma mistura de o-toluidina (2metilanilina) e perxido de hidrognio. So fceis de usar porque apenas
se mergulha a tira na amostra a ser testada. Se o sangue est presente, a
hemoglobina cataliza a converso de o-toluidina a um produto esverdeado.
A intensidade do verde pode dar uma indicao da concentrao de sangue
na amostra.

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Hemident Presumptive Blood ID Kit
Leucomalachite green

Contem: <1% Leucomalachite green (mpola esq)

3% H2O2 (mpola dir)
The reagents are capable of identifying
down to one part per million of blood

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Composto orgnico usado

como corante

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Teste do luminol (5-amino-2,3-dihidro-1,4-ftalazinediona)
Desenvolvido em 1937 pelo criminologista alemo, Walter Specht.
Quando tratado com H2O2 na presena de sangue, um dos anis do luminol
abre, libertando azoto gasoso e produzindo um composto conhecido como
3-aminonaflato num estado excitado (forma indicada com um *). Aps
breves momentos o 3-APA* d um foto com um c.d.o. de cerca de 425
nanometros que corresponde a uma luz azul-violeta; fluoresce.

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Experimental: O reagente de luminol pode ser feito dissolvendo 5 gramas
de carbonato de sdio e 0.1g de luminol em 100 militros de gua destilada.
Mesmo antes de se usar adiciona-se 0.7g de perborato de sdio soluo
de carbonato de sdio/luminol. O teste feito numa cmara escura de tal
modo que a fluorescncia produzida pode facilmente ser vista. Primeiro a
amostra a ser testada coberta com papel de filtro e depois feito o spray
com uma soluo de lixvia caseira. A soluo de luminol depois
adicionada imediatamente em spray por cima do papel de filtro ensopado
em lixvia. Se o sangue est presente ele fluoresce com uma cor azulvioleta.
um teste muito sensvel que tem sido usado em amostras muito diludas.
D teste positivo mesmo com amostras com alguns anos. Muitas vezes
usado quando outros testes presuntivos no do positivo.

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A quimica por detrs do luminol:

O luminol tem primeiro que ser activado com um oxidante. Usualmente

uma soluo de perxido de hidrognio e um sal de hidrxido (base). Na
presena de um catalisador tal como um composto de ferro, o H2O2
decompoem-se em oxignio e gua:
2 H2O2 O2 + 2 H2O
Num laboratrio o catalisador usado o ferrocianeto de potssio.
Do ponto de vista forense, na deteco de sangue, o catalisador o ferro
presente na hemoglobina.
Quando o luminol reage com a base formado um dianio. O oxignio
produzido atravs do H2O2 reage com o dianio do luminol. O produto
desta reaco um dianio orgnico muito instvel e decompem-se
imediatamente com perda de azoto para dar o acido 3-aminoftalico com
electres num estado excitado. Assim que acontece o relaxamento ao
estado fundamental o excesso de energia libertado como um foto
visvel como uma luz azul.
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NH2 O

NH2 O

NH2 O
NH
NH

2OH

N
N

N
N
O

O
Luminol

Dianio

Dianio

Reage com O2 para

produzir um dianio instvel
NH2 O

NH2 O
O
O

+ h

O
Dianio no
estado fundamental (S0)

NH2 O
O
O

O
Dianio singuleto (S1)
Estado excitado

O
O

O
Dianio tripleto (T1)
Estado excitado

http://www.youtube.com/watch?v=EdBuzBX3dxQ
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+ N2

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Teste de Takayama e Teste de Teichmann
Em ambos os testes a adio de um reagente ao sangue resulta na
formao de cristais.
No teste de Teichmann o reagente uma mistura de cido actico glacial e
cloreto de sdio. O reagente provoca a quebra da molcula de hemoglobina
produzindo cristais acastanhados de puro hemin que tm um brilho violeta
quase preto. (Hemin a forma de heme que contem o io Fe3+).
No teste de Takayama piridina adicionado ao sangue, causando a
reduo da hemoglobina a um complexo de piridina-hemoglobina com uma
cor caracterstica rosa-salmo. Em ambos os testes o cristal colorido pode
ser observado ao microscpio.
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ltima fase na deteco de um vestgios como sangue classific-lo com:
humano ou animal
O teste usado chamado de teste precipitina. baseado no principio do
antigene-anticorpo. Quando uma amostra de sangue colocada com
anticorpos contra protenas humanas forma-se precipitina se a amostra de
sangue humano. Este teste realizado com serum de coelhos o qual tem
anticorpos os quais destroem o sangue humano quando adicionado ao teste.
Assim se ocorre precipitao o sangue de origem humana.
Para ler mais: http://www.ehow.com/about_6545261_forensics-history-bloodanalyzing.html#ixzz2TS7YJ2te
Por fim e quando necessrio do ponto de vista forense faz-se a anlise do DNA

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