FITORREMEDIACIN POR

BIOTECNOLOGA

Jess Blanco Piar

Nubia Arely Gonzlez Rivero

Biotecnologa Vegetal

David Israel Lucero Ferrer

3 Grado en Bioqumica

Biotecnologa Vegetal

Grado en Bioqumica
NDICE

Introduccin

Ventajas y limitaciones

Tipos de fitorremediacin

Fitorremediacin de herbicidas

Fitorremediacin de explosivos txicos

Fitorremediacin de metales pesados

INTRODUCCIN
Por siglos, la industria, la minera, la agricultura, el desecho de residuos, entre muchas actividades
realizadas por el hombre, han ido contaminando al planeta dando como resultado altas
concentraciones de contaminantes orgnicos as como de metales pesados, sobre todo en los pases
desarrollados. Adems de los efectos negativos que tienen estos contaminantes sobre los ecosistemas
y recursos naturales, representan un gran riesgo para la salud humana. Su introduccin a nuestro
organismo puede llevarse a cabo a travs de los productos agrcolas o ganaderos, su lixiviacin en el
agua potable o en la atmsfera (Peuke y Rennenberg, 2005).
Las tcnicas tradicionales de remediacin del suelo contaminado involucran prcticas convencionales
de ingeniera civil utilizando procesos fsicos, qumicos y trmicos cuyo fin principalmente es remover
fsicamente el suelo del sitio contaminado o bien minimizar el riesgo de exposicin. Estas tcnicas se
clasifican en tres grupos:
A. Contencin: incluye tcnicas de cobertura o utilizacin de barreras verticales u horizontales
manteniendo el material contaminado, de tal manera que no entra en contacto con personas ni
con el medio ambiente
B. Solidificacin y estabilizacin: es el grupo de procesos en los que se administran agentes de
tratamiento al material contaminado con el fin de obtener residuos slidos, reducir la
solubilidad del contaminante, limitar el contacto entre fluidos y contaminantes o disminuir el
rea de contaminacin expuesta.
C. Separacin y concentracin: dentro de esta tcnica se encuentra el lavado de suelo, enjuague in
situ y prometalurgia.
Las tcnicas convencionales presentan varias desventajas como un alto costo, un elevado consumo de
energa, destruccin del sitio contaminado y problemas de logstica (Serrano, 2006).
La fitorremediacin es una tecnologa biolgica emergente que utiliza plantas y los microorganismos
asociados a la rizsfera, para remover, transformar o contener sustancias contaminantes localizadas en

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suelos, sedimentos, acuferos, cuerpos de agua e incluso de la atmsfera. Los estudios de

fitorremediacin pueden clasificarse en dos grandes grupos: la biorremediacin de sustancias orgnicas
recalcitrantes o peligrosa, donde el principal objetivo es degradar los contaminantes hasta obtener un
producto menos txico. Los contaminantes orgnicos ms estudiados son los contaminantes derivados
del petrleo (hidrocarburos poliaromticos) y los explosivos peligrosos como el TNT. La otra gran rea
de investigacin es la remocin de sustancias txicas elementales, grupo en el que estn comprendidos
los metales pesados y los elementos radioactivos (Weiss et al, 2006).
VENTAJAS Y LIMITACIONES
La fitorremediacin presenta diversas ventajas en comparacin con los mtodos fsico-qumicos
convencionales:

Es una tecnologa agradable estticamente y respetuosa con el medio ambiente

Es barata (entre un 50-80% del coste de los mtodos actuales, o incluso menos). En la mayora
de los casos, los costes de ingeniera son mnimos y esta tecnologa puede aplicarse tanto in situ
como ex situ

Es muy til para el tratamiento de un amplio rango de contaminantes medioambientales

Supone una alteracin mnima del medio ambiente.

Presenta la posibilidad de recuperar y reutilizar metales valiosos tras los procesos de recogida
de la siembra.

Por otra parte, la fitorremediacin presenta ciertas limitaciones:

Solo es efectiva en sitios en los que hay contaminacin superficial (menos de 5 metros de
profundidad).

Es un proceso lento y las condiciones climticas y/o estacionales pueden interferir o inhibir el
crecimiento de las plantas.

Los compuestos orgnicos e inorgnicos pueden ser txicos para las plantas, y por tanto su
supervivencia estar condicionada por esta toxicidad.

Las plantas que absorben contaminantes pueden presentar un riesgo al poder transferir dichos
contaminantes a la cadena alimenticia.

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TIPOS DE FITORREMEDIACIN

Dependiendo de la tcnica aplicada de fitorremediacin se puede subdividir en muchos tipos:

1. Fitoextraccin: conocida tambin como fitoacumulacin, se refiere a un proceso en el

que las plantas degradan contaminantes y los adsorben dentro de sus tejidos. Despus
de la adsorcin, las plantas pueden ser removidas de sitio y desecharse o incinerarse.
Diferentes tipos de plantas tienen diferente capacidad de fitoextraccin y las plantas
con la mayor eficacia se eligen por lo general. Este proceso se utiliza sobre todo para el
tratamiento de contaminantes metlicos en el suelo.

2. Fitotransformacin: tambin conocido como fitodegradacin, este proceso implica la

transformacin o la degradacin de los contaminantes como resultado de varios
procesos metablicos de las plantas, por lo que es un proceso mucho ms lento que la
fitoextraccin. Las sustancias naturales liberadas por las races de las plantas (azcar,
alcohol y cidos) contienen carbono orgnico, del cual se alimentan los
microorganismos del suelo, intensificando su actividad de biodegradacin en la
rizosfera.

Por ejemplo, los lamos absorben 113 litros de agua por da, en zonas agrcolas, los lamos plantados a
lo largo de cursos de agua reducen el excedente de fertilizantes y herbicidas que va a parar a los cursos
de agua y al agua subterrnea.

3. Rizofiltracin: en este proceso los contaminantes son adsorbidos y depositados, no en

los tejidos sino que en la raz, o ms bien en la rizosfera de plantas. Esta tcnica se
emplea especficamente para la eliminacin de residuos a partir de fuentes de agua
contaminada, ya sean superficiales o profundas. Las plantas se cultivan en invernaderos
con las races en agua, en vez de tierra. Este mecanismo, al igual que la fitoextraccin,
son los ms importantes ya que se ocupan de la descontaminacin de suelos por
metales pesados como el zinc, plomo, nquel, cromo, etc. Los metales pesados
constituyen uno de los problemas de mayor dificultad para solucionar debido a su
naturaleza inorgnica que no los hace susceptibles a biodegradarse.

Cuando las plantas tienen un sistema de races bien desarrollado, se recoge agua contaminada de un
vertedero, se transporta hasta el lugar donde estn las plantas y se colocan las plantas en esta agua. Las
races absorben el agua junto con los contaminantes. A medida que las races se saturan de
contaminantes, se cortan y eliminan. Adems de extraer metales del agua, la rizofiltracin puede ser

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til para descargas industriales, escorrenta de tierras agrcolas, drenaje de minas de cidos y
contaminantes radioactivos. Por ejemplo, las semillas de girasol dieron resultado para retirar
contaminantes radioactivos del agua de una laguna en una prueba realizada en Chernobyl (Ucrania).

4. Fitoestabilizacin: este concepto implica la inmovilizacin de los contaminantes

despus de la absorcin y la adsorcin de la misma por races de las plantas y,
finalmente, la precipitacin del contaminante en la raz de modo que no migre desde el
suelo al aire u otras fuentes

5. Fitovolatilizacin: los contaminantes son absorbidos por las plantas, experimentan

muchos cambios y finalmente se volatilizan por la superficie de la hoja durante el
proceso de transpiracin de las plantas a travs de los estomas. Algunos de los
contaminantes pueden llegar hasta las hojas y evaporarse o volatilizarse en la
atmsfera. Los lamos, por ejemplo, volatilizan el 90% del tricloroetileno que
absorben.

6. Fitoestimulacin: la rizosfera, especficamente, las races de las plantas, induce a la

poblacin microbiana cerca del sistema de races la descomposicin de los
contaminantes. Este proceso tambin se conoce como la degradacin de la rizosfera.

EL PAPEL DE LA BIOTECNOLOGA EN LA FITORREMEDIACIN

Hemos comentado los diferentes tipos de fitorremediacin que existen, pero el principal problema que
se produce es que las plantas, al tratarse de organismos auttrofos, no requieren utilizar compuestos
orgnicos como fuente de C, N y energa. Esto se traduce en que los compuestos xenobiticos suelen
ser nicamente compartimentalizados y rara vez son degradados o mineralizados. Aunque algunas
plantas de forma natural tienen la habilidad inherente de fitodegradar algunos contaminantes, de igual
modo carecen de las rutas catablicas completas necesarias para degradarlos por completo, en
comparacin con microorganismos que utilizan estos xenobiticos como fuente de energa. El objetivo
por tanto es transferir genes de organismos alejados, de forma que los xenobiticos puedan ser
fitodegradados hasta metabolitos inocuos o sean completamente mineralizados hasta CO2, nitrato,
NH3, Cl, etc. El desarrollo de plantas transgnicas, en las que se incorporan etapas crticas del
metabolismo de estos compuestos, puede conseguir un gran aumento de su capacidad de
fitorremediacin (Eapen et al, 2007).

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FITORREMEDIACIN DE HERBICIDAS
En las plantas superiores, los herbicidas pueden ser metabolizados a travs de varios procesos
bioqumicos. Estos procesos pueden ser agrupados en tres fases principales: conversin (fase I),
conjugacin (fase II) , y compartimentacin (fase III). Dos sistemas enzimticos juegan un papel
importante en el aumento de la degradacin de los herbicidas:citocromo P450 monooxigenasa (P450s)
y glutatin S-transferasa (GST).
En la fase I, los productos qumicos hidrofbicos se convierten en metabolitos menos hidrfobos por el
citocromo P450s. En las plantas, la mayora de las reacciones catalizadas por P450 son reacciones de
hidroxilacin, sin embargo, tambin se producen desalquilacin oxidativa y de epoxidacin. Este
sistema enzimtico, que se encuentra en los microsomas, se compone de varias isoformas del
citocromo P450 y un NADPH-citocromo P450 oxidoreductasa. La conversin de qumicos hidrofbicos
normalmente produce metabolitos menos txicos, as mismo puede activar algunos pro-herbicidas. En
la fase II los pesticidas o los metabolitos de la fase I son conjugados directamente con glutatin,
azcares o aminocidos para producir compuestos hidrosolubles. Adicionalmente, la UDP-glucosa
transferasa y el GST actan sobre compuestos hidrofbicos, electroflicos, compuestos citotxicos, as
como con los metabolitos de la fase I.Por ltimo, en la fase III, las bombas dependientes de ATP
reconocen los conjugados y los transfieren a travs de las membranas. Estos metabolitos conjugados
son depositados en vacuolas, transferidos a apoplastos o incorporados en la pared celular junto con
fragmentos de pectina, lignina, hemicelulosa y celulosa (Kawahigashi, 2009).
La tolerancia a herbicidas fue uno de los primeros rasgos modificados genticamente, y se ha generado
un rpido desarrollo en la produccin de plantas transgnicas resistentes a herbicidas utilizado genes
diana que abarcan desde bacterias hasta mamferos. Estas plantas pueden ser utilizadas para la
fitorremediacin de residuos de herbicidas en el ambiente. Para que sean capaces de poder ejercer su
accin fitorremediadora es necesario que la planta contenga genes involucrados en las tres fases del
metabolismo herbicida descritas anteriormente.
La expresin de distintos genes del citocromo P450 de mamferos en plantas de patatas y arroz han
sido utilizados para detoxificar suelos contaminados de herbicidas. La atrazina, inhibidor de la
fotosntesis, y el metolaclor, inhibidor de la sntesis de cadenas largas de cidos grasos en plantas, son
herbicidas ampliamente distribuidos por el mundo. En estudios a gran escala, las plantas de arroz a las
cuales se le introdujo los genes del citocromo P450 CYP1A1, CYP2B6, y CYP2C19 mostraron una
actividad fitorremediadora frente a estos herbicidas (Kawahigashi, 2005).
Por otro lado, se sabe que la GSTs cataliza el ataque nucleoflico por el tomo de sulfuro del glutatin
en el grupo electroflico de una variedad de sustratos hidrofbicos, incluyendo herbicidas. La
sobreexpresin de genes GST refuerza el potencial de fitorremediacin de herbicidas. La introduccin
de la g-glutatin sintetasa en plantas de lamo conduce a concentraciones de glutation muy elevadas,
mostrando tolerancia hacia dos herbicidas cloroacetanilidas. El GSTs del maz se ha conocido como
detoxificante de herbicidas como atrazina y cloroacetanilidas; el tabaco transgnico que expresa este

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gen ha demostrado tener efecto fitorremediador contra alaclor, una cloroacetanilida (Karavangeli,
2005).

FITORREMEDIACIN DE EXPLOSIVOS TXICOS

La manufacturacin a gran escala y el uso masivo de explosivos ha contribuido a que exista un gran
nivel de contaminacin por los compuestos que forman parte de estos explosivos. Este tipo de
sustancias pueden hallarse en campos de tiro militares, zonas o ex-zonas de guerra y lgicamente en las
inmediaciones de reas utilizadas para la fabricacin y el uso de explosivos.
http://granadaimedia.com/wp-content/uploads/2013/03/fargue1.jpg. Debido a su estructura qumica, los
explosivos son recalcitrantes a la oxigenacin y a la hidrlisis tanto qumica como biolgica. Por tanto,
son estables en el medio ambiente y la remediacin de suelos y aguas contaminadas por estas
sustancias es muy complicada, lo que se ve agravado por la gran toxicidad de los explosivos.
En 1997, el hexahidro-1, 3, 5-trinitro-1, 3, 5-triazina (RDX Royal Demolition Explosive) se descubri en
el agua subterrnea bajo un campo de entrenamiento en la reserva militar de Massachusetts en Cabo
Cod (USA). Esta rea contena un acufero que proporciona agua potable a casi medio milln de
personas, lo que condujo a la agencia de proteccin medioambiental de los US (EPA) a detener toda la
actividad de entrenamiento con fuego real en este lugar. A pesar de numerosos intentos en forma de
proyectos de remediacin siguen apareciendo informes de que el RDX sigue siendo detectable en el
suelo y en el agua subterrnea de la reserva.
Las estrategias de remediacin actuales incluyen la eliminacin directa de suelo, el composting, la
incineracin o el cubrimiento del suelo. Estos mtodos son dainos para el medio ambiente per se y
adems resultan insuficientes para la magnitud del problema, adems de sustancialmente caros. En
este contexto la fitorremediacin podra constituir una alternativa menos costosa y ms efectiva,
adems de respetuosa para el medio ambiente. Al poseer redes de races muy extensas, las plantas
pueden penetrar eficientemente en el suelo contaminado y retirar componentes del agua subterrnea.
Adems las plantas, como organismos mayormente ssiles, han desarrollado sistemas complejos de
detoxificacin para tratar de eliminar una gran variedad de productos qumicos txicos. La plasticidad
de estos sistemas puede permitir a las plantas detoxificar sustancias sintticas relativamente recientes
como los explosivos. [Problemas de las plantas WT].
En este sentido, la mayor parte de la investigacin biotecnolgica se centra en disear plantas
transgnicas que contengan genes bacterianos que confieran la habilidad de detoxificar explosivos.
TIPOS DE EXPLOSIVOS
Existen 3 grupos principales de explosivos: steres de nitrato, nitroaromticos y nitraminas.
STERES DE NITRATO
Se trata de steres de cido ntrico que contienen normalmente grupos O-nitro. Los principales steres
de nitrato son el gliceroltrinitrato (nitroglicerina, GTN) y el pentaeritrioltetranitrato (PETN). A bajos

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niveles, ambos se utilizan clnicamente como vasodilatadores (explicar ruta?), y aunque dosis ms altas
pueden causar sntomas como dolores de cabeza y convulsiones, estos compuestos parecen ser
relativamente no txicos.

NITROAROMTICOS
Los explosivos nitroaromticos contienen un anillo aromtico con varios grupos nitro. El ms conocido
y utilizado es el 2,4,6-trinitrotolueno (TNT), que presenta tres grupos nitro. Estos grupos atraen a los
electrones del anillo aromtico, dificultando el ataque electroflico del anillo, por lo que el TNT es
especialmente recalcitrante a la degradacin por parte de las oxigenasas microbianas. Adems, el TNT
se mantiene fuertemente unido a la fraccin hmica del suelo, eliminando su biodisponibilidad.
Sustancias hmicas, que se encuentran en todos los ambientes terrestres y acuticos, y pueden
considerarse como un grupo de sustancias orgnicas heterogneas constituidas por un conjunto de
molculas altamente polimerizadas, de peso molecular relativamente alto y con un color entre amarillo y
negro. Estas sustancias amorfas y con propiedades coloidales e hidroflicas muy marcadas, estn
constituidas principalmente por C, H, O y N. Contienen estructuras moleculares alifticas y aromticas y
muestran alta capacidad de intercambio catinico as como gran cantidad de grupos acdicos (carboxlicos y
fenlicos). Los nitroaromticos se ha observado que son txicos para todos los organismos para los que
se han probado, causando anemia y dao heptico en mamferos y clorosis y retraso del crecimiento en
plantas. La EPA cataloga al TNT como un potencial carcingeno humano.
NITROAMINAS
Contienen grupos N-nitro. El ms importante es el RDX, que suele hallarse junto al TNT en artillera,
minas terrestres y en el explosivo plstico C4. El octahidro-1,3,5,7-tetranitro-1,3,5,7-tetrazocina (HMXabreviado de Her Majestys Explosive) es tambin muy utilizado en armas anti-tanques. El RDX provoca
convulsiones en humanos y otros mamferos y su diana es el SNC. La EPA lo clasifica como un posible
carcingeno humano.
METABOLISMO DE EXPLOSIVOS EN PLANTAS
Debido a la exposicin de las plantas a un gran nmero de alelo qumicos naturales y compuestos
xenobiticos a travs de la raz, estas han desarrollado diversos mecanismos de detoxificacin y se ha
visto que tienen la capacidad de metabolizar distintos compuestos orgnicos. En particular, los
explosivos con grupos nitro- son absorbidos eficientemente y se metabolizan dentro de los tejidos de la
planta. Mediante la deteccin de metabolitos de oxidacin y reduccin, as como de productos de largo
peso molecular, se ha visto que las plantas metabolizan los explosivos siguiendo un modelo de hgado
verde. Al igual que ocurre en el hgado de los mamferos, la detoxificacin por parte de las plantas
implica tres fases:
1. Los xenobiticos que carecen de un grupo reactivo entran en la Fase I, donde un grupo
funcional, normalmente un hidroxilo, amino o sulfidrilo es introducido en la molcula.

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2. La transformacin anterior permite que ocurra la Fase II, en la que una o varias molculas
hidroflicas se conjugan al xenobitico transformado.
3. En la fase III, el xenobitico conjugado es secuestrado, normalmente en una vacuola.
A pesar de la existencia de estas rutas complejas de detoxificacin, por razones evolutivas est claro
que las plantas han tenido menos tiempo para desarrollar mtodos eficientes para detoxificar estos
compuestos sintticos. Los explosivos aromticos son particularmente fitotxicos y la tasa de
detoxificacin para los 3 grupos es bastante baja comparada con la de los cultivos bacterianos. A pesar
de que se ha visto que bacterias aisladas de suelos contaminados pueden degradar rpidamente los
explosivos en cultivos de laboratorio, el hecho de que estos mismos explosivos persistan en el medio
sugiere que las bacterias no presentan suficiente biomasa o actividad metablica para producir una
descontaminacin significativa de estas zonas. Para superar esta limitacin la ingeniera gentica
puede actuar en cuanto a la transferencia de estos genes bacterianos a plantas, intensificando su
habilidad para detoxificar explosivos.

METABOLISMO DE STERES DE NITRATO

Varias cepas bacterianas pueden realizar una denitracin de los explosivos steres de nitrato GTN y
PETN. Estas cepas se han aislado de terreno contaminado, como Enterobacter cloacae PB2. En concreto
esta cepa se aisl de suelo enriquecido bajo condiciones aerobias y limitacin de N y se vio que era
capaz de utilizar el GTN o PETN como nica fuente de N. El gen responsable de esta actividad,
designado onr (organic nitrate reductase) fue identificado y se caracteriz el producto gnico, PETN
reductasa (PETNr). Se trata de una protena de la familia de las flavoprotenas que contiene un grupo
FMN. Esta enzima reduce secuencialmente dos de los cuatro grupos nitro del PETN para dar
pentaeritriol dinitrato, que es posteriormente oxidado hasta el dialdehido.
En un trabajo pionero, unos investigadores desarrollaron las primeras plantas transgnicas
especficamente diseadas para la fitorremediacin de compuestos orgnicos: se obtuvieron plantas de
tabaco que expresaban PETNr y que fueron capaces de germinar y crecer normalmente en medio de
cultivo con una concentracin de GTN de 1mM, concentracin que sera letal para el tabaco no
transformado. Estas plantas transgnicas tambin fueron capaces de eliminar GTN de un cultivo lquido
bastante ms rpido que las plntulas normales.

METABOLISMO DE NITROAROMTICOS
Las nitroreductasas bacterianas tambin son efectivas para la reduccin de los grupos nitro del TNT
para dar diferentes ismeros de aminonitrotoluenos, lo que es interesante porque estos productos
pueden unirse irreversiblemente a la arcilla y a la materia orgnica del suelo. Estas enzimas tambin
atacan otros compuestos nitroaromticos que pueden estar presentes en sitios contaminados. Por
tanto, para mejorar el proceso de fitorremediacin ya hemos visto cmo se han introducido
nitroreductasas en plantas para eliminar los steres de nitrato. En el contexto de los nitroaromticos,
tambin se ha introducido el gen nsf1 de Enterobacter cloacae en plantas de tabaco y el gen nfsA de

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E.coli en Arabidopsis thaliana. En ambos casos las plantas transgnicas obtenidas resistieron altas
concentraciones de TNT en comparacin con las WT.
En este sentido, investigadores de investigadores de la Estacin Experimental del Zaidn y del Instituto
de Investigaciones Agrobiolgicas de Galicia consiguieron mejorar an ms el proceso utilizando una
planta arbrea como diana de expresin. Partieron de un lamo hbrido (Populus tremula x
tremuloides var. Etropole) al que le aadieron el gen pnrA de Pseudomonas putida mediante
transformacin con Agrobacterium tumefaciens. La nitrorreductasa introducida es la encargada de
reducir el TNT a 4-hidroxilamina-2,6-dinitrotolueno, permitiendo al rbol degradar y acumular el TNT.
Los rboles transgnicos resultantes soportan una concentracin doble del contaminante en el suelo
con respecto a la misma variedad no transgnica, obteniendo tambin mayor rendimiento de absorcin
en condiciones de alta concentracin del compuesto problemtico. Es interesante destacar el hecho de
que solamente una pequea proporcin de TNT es llevado al tallo y hojas, acumulndose as la mayor
parte en las races, disminuyendo el riesgo de dao en los animales herbvoros que pudiesen comer sus
hojas. Otro aspecto positivo de estos rboles transgnicos es que solamente se han generado hembras,
para as evitar la dispersin del transgn a travs del polen. Gracias a la implementacin de este tipo de
rboles transgnicos, la posibilidad de regeneracin del suelo ser muy buena en lugares con altos
ndices de TNT.
METABOLISMO DE NITRAMINAS
Se han aislado diversas cepas bacterianas capaces de utilizar el RDX como nica fuente de N para su
crecimiento. Entre ellas destaca Rhodococcus rhodochrous 11Y. El gen responsable de este
metabolismo, xplA, se clon y su producto gnico fue identificado como una protena novedosa
consistente en una fusin entre una flavodoxina y el citocromo p450 (CYP177). Posteriores
caracterizaciones de la enzima demostraron que bajo condiciones aerobias un mol de RDX es degradado
por CYP177 con la produccin de un mol de 4-nitro-2,4-diazabutanal (NDAB), dos moles de nitrito y un mol
de formaldehido, mientras que en condiciones anaerobias se forma un mol de metilendinitramina
(MEDINA), un mol de nitrito y dos moles de formaldehido. Las plantas de Arabidopsis que expresaban el
gen fueron capaces de eliminar todo el RDX de una solucin de 180 M, lo que constituye una
capacidad 10 veces mayor para detoxificar el explosivo en comparacin con las plantas WT. Los)
estudios revelaron que las plantas que expresaban el gen podan crecer, sin efectos adversos, en suelo
contaminado con niveles de RDX de 2000 mg/kg, la mayor concentracin ensayada, mientras que las no
transformadas ya presentaban efectos citotxicos a concentraciones de RDX de 250 mg/kg. Adems,
las plantas transgnicas presentaban mayor biomasa de races en comparacin con las WT, lo que
sugiere que las plantas transformadas utilizan utilizan el RDX como fuente de N para un mayor
crecimiento. La degradacin del RDX puede aumentarse hasta 30 veces ms mediante la introduccin
del gen xp1B, que codifica para otra reductasa. Lo interesante de estas plantas mejorada es que fueron
capaces de eliminar el RDX de lixiviados del suelo, lo que podra solucionar una de los mayores
problemas de la contaminacin por RDX: su migracin a travs del agua subterrnea y la consiguiente
contaminacin de fuentes de agua potable.
Muchos explosivos no se hayan solos en los campos de entrenamiento sino que aparecen junto a otros
de distinta naturaleza qumica. El siguiente paso en la investigacin sera transformar las plantas con
dos o ms genes bacterianos con el objetivo de abarcar un mayor rango de explosivos con una nica

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especie vegetal. Las especies candidatas para ello deben crecer poca altura, ser resistentes al fuego y
ser capaces de resistir y recuperarse rpidamente de alteraciones debidas a equipamiento pesado
militar. En este sentido las especies de hierbe perenne (Agropyron smithii) y pastos de trigo
(A.trachycaulum), que adems son nativas de regiones de USA donde se emplazan los campos de
entrenamiento, son candidatas prometedoras. Como colofn a la tcnica, especies arbreas como
lamos podra ensayarse en los bordes de estas zonas para eliminar los explosivos procedentes del
lixiviado del suelo.

FITORREMEDIACIN DE METALES PESADOS:

La contaminacin de hbitat con metales pesados es actualmente un problema de importancia
mundial, para lo cual se necesitan sistemas rpidos y accesibles que permitan conocer con exactitud las
concentraciones de estos elementos para el desarrollo de tcnicas que permitan la restauracin de
suelos contaminados. Merece atencin la fitorremediacin como una tcnica novedosa que consiste en
el uso de sistemas biolgicos, en este caso plantas y algas, naturales o mejorados genticamente para
degradar, transformar o eliminar sustancias peligrosas orgnicas e inorgnicas presentes en los suelos,
aguas y aire.
Los metales pesados son definidos como aquellos que poseen una densidad superior a 5 g cm^-3,
constituyendo un grupo de 65 elementos con caractersticas fsicas, qumicas y biolgicas muy
heterogneas. Se pueden clasificar en esenciales y no esenciales. Los ltimos no presentan funcin
biolgica y su presencia puede ser txica, mientras que los esenciales son requeridos por todos los
organismos en cantidades trazas. Los metales pesados pueden convertirse en contaminantes si su
distribucin se ve afectada por las actividades humanas, ya que a diferencia de contaminantes
orgnicos estos no son biodegradables, pudiendo provocar diversos y agudos efectos en la biota.
Las fases del proceso por el cual las plantas absorben y acumulan los metales pesados son las
siguientes:
-Fase 1: Transporte de metales pesados al interior de la planta y sus clulas, mediante difusin, flujo
masivo o por intercambio catinico.
-Fase 2: En su interior la planta, los metales son acomplejados mediante ligandos especficos,
denominados quelantes. Entre los quelantes comunes se encuentran cidos orgnicos (cido ctrico,
oxlico y mlico), algunos aminocidos ( histidina y cistena) y dos clases de pptidos: fitoquelatinas y
metalotenas.
-Fase 3: Compartimentalizacin y acumulacin del metal junto con su ligando en la vacuola.
Se conocen alrededor de 400 especies de plantas con capacidad de eliminar, reducir, transformar,
mineralizar, degradar, volatilizar o estabilizar selectivamente algunas sustancias. Algunas de ellas,
debido a su gran capacidad para acumular metales pesados, reciben el nombre de hiperacumuladores,
que por definicin, estas plantas deben acumular al menos 100 g/g(0.01%peso seco)de Cd y
As;1000g/g (0.1%peso seco) de Co, Cu, Cr, Ni y Pb; y 10000 g/g (1.0%peso seco) de Mn.

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En la mayora de los casos especies comunes muy conocidas, otras especies raras y cada vez con
mayor aplicacin de plantas modificadas genticamente.
Los tipos de fitorremediacin y especies ms ampliamente utilizados y desarrolladas para
biorremediacin de metales pesados son:
-Fitoextraccin: Hyparrhenia hirta (Pb); Zygophyllum fabago (Zn); Lupinus albus (Cd, As); Anthyllis
vulneraria (Zn, Pb, Cd); Deschampsia cespitosa (Pb, Cd, Zn); Cardaminopsis arenosa (Cd,Zn); Horedeum
vulgare, Lupinus angustifolius y Secale cereale (As); Lolium italicum y Festuca arundinaceae (Pb, Zn); y
Brassica juncea (Cd, Zn, Cu, Mn, Fe, Pb)
-Fitofiltracion: Scirpus lacustris (Cd, Cu, Pb, Mg, Fe, Se, Cr),Lemna gibba (Pb, As, Cu, Cd, Ni, Cr, Al, Fe, Zn,
Mn), Azolla caroliniana (Hg, Cr Sr, Cu, Cd, Zn, Ni, Pb, Au,Pt), Elatine trianda (As), Wolffia papulifera (Cd),
Polygonum punctatum (Cu, Cd, Pb, Se, As, Hg, Cr, Mn) y Myriophylhum aquaticum, Ludwigina palustris y
Mentha aquatic (Cu, Zn, Mn, Fe, Ni).
-Hiperacumulacion: Thlaspi caerulescens (Cd); Sedum alfredii, Viola baoshanensis y Vertiveria zizanioides
(Zn, Cd, Pb); Alyssum murale, Trifolium nigriscens, Psychotria douarrei, Geissois pruinosa, Homalium
guillainii, Hybanthus floribundus, Sebertia acuminata, Stackhousia tryonii, Pimelea leptospermoides,
Aeollanthus biformifolius y Haumaniastrum robertii (Ni); Brassica juncea, Helianthus annuus, Sesbania
drummondii (Pb); Brassica napus (Cu, Pb, Zn); y Pistia stratiotes (Ag, Cd, Cr, Cu, Hg, Ni, Pb, Zn).
Esta tecnologa se hace ms efectiva a travs de la manipulacin gentica, mejorando las capacidades
naturales de las plantas. Se han diseado plantas con una mayor capacidad de acumulacin (metales
pesados), degradacin (contaminantes orgnicos) o transformacin de contaminantes. El uso de la
ingeniera gentica permite transferir y sobre expresar los genes de bacterias, levaduras o animales que
promueven la hiperacumulacion en ciertas plantas que tienen una gran biomasa.
Se han identificado, a nivel molecular, numerosos genes que mejoran la capacidad biorremediadora
para su posterior insercin en el material gentico de plantas. Un ejemplo de ellos es la sobreexpresin
de genes relacionados con la sntesis de metalotenas, aumentando as, la capacidad de acomplejar
metales. En la planta de tabaco promueve una mayor afinidad hacia el Cd. En la coliflor por ejemplo, la
sobreexpresin del gen CUPI, promueve la acumulacin de Cd, 16 veces ms que en la especie salvaje.
La eliminacin del mercurio se ha convertido en una aplicacin representativa de la modificacin
gentica de especies vegetales. En base a esto, se estudi el uso de la reductasa de origen bacteriano
MerA, en plntulas de Liriodendron tulipifera (lamo amarillo), elodea sp y arabidopsis thaliana, que
cataliza la reduccin del ion mercrico a mercurio elemental, con NADPH como donador de electrones.
Adems de su identificacin se produjo la introduccin de secuencias adicionales para garantizar la
traduccin del gen en plantas mediante el uso de vectores plasmdicos, PCR y electroforesis ,
sintetizando el gen mutado MerApe9,testado en E.coli, se insert mediante Agrobacterium tumefaciens.
Posteriormente se demostr que se produjo una mejora en la resistencia en la germinacin y
crecimiento en un medio contaminado con HgCl2. Para Arabidopsis se encontr mejora en
concentraciones de 25-100 M.
RSHg+ + NADPH -----> Hg+ RSH + NADP+

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Grado en Bioqumica

Relacin entre nivel de reduccin y el tiempo. Los ejemplares mutados ven aumentada su tasa de
reduccin frente a otros genes y la especie no mutada (RLD).
El uso de Arabidopsis thaliana modificada genticamente, es comn para la reduccin de metales (Cu,
Pb, Cr) a travs de procesos enzimticos y acumulacin en races de Zn sobreexpresan el gen
responsable de una protena transportadora de Zn.
La naturaleza sedentaria de las plantas es una gran ventaja para los estudios basados para monitorizar
sustancias qumicas txicas en el medioambiente. El uso de plantas portadoras de un gen marcador de
mutacin o recombinacin permite el marcaje del dao del ADN en una secuencia conocida no esencial.
Se us A. thaliana transgnica para analizar las mutaciones puntuales y la recombinacin en el gen GUS
ante la exposicin a metales pesados. Las lneas transgnicas homocigotas (166 y 166A) llevan consigo
una copia del gen testador, inactivado por una mutacin puntual G-->T y G-->A, respectivamente, por
genoma haploide. Esta sustitucin dirige la formacin de un codn de parada o a una sustitucin de
aminocidos. Ha sido mostrado que solo la reversin al nucletido original devuelve actividad a la
enzima. La lnea homocigtica 651 lleva consigo una copia por genoma haploide de una superposicin,
no funcional, truncada de una versin del gen marcador GUS como sustrato de recombinacin. La
actividad de GUS puede ser restaurada por una hebra rota inductora de recombinacin entre dos
repeticiones. As, clulas las cuales la recombinacin o reversin de una mutacin puntual ha ocurrido
puede ser visualizada por restauracin del gen marcador.
Otra de las aplicaciones de la ingeniera gentica es la caracterizacin de un opern copABCD de
resistencia al cobre de la cepa Pseudomonas sp aislada de leguminosas, transmitiendo a diversos
organismos y plantas para aumentar su resistencia y capacidad de acumulacin de Cu. El gen copC se
introdujo en plantas de Arabidopsis thaliana y en races pilosas de tabaco, donde se vio que las plantas
transgnicas que expresan este gen aumentaban hasta 5 veces su capacidad de acumulacin de Cu.
En ingeniera gentica aplicada a la fitorremediacin hacen falta tener en cuenta varios factores para
elegir la tcnica y su desarrollo, pues las rutas metablicas involucradas son de una elevada
complejidad, por lo que su correcta eleccin marcara el resultado del ensayo por completo.
Es importante saber a qu nivel queremos modificar las capacidades de la planta, por lo que elegir los
genes a modificar y su mecanismo de expresin es crucial. Respecto a esto, podemos deducir que, no es
lo mismo modificar un gen relacionado con la incorporacin del metal a la planta, como de las protenas
relacionadas con su transporte o compartimentalizacin. De este modo, podemos distinguir distintos
tipos de genes que codifican protenas a los que prestar atencin a distintos niveles:
1. Transporte de los iones al interior de la planta.
2. Quelacin de metales.
3. Compartimentalizacin.
4. Transformacin y detoxificacin.

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Grado en Bioqumica

Estos son algunos de los genes introducidos para la mejora de la fitorremediacin de metales pesados.

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