Vous êtes sur la page 1sur 125

SPECTROSCOPIE

Philippe BERTANI
pbertani@chimie.u-strasbg.fr

Bibliographie
1. P.W. Atkins Chimie-Physique (De Boeck)
2. Daniel Canet : la RMN concepts et mthodes, interedition 1991
3. http://www.uel.education.fr/consultation/reference/chimie
/spectro/introduction/index.htm

Plan
Introduction
Principes gnraux
Rsonance Magntique Nuclaire:

Prsentation et historique
Principe et instrumentation
Parametres RMN
RMN multidimensionnelle
Traitement du signal
Techniques avances

Spectroscopie de rotation et de vibration


Spectres de rotation pure
Vibration de molcules diatomiques
Vibration de molcules polyatomiques

Spectroscopie lectronique
Spectre dabsorption
Fluorescence et phosphorescence

Introduction
Spectroscopie : Etude de linteraction Onde/matire

Noyaux
Domaine de la
spectroscopie

lectrons des
couches internes
lectrons de
valence

vibration

RPE
rotation
RMN

Onde lectromagntique

Expression dune onde plane monochromatique :

E ( r ,t) = E 0 cos(t k r + )

2
c
Pulsation =

position
phase
C vitesse de la lumire

Vecteur donde

2
k=

Relations fondamentales

Relation de Planck Einstein :

E = h.
p = h. / c

E = Energie dun photon


c=vitesse de la lumire

p = impulsion du photon
h=constante de Planck

Relations fondamentales

Dualit onde/particule

De Broglie

p = impulsion=mv

p = h /

h=cste de Planck

=longueur donde

Relations fondamentales

Lnergie dun atome (ou dune molcule) est quantifi


Niveaux dnergie
e
E=hv
f

Relations fondamentales
Niveaux dnergie
e

Ee E f
N
g
e
e
Boltzmann
= exp

N f gf
kT

Donne les populations des tats en fonction de la temprature

Relations fondamentales
Spectroscopie dabsorption
monochromateur
chantillon
source
I0

dtecteur

Loi de Beer-Lambert

I0
A = log( ) = lc
I

Largeur des raies


a) Effet Doppler (dplacement de la source par rapport lobservateur)

mesur

1 vit 1/ 2
c
=
1+ vit

b) Dure de vie (largeur spectrale naturelle)

E = /

c) Superposition de raies

RMN Domaines dapplication

Physique
Chimie analytique
Biologie structurale
Mdecine (imagerie)

Historique
1921 Stern (Nobel 1943), Gerlach, mise en vidence du spin
lectronique

1933 Rabi (Nobel 1944) spin nuclaire

I I Rabi and V W Cohen 1933 The nuclear spin of sodium Physical Review 43 582

Historique
1945 : Bloch, Hansen, Packard (Stanford), Phys. Rev. 69, 127, 1946
Purcell, Torrey, Pound (Harvard), Phys. Rev. 69, 37, 1946

Phys. Rev. 70, 474485 (1946)


=B0

Bloch, Purcell Prix Nobel de physique 1952

Historique
1950 : La RMN comme outil analytique

J Chem Phys 19, 507, 1951

Spectre proton de lethanol


1951

1959 Haute Resolution


Couplage scalaire
Roberts, J. D. Nuclear Magnetic
Resonance: Applications to Organic
Chemistry. McGraw-Hill: New York,
1959

Historique
1966 RMN transforme de Fourier

Richard Ernst Nobel 1991

Historique
1972 : Supraconducteur

1959 electroaimant
40 MHz

2000 aimant supraconducteur


900 MHz

Historique
1973: Premire Image P.Lauterburg Nobel 2003, P.Mansfield

1973
Nature, 242,190, 1973

2000

Historique

1975 RMN 2D (Jeener, Ernst)

Historique
Dveloppement technologique:
1. Ordinateur plus puissant (traitement et stockage)
2. Electronique plus rapide (excitation et acquisition)
3. Champs magntique plus lev (sensibilit)

Historique
Structure de protine: Kurt Wutrich Nobel (2002)
1984 Dtermination de la structure 3D de protine par RMN en
solution

2D/contraintes/modlisation

Principe

Effet Zeeman

B0/2
E= B0, =B0/2

-B0/2

1. Spin nuclaire et moment magntique =I


2. Energie associ : E=- B
3. Spin 1/2 : 2 tats dnergie +-B0/2
4. Energie de transition E= B0, frquence associ E=h =B0/2
(frquence de Larmor)

Principe

http://www.cis.rit.edu/htbooks/nmr/inside.htm

Principe : Aimantation dquilibre

B0 =0

B0

M0

On montre (TD1) que laimantation macroscopique lquilibre est


donne par :
(!h)2 B0 N
M0 =
4K BT

Principe : prcession de Larmor

Rotation autour de B avec une


vitesse angulaire =-B0


dM
= M B
dt

Champs magntique B0
=-B0
a

M x (t) = M 0 sin cos(t)

M y (t) = M 0 sin sin t)

M z (t) = M 0 cos

Laimantation effectue un mouvement de prcession autour du champ


On retrouve la frquence de Larmor

Prcession

Champs magntique B
En particulier, si M est suivant x
M x (t) = M 0 cos(t)

M y (t) = M 0 sin t)

M z (t) = 0

Principe : retour lquilibre


Equations de Bloch

dM x
Mx
dt = M y B0 T2
dM
My
y
= M x B0

T2
dt
dM z = M 0 M z
dt
T1
T2 temps de relaxation transversal
T1 temps de relaxation longitudinal

Principe : retour lquilibre


Si M(0) suivant x
Mx(t) = M0cos(wt)exp(-t/T2)

My(t) = -M0sin(wt)exp(-t/T2)

Mz(t) = M0(1-exp(-t/T1))

Principe rfrentiel tournant


Rfrentiel tournant
z

Laboratoire
z

X
Y

Laimantation apparat immobile dans


ce rfrentiel

Impulsion
phase

bobine
B=B*cos(t)

Amplitude


1.
2.
3.
4.

X
longueur

Frequence (ou offset ) :


Phase : direction dapplication +X, -X, Y, -Y
Amplitude B : puissance dimpulsion
Longueur dimpulsion

Effet dune impulsion


B0
Dans le referentiel tournant :
M
r
B=2B1*cos(rt)


dM
= M Beff
dt T
Avec

z
B0- r/

Beff = (B0 r / ) k + B1i

Beff
B1

x'

Effet de B1 : nutation
Si r 0
RESONANCE

Impulsion de 90

Beff

t = 0
z
y

Beff

t = t

Beff

Beff

t = t180

t = t90

Impulsion 180
x
=1=frquence de nutation

Squence dimpulsion
Srie dimpulsions et dlais appliqu au systme
t90
Squence de Base

t90
Squence dcho

t180
Y

Squence dimpulsion

Description Quantique
La description classique (modle vectoriel/quation de Bloch) reste
valable tant que laimantation peut tre assimiler un vecteur.
Dans la plupart des cas une approche quantique est donc ncessaire.

Description Quantique
La matrice densit (t) contient toute linformation sur le systme.
On peut obtenir la valeur de chaque observable par la relation :
<O(t) >= Tr <*(t)>
En particulier, laimantation Mz = Tr (Iz*(t))
L volution de la matrice densit est donne par lquation de
Liouville-von Neumann

d
(t) = i[ H ( t ), (t)]
dt

Dtection
Bobine
Bcos(wt)

Champ magntique oscillant induit un courant


dans la bobine

La projection (sur x ou(et) y)


de laimantation est dtecte
Free Induction Decay
x

Detection/digitalisation
Signal de reference
400 MHz
Signal digitalis
2000 Hz

Signal RMN

On detecte la diffrence entre le


signal RMN et une frequence de
reference

400,OO2 MHz
RF

Audio

Traitement du signal : Transforme de Fourrier

FT

FT

Traitement du signal : Transforme de Fourrier


FID

Spectre
FT

FT

Traitement du signal : Transforme de Fourrier

FT

Spectromtre RMN

Aimant

Console RMN
Gnrateur dimpulsion
Amplificateur
Convertisseur
Analogique digital
recepteur

Pramplificateur
Sonde

Spectromtre RMN

Spectromtre RMN : aimant

www.jeol.com/nmr/nmr.html,

Spectromtre RMN sonde

L
Circuit accordable en
frquence et en impdance
R

Spectromtre : sonde

Bobine selle de cheval

Spectometre : console

Paramtres et interactions RMN

1. Dplacement chimique
2. Couplage scalaire
3. Interactions anisotropes
4. Temps de relaxation T1, T2, T1

Dplacement chimique et couplage scalaire


Les noyaux sont galement sensible au champ local :
-Nuage lectronique (dplacement chimique)
-Noyaux voisins (couplage dipolaire et scalaire homonuclaire
et htronuclaire)

Des noyaux dans des environnements


diffrents rsonnent des frquences
diffrentes

Spectre proton

N+1
http://www.chem.ucla.edu/~webspectra/
http://drx.ch.huji.ac.il/nmr/techniques/1d/row1/h.html
http://www.aist.go.jp/RIODB/SDBS/

Dplacement chimique

Zeeman
B0=0

Chemical Shift

= 0 + S

Dplacement chimique proton


Echelle de dplacement
chimique :
(z)-0(Hz)

=
0(MHz)

dblind

blind

+
Densit lectronique

Dplacement chimique proton

http://www.chem.ucalgary.ca/courses/351/Carey/

Couplage scalaire J

A
A

X
X

1 dplacement
chimique

1
Zeeman

Le couplage se transmet via les


liaisons (lectron)

12
12

Couplage
J

12
12
Couplage J

= s J/2

Equivalence
Equivalence chimique : Mme environnement chimique
Equivalence magntique An:
Frquence de rsonance identique
Chaque A est coupl de manire identique tous les
autres noyaux
Ex : 1,2 dichlorobenzene

Couplage scalaire J Triangle de Pascal


A
JAX

AX

JAX

JAX

A2X

JAX

A3X

Doublet 1:1

Triplet 1:2:1

Quadruplet
1:3:3:1

Couplage en Hz (indpendant du champs B0)


Le couplage nest pas visible entre noyau quivalent

Couplage scalaire J triangle de Pascal

Intensit relative des signaux pour un couplage


avec des voisins quivalents (ou une mme
valeur de J)

Couplage scalaire H-H

http://www.cem.msu.edu/~reusch/VirtualText/Spectrpy/nmr/nmr1.htm

Couplage scalaire H-H

http://www.cem.msu.edu/~reusch/VirtualText/Spectrpy/nmr/nmr1.htm

Couplage scalaire H-H

http://www.cbs.cnrs.fr/MAJ/FORMATIONS/COURS/RMN/cours/canet1/canet1-3.html

Spectre 1H

benzene

Chlorobenzene

Spectres 1H

Couplage C-H spectre 13C


Cq

Singulet
JCH

CH

Doublet 1:1
JCH

Triplet 1:2:1
JCH

CH3

Quadruplet
1:3:3:1

Couplage C-H spectre 1H

JCH

Transition satelitte :
Intensit 1% dues
labondance naturel du
13C

Spectre 13C

13C

simple
impulsion

13Cdcoupl 1H

13C

13CC

large bande

DEPT135

4H10O

/ CDCl3 (0,05 M) + TMS, spectromtre 300 MHz

(ppm)

Dcouplage
Irradiation des protons pendant lobservation en
carbone : supprime leffet des couplages
1H

t90
13C

Acquisition suivant Y
Temps de recyclage
Experience double
resonance

Edition spectrale DEPT


Distortionless Enhancement Polarization Transfer

Dplacement chimique 13C

RMN du solide

Solide

solution

Interaction anisotrope deplacement chimique


Le nuage lectronique nest pas
rparti de manire symtrique autour
du noyau

B0

=90
=45

=0

Interaction anisotrope dplacement chimique

Toutes les orientations sont prsentes :


Moyenne de poudre

Interaction anisotrope couplage dipolaire


Homonuclaire ou Htronuclaire
D
D=1-3cos2
r 3

B0

=
180 90 54.7 90 180

r
1

-15

-10

-5

0
kHz

10

15

Interaction anisotrope couplage dipolaire

Moyenne de poudre

B0

-15

-10

-5

0
kHz

10

15

interactions Anisotropes:
dipolaire
Dplacement
chimique

-15

-10

-5

ppm

10

15

-15

-10

Quadrupolaire (spin >1/2)

-15

-10

-5

0
ppm

10

-5

0
ppm

10

15

Plusieurs interactions

15

-15

-10

-5

0
ppm

10

15

Effet du mouvement : rotation a langle magique


Magic Angle Spinning (MAS)
Z

Angle Magique

B0
statique

Rotation rapide

y
32

Bande de rotation

24 16 8 0 -8
ppm

-16 -24

Effet du mouvement

Le mouvement des molcules moyenne les interactions


Si il est isotrope et rapide alors seule la partie isotrope est
conserve
La partie anisotrope reste observable uniquement travers les
phnomnes de relaxation
INTERACTION

Partie isotrope

Dplacement chimique iso


Dipolaire

Quadupolaire

Relaxation T1
T1 = temps de relaxation longitudinal, ou spin rseau,
dcrit le retour lquilibre suivant B0

http://www.chem.queensu.ca/FACILITIES/NMR/nmr/webcourse/t1-lash.htm

Relaxation T2
T2 = temps de relaxation transversale, ou spin spin, dure
de vie du signal RMN

Relaxation

Mchanismes de relaxation
1. Dipole-Dipole
2. Quadrupolaire
3. Anisotropie de dplacement chimique
4. Spin rotation
5. Couplage scalaire

Les temps de relaxation sont lis au mouvement

RMN deux dimensions 2D


Preparation Evolution

Melange

Detection

t1
(increment)

double TF

t2

(ppm)

RMN 2D : nutation
Detection
=1

t1
t1
(increment)

t2

Resultat

t1
http://www.univ-lille1.fr/lcom/RMN2D/index1.htm

(ppm)

RMN 2D : COSY
COrrelation SpectroscopY
Corrlation homonuclaire

/2

CHA-CHB

/2

(ppm)

t1

t2

Les taches de corrlation indiquent un


couplage J

(ppm)

RMN 2D : COSY

2D TOCSY
Total COrrelation SpectroscoPY

COSY
TOCSY

Les taches de corrlation indiquent un


couplage systeme de spin coupls

RMN 2D : NOESY
Nuclear Overhauser Effect SpectroscoPY

/2

/2

HB

/2

t2

Les taches de corrlation


indiquent une proximit
spatiale ou un change
chimique

tm

(ppm)

t1

HA

(ppm)

2D NOESY

http://www.bch.bris.ac.uk/staff/pfdg/teaching/nmr.htm

RMN 2D : HMQC
Heteronuclear Multiple Quantum Correlation
= correlation htronuclaire
/2
1H

1/2J
/2

/2

t2

Decouplage

t1
Les taches de corrlation
indiquent un couplage scalaire
(adapte pour couplage faible)


H
En gnral 1J(13C-1H)
(ppm)

2D HMQC

2D HSQC
Heteronuclear Single Quantum Correlation
= correlation htronuclaire

Les taches de corrlation


indiquent un couplage scalaire
En gnral 1J(15N-1H)
http://www.cryst.bbk.ac.uk/PPS2/projects/schirra/html/2dnmr.htm

HMBC
Heteronuclear multiple bound Correlation
= correlation htronuclaire

On observe J2 et J3 parfois J4

2D INADEQUATE

Incredible Natural Abondance


DoublE QUAntum TransfErt
/2

/2

/2

t1
t2

Decouplage

Correlation homonuclaire travers J

Autres squences
ACCORDION ADA ADRF AHT APHH-CP APT ARP ASIS BB BIRD BLEW BR-24
CAMELSPIN CHESS CHIRP CIDNP COCONOESY COLOC CONOESY COSY COSY-45
COSYDEC COSYLR CP CPD CPMAS CPMG CRAMPS CRINEPT CSA CSCM CT
CT-HSQC CW CYCLOPS DANTE DAS DCNMR DD DECSY DEFT DEPT DEPTH
DIGGER DIPSI DISCO DNMR DOUBTFUL DQ DQC DQF DQF-COSY DRAMA DRESS
DSA DUMBO E.COSY EFG ELD ENDOR ENMR EPI ESR EXORCYCLE FFT FID FIRFT
FLASH FLOPSY FOCSY FOV FSLG FT FUCOUP GARP GE GES GRASP GRASS GROPE
GS H, C-COSY H, X-COSY HETCOR HMBC HMQC HOESY HOHAHA HR HSQC
INADEQUATE INDOR INEPT INVERSE IPAP IR ISIS JR LIS LP LSR MARF MAS MASS
MEDUSA MEM MLEV MP MQ MQC MQF MQS MREV MRI MRS MRSI MSHOT-3
MSPGSE NMR NOE NOESY NQCC NQR ODMR OSIRIS P.E.COSY PAR PELF PFG
PFGSE PGSE PMFG POST PRESS PRFT PSD PW QF QPD RARE RCT RD RECSY
REDOR RELAY RF ROESY ROTO SA SC SD SDDS SE SECSY SEDOR SEFT SELINCOR
SELINQUATE SEMUT SFORD SKEWSY SNR (S/N) SPACE SPECIFIC-CP SPI SPT SQ
SQF SR SSFP SSI ssNMR STE STEAM STUD SUSAN TCF TE TMR TOCSY TOE TORO
TOSS TPPI TPPM TQ TQF TR TRCF TROSY UE VAS VOSY WAHUHA WALTZ
WATERGATE WEFT WURST X-Filter X-Half-Filter XCORFE Z-COSY Z-Filter ZECSY ZQ
ZQC ZQF ZZ-Spectroscopy
http://www.bmrb.wisc.edu/education/nmr_acronym.php

Concepts in Magnetic Resonance, Vol. 10 59-62 (1998) 1998 John Wiley & Sons, Inc.

Interpretation des spectres


1) Calcul du nombre dinsaturation
Nombre dinsaturation = C- H/2-nhalo/2+N/2+P/2 +1
Monovalent -1/2
Divalent 0
Trivalent +1/2
Tetravalent +1

2) Integration/quivalence
3) Couplage
4) Deplacement chimique

Acquisition des donnes : prparation de


lchantillon
Solution
1. Quantit : 5 mg dans
600 ul pour 1H
2. Solvant deutr
3. Filtrer (pas de solide)
4. Ajuster la hauteur
5. Tube (propre et sec)
http://www.york.ac.uk/depts/chem/services/nmr/pictures/nmrtube.gif

Acquisition des donnes : prparation de


lchantillon
Solide

Acquisition des donnes : Lock et shim

B0 varie vo varie aussi

Acquisition des donnes : Lock et shim

BO
vO

Acquisition des donnes : Lock et shim

Traitement du signal : FT

Parametres dacquisition
On acquiert TD point
Dwell time = dw

Temps daquisition = taq= TD*dw

Paramtres dacquisition

FT

Resolution
= 1/taq

sw= 1/dw= largeur spectrale

Detection en quadrature

Phase

Ordre 0 : On obtient un signal en absorption


ordre 1 : On limine leffet du temps mort

Fenetres dapodization
Avec multiplication exponentielle
Sans apodization

Il existe dautres fenetres dapodization

Ajout de point et correction de ligne de base

Rapport signal sur bruit (S/N)


128 scans
10.0

250

500

750

1000

1250

1500

1750

2000

7.5

5.0

2.5

S/N varie en racine de N

2 scans
250

500

750

1000

1250

1500

1750

2000
10.0

7.5

5.0

2.5

S/N est galement fonction de la quantit de produit :


2x moins de produit 22 plus de temps pour le mme spectre

Double transforme de Fourrier

Erreurs
troncature

Repliement, gain, quantit de produit

http://www.acornnmr.com/codeine/1d.htm

Techniques avances : 3D

Preparation Evolution

t1
(increment)

Melange Evolution

t2
(increment)

Melange

Detection

t3

Techniques avances : 3D

HNCA
HSQC-COSY
HSQC-TOCSY
HSQC-NOESY
.

Techniques avances : 3D

http://www.chem.queensu.ca/FACILITIES/NMR/nmr/webcourse/

Techniques avances : Impulsions Selectives


Rappel : Impulsion
z
B0- r/

Beff
B1

Limpulsion nest efficace que si elle est


applique aux environs de la rsonance :
Impulsion slective

Techniques avances : dcouplage slectif


Spectre 1H normal

C6H10O2

Irradiation

DEPT
(ppm)

Techniques avances : Phnomnes dynamiques


change

coalescence

http://www.chem.uky.edu/courses/che450g/handouts/cp2tis5.html

Techniques avances : Phnomnes dynamiques


change

Techniques avances : Gradients


B

B0+gx

Ba
B0

spectre
image

objet
B

0 a

x
B0+gx

Ba
B0

spectre
image

Utilisation des gradients en RMN


1. Acquisition plus rapide (cyclage de phase)
2. Etude de diffusion (DOSY)
3. Shimming automatique

Effet dun gradient

Dephasage de laimantation

Echo de gradient

Echo de spin

DOSY

http://www.people.man.ac.uk/~mbdssgam/research_2.htm

DOSY
Diffusion ordered spectroscopy
Gz

Gz

H
H H

Gz

Non refocalis par lecho

Refocalis par lecho

Imagerie : but

Imagerie : but
OBJET

IMAGE
PIXEL

VOXEL

Imagerie : principe
B0+gx

g environ
10 mT /cm
spectre

B0

image

objet
x

0 a

On utilise un gradient de champ B0 suivant trois directions pour


obtenir une image.
En raison du caractre vectoriel (additif) des gradients on ne peut
pas localiser simultanment lobjet dans les trois dimensions on
fait donc cette localisation de faon successive