Universidad Veracruzana

Campus Coatzacoalcos
Facultad De Ciencias Qumicas
Ingeniera En Biotecnologa

Enzimologa y Biocatlisis
Examen Ordinario
Martnez Hernndez Luis Miguel
Diciembre 16 del 2016

-Amilasa
Actividad catalitica
La proteina Acido -amilasa realiza una endohidrolisis en los enlaces (14) -D-glucosidicos en los polisacridos que
contienen 3 o ms enlaces (14)--D-glucosa

Cofactor
La Acido -amilasa utiliza 2 iones de 2+ por subunidad
NOTA: altas concentraciones de calcio pueden causar inhibicin de la actividad enzimtica de la protena.

Sitios de la enzima

Figura 1. Tabla de las posiciones principales en la enzima

La figura 1 muestra los principales sitios de la enzima entre los cuales destacamos en sitio de unin a sustrato localizado
en los aminocidos 83, 122, 204, 234, 297 y 344; lo que nos indica que la protena posee varios sitios de unin a sustrato
para hacer ms eficiente la catlisis enzimtica, tambin podemos encontrar los sitios de unin al cofactor que se
encuentran en las posiciones 121, 162, 175, 206, 210 y 230. En esta tabla tambin podemos apreciar los sitios de actividad
enzimtica que se esquematizaran en la siguiente figura.

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Secuencia de la protena y sitios activos

Figura 2 Cdigo gentico de la protena obtenido de: http://www.uniprot.org/blast/?about=P56271[230]&key=Active%20site

Es esta figura podemos aprecias los 2 sitios activos ms a detalle, uno localizado en la posicin 206 y otro en la posicin
230. Uno que inicia la reaccin (el donador de protones) y otro que es un nuclofilo, es decir un donador de electrones.
El aminocido donador de protones es un cido asprtico (posicin 206) por lo que es consistente con la naturaleza de la
reaccin, donar protones, mientras que el otro aminocido (posicin 230) es un cido glutmico y su funcin sera la de
realizar un ataque nucleoflica hacia los enlaces glicosdicos.
Para encontrar el sitio cataltico en las posiciones 206 y 230, se realizaron pruebas de identidifcacion de molculas de
agua, las cuales se rompen cuando hay ruptura de los enlaces glucosidicos.[1]

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Blast

Figura 3 BLAST de secuencia de la amilasa

En esta figura podemos observar que la secuencia es parecida a muchas protenas que posiblemente realizan la misma
funcin y que son sintetizadas por el mismo microorganismo, esto debido a que hay factores de estrs celular que hacen
que el mismo microorganismo produzca isoformas de la protena en respuesta al estrs, aunque tambin podemos
observar que hay secuencias que aunque es muy bajo el parecido en otros microorganismo, estos tienen la misma funcin
o parecida, y por lo tanto esta secuencia est muy conservada entre especies.
Referencias
Boel, E., Brady, L., Brzozowski, A. M., Derewenda, Z., Dodson, G. G., Jensen, V. J., ... & Woldike, H. F. (1990). Calcium
binding in. alpha.-amylases: an x-ray diffraction study at 2.1-. ANG. resolution of two enzymes from
Aspergillus. Biochemistry, 29(26), 6244-6249.