UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE

GROHMANN
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE INGENIERA
EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

NOMBRE:

Brighitte Yomahira Mostacero Vargas

PROFESORA:

Amelia Castro Gamero

CODIGO:

2010 35214

AO:

5to ao

CURSO:

Laboratorio de Biotecnologa

Tacna Per
2014

I.

TITULO
Curva de crecimiento de bacterias (lcticas). Curva de sntesis del producto (cido
lctico)

II.

OBJETIVOS

Estudiar la curva de crecimiento de bacterias lcticas y al mismo tiempo

construir la curva de sntesis de cido lctico.

Comparar los resultados de una cepa con fecha de vencimiento vencida con una
de fecha no vencida.

III.

FUNDAMENTO TEORICO
Ciclo normal del crecimiento.
Las poblaciones microbianas raramente mantienen un crecimiento exponencial
prolongado. Si ello ocurriera en poco tiempo la tierra estara tapada de una masa
microbiana mayor que la de la tierra misma. El crecimiento est normalmente
limitado por el agotamiento de nutrientes o por la acumulacin de productos del
mismo metabolismo microbiano, que les son txicos a la poblacin. La consecuencia
es que el crecimiento al cabo de un cierto tiempo llega a disminuir hasta detenerse.
En la figura 4 se presenta la grfica de una curva tpica de crecimiento bacteriana.
Como se puede observar, en la grfica se ha relacionado el tiempo transcurrido con
el logaritmo del nmero de clulas bacterianas. Cuando se realiza este tipo de
grficas se obtiene una lnea recta, sin embargo en esta slo un sector (fase
exponencial) corresponde a una recta.
Es posible distinguir cuatro fases:
1) fase de latencia o de retardo
2) fase exponencial
3) fase estacionaria
4) fase de muerte

En la fase de latencia existe un aparente reposo en el que las clulas sintetizan las
enzimas necesarias para la actividad metablica que deben llevar adelante. Cuando
se hacen mediciones del nmero de clulas en distintos tiempos dentro de esta fase,
el valor no cambia sustancialmente. En cambio, interiormente las clulas trabajan
activamente adaptando el equipo enzimtico al medio de cultivo. La bacteria se
prepara para hacer uso de los nutrientes que este medio le aporta, por lo tanto es
la fase de adaptacin al medio, con aumento de la masa celular pero no del nmero
de clulas. La edad del inculo va a influir en el tiempo de latencia en el medio fresco
debido a la acumulacin de materiales txicos y a la falta de nutrientes esenciales
dentro de la clula durante el crecimiento anterior. En general, inculos viejos
alargan la fase de latencia.

Pasado este perodo, el cultivo entra en la denominada fase de crecimiento

exponencial, donde la velocidad de crecimiento es mxima.La velocidad de
crecimiento que alcanza un cultivo, depende del tipo de microorganismoque se trate
y diversos factores ambientales como son la temperatura, el pH, oxigenacin,etc.La
velocidad de crecimiento comenzar a disminuir hasta hacerse nula cuando alcance
la fase estacionaria, ya que cambios en la composicin y concentracin de nutrientes
entreel cultivo del inculo y el medio fresco pueden desencadenar el control y la
regulacin dela actividad enzimtica.Esta fase se presenta por agotamiento del
suministro de algn nutriente esencial o poracumulacin de productos metablicos
que sean txicos. Tambin puede ser por ladisminucin de la oxigenacin o cambios
en las condiciones de pH del medio de cultivo (acidificacin o alcalinizacin):En esta
fase se equilibran el nmero de clulas nuevas con el nmero de clulas
quemueren.Por ltimo, el cultivo entra en la fase de muerte, en la que el nmero de
clulas quemueren se va haciendo mayor. La pendiente de esta fase puede ser ms
o menos pronunciada de acuerdo al tipo de microorganismo de que se trate. Suelen
presentarse pendientes menos bruscas cuando el microorganismo presenta alguna
forma de resistencia (esporas, glicocalix).

Factores fsicos y qumicos que influyen en el crecimiento bacteriano.

Temperatura: Cada microorganismo tiene una temperatura de crecimiento

adecuada. Si consideramos la variacin de la velocidad de crecimiento en funcin de

la temperatura de cultivo, podemos observar una temperatura mnima por debajo
de la cual no hay crecimiento; a temperaturas mayores se produce un incremento
lineal de la velocidad de crecimiento con la temperatura de cultivo hasta que se
alcanza la temperatura ptima a la que la velocidad es mxima. Por encima de esta
temperatura ptima, la velocidad de crecimiento decae bruscamente y se produce
la muerte celular. El aumento de la velocidad de crecimiento con la temperatura se
debe al incremento generalizado de la velocidad de las reacciones enzimticas con
la temperatura. Se denomina coeficiente de temperatura a la relacin entre el
incremento de la velocidad de reaccin y el de temperatura. En trminos generales,
la velocidad de las reacciones bioqumicas suele aumentar entre 1.5 y 2.5 veces al
aumentar 10C la temperatura a la que tienen lugar. La falta de crecimiento a
temperaturas bajas se debe a la reduccin de la velocidad de las reacciones
bioqumicas y al cambio de estado de los lpidos de la membrana celular que pasan
de ser fluidos a cristalinos impidiendo el funcionamiento de la membrana celular. La
muerte celular a altas temperaturas se debe a la desnaturalizacin de protenas y a
las alteraciones producidas en las membranas lipdicas a esas temperaturas.

Es importante tener en cuenta que a temperaturas bajas, el metabolismo celular es

lento y las clulas paran de crecer; aunque suelen morir. Sin embargo, cuando la
temperatura es superior a la ptima, se produce la muerte celular rpidamente y las
clulas no pueden recuperar su capacidad de divisin si baja posteriormente la
temperatura. Esto permite esterilizar por calor y no por fro. Hay varios tipos de
microorganismos en funcin de sus temperaturas de crecimiento mnima, mxima
y ptima.

Los microorganismos psicrtrofos son mesfilos que pueden crecer a temperaturas

bajas. Por tanto, se les puede considerar como psicrfilos facultativos. Esto es
importante desde el punto de vista aplicado porque cuando se encuentran
contaminando alimentos, son capaces de crecer en condiciones de refrigeracin (4
- 8C) y de producir infecciones en los consumidores del alimento (30 - 35 C).

Desde el punto de vista clnico, los microorganismos capaces de producir

infecciones en pacientes son los mesfilos y algunos psicrtrofos ya que sus
temperaturas ptimas de crecimiento coinciden con las corporales.

FORMULACIN DE MEDIOS DE FERMENTACIN

La preparacin de medios para el desarrollo de procesos de fermentacin es una
etapa fundamental para asegurar la productividad de los mismos. Donde los
componentes de los medios constituyen los efectores externos de naturaleza
qumica que desempean un rol esencial en los procesos ya que deben cumplir con
los requerimientos del crecimiento y de formacin de productos y adems
suministrar energa para la sntesis de metabolitos y para el mantenimiento celular.
No obstante que los microorganismos varan considerablemente respecto de los
nutrientes que pueden necesitar es posible efectuar la distincin de las siguientes
categoras de componentes:
a) Macronutrientes, agregados en cantidades de gramos por litro que estn
representados por las fuentes de C, N, S, P, K y Mg.
b) Micronutrientes o elementos trazas representados por las sales de Fe, Mn, Mo,
Ca, Zn y Co que se agregan a los medios en cantidades de miligramos o microgramos
por litro.
c) Factores de crecimiento, que estn constituidos generalmente por componentes
orgnicos suministrados en baja concentracin y que no son sintetizados ni
metabolizados por las clulas, sino incorporados a estructuras celulares y de funcin

metablica especfica, como vitaminas, algunos aminocidos, cidos grasos no

saturados, etc.
Los medios pueden clasificarse, considerando la naturaleza qumica de los
componentes, en:

Medios sintticos o medios qumicamente definidos.

Medios complejos, en cuya composicin intervienen sustancias de origen

animal o vegetal como peptonas, extracto de levadura, macerado de maz,
harina de soja, etc. que aportan las sustancias fundamentales ya
mencionadas, pero que son qumicamente indefinidas y de composicin
variable

CRECIMIENTO Y SNTESIS DEL PRODUCTO EN PROCESOS INDUSTRIALES.

Hay dos tipos fundamentales de productos metablicos: primarios y secundarios.
Un metabolito primario es el que se forma durante la fase primaria del crecimiento
del microorganismo, mientras que un metabolito secundario es el que se forma
cerca del final de la fase de crecimiento, frecuentemente cerca de, o en la fase
estacionaria del crecimiento. Las diferencias entre un metabolito primario y un
metabolito secundario se ilustran en la imagen de la izquierda.

Metabolitos primarios microbianos.

Un proceso microbiano tpico, en el que el producto se forma durante la fase
primaria del crecimiento, es el alcohol (etanol) obtenido por fermentacin. El etanol
es un producto del metabolismo anxico de la levadura y de algunas bacterias y se
forma como parte del metabolismo de la energa. Debido a que el crecimiento slo
puede tener lugar si puede producirse energa, la formacin de etanol tiene lugar en
paralelo con el crecimiento.

Metabolitos secundarios microbianos.

Un tipo ms complejo de productos industriales es aquel en el que el producto
deseado no se produce durante la fase primaria del crecimiento sino durante la fase
estacionaria. Los metabolitos producidos durante la fase estacionaria se denominan
metabolitos secundarios y son algunos de los metabolitos ms comunes y ms
importantes de inters industrial. Mientras que el metabolismo primario es
generalmente similar en todas las clulas, el metabolismo secundario presenta
claras diferencias entre un organismo y otro. Las caractersticas reconocidas del
metabolismo secundario son:

Cada metabolito secundario slo lo forman relativamente pocos organismos.

Los metabolitos secundarios, aparentemente no son esenciales para el

crecimiento y la reproduccin.

Con frecuencia, los metabolitos secundarios se producen como un grupo de

estructuras estrechamente relacionadas.

Con frecuencia es posible obtener una espectacular superproduccin de

metabolitos secundarios, en tanto que los metabolitos primarios, ligados como
estn al metabolismo primario, usualmente no se pueden supe producir de una
manera tan espectacular.

IV.

MATERIALES Y EQUIPOS
MATERIALES

01 vaso de precipitado de 1 lt estril.

Pipetas de 10, 5, 2 ,1 ml

Placas Petri

Tubos de ensayo

Cepas de lactobacillus

Agar rogosa

Equipo para incubacin anaerbica,

Equipo para determinacin de acidez titulable

V.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. Sembrar la leche con lactobacillus.

2. Verter leche (aproximadamente 1Lt) en un vaso de precipitado de 1000ml.

3. Luego en un matraz con 50ml de leche inocular el cultivo lctico BIFLORA

(dcima parte), agitar y verter al vaso de precipitado con 1Lt de leche. Agitar
con una varilla de vidrio.

4. Preparar los tubos de ensayo para las diluciones.

5. En 36 tubos de ensayo previamente rotulados echar 9 ml de agua peptonada
(solo en el tubo 10-1 agregar 0.5ml de leche con el cultivo lctico). Realizar
las diluciones hasta 10-4 para cada tiempo.
6. Incubar a 43 C.
7. Controlar el proceso de fermentacin realizar las siembras y titulaciones
necesarias.
8. Utilizar una cepa con fecha de vencimiento

recientemente vencida.

Comparar con los resultados anteriores. Graficar los resultados vs. Tiempo.

VI.

RESULTADOS
TABLA N01: RESULTADOS DE CEPAS CON FECHA DE VENCIMIENTO NO VENCIDA
(2013)

Hora
anlisis

de

Tiempo min

D(acidez)

Recuento de Bacterias
lcticas

9:05

18

1 x 104

9:40

35

18.5

0 x 104

10:20

40

20

1 x 104

11:00

40

32

4 x 104

11:40

40

50

6 x 104

12:20

40

64

17 x 104

13:00

40

72

34 x 104

13:50

50

78

68 x 104

14:20

30

80

75 x 104

Ufc/ml

TABLA N02: RESULTADOS DE CEPAS CON FECHA DE VENCIMIENTO NO VENCIDA

(2013)

Hora de Tiempo

Tiempo
()

Bacterias lcticas

de

Log

anlisis

min

9:05

18

1 x 104

9:40

35

35

18.5

0 x 104

10:20

40

75

20

1 x 104

11:00

40

115

32

4 x 104

4.60

11:40

40

155

50

6 x 104

4.78

12:20

40

195

64

17 x 104

5.23

13:00

40

235

72

34 x 104

5.53

13:50

50

285

78

68 x 104

5.83

14:20

30

315

80

75 x 104

5.87

min

(acidez)

Recuento

Ufc/ml

- No se consideraran las placas N1 y N2 en los siguientes grficos debido a que

no se control la temperatura de fermentacin de 43C, bajando este a 38C.
- Placas N1 y N2: Poca produccin de cido lctico y mal desarrollo y
crecimiento de Bacterias lcticas.

GRAFICOS DE RESULTADOS
Recuento
de 1 x 104
Bacterias lcticas
Ufc/ml

4 x 104 6 x 104

17 x 104

34 x 104

68 x 104

75 x 104

Tiempo ()
min

115

195

235

285

315

75

155

x (Ufc/ml)

Variacin de Biomasa
800000
700000
600000
500000
400000
300000
200000
100000
0
75

115

155

195

235

285

315

(min)

D (acidez)

20

32

50

64

72

78

80

Tiempo ()min

75

115

155

195

235

285

315

Acidez (D)

Produccin de cido lctico

90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
75

115

155

195
(min)

235

285

315

Log X

4.60

4.78

5.23

5.53

5.83

5.87

Tiempo ()
min

75

115

155

195

235

285

315

Nmero de Celulas
7
6

Log X

5
4
3
2
1
0
75

115

155

195

235

285

315

(min)

Para determinar el tiempo de vida de una cepa liofilizada es necesario comparar el

crecimiento de la biomasa con la velocidad de sntesis del producto final.

Recuento
de 1 x 104
Bacterias lcticas
Ufc/ml
D(acidez)
20

+ X

4 x 104

6 x 104

17 x 104

34 x 104

68 x 104

75 x 104

32

50

64

72

78

80

x (Ufc/ml

VS

D )

90
80

Acidez (D)

70
60
50
40
30
20
10
0
10000

40000

60000

170000

340000

680000

750000

x (Ufc/ml)

X = 10 000 Ufc/ml

VII.

CONCLUSIONES

La interaccin marca-tiempo de almacenamiento tiene un efecto significativo

sobre el nmero de bacterias cido lcticas, enterococos y la concentracin de
las aminas bigenas detectadas

La prctica realizada nos mostr de manera sencilla un mtodo de crecimiento

de bacterias lcticas; haciendo uso de la leche como sustrato; as se pudo
obtener a diferentes tiempos la reproduccin inmediata de estas bacterias,
entonces as se pudo hacer una curva de crecimiento de bacterias; teniendo en
los primeros minutos un crecimiento minsculos hasta que llega a los 315
minutos donde el nmero de ufc lleg a 75 x 104. Entonces se puede decir que
a ms tiempo las colonias aumentan hasta un punto tope donde estas bacterias
mueren y esta curva debera descender.

La fermentacin cido lctica es aquella que se lleva a cabo por las bacterias
cido lctica cuya actividad se desarrolla en ausencia de oxgeno (anaerobiosis).

VIII.

BIBLIOGRAFIA

http://www.biologia.edu.ar/microind/cultivo%20y%20biorreactores.htm
Mircoles 23 de julio de 2014, Tacna Per, 08:45 P.M.

http://itmorelia.edu.mx/2012-admin/extras/Bioquimica2010/BQF-1012.pdf
Mircoles 23 de julio de 2014, Tacna Per, 08:45 P.M.