Vous êtes sur la page 1sur 73

PLAGIAT

PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI AGLIKON SAPONIN KECAMBAH


KACANG HIJAU (Phaseolus radiatus L.)

SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Ilmu Farmasi

Oleh :
Yohana Octaviani
NIM : 038114013

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2009

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

ii

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

iii

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

HALAMAN PERSEMBAHAN

Aku memulai segalanya dengan pikiranku


Mengerjakannya dengan tanganku
Hanya berhenti sejenak untuk melepas lelah
Dan akhirnya
Menyelesaikan segala sesuatunya dengan hasil yang sangat memuaskan
Aku melakukan pekerjaan-pekerjaan besar
Membuat aku begitu bangga menjadi diriku sendiri
Dengan demikian aku menjadi besar
Bahkan lebih besar dari apa yang selama ini aku mimpikan
Dan tak sekalipun aku menahan hatiku dari sukacita apapun
Sebab hatiku bersukacita karena segala jerih payahku
Dan ketika aku merenungkan segalanya
Melihat kembali apa yang telah aku lakukan
Sesungguhnya aku bertanya pada diriku sendiri
Apa yang menjadi tujuan hidupku
Karena ternyata segala sesuatu adalah kesia-siaan dan usaha menjaring angin
Dan inilah yang bukan menjadi kesia-siaan
Mempersembahkan karya termegahku untukMu, BAPA
Karena menyenangkanMu adalah kerinduan hatiku

(Pengkotbah 2:1-26)

Karya ini kupersembahkan untuk


TUHAN YESUS, Bapa dan Rajaku
PAPA & MAMA, penyalur berkat terbesar dari Bapa
ANGGI, ANGGA, ANGELIA, adik-adikku yang menjadi
penyemangat hidupku
BENNY, yang selalu mendampingiku dalam segala keadaanku
dan ALMAMATERKU

GBU...GBU...GBU...GBU...GBU...GBU...GBU...GBU...GBU...GBU...GBU...GBU...GBU...GBU...GBU

iv

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas
segala berkat dan pertolongan-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi
yang berjudul Isolasi dan Identifikasi Aglikon Saponin Kecambah Kacang Hijau
(Phaseolus radiatus L.). Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat untuk
memperoleh gelar Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma Yogyakarta.
Dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini tentunya tidak terlepas dari
bantuan berbagai pihak. Oleh karena itu, dalam kesempatan ini penulis ingin
mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada :
1. Ibu Rita Suhadi, M.Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma Yogyakarta.
2. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M. Si. selaku dosen pembimbing atas
kesediaannya membimbing, mengoreksi, dan memberi saran selama persiapan
usulan penelitian, pelaksanaan penelitian, sampai selesainya penyusunan
skripsi ini.
3. Ibu Erna Tri Wulandari, M. Si., Apt. selaku dosen penguji yang telah
memberikan masukan dan saran dalam penyusunan skripsi ini.
4. Ibu Lucia Wiwid Wijayanti, M. Si. selaku dosen penguji yang telah
memberikan masukan dan saran dalam penyusunan skripsi ini.
5. Bapak Ign. Kristio Budiasmoro, M. Si. yang telah membantu penulis dalam
mendeterminasi tanaman.

vi

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

6. Ibu Christine Patramurti, M. Si., Apt. yang telah memberikan saran dan
bantuan sehingga penulis bisa menyelesaikan skripsi ini.
7. Papa dan mama serta adik-adikku Anggi, Angga, Angelia, untuk semua
dukungan dan doa, juga khususnya untuk bantuan dalam materi dan dalam
memperoleh bahan-bahan penelitian. I love U.
8. Benny, terima kasih untuk doa dan semangat yang diberikan, kebersamaan
yang indah, kotbah-kotbah yang membangun kehidupan rohaniku, dan kasih
yang nyata. Terima kasih karena mengajariku banyak hal dalam memaknai
hidupku.
9. Mas Wagiran, Sigit, Andri, Sarwanto, Ottok, Parlan, Kunto, Iswanto, Bapak
Mukmin. Terima kasih atas bantuan yang diberikan.
10. Dita, teman seperjuanganku dalam menyelesikan skripsi ini. Terima kasih
untuk kerjasamanya.
11. Shyu dan Adhy. Terima kasih untuk persahabatan yang indah.
12. Teman-teman farmasi khususnya Nia, Nenes, Ci Prima, Mba Ayu, terima
kasih atas setiap bantuan dan semangatnya.
13. Pdt. Sarah Anthony selaku gembala GSJA Filipi Klaten dan Bapak Ev. Daniel
Yohanes, terima kasih atas doanya.
14. Teman-teman kos Dewi, persekutuan Gospel, GSJA Filipi Klaten, GKM-IBS,
komsel Be-Bless, dan komsel Rajawali. Terima kasih untuk setiap doa,
bantuan, kepedulian, dan semangat yang diberikan kepada penulis.
15. Bapak Rudy Gunawan, DDD selaku dosen di GKM-IBS dan Ibu Renny.
Terima kasih atas semangat yang diberikan.

vii

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

16. Pihak lain yang tidak dapat disebutkan satu persatu oleh penulis.
Penulis menyadari sepenuhnya bahwa penyusunan skripsi ini masih jauh
dari sempurna. Maka dari itu, penulis dengan senang hati menerima segala saran
maupun kritik yang bersifat membangun, yang dapat membantu skripsi ini agar
dapat menjadi lebih sempurna dan berguna. Akhir kata semoga skripsi ini dapat
memberi manfaat bagi pembacanya dan bagi perkembangan ilmu pengetahuan
terutama di bidang kefarmasian.

Yogyakarta, 4 Mei 2009


Penulis

viii

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

ix

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

INTISARI
Saponin merupakan salah satu senyawa kimia yang terkandung dalam
biji kacang hijau (Phaseolus radiatus L.) dan kadarnya meningkat ketika
berkecambah. Bila dihidrolisis dengan asam, saponin akan menghasilkan aglikon
(sapogenin). Berdasarkan aglikonnya, saponin dibedakan menjadi saponin steroid
dan triterpenoid. Saponin steroid digunakan sebagai senyawa awal untuk sintesis
beberapa bahan seperti hormon seks, kortison, vitamin D, dan glikosida jantung.
Sedangkan saponin triterpenoid sering dimanfaatkan sebagai ekspektoran dan
antiinflamasi. Penentuan tipe saponin berguna untuk pemanfaatan selanjutnya dari
tanaman yang mengandung tipe saponin tersebut. Penelitian ini bertujuan
mengetahui tipe aglikon saponin dalam kecambah kacang hijau beserta
karakternya secara KLT dan spektrofotometri UV.
Jenis penelitian yang digunakan adalah penelitian noneksperimental
dengan cara analisis deskriptif komparatif. Sebagai pembanding digunakan Succus
Liquiritiae. Uji pendahuluan saponin dilakukan dengan uji buih dan reaksi warna
Liebermann-Burchard. Saponin dihidrolisis menjadi aglikonnya dan diisolasi
dengan metode KLT preparatif, kemudian dilakukan uji kemurnian secara KLT
multi-eluen untuk mendapatkan karakter aglikon saponin berupa warna bercak
dan harga Rf. Selanjutnya, dilakukan karakterisasi aglikon saponin dengan
spektrofotometri UV.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kecambah kacang hijau
mengandung saponin triterpenoid. Isolasi dengan KLT preparatif menghasilkan
isolat yang murni secara KLT. Dengan analisis KLT, isolat tersebut tampak
sebagai bercak ungu pada deteksi dengan sinar UV 254 nm dan biru dengan
deteksi anisaldehid-asam sulfat. Hasil spektrofotometri UV menunjukkan puncak
tunggal isolat aglikon saponin kecambah kacang hijau dengan max 280,4 nm.
Kata kunci : aglikon saponin, triterpenoid, kecambah, Phaseolus radiatus L.,
KLT, KLT preparatif, spektrofotometri UV

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

ABSTRACT
Saponin is one of the chemical substance in mungbean (Phaseolus
radiatus L.) and its concentration promotes up in the sprout-shape. Saponins are
hydrolized by acids to give an aglycone (sapogenin). Saponin are divided into two
types according to the aglycone, they are steroidal and triterpenoid types.
Steroidal saponins are used as starting materials for the synthesis of such
compounds as the sex hormones, cortisone, vitamin D, and the cardiac glycosides.
Meanwhile the triterpenoid saponins are generally used for expectorant and
antiinflamation. Knowing the type of saponin is very useful for the next
preparation of the plants that include the type of the saponin. The purposes of this
research are to knowing the type of saponin of mungbean sprouts and their
characterization based on Thin Layer Chromatography and UV
spectrophotometry.
This was a non-experimental research using comparative descriptive
analysis. Succus Liquritiae is used as standard. Saponin was tested with foam test
and Liebermann-Burchard reaction. Saponin was hydrolized to produce its
aglycone. The isolation was done through preparative TLC method. Purity test
was done using multi-eluen TLC to get characters of saponin aglycone, included
spot colour and Rf value. Then, characterization was done through UV
spectrophotometry.
Based on the research, indicate that mungbean sprout contained
triterpenoid saponin. Isolation using TLC preparative gave pure triterpenoid
saponin isolate by TLC multi-eluen. Using TLC analysis, the isolate seemed like a
violet spot by UV 254 nm detection and blue spot by reaction with anisaldehidesulphuric acid. The result of UV spectrophotometry showed only one peak of
isolate saponin aglycone mungbean sprout with max 280,4 nm.
Key words : saponin aglycone, triterpenoid, sprout, Phaseolus radiatus L., TLC,
PTLC, UV spectrophotometry

xi

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL...............................................................................

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ....................................

ii

HALAMAN PENGESAHAN .....................................................................

iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ........................................................................

iv

PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK


KEPENTINGAN AKADEMIS .........................................................................

KATA PENGANTAR .......................................................................................

vi

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................

ix

INTISARI . ........................................................................................................

ABSTRACT.........................................................................................................

xi

DAFTAR ISI......................................................................................................

xii

DAFTAR TABEL..............................................................................................

xvi

DAFTAR GAMBAR .........................................................................................

xvii

DAFTAR LAMPIRAN......................................................................................

xviii

BAB I . PENGANTAR ..................................................................................

A. Latar Belakang ....................................................................................

1. Permasalahan ........................................................................

2. Keaslian penelitian ................................................................

3. Manfaat penelitian.................................................................

B. Tujuan Penelitian................................................................................

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ..........................................................

A. Kacang hijau .......................................................................................

xii

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

Keterangan botani .................................................................

2. Nama daerah. .........................................................................

3. Deskripsi .................................................................................

4. Khasiat ....................................................................................

5. Kandungan kimia ..................................................................

B. Kecambah .............................................................................................

C. Succus Liquiritiae...............................................................................

D. Saponin. ...............................................................................................

E. Penyarian ..............................................................................................

1.

F. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan Kromatografi Lapis Tipis

Preparatif (KLTP) .................................................................................... 11


G. Spektrofotometri Ultraviolet .............................................................

12

H. Keterangan Empiris ...........................................................................

16

BAB III METODE PENELITIAN ..............................................................

17

A. Jenis dan Rancangan Penelitian .......................................................

17

B. Definisi Operasional ..........................................................................

17

C. Bahan dan Alat penelitian .................................................................

18

D. Jalan Penelitian ...................................................................................

19

1. Determinasi tanaman ............................................................

19

2. Pengumpulan bahan dan proses perkecambahan ..............

19

3. Pemeriksaan organoleptik dan makroskopik .....................

19

4. Uji saponin .............................................................................

19

5. Hidrolisis saponin kecambah kacang hijau dan

xiii

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

Succus Liquiritiae

20

6. Ekstraksi aglikon saponin kecambah kacang hijau dan

Succus Liquiritiae..................................................................

20

7. Pemeriksaan pendahuluan aglikon saponin


dengan KLT ...........................................................................

21

8. Isolasi aglikon saponin dengan KLT preparatif ................

21

9. Uji kemurnian dengan KLT multi-eluen ............................

22

10. Spektrofotometri Ultra Violet (UV).........................................

22

E. Tata Cara Analisis Hasil ....................................................................

23

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................

24

A. Determinasi Tanaman. .......................................................................

24

B. Pengumpulan Bahan dan Proses Perkecambahan ..........................

24

C. Hasil Pemeriksaan Organoleptik dan Makroskopik ......................

25

D. Uji Saponin .........................................................................................

26

E. Hidrolisis Saponin Kecambah Kacang Hijau dan

Succus Liquiritiae...............................................................................

29

F. Ekstraksi Aglikon Saponin Kecambah Kacang Hijau dan

Succus Liquiritiae...............................................................................

30

G. Pemeriksaan Pendahuluan Aglikon Saponin dengan KLT ...........

31

H. Isolasi Aglikon Saponin dengan KLT Preparatif ...........................

36

I.

Uji Kemurnian dengan KLT multi-eluen ........................................

37

J.

Spektrofotometri Ultra Violet (UV)......................................................

43

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ......................................................

46

xiv

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

A. Kesimpulan .........................................................................................

46

B. Saran ....................................................................................................

46

DAFTAR PUSTAKA .....................................................................................

47

LAMPIRAN .....................................................................................................

49

BIOGRAFI PENULIS ....................................................................................

55

xv

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

DAFTAR TABEL

Tabel I. Hasil kromatogram KLT pendahuluan .....................................

33

Tabel II. Hasil kromatogram uji kemurnian dengan


KLT multi-eluen .........................................................................

xvi

38

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1.

Struktur kimia dua macam golongan saponin....................

Gambar 2.

Diagram spektrofotometer .................................................

15

Gambar 3.

Gugus hidrofilik dan lipofilik pada saponin.......................

26

Gambar 4.

Adsorpsi molekul-molekul saponin pada antarmuka


air-udara .............................................................................

27

Gambar 5.

Reaksi Liebermann-Burchard ............................................

28

Gambar 6.

Mekanisme hidrolisis Succus Liquiritiae dalam


suasana asam ......................................................................

30

Gambar 7.

Hasil kromatogram KLT pendahuluan...............................

32

Gambar 8.

Reaksi antara saponin triterpenoid dengan deteksi


anisaldehida-asam sulfat ....................................................

Gambar 9.

35

Hasil kromatogram KLT multi-eluen dengan fase gerak


kloroform metanol (95:5 v/v).........................................

39

Gambar 10. Hasil kromatogram KLT multi-eluen dengan fase gerak


kloroform metanol air (64:50:10 v/v) .........................

40

Gambar 11. Hasil kromatogram KLT multi-eluen dengan fase gerak


n-butanol etanol air (7:2:5 v/v) ....................................

41

Gambar 12. Spektra aglikon saponin kecambah kacang hijau (sampel)

45

Gambar 13. Spektra saponin Succus Liquiritiae (pembanding) ............

45

xvii

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat pengesahan determinasi ............................................

49

Lampiran 2. Sertifikat analisis Succus Liquiritiae..................................

50

Lampiran 3. Foto biji dan kecambah kacang hijau.................................

51

Lampiran 4. Foto uji saponin..................................................................

52

Lampiran 5. Foto alat hidrolisis .............................................................

53

Lampiran 6. Foto alat menyaring isolat..................................................

54

xviii

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

BAB I
PENGANTAR

A. Latar Belakang
Hampir semua tumbuhan memiliki khasiat dalam hubungannya dengan
kesehatan. Dasar inilah yang membuat penelitian tentang tumbuhan berkembang
pesat. Lebih jauh lagi, penelitian selanjutnya bukan hanya untuk mengetahui efek
kesehatan dari suatu tumbuhan, tetapi juga untuk mengetahui senyawa kimia apa
sajakah yang dapat memberikan efek kesehatan bagi manusia. Salah satu dari
senyawa kimia ini adalah saponin.
Pada dasarnya, pencarian saponin dalam tumbuhan didasari atas
kebutuhan akan sumber sapogenin (aglikon saponin). Saponin dengan aglikon
triterpenoid banyak dimanfaatkan sebagai ekspektoran dan antiinflamasi
(Bruneton, 1999), sedangkan saponin dengan aglikon steroid sangat penting
dalam sintesis bahan-bahan seperti hormon seks, kortison, vitamin D, dan
glikosida jantung (Evans, 2002).
Salah satu sumber saponin adalah biji kacang hijau. Bila biji kacang
hijau ini dikecambahkan, kadar saponinnya akan meningkat sekitar 450%. Selain
dapat membangkitkan sistem kekebalan tubuh, saponin dalam kecambah juga
dapat menurunkan kadar lemak LDL (Low Density Lipoprotein) tanpa
mengganggu kadar lemak HDL (High Density Lipoprotein) (Anonim, 2007). LDL
bersifat atherogenik (dapat memicu atherosklerosis atau pengerasan pembuluh
darah akibat penimbunan lemak) sedangkan HDL bersifat anti atherogenik

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

(mengangkut kolesterol kembali ke hati untuk dikatabolisme sehingga


mengurangi simpanan kolesterol). Kadar LDL normal adalah < 130 mg/dl,
sedangkan kadar HDL normal adalah > 40 mg/dl. Di Indonesia, kecambah
merupakan bahan pangan yang cukup dikenal dan memiliki harga yang
terjangkau. Kecambah atau tauge ini merupakan salah satu sayuran dalam
masakan soto dan rawon.
Penentuan tipe saponin berguna untuk pemanfaatan selanjutnya dari
tanaman yang mengandung saponin tersebut. Setelah diketahui tipe saponin dan
karakter aglikon saponin dari kecambah kacang hijau, diharapkan selanjutnya
dapat diketahui secara pasti struktur saponin pada kecambah kacang hijau dan
pemanfaatan selanjutnya saponin kecambah kacang hijau tersebut sebagai obat
untuk menurunkan kolesterol dan membangkitkan sistem kekebalan tubuh.
Untuk mengetahui dan lebih mendalami tentang saponin kecambah
kacang hijau maka dilakukan penelitian mengenai isolasi aglikon saponin
kecambah kacang hijau (Phaseolus radiatus L.) secara kromatografi lapis tipis
preparatif (KLTP) dan identifikasinya secara kromatografi lapis tipis (KLT) dan
spektrofotometri ultraviolet (UV).
1. Permasalahan
Berdasarkan latar belakang di atas, timbul permasalahan untuk
diteliti, yaitu :
1. Tipe saponin apakah yang terdapat dalam kecambah kacang hijau?
2. Bagaimana karakter aglikon saponin kecambah kacang hijau secara KLT
dan spektrofotometri UV?

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

2. Keaslian penelitian
Sejauh penelusuran pustaka yang dilakukan penulis, penelitian
mengenai isolasi dan identifikasi aglikon saponin kecambah kacang hijau serta
karakternya secara KLT dan spektrofotometri UV belum pernah dilakukan.
3. Manfaat penelitian
a. Manfaat teoritis
Penelitian ini diharapkan dapat bermanfaat dalam pengembangan
ilmu kefarmasian khususnya tentang tipe saponin kecambah kacang hijau.
b. Manfaat praktis
Penelitian ini diharapkan dapat melengkapi informasi mengenai
tipe saponin kecambah kacang hijau dan karakternya secara KLT dan
spektrofotometri UV serta memberikan informasi sumber saponin dari
bahan pangan.

B. Tujuan Penelitian
1. Tujuan umum
Penelitian ini secara umum bertujuan untuk lebih mendalami
pengetahuan tentang kecambah kacang hijau.
2. Tujuan khusus
Penelitian ini secara khusus bertujuan untuk mengetahui tipe saponin
kecambah kacang hijau dan karakter aglikon saponin pada kecambah kacang
hijau secara KLT dan spektrofotometri UV.

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA

A. Kacang Hijau
1. Keterangan botani
Kacang hijau memiliki nama ilmiah Phaseolus radiatus L. dan
termasuk suku Papilionaceae (Marzuki dan Soeprapto, 2005).
2. Nama daerah
Kacang hijau dikenal dengan berbagai macam nama, antara lain :
Sumatera : kacang padi, retak hijo, retik ritak
Jawa

: kacang ijo, kacang hejo, kacang herang

Sulawesi : tamul, tambul, bue kope, hue moidono, tibuang kopek


Maluku

: bua, hue elo, temelo, tamelo, bora, tangun, kalebu, pue mepim
(Anonim, 1995)

3. Deskripsi
Tanaman kacang hijau berbatang tegak dengan ketinggian sangat
bervariasi, antara 30-60 cm, tergantung varietasnya. Cabangnya menyamping
pada batang utama, berbentuk bulat, dan berbulu. Warna batang dan
cabangnya ada yang hijau ada juga yang ungu.
Daunnya trifoliat (terdiri dari tiga helaian) dan letaknya berseling.
Tangkai daunnya cukup panjang, lebih panjang dari helaian daunnya. Warna
daunnya hijau muda sampai hijau tua.

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

Bunganya berwarna kuning, tersusun dalam tandan, keluar pada


cabang serta batang dan dapat menyerbuk sendiri. Polong berbentuk silindris
dengan panjang antara 6-15 cm dan biasanya berbulu pendek. Sewaktu muda
polong berwarna hijau dan setelah tua berwarna hitam atau coklat.
Bijinya lebih kecil dibandingkan biji kacang-kacangan lain. Warna
bijinya kebanyakan hijau kusam atau hijau mengkilap, beberapa ada yang
berwarna kuning, coklat, dan hitam. Tanaman kacang hijau berakar tunggang
dengan akar cabang pada permukaan (Marzuki dan Soeprapto, 2005).
4. Khasiat
Kacang hijau berkhasiat sebagai obat beri-beri, demam nifas,
pelancar air seni dan buang air besar, jantung lemah, dan kurang darah
(Anonim, 1995; Anonim, 2007)
5. Kandungan kimia
Biji kacang hijau mengandung sterol/ terpen, saponin, protein,
lemak, karbohidrat, kalsium, fosfor, besi, vitamin A, vitamin B1, vitamin C
(Anonim, 1995).

B. Kecambah
Kecambah merupakan tumbuhan kecil yang baru tumbuh dari biji dan
masih

hidup

dari

(Tjitrosoepomo, 2003).

persediaan

makanan

yang

terdapat

dalam

biji

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

Menurut Sutopo (1985), ada 5 tahap proses perkecambahan, yaitu :


1. proses penyerapan air oleh biji, melunaknya kulit biji, dan hidrasi dari
protoplasma.
2. adanya kegiatan-kegiatan sel dan enzim-enzim serta naiknya tingkat respirasi
biji.
3. penguraian bahan-bahan seperti karbohidrat, lemak, dan protein menjadi
bentuk-bentuk yang melarut dan ditranslokasikan ke titik-titik tumbuh.
4. asimilasi bahan-bahan tadi di daerah meristematik untuk menghasilkan energi
untuk kegiatan pembentukan komponen dan pertumbuhan sel-sel baru.
5. pertumbuhan kecambah melalui proses pembelahan, pembesaran, dan
pembagian sel-sel pada titik-titik tumbuh.
Faktor-faktor yang mempengaruhi perkecambahan dibedakan menjadi 2,
yaitu :
1. Faktor dalam, yang meliputi tingkat kemasakan biji, ukuran biji, dormansi,
dan zat-zat penghambat perkecambahan
2. Faktor luar, yang meliputi air, temperatur, oksigen, cahaya, dan medium
(Sutopo, 1985)
Ketika biji-bijian dan kacang-kacangan dikecambahkan, secara umum
kadar saponinnya menanjak 450%. Saponin dalam kecambah akan menurunkan
LDL tanpa mengganggu kandungan HDL. Setelah melalui sejumlah percobaan
pada binatang, saponin kecambah diketahui dapat membangkitkan sistem
kekebalan tubuh, dengan cara menaikkan aktivitas sel pembunuh alami (natural
killer cells), khususnya sel T-limfosit dan interferon (Anonim, 2006).

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

Manfaat kecambah bagi kesehatan antara lain mencegah kanker,


mencegah serangan jantung dan stroke, mencegah osteoporosis, membangkitkan
sistem kekebalan tubuh, menjaga keasaman lambung dan memperlancar
pencernaan, membantu meningkatkan kesuburan, dan juga baik untuk kecantikan
(Anonim, 2005).

C. Succus Liquiritiae
Succus Liquiritiae merupakan ekstrak dari Liquiritiae Radix. Liquiritiae
Radix (Glycyrrhiza, Licorice root, akar kayu manis cina) berasal dari sari akar
Glycyrrhiza glabra L. yang dikeringkan (Anonim, 1965). Liquiritiae Radix
mengandung glikosida saponin, yaitu glisirisin (asam glisirizinat) yang berasa
manis 50 kali lipat sukrosa. Bila dihidrolisis, glisirisin akan terurai menjadi asam
glisiretinat dan 2 molekul asam glukuronat yang tidak berasa manis lagi. Asam
glisiretinat merupakan derivat triterpen pentasiklik tipe -amyrin. Kandungan
lainnya

adalah

glikosida

flavonoid

(antara

lain

likuiritin,

isolikuiritin,

liquiritosida, isolikuiritosida, ramnoli-kuiritin, dan ramnoisolikuiritin), derivat


kumarin (herniarin dan umbeliferon), asparagine, 22,23-dihidrostigmasterol,
glukosa, manitol, dan amilum 20% (Tyler, 1988).

D. Saponin
Saponin merupakan suatu glikosida yang memiliki berat molekul dan
kepolaran yang tinggi. Sebagai glikosida, saponin dapat dihidrolisis dengan asam
atau enzim untuk menghasilkan aglikon (sapogenin), gula, dan asam uronat.

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

Saponin merupakan surfaktan yang kuat yang menimbulkan busa bila dikocok
dalam air dan pada konsentrasi yang rendah sering menyebabkan hemolisis sel
darah merah. Saponin tersebar luas pada tanaman tingkat tinggi dan merupakan
obat yang pahit menusuk. Saponin larut dalam air dan etanol tetapi tidak larut
dalam eter (Brotosisworo, 1979; Robinson, 1995; Evans, 2002).
Hidrolisis saponin menghasilkan aglikon yang disebut sapogenin.
Berdasarkan aglikonnya, saponin dibagi menjadi dua, yaitu saponin steroid dan
saponin triterpenoid (gambar 1). Kedua macam senyawa tersebut mempunyai
hubungan glikosidal pada C-3 dan mempunyai asal-usul biogenetika yang sama
melalui asam mevalonat dan satuan isoprenoid (Brotosisworo, 1979; Bruneton,
1999; Evans, 2002).
O

21
20

11

19

R1

10

15

R2

16

HO

13
14

1
2

17

25

24

22

18
12

26
23

Kerangka steroid
29

30
20

19

18
11
25
1
2

HO

9
10
5

R 2 23

12

C
26

13

14

22
17

28

COOH

16
15

21

R1

27

7
6

24

Kerangka triterpenoid
Gambar 1. Struktur kimia dua macam golongan saponin (Robbers, 1996)

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

Saponin meningkatkan aktivitas epitel yang bersilia, suatu peristiwa


yang memicu batuk untuk mengeluarkan dahak, sedangkan pengaruh iritasi lokal
saponin dapat menimbulkan bersin. Selain itu, saponin juga dapat meningkatkan
absorpsi zat diuretika dan merangsang ginjal supaya lebih aktif (Brotosisworo,
1979) dan menghambat pertumbuhan kanker kolon serta membantu kadar
kolesterol menjadi normal (Arnelia, 2004). Beberapa saponin steroid digunakan
sebagai senyawa awal untuk sintesis beberapa bahan seperti hormon seks,
kortison, steroid diuretik, vitamin D, dan glikosida jantung (Evans, 2002).
Sedangkan saponin triterpenoid banyak dimanfaatkan sebagai ekspektoran dan
antiinflamasi (Bruneton, 1999).

E. Penyarian
Penyarian adalah kegiatan penarikan zat yang dapat larut dari bahan
yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Untuk melakukan penyarian harus
diketahui zat aktif yang dikandungnya sehingga mempermudah pemilihan cairan
penyari serta cara penyarian yang tepat (Anonim, 1986). Metode ekstraksi
menggunakan pelarut dapat dibedakan menjadi dua cara yaitu cara dingin dan
panas.
1. Cara dingin
a. Maserasi
Maserasi adalah proses pengekstraksian simplisia menggunakan pelarut
dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur.

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

10

b. Perkolasi
Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai
sempurna yang umumnya dilakukan pada temperatur kamar.
2. Cara panas
a. Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya,
selama waktu tertentu dan jumlah pelarutnya terbatas yang relatif konstan
dengan adanya pendingin balik.
b. Soxhlet
Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang
umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu
dengan jumlah pelarut yang relatif konstan dengan adanya pendingin
balik.
c. Digesti
Digesti adalah maserasi kinetik pada temperatur yang lebih tinggi dari
temperatur ruangan, secara umum dilakukan pada temperatur 40 - 50 C.
d. Infus
Infus adalah sediaan cair yang dibuat dengan menyari simplisia dengan air
pada suhu 90 C selama 15 menit.
e. Dekok
Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama ( 30 menit) dan
temperatur sampai titik didih air (Anonim, 2000).

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

11

F. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan Kromatografi Lapis Tipis Preparatif


(KLTP)
KLT merupakan metode pemisahan komponen-komponen atas dasar
perbedaan adsorpsi atau partisi oleh fase diam di bawah pergerakan pelarut
pengembang atau pelarut pengembang campur. Pemilihan pelarut pengembang
atau pelarut pengembang campur sangat dipengaruhi oleh macam dan polaritas
zat-zat kimia yang dipisahkan (Mulja dan Suharman, 1995). Penjerap yang umum
ialah silika gel (paling banyak digunakan), aluminium oksida, selulosa dan
turunannya, poliamida, dan lain-lain (Stahl, 1985).
Jarak pengembangan senyawa pada kromatogram dinyatakan dengan
angka Rf atau hRf.
jarak titik pusat bercak dari titik awal
Rf =
jarak garis depan dari titik awal
Angka Rf berjangka 0,00 dan 1,00 dan hanya dapat ditentukan dengan dua
desimal, sedangkan hRf adalah angka Rf dikalikan faktor 100 (h) menghasilkan
nilai berjangka 0 sampai 100 (Stahl, 1985).
Salah satu metode pemisahan yang memerlukan pembiayaan paling
murah dan memakai peralatan paling dasar adalah kromatografi lapis tipis
preparatif (KLTP). Ketebalan penjerap yang paling sering dipakai ialah 0,5-2 mm.
Ukuran pelat kromatografi biasanya 20x20 cm atau 20x40 cm (Hostettmann dan
Marston, 1995).
Cuplikan dilarutkan dalam sedikit pelarut sebelum ditotolkan pada pelat
KLTP. Pelarut yang baik adalah pelarut atsiri. Kebanyakan penjerap KLTP

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

12

mengandung indikator fluoresensi yang membantu mendeteksi kedudukan pita


yang terpisah sepanjang senyawa yang dipisahkan menyerap UV (Hostettmann
dan Marston, 1995).
Pita yang kedudukannya telah diketahui dikerok dari pelat dengan
spatula atau pengerok berbentuk tabung yang disambungkan ke pengumpul
vakum. Cara terakhir tidak dapat dilakukan untuk senyawa peka karena penjerap
yang mengandung senyawa yang sudah murni terus menerus terkena aliran udara
dan resiko otooksidasi selalu ada. Kemudian senyawa harus diekstraksi dari
penjerap dengan pelarut sekitar 5 ml untuk 1 g penjerap. Harus diperhatikan
bahwa makin lama senyawa berkontak dengan penjerap makin besar
kemungkinan penguraian (Hostettmann dan Marston, 1995).

G. Spektrofotometri Ultraviolet
Teknik spektroskopik adalah salah satu teknik analisis fisiko-kimia yang
mengamati tentang interaksi atom atau molekul dengan radiasi elektromagnetik
(REM). Spektrofotometri ultraviolet merupakan teknik analisis spektroskopik
yang memakai sumber radiasi elektromagnetik ultraviolet dekat (190-380 nm)
dengan memakai instrumen spektrofotometer. Dasar dari metode ini adalah
interaksi antara radiasi elektromegnetik dengan atom, molekul, atau ion. Interaksi
ini akan menyebabkan eksitasi elektron ke tingkat energi yang lebih tinggi (Mulja
dan Suharman, 1995). Proses eksitasi ini mengakibatkan terjadinya satu atau lebih
transisi. Transisi-transisi tersebut diklasifikasikan sebagai berikut :

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

13

1. Transisi elektron n *, meliputi transisi elektron-elektron heteroatom tak


berikatan ke orbital antibonding * dan terjadi pada panjang gelombang yang
panjang dan intensitasnya rendah. Transisi ini menunjukkan pergeseran
hipsokromik dalam pelarut-pelarut yang lebih polar dan dengan substituensubstituen yang bersifat pemberi elektron.
2. Transisi elektron n *, terjadi pada senyawa-senyawa jenuh yang
mengandung heteroatom seperti oksigen, nitrogen, belerang, atau halogen
3. Transisi elektron *, terjadi pada elektron di orbital , yaitu pada ikatan
rangkap dua dan rangkap tiga. Eksitasi ini paling mudah terbaca dan
bertanggung jawab terhadap spektra elektronik dalam daerah UV dan tampak
4. Transisi elektron *, terjadi pada elektron yang mempunyai ikatan
tunggal kovalen dan menduduki orbital . Tingkat energi yang dibutuhkan
untuk eksitasi ini sangat besar (Mulja dan Suharman, 1995; Sastrohamidjojo,
2001).
Spektrum ultraviolet adalah suatu gambar antara panjang gelombang
atau frekuensi serapan lawan intensitas serapan (transmitasi atau absorbansi).
Kromofor merupakan gugus tak jenuh kovalen yang dapat menyerap radiasi
dalam daerah ultraviolet dan terlihat. Contoh kromofor adalah gugus karbonil
(keton) pada aseton yang memberi serapan maksimum pada 188 nm (dengan
transisi elektronik * dan 279 nm (dengan transisi elektron n*).
Sedangkan auksokrom merupakan gugus jenuh yang bila terikat pada kromofor
akan mengubah panjang gelombang dan intensitas serapan maksimum. Ciri
auksokrom adalah heteroatom yang langsung terikat pada kromofor, misal

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

14

OCH3, Cl, OH dan NH2. Terikatnya gugus auksokrom oleh gugus kromofor
akan mengakibatkan pergeseran pita absorpsi menuju ke panjang gelombang yang
lebih panjang. Pergeseran ini disebut pergeseran merah atau pergeseran
batokromik, yang biasanya disertai dengan peningkatan intensitas serapan (efek
hiperkromik). Substitusi atau pengaruh pelarut, selain menyebabkan pergeseran
batokromik, juga dapat menyebabkan pergeseran hipsokromik (pergeseran biru),
yaitu pergeseran serapan ke arah panjang gelombang yang lebih pendek.
Sedangkan efek hipokromik adalah penurunan intensitas serapan (Pecsok, 1976;
Mulja dan Suharman, 1995; Sastrohamidjojo, 2001).
Panjang gelombang dimana terjadi eksitasi elektronik yang memberikan
absorban maksimum disebut panjang gelombang maksimum. Penentuan panjang
gelombang maksimum dapat digunakan untuk mengidentifikasi molekul (Mulja
dan Suharman, 1995).
Spektrum serapan kandungan tumbuhan dapat diukur dalam larutan yang
sangat

encer

dengan

pembanding

blangko

pelarut

serta

menggunakan

spektrofotometer yang merekam otomatis. Senyawa tak berwarna diukur pada


panjang gelombang 200-400 nm, senyawa berwarna pada panjang gelombang
200-700 nm. Panjang gelombang serapan maksimum dan minimum pada
spektrum serapan yang diperoleh direkam (dalam nm), demikian juga kekuatan
absorbansi. Bahan yang diperlukan hanya sedikit saja karena sel spektrofotometri
baku (1x1 cm) hanya dapat diisi 3 ml larutan. Pengukuran spektrum yang
demikian penting pada identifikasi kandungan tumbuhan, yaitu untuk memantau

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

15

eluat dari kolom kromatografi sewaktu pemurnian dan untuk mendeteksi golongan
senyawa tertentu (Harborne, 1987).
Pelarut yang dipakai untuk melarutkan sampel dalam spektrofotometri
UV harus memenuhi persyaratan sebagai berikut :
1. tidak mengandung sistem ikatan rangkap terkonjugasi pada struktur
molekulnya dan tidak berwarna
2. tidak terjadi interaksi dengan molekul senyawa yang dianalisis
3. kemurniannya harus tinggi atau derajat untuk analisis (Mulja dan Suharman,
1995).
Pelarut yang banyak digunakan untuk spektrofotometri UV adalah etanol
95% karena kebanyakan golongan senyawa larut dalam pelarut tersebut. Dan
sebaiknya alkohol mutlak niaga harus dihindari karena mengandung benzena yang
menyerap di daerah UV pendek (Harborne, 1987).
Komponen-komponen pokok dari spektrofotometer meliputi : (1)
sumber tenaga radiasi yang stabil, (2) sistem yang terdiri atas lensa-lensa, cermin,
celah-celah, dan lain-lain, (3) monokromator untuk mengubah radiasi menjadi
komponen-komponen panjang gelombang tunggal, (4) tempat cuplikan yang
transparan, dan (5) detektor radiasi yang dihubungkan dengan sistem meter atau
pencatat. Diagram sederhana dari spektrofotometer adalah sebagai berikut:
sumber

monokromator

sel
penyerap

detektor

pencatat

Gambar 2. Diagram spektrofotometer


(Sastrohamidjojo, 2001)

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

16

H. Keterangan Empiris
Dari penelitian ini diharapkan dapat diketahui tipe saponin pada
kecambah kacang hijau beserta karakter aglikon saponinnya secara KLT dan
spektrofotometri UV.

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

BAB III
METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian


Penelitian ini termasuk dalam penelitian noneksperimental karena di
dalam penelitian ini tidak dilakukan manipulasi atau intervensi terhadap subjek
uji.

B. Definisi Operasional
1. Identifikasi organoleptik dan makroskopik adalah cara untuk menentukan ciri
khas kecambah kacang hijau yang dilakukan berdasarkan pengamatan
terhadap rasa, warna, bau, dan bentuk.
2. Uji buih adalah cara untuk mengetahui adanya saponin dengan menggojog
ekstrak air dari kecambah kacang hijau dalam tabung reaksi sampai terbentuk
buih yang tidak hilang selama 10 menit.
3. Isolasi aglikon saponin kecambah kacang hijau adalah proses pengambilan
aglikon saponin dari kecambah kacang hijau dengan metode KLTP.
4. Karakter aglikon saponin kecambah kacang hijau secara KLT adalah hasil
KLT yang didapatkan berupa warna bercak dan Rf aglikon saponin kecambah
kacang hijau.
5. Karakter aglikon saponin kecambah kacang hijau secara spektrofotometri UV
adalah hasil spekra isolat aglikon saponin kecambah kacang hijau berupa
panjang gelombang maksimum (max)

17

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

18

C. Bahan dan Alat Penelitian


1. Bahan
a. Bahan utama : kacang hijau
b. Bahan pembanding yang digunakan adalah Succus Liquiritiae yang
diambil dari Laboratorium Farmasetika Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma Yogyakarta (asal BRATACO/pharmaceutical grade).
c. Bahan kimia yang digunakan, kecuali disebut lain, berderajat pro analisis,
antara lain : aquadestilata (diambil dari Laboratorium Farmakognosi
Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta), asam
asetat anhidrida, asam sulfat, asam klorida, natrium sulfat anhidrat, silika
gel GF254, kloroform, metanol, anisaldehida, etanol, n-butanol.
2. Alat
Bakul bambu, neraca analitik (Metler Toledo), kompor, waterbath,
seperangkat alat refluks, magnetic stirrer, sinterred glass, oven, alat
penyemprot, pipet mikroliter, lampu UV 254 nm, bejana kromatografi,
spektrofotometer UV-Vis Lambda 20 (Perkin Elmer) dan kuvet (Quartz),
peralatan gelas (tabung reaksi, Erlenmeyer, corong pisah, gelas ukur, dan lainlain).

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

19

D. Jalan Penelitian
1. Determinasi tanaman
Determinasi tanaman kacang hijau dilakukan dengan menggunakan
buku acuan (Van Steenis, 1975).
2. Pengumpulan bahan dan proses perkecambahan
Biji kacang hijau diperoleh dari pedagang biji-bijian di Klaten.
Kacang hijau yang digunakan adalah kacang hijau jenis lokal. Biji yang baik
dipilih untuk dikecambahkan.
Biji kacang hijau direndam dalam air selama satu malam kemudian
ditebarkan dalam bakul bambu, dan diberi daun untuk menjaga kelembaban.
Setiap hari disiram air sebanyak 4 kali (Gsianturi, 2003). Kecambah yang
digunakan adalah kecambah berumur 2 hari.
3. Pemeriksaan organoleptik dan makroskopik
Pemeriksaan organoleptik dan makroskopik dilakukan berdasarkan
pengamatan terhadap rasa, warna, bau, dan bentuk kecambah kacang hijau,
4. Uji saponin
a. Uji buih
Sebanyak 500 mg kecambah kacang hijau dilumatkan dan
dimasukkan dalam tabung reaksi, lalu ditambah 10 ml air panas, didinginkan
kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 detik. Terbentuknya buih selama tidak
kurang dari 10 menit menunjukkan adanya saponin (Anonim, 1995).

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

20

b. Reaksi Liebermann Burchard


Sebanyak 500 mg kecambah kacang hijau dilumatkan, dipanasi
dengan 1 ml asam asetat anhidrida lalu ditetesi dengan asam sulfat pekat 2
tetes, akan terbentuk warna hijau sampai biru bila mengandung senyawa
steroid atau warna merah muda sampai merah bila mengandung senyawa
triterpen (Bruneton, 1999).
5. Hidrolisis saponin kecambah kacang hijau dan Succus Liquiritiae
Secara terpisah, 10 gram Succus Liquiritiae dihaluskan dan 10 gram
kecambah kacang hijau dilumatkan kemudian dihidrolisis dengan 50 ml asam
sulfat 1 N selama 2 jam dengan menggunakan refluks kemudian didinginkan
(Harborne, 1987). Hasil hidrolisis ini dinamakan hidrolisat.
6. Ekstraksi aglikon saponin kecambah kacang hijau dan Succus Liquritiae
Hidrolisat yang diperoleh dituang ke dalam Erlenmeyer bertutup,
ditambahkan kloroform 30 ml dan diaduk menggunakan magnetic stirrer
selama 30 menit. Fase kloroform yang terbentuk dipisahkan dengan corong
pisah, larutan fase air-asam diekstraksi ulang dengan kloroform sebanyak 3
kali. Fase kloroform yang diperoleh ditambah dengan natrium sulfat anhidrat
lalu disaring. Filtrat yang diperoleh diuapkan sampai volumenya sekitar 5 ml.
Hasil yang diperoleh adalah ekstrak kloroform kecambah kacang hijau dan
ekstrak kloroform Succus Liquiritiae (Stahl, 1985).

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

21

7. Pemeriksaan pendahuluan aglikon saponin dengan kromatografi lapis


tipis (KLT)
Pemisahan dengan metode KLT ini menggunakan fase diam silika
gel GF 254 dan fase gerak kloroform metanol (95:5 v/v). Pada titik pertama
lempeng ditotolkan pembanding (ekstrak kloroform Succus Liquiritiae)
sebanyak 10 l dan pada titik kedua ditotolkan sampel (ekstrak kloroform
kecambah kacang hijau) sebanyak 20 l. Jarak penotolan 1,5 cm dari tepi
bawah lempeng dengan jarak pengembangan 10 cm, lalu diamati dengan sinar
UV 254 nm. Selanjutnya disemprot dengan pereaksi anisaldehida-asam sulfat
LP dan dipanaskan pada suhu 110 C selama 10 menit lalu diamati dengan
sinar tampak.
8. Isolasi aglikon saponin dengan KLT preparatif
Isolasi atau pemisahan aglikon saponin dari senyawa-senyawa lain
dilakukan dengan metode KLT preparatif. Fase diam yang digunakan adalah
silika gel GF254 pada lempeng berukuran 20 x 20 cm dengan ketebalan 0,5 mm
dengan fase gerak kloroform metanol (95:5 v/v).
Pada lempeng dilakukan penotolan ekstrak kloroform berbentuk pita
kemudian dikembangkan dengan fase gerak kloroform metanol (95:5 v/v).
Jarak penotolan 1,5 cm dari tepi bawah lempeng. Setelah jarak pengembangan
mencapai 10 cm, pelat diambil dan dikeringkan kemudian dimasukkan lagi
dalam bejana. Pengembangan berulang dilakukan sebanyak 2 kali.
Setelah pelat dikeringkan, pita yang berfluoresensi di bawah sinar
UV 254 nm dan diduga merupakan aglikon saponin dikerok dan dikumpulkan.

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

22

Hasil kerokan ini dilarutkan dalam kloroform dan disaring dengan sinterred
glass. Filtrat diuapkan di atas waterbath sampai volumenya sekitar 5 ml. Hasil
yang diperoleh disebut isolat aglikon saponin Succus Liquiritiae dan isolat
aglikon saponin kecambah kacang hijau. Isolat ini kemudian diuji
kemurniannya

dengan

KLT

multi-eluen

dan

diidentifikasi

secara

spektrofotometri ultra violet.


9. Uji kemurnian dengan KLT multi-eluen
Uji kemurnian dengan KLT multi-eluen ini menggunakan fase diam
silika gel GF254 dan 3 fase gerak yang berbeda, yaitu kloroform metanol
(95:5 v/v), kloroform metanol air (64:50:10 v/v), dan n-butanol etanol
air (7:2:5 v/v) (Stahl, 1973; Gasparic, 1978; Wagner, 1999).
Pada titik pertama lempeng ditotolkan isolat pembanding sebanyak
10 l dan pada titik kedua ditotolkan isolat aglikon saponin kecambah kacang
hijau sebanyak 20 l dengan jarak 1,5 cm dari tepi bawah lempeng.
Selanjutnya ketiga lempeng dielusi dengan ketiga fase gerak tersebut dalam
bejana yang sudah dijenuhkan. Setelah mencapai jarak pengembangan 10 cm,
lempeng diangkat dan dikeringkan, lalu diamati dengan di bawah lampu UV
254 nm. Selanjutnya disemprot dengan pereaksi anisaldehida-asam sulfat LP,
dipanaskan pada suhu 1100 C selama 10 menit lalu diamati dengan sinar
tampak.
10. Spektrofotometri Ultra Violet (UV)
Isolat aglikon saponin pembanding dan isolat aglikon saponin
kecambah kacang hijau diuapkan sampai kering kemudian dilarutkan dalam

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

23

etanol dan dibaca serapannya dengan spektrofotometer UV pada panjang


gelombang 220-350 nm.

E. Tata Cara Analisis Hasil


Data yang telah diperoleh berupa data kualitatif dan dipaparkan secara
deskriptif komparatif, yaitu dengan menggambarkan apa adanya hasil yang
diperoleh dan dibandingkan dengan pembanding yang sesuai, yaitu Succus
Liquiritiae.
Untuk mengetahui tipe aglikon saponin kecambah kacang hijau
dilakukan uji pendahuluan yang meliputi uji buih dan reaksi warna Liebermann
Burchard. KLT pendahuluan digunakan untuk mengetahui bercak aglikon saponin
sehingga dapat diketahui bercak mana yang akan diisolasi. Caranya adalah dengan
membandingkan warna bercak dan Rf dari ekstrak kecambah kacang hijau dan
ekstrak Succus Liquiritiae secara kualitatif.
Isolasi aglikon saponin kecambah kacang hijau dilakukan dengan
metode KLT preparatif, sedangkan uji kemurnian isolat dilakukan dengan metode
KLT multi-eluen. Analisis hasil KLT multi-eluen dilihat dari kromatogramnya
yang hanya menghasilkan satu macam bercak. Setelah itu dilakukan juga analisis
secara kualitatif dengan spektrofotometri UV untuk melihat karakter dari aglikon
saponin yang berupa panjang gelombang maksimum (max).

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Determinasi Tanaman
Biji kacang hijau yang digunakan dalam penelitian ini diperoleh dari
pedagang biji-bijian. Oleh karena itu, biji yang digunakan untuk dikecambahkan
ditumbuhkan menjadi tanaman kemudian dideterminasi menggunakan buku acuan
determinasi menurut Van Steenis (1975).
Berdasarkan hasil determinasi dapat disimpulkan bahwa tanaman yang
ditumbuhkan dari biji tersebut benar adalah Phaseolus radiatus L. (lampiran 1).

B. Pengumpulan Bahan dan Proses Perkecambahan


Bahan yang digunakan adalah biji kacang hijau yang diperoleh dari
pedagang biji-bijian di Klaten. Proses pembuatan kecambah dilakukan dengan
menggunakan biji kacang hijau yang baik, artinya biji tidak busuk dan bentuk
masih baik. Biji kacang hijau kemudian dicuci bersih dan direndam dalam air
selama 1 malam. Proses perendaman ini bertujuan supaya biji menarik air dan
kulit bijinya melunak, sehingga dapat berkecambah. Setelah perendaman selama 1
malam, keesokan paginya biji disebar di atas daun yang dimasukkan dalam wadah
bambu dan ditutupi dengan daun. Biji disebar supaya semua biji mendapat udara
untuk proses respirasi. Biji disiram air 3 kali sehari dan ditutupi dengan daun
untuk menjaga supaya biji tetap dalam lingkungan yang lembab sehingga dapat
mendukung proses perkecambahannya. Keesokan harinya biji sudah berkecambah

24

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

25

dengan panjang sekitar 1,5 2 cm. Kecambah inilah yang digunakan sebagai
bahan percobaan. Kulit biji yang berwarna hijau dipisahkan dari kecambah.
Kecambah dilumatkan dalam mortir dengan stamper dan siap untuk digunakan
dalam percobaan.

C. Hasil Pemeriksaan Organoleptik dan Makroskopik


Pemeriksaan organoleptik dan makroskopik kecambah kacang hijau
dilakukan berdasarkan pengamatan terhadap bentuk, rasa, warna, dan baunya.
Dari hasil pemeriksaan didapatkan hasil sebagai berikut :
Rasa

tawar

Warna

kuning pucat

Bau

langu

Bentuk :

radikel berwarna putih dengan panjang 1,5 cm; kotiledon


berwarna kekuningan dengan bentuk cembung pada satu sisi
dan rata pada sisi lain, jumlah dua, dan duduk berhadapan pada
sisi yang rata

Kecambah yang digunakan pada penelitian ini dipilih yang baik, artinya memiliki
kotiledon dan radikel yang tidak rusak, utuh, tidak lembek, dan tidak ada noda.

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

26

D. Uji Saponin
1.

Uji buih
Hasil uji buih pada kecambah kacang hijau adalah positif, ditandai

dengan pembentukan buih yang mencapai tinggi lebih kurang 1,5 cm dan setelah
10 menit buih ini tidak hilang. Hal ini menunjukkan bahwa kecambah kacang
hijau mengandung saponin. Hasil uji tersebut sesuai dengan pustaka menurut
Anonim (1995), yaitu terbentuknya buih yang tidak hilang selama 10 menit.
Pembentukan buih ini dikarenakan sifat saponin yang dapat menurunkan
tegangan permukaan air. Molekul saponin mengandung gugus hidrofilik (bagian
polar) dan lipofilik (bagian nonpolar). Di dalam air, gugus hidrofilik akan
berikatan dengan air dan gugus hidrofilik menjauhi air (gambar 3).

gu

li
us

po

f i li

gug

us

COOH

gu

gus

r
h id

ofi

R"

li k

O
H

HO
R'
O
H

Gambar 3. Gugus hidrofilik dan lipofilik pada saponin

hid

rof

il ik

27

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

Gugus hidrofilik dapat bergabung dengan air namun gugus lipofilik


ditolak karena gaya adhesifnya dengan air lebih kecil dibandingkan dengan gaya
kohesif antar molekul air. Akibatnya zat tersebut diadsorpsi pada antarmuka airudara (Martin,1993).
lipofilik

udara

hidrofilik

air

Gambar 4. Adsorpsi molekul-molekul saponin pada antarmuka air-udara


(Martin, 1993)
Adsorpsi

molekul

saponin

pada

antarmuka

air-udara

dapat

mengakibatkan penurunan tegangan permukaan air yang dapat menimbulkan buih.


Dengan adanya alasan ini saponin diklasifikasikan sebagai zat aktif permukaan
(surfaktan) (Martin, 1993).
2.

Reaksi Liebermann-Burchard
Uji reaksi ini dilakukan untuk membuktikan ada tidaknya senyawa

triterpenoid atau steroid dalam kecambah kacang hijau karena reaksi ini positif
dengan kebanyakan triterpenoid dan steroid. Uji ini sangat menentukan
pembanding apa yang akan digunakan dalam identifikasi aglikon saponin kacang
hijau secara KLT. Bila didapatkan hasil bahwa kecambah kacang hijau
mengandung saponin tipe triterpenoid maka akan digunakan asam glisiretinat
sebagai pembanding dan bila kecambah kacang hijau mengandung saponin tipe
steroid maka akan digunakan stigmasterol sebagai pembanding. Kacang hijau

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

28

yang sudah dilumatkan dipanasi dengan asam asetat anhidrat (sebagai pereaksi)
dan ditetesi dengan asam sulfat (sebagai katalis) menghasilkan warna merah
keunguan (gambar 5) yang menunjukkan bahwa kecambah kacang hijau
mengandung senyawa triterpenoid.

COOH

(CH3CO)2O

H2SO4

R"

HO
R'

asam asetat anhidrida

saponin triterpenoid

COOH

CH3COOH

R"

CH3COO
R'

(warna merah keunguan)

asam asetat

Gambar 5. Reaksi Liebermann-Burchard (Kristianti, 2007)


Dari hasil uji pendahuluan ini dapat disimpulkan bahwa kecambah
kacang hijau mengandung saponin triterpenoid, sehingga untuk identifikasi
dengan KLT akan digunakan asam glisiretinat sebagai pembanding.

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

29

E. Hidrolisis Saponin Kecambah Kacang Hijau dan Succus Liquiritiae


Untuk mendapatkan aglikonnya, saponin harus dihidrolisis dengan asam.
Asam yang digunakan adalah asam klorida 0,1 M. Hidrolisis dilakukan selama 2
jam menggunakan alat pendingin balik (refluks). Pembanding yang digunakan
adalah asam glisiretinat. Karena tidak tersedianya asam glisiretinat atau glisirisin
dalam bentuk murni, digunakan Succus Liquiritiae sebagai pembanding karena
Succus Liquiritiae mengandung saponin tipe triterpenoid, yaitu glisirisin.
Sedangkan pada uji saponin sebelumnya didapatkan bahwa kecambah kacang
hijau juga mengandung saponin tipe triterpenoid. Glisirisin terhidrolisis dalam
suasana asam menghasilkan asam -glisiretinat (aglikon) yang merupakan derivat
triterpen pentasiklik dengan tipe -amirin dan 2 molekul asam glukuronat
(glikon). Succus Liquiritiae diperlakukan sama dengan sampel kecambah kacang
hijau. Untuk mengetahui bahwa hidrolisis sudah terjadi dapat diketahui dari
perubahan warna yang terjadi, yaitu kecambah kacang hijau yang semula
berwarna kekuningan, setelah dihidrolisis menjadi berwarna coklat.

30

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

COOH
O

COOH

H
H

O
O

COOH
O
OH
H

OH
OH

O
OH

+
COOH

Kalor

OH

HO

asam glisiretinat

glisirisin
COOH
O

OH

OH
H

OH
OH

COOH

H
OH

2 molekul asam glukuronat

Gambar 6. Mekanisme hidrolisis Succus Liquiritiae dalam suasana asam

F. Ekstraksi Aglikon Saponin Kecambah Kacang Hijau


dan Succus Liquiritiae
Hidrolisat yang diperoleh didinginkan kemudian diekstraksi. Ekstraksi
aglikon saponin dilakukan dengan corong pisah menggunakan penyari kloroform
sebanyak 3x30 ml dimaksudkan agar memperoleh aglikon saponin dalam jumlah
yang cukup banyak. Kloroform digunakan karena tidak bercampur dengan air dan
aglikon saponin larut dalam kloroform. Fase kloroform yang diperoleh ditambah
natrium sulfat anhidrat untuk menarik sisa air yang kemungkinan masih ada di
dalam ekstrak lalu disaring. Filtrat yang diperoleh diuapkan sampai volumenya
kira-kira 5 ml. Hasil yang diperoleh berupa ekstrak kloroform kecambah kacang
hijau dan ekstrak kloroform Succus Liquiritiae.

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

31

G. Pemeriksaan Pendahuluan Aglikon Saponin dengan KLT


Pemeriksaan pendahuluan aglikon saponin dengan KLT dilakukan untuk
mengetahui aglikon saponin yang terdapat dalam ekstrak kloroform kecambah
kacang hijau. Caranya adalah dengan membandingkan ekstrak kloroform
kecambah kacang hijau sebagai sampel dan ekstrak kloroform Succus Liquiritiae
sebagai pembanding dalam satu pelat dan dikembangkan dalam fase gerak yang
sama dengan metode KLT. Perbandingan ini ditentukan berdasarkan harga Rf dan
warna bercak yang dihasilkan.
Fase diam yang digunakan adalah silika gel GF254, yang merupakan
silika gel dengan perekat CaSO4 dan indikator fluoresensi sehingga akan
berfluoresensi pada deteksi sinar UV 254 nm, sedangkan bercaknya akan terlihat
lebih gelap (peredaman) karena sinar UV yang seharusnya diteruskan sampai ke
fase diam (sehingga fase diam berfluoresensi) dihalangi oleh adanya senyawa
yang menyerap sinar UV tersebut dan tidak dipantulkan kembali. Fase gerak yang
digunakan adalah kloroform metanol (95:5 v/v) yang bersifat nonpolar sehingga
sistem KLT ini merupakan kromatografi fase normal. Alasan digunakannya fase
gerak yang bersifat nonpolar ini adalah karena aglikon saponin (sapogenin)
cenderung bersifat nonpolar, sehingga dengan fase gerak yang bersifat nonpolar,
diharapkan aglikon saponin dapat terelusi dengan baik.

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

(1)

32

(2)

Gambar 7. KLT pendahuluan


Keterangan :
A : ekstrak kloroform Succus Liquiritiae (pembanding)
B : ekstrak kloroform kecambah kacang hijau (sampel)
Deteksi :
(1) Dilihat dibawah sinar UV 254 nm
(2) Pereaksi anisaldehid-asam sulfat, dipanaskan 110C selama 5-10 menit,
dilihat dengan sinar tampak
Fase diam : silika gel GF254
Fase gerak : kloroform metanol (95:5 v/v)
Jarak pengembangan : 10 cm

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

33

Tabel I. Hasil kromatogram KLT pendahuluan dengan menggunakan fase diam silika gel
GF254 dan fase gerak kloroform metanol (95:5 v/v)
nama bercak

no
bercak

Rf

1
2
3
4
5
6
1
2
3
4
5

0,23
0,30
0,55
0,63
0,85
1,00
0,13
0,54
0,68
0,86
1,00

warna bercak
UV 254nm

anisaldehid-asam sulfat

ungu
ungu
ungu
ungu
ungu
-

kuning
kuning
biru
biru
coklat
biru
coklat
biru
coklat

Keterangan :
A : ekstrak kloroform Succus Liquiritiae (pembanding)
B : ekstrak kloroform kecambah kacang hijau (sampel)
Deteksi :
(1) Dilihat dibawah sinar UV 254 nm
(2) Pereaksi anisaldehid-asam sulfat, dipanaskan 110C selama 5-10 menit,
dilihat dengan sinar tampak
Jarak pengembangan : 10 cm

Dari hasil kromarogram (gambar 7 dan tabel I) dapat dilihat bahwa


terdapat 6 bercak yang berasal dari cuplikan pembanding (ekstrak Succus
Liquiritiae) dan 5 bercak dari cuplikan sampel (ekstrak kecambah kacang hijau).
Dari bercak tersebut terdapat 3 pasang bercak yang mempunyai Rf dan warna
bercak yang hampir sama, yaitu bercak A3 dan B2, bercak A5 dan B4, serta
bercak A6 dan B5. Bercak A3 dan B2 masing-masing mempunyai Rf 0,55 dan
0,54 dengan warna bercak pada deteksi sinar UV 254 nm adalah ungu dan setelah
disemprot dengan pereaksi anisaldehid-asam sulfat dan dipanaskan 1100C selama

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

34

5-10 menit, kedua bercak menghasilkan warna biru. Bercak A5 dan B4 masingmasing mempunyai Rf 0,85 dan 0,86 dengan bercak yang tidak tampak pada
deteksi sinar UV 254, namun setelah disemprot dengan pereaksi anisaldehid-asam
sulfat dan dipanaskan 1100C selama 5-10 menit, kedua bercak sama-sama
menghasilkan warna biru. Bercak A6 dan B5 sama-sama mempunyai Rf 1,00
dengan bercak yang tidak tampak pada deteksi sinar UV 254, namun setelah
disemprot dengan pereaksi anisaldehid-asam sulfat dan dipanaskan 1100C selama
5-10 menit, kedua bercak sama-sama menghasilkan warna coklat.
Sebenarnya tidak ada saponin yang dapat dideteksi atau diamati secara
spesifik dengan menggunakan sinar lampu UV 254 dan 365 nm, kecuali asam
glisiretinat (Wagner, 1984). Jadi untuk memperjelas identifikasi saponin perlu
menggunakan pereaksi semprot. Salah satu pereaksi semprot yang digunakan
untuk mengidentifikasi aglikon saponin triterpenoid adalah anisaldehid-asam
sulfat. Reaksi dengan anisaldehid-asam sulfat mengakibatkan penambahan
panjang gugus kromofor yang menyebabkan serapan bercak senyawa berada pada
panjang gelombang yang lebih panjang sehingga terjadi peningkatan intensitas
warna dan dapat dilihat pada sinar tampak (gambar 8).
Stahl (1985) menyatakan bahwa aglikon saponin dari Succus Liquiritiae
adalah asam glisiretinat yang memiliki harga hRf sekitar 20-30 dengan warna
bercak biru sampai ungu dengan deteksi anisaldehid-asam sulfat, pada fase diam
silika gel GF254 asam dan fase gerak kloroform metanol (95:5 v/v). Dari hasil
penelitian yang dilakukan oleh Yanuarsih (2001) diperoleh bahwa aglikon saponin
triterpenoid golongan -amirin memiliki hRf 55 dengan warna biru setelah

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

35

dideteksi dengan anisaldehid-asam sulfat. Dari dasar inilah dapat disimpulkan


bahwa aglikon saponin pembanding (asam glisiretinat) adalah bercak A3 dan
aglikon saponin dari sampel adalah bercak B2.
H2SO4

H + + HSO4-

OCH3

H+

+
COOH
C
H

O
HO

OCH3

+
COOH
C
HO
HO

-H+
COOH
H3CO

OH
C

36

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

COOH
O
H3CO

OH
C

COOH
H3CO

H2

O
C

(warna biru)
Gambar 8. Mekanisme reaksi aglikon saponin triterpenoid dengan penampak
bercak anisaldehid-asam sulfat (Kristianti, 2007)

H. Isolasi Aglikon Saponin dengan Metode KLT Preparatif


Ekstrak kloroform kecambah kacang hijau diisolasi secara KLTP untuk
mendapatkan jumlah yang cukup banyak untuk analisis aglikon saponin tahap
selanjutnya. Isolasi dilakukan dengan menggunakan fase diam silika gel GF254
pada pelat kaca 20x20 cm dan fase gerak kloroform metanol (95:5 v/v) karena
pada literatur yang diperoleh, hanya didapatkan data karakteristik aglikon saponin
pembanding dengan fase diam dan fase gerak tersebut.

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

37

Cuplikan yang akan dipisahkan ditotolkan membentuk pita dan


dikembangkan 2x. Pengembangan berulang dimaksudkan supaya pemisahan
senyawa semakin baik. Dalam penelitian ini, 2x pengembangan sudah
menghasilkan pemisahan yang cukup baik. Hal ini dapat dilihat dari bercak yang
didapat yang terlihat cukup jelas dan tidak terlalu dekat satu sama lain, sehingga
lebih mudah dikerok. Bercak yang menunjukkan Rf dan warna yang hampir sama
dengan bercak yang diduga aglikon saponin pada KLT pendahuluan dikerok
dengan menggunakan spatula dan dikumpulkan. Hasil kerokan ini dilarutkan
dalam kloroform dan disaring dengan sinterred glass. Filtrat kemudian diuapkan
sampai volumenya kira kira 5 ml. Fase diam yang digunakan pada isolasi ini
sejumlah 5 pelat untuk mendapatkan isolat yang lebih banyak. Jumlah kloroform
yang digunakan untuk satu kali penyarian adalah 20 ml supaya hasil kerokan
benar-benar terendam oleh pelarut, dan dilakukan 5x penyarian supaya
mendapatkan aglikon saponin dalam jumlah yang cukup banyak. Selanjutnya dari
hasil isolat ini dianalisis untuk uji kemurnian dengan menggunakan metode KLT
multi-eluen.

I. Uji Kemurnian dengan Metode KLT multi-eluen


Uji kemurnian ini dilakukan untuk memastikan apakah senyawa yang
telah dipisahkan benar-benar murni hasil dari isolasi senyawa yang diinginkan,
dan tidak tercampur dengan senyawa lain. Isolat yang diperoleh diuji
kemurniannya dengan 3 macam fase gerak yang berbeda, yaitu kloroform
metanol (95:5 v/v), kloroform metanol air (64:50:10 v/v), dan n-butanol

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

38

etanol air (7:2:5 v/v). Jika isolat tersebut murni maka hanya akan menghasilkan
satu bercak. Fase gerak yang dipilih adalah fase gerak yang pernah digunakan
dalam identifikasi beberapa macam aglikon saponin dalam literatur (Stahl, 1973;
Gasparic, 1978; Wagner, 1999) sehingga diharapkan dapat mengelusi aglikon
saponin dalam sampel. Selain itu, fase gerak juga dipilih berdasarkan tingkat
kepolarannya sehingga dapat diketahui benar kemurniannya. Fase gerak
kloroform metanol (95:5 v/v) bersifat relatif nonpolar dibandingkan dengan
kloroform metanol air (64:50:10 v/v) dan n-butanol etanol air (7:2:5 v/v).
Masing-masing isolat ditotolkan sejumlah 20 l, karena jumlah tersebut
dapat menghasilkan intensitas warna bercak yang cukup jelas dilihat pada deteksi
dengan sinar UV sehingga mudah dalam identifikasinya.

Tabel II. Hasil uji kemurnian isolat aglikon saponin dengan KLT multi-eluen
fase gerak

nama
bercak

Rf

kloroform metanol
(95:5 v/v)
kloroform metanol air
(64 : 50 : 10 v/v)
n-butanol etanol air
(7:2:5 v/v)

A
C
A
C
A
C

0,59
0,59
0,92
0,91
0,81
0,79

Keterangan :
A = isolat kecambah kacang hijau (sampel)
C = isolat Succus Liquiritiae (pembanding)

warna bercak
UV 254 nm

anisaldehid-asam sulfat

ungu
ungu
ungu
ungu
ungu
ungu

biru
biru
biru
biru
biru
biru

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

(1)

39

(2)

Gambar 9. Uji kemurnian dengan KLT multi-eluen dengan fase gerak


kloroform metanol (95:5 v/v)

Keterangan :
A : isolat aglikon saponin kecambah kacang hijau (sampel)
B : isolat aglikon saponin gabungan (Succus Liquiritiae dan kecambah kacang
hijau)
C : isolat aglikon saponin Succus Liquiritiae (pembanding)
Deteksi :
(1) Dilihat dibawah sinar UV 254 nm
(2) Pereaksi anisaldehid-asam sulfat, dipanaskan 110C selama 5-10 menit,
dilihat dengan sinar tampak
Fase diam : silika gel GF254
Jarak pengembangan : 10 cm

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

(1)

40

(2)

Gambar 10. Uji kemurnian dengan KLT multi-eluen dengan fase gerak
kloroform metanol air (64:50:10 v/v)
Keterangan :
A : isolat aglikon saponin kecambah kacang hijau (sampel)
B : isolat aglikon saponin gabungan (Succus Liquiritiae dan kecambah kacang
hijau)
C : isolat aglikon saponin Succus Liquiritiae (pembanding)
Deteksi :
(1) Dilihat dibawah sinar UV 254 nm
(2) Pereaksi anisaldehid-asam sulfat, dipanaskan 110C selama 5-10 menit,
dilihat dengan sinar tampak
Fase diam : silika gel GF254
Jarak pengembangan : 10 cm

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

(1)

41

(2)

Gambar 11. Uji kemurnian dengan KLT multi-eluen dengan fase gerak
n-butanol etanol air (7:2:5 v/v)
Keterangan :
A : isolat aglikon saponin kecambah kacang hijau (sampel)
B : isolat aglikon saponin gabungan (Succus Liquiritiae dan kecambah kacang
hijau)
C : isolat aglikon saponin Succus Liquiritiae (pembanding)
Deteksi :
(1) Dilihat dibawah sinar UV 254 nm
(2) Pereaksi anisaldehid-asam sulfat, dipanaskan 110C selama 5-10 menit,
dilihat dengan sinar tampak
Fase diam : silika gel GF254
Jarak pengembangan : 10 cm

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

42

Dari hasil deteksi menggunakan sinar UV 254 nm menunjukkan adanya


peredaman bercak yang berwarna ungu dengan latar belakang berfluoresensi
hijau. Hal ini dikarenakan aglikon saponin memiliki gugus kromofor yang
menyerap sinar UV dan tidak memantulkannya kembali, sehingga terjadi
peredaman. Bercak aglikon saponin kecambah kacang hijau dan Succus Liquritiae
setelah disemprot dengan pereaksi anisaldehid-asam sulfat tampak menimbulkan
bercak berwarna biru (gambar 8). Deteksi dengan pereaksi ini digunakan untuk
mengetahui bercak aglikon saponin dan kemungkinan adanya bercak-bercak lain.
Isolat dikatakan sudah murni bila hanya menghasilkan satu bercak saja pada
masing-masing komposisi fase gerak.
Pada KLT dengan fase gerak kloroform metanol (95:5 v/v) didapatkan
bercak tunggal dengan Rf 0,59 baik pada isolat aglikon saponin pada kecambah
kacang hijau maupun Succus Liquiritiae. Dari KLT dengan fase gerak kloroform
metanol air (64:50:10 v/v) didapatkan bercak tunggal dengan Rf 0,92 pada
isolat aglikon saponin kecambah kacang hijau dan Rf 0,91 pada isolat aglikon
saponin Succus Liquiritiae. Untuk KLT dengan fase gerak n-butanol etanol air
(7:2:5 v/v) didapatkan bercak tunggal dengan Rf 0,81 pada isolat aglikon saponin
kecambah kacang hijau dan Rf 0,79 pada isolat aglikon saponin Succus
Liquiritiae. Semua bercak pada uji kemurnian ini berwarna ungu pada deteksi
dengan sinar UV 254 nm dan berwarna biru pada deteksi dengan sinar tampak
setelah

disemprot

dengan

pereaksi

anisaldehid-asam sulfat.

Dari

hasil

kromatogram yang diperoleh, dapat dilihat bahwa isolat aglikon saponin pada
sampel dan pembanding sudah murni dan selanjutnya dapat dilakukan identifikasi

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

43

dengan spektrofotometri UV. Berdasarkan data tersebut juga dapat disimpulkan


bahwa sampel kecambah kacang hijau mengandung senyawa yang sama dengan
yang dikandung pembanding Succus Liquiritiae, yaitu saponin golongan
triterpenoid. Selain harga Rf dan warna yang mirip, persamaan tersebut juga
didukung dengan hasil KLT pada totolan gabungan antara sampel dan
pembanding yang menghasilkan satu bercak saja dan sama dengan bercak sampel
dan pembanding ( gambar 9, 10, dan 11).

J. Spektrofotometri Ultra Violet (UV)


Pemeriksaan spektra dengan spektrofotometer UV ini dilakukan untuk
melihat karakterisitik dari aglikon saponin kecambah kacang hijau. Panjang
gelombang yang dipilih adalah 220-350 nm karena senyawa yang diukur tidak
berwarna. Pelarut yang juga digunakan sebagai blangko adalah etanol karena
saponin larut dalam etanol dan etanol memenuhi persyaratan pelarut untuk
spektrofotometri UV, yaitu tidak mengandung sistem ikatan rangkap terkonjugasi,
tidak terjadi interaksi dengan molekul senyawa yang dianalisis, dan kemurnian
atau derajat untuk analisisnya tinggi.
Dari spektra (gambar 12 dan 13) tampak bahwa aglikon saponin
kecambah kacang hijau memiliki puncak tunggal pada panjang gelombang 280,4
nm, sedangkan aglikon saponin dari Succus Liquiritiae juga memiliki puncak
tunggal pada panjang gelombang 280,5 nm. Hasil tersebut dapat dikatakan sama
karena hanya memiliki selisih 0,1 nm dan menurut Farmakope Indonesia edisi IV,
range perbedaan yang diperbolehkan adalah 2 nm. Selain itu, bentuk spektra dari

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

44

kedua isolat aglikon saponin tersebut mirip. Pada aglikon saponin kecambah
kacang hijau, terbentuk puncak tunggal mulai dari 244,0 nm kemudian naik
membentuk puncak pada 280,4 nm lalu menurun kembali. Demikian pula pada
aglikon saponin Succus Liquiritiae, terbentuk puncak tunggal mulai dari 242,9
nm kemudian naik membentuk puncak pada 280,5 nm lalu menurun kembali.
Adanya perbedaan tinggi puncak spektra dikarenakan perbedaan kadar saponin
dalam etanol tersebut. Suatu puncak pada spektra dengan menggunakan
spektrofotometri UV menunjukkan adanya gugus kromofor dengan serapan
maksimum pada panjang gelombang tersebut. Oleh karena itu, dapat disimpulkan
bahwa kecambah kacang hijau memiliki tipe saponin yang sama dengan Succus
Liquiritiae, yaitu saponin triterpenoid, dengan gugus kromofor yang sama pula.

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

Gambar 12. Spektra aglikon saponin kecambah kacang hijau (sampel)

Gambar 13. Spektra aglikon saponin Succus Liquiritiae (pembanding)

45

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN

A. KESIMPULAN
1. Saponin pada kecambah kacang hijau adalah saponin tipe triterpenoid
2. Karakter aglikon saponin kecambah kacang hijau secara KLT adalah bercak
berwarna ungu pada deteksi dengan sinar UV 254 nm dan berwarna biru pada
deteksi dengan anisaldehid-asam sulfat dilihat pada sinar tampak dengan :
a. Rf 0,59 pada fase gerak kloroform metanol (95:5 v/v)
b. Rf 0,92 pada fase gerak kloroform metanol air (64:50:10 v/v)
c. Rf 0,81 pada fase gerak n-butanol etanol air (7:2:5 v/v)
Karakter aglikon saponin kecambah kacang hijau dengan spektrofotometri UV
adalah puncak tunggal dengan max 280,4 nm.

B. SARAN
1. Perlu dilakukan uji KLT sebelum dan setelah hidrolisis untuk lebih
memastikan bahwa proses hidrolisis telah sempurna.
2. Perlu dilakukan penelitian saponin kecambah kacang hijau secara kuantitatif
3. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk identifikasi senyawa dan
elusidasi

struktur

aglikon

saponin

menggunakan spektroskopi IR dan NMR.

46

kecambah

kacang

hijau

dengan

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

47

DAFTAR PUSTAKA

Anonim, 1965, Farmakope Indonesia, ed. II, 305, DepKes RI, Jakarta
Anonim, 1986, Sediaan Galenik, Ed I, 2-4,7, DepKes RI, Jakarta
Anonim, 1995a, Materia Medika Indonesia, vol.VI , 194, 336, DepKes RI, Jakarta
Anonim, 1995b, Farmakope Indonesia, ed. IV, 1062-1066, DepKes RI, Jakarta
Anonim, 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, 9-11, DepKes
RI, Jakarta
Anonim,
2005,
Taoge,
Si
Imut
http://www.abolhaq.web.ugm.ac.id

Kaya

Khasiat,

File

Anonim, 2006, Jangan Remehkan Taoge, File : http://www.freewebs.com


Anonim, 2007, Phaseolus radiatus L., File : http://micro.magnet.fsu.edu
Anonim, 2008, Taoge Vs Kanker dan Stroke, File : http://anik.blog.unair.ac.id
Arnelia, 2004, Fito-kimia Komponen Ajaib Cegah PJK, DM, dan Kanker, File :
http://www.kimianet.lipi.go.id
Brotosisworo, S., 1979, Obat Hayati Golongan Glikosida, 44, UGM Press,
Yogyakarta
Bruneton, J., 1999, Pharmacognosy: Phytochemistry Medicinal Plants, 2nd
edition, 680-683, Lavoisier Publishing Inc., Paris
Evans, W.C., 2002, Pharmacognosy, ed.XV, 289, W.B.Saunders, London
Gasparic, J., and Churacek, J., 1978, Laboratory Handbook of Paper and Thin
Layer Chromatography, John Wiley & Sons, New York
Gsianturi, 2003, Mari, Ramai-Ramai Makan Tauge, File : http://www.gizi.net
Harborne, J.B., 1987, Metode Fitokimia, 21, 155, ITB, Bandung
Hostettmann, K, Hostettmann, M, Marston, A , 1995, Preparatif Chromatography
Techniques, 9-11, ITB, Bandung

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

48

Kristianti, P. A., 2007, Isolasi dan Identifikasi Glikosida Saponin pada Herba
Krokot ( Portulaca oleracea L. ), Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma, Yogyakarta
Martin, A., 1993, Physical Pharmacy, 940, UI-Press, Jakarta
Marzuki, R. dan Soeprapto, 2005, Bertanam Kacang Hijau, 7-9, Penebar
Swadaya, Jakarta
Mills, S, 2000, Principles and Practice of Phytoteraphy, 43-47, Churchill
Livingstone, China
Mulja dan Suharman, 1995, Analisis Instrumental, 26, 27, 224, Universitas
Airlangga Press, Surabaya
Pecsok, R.L., Shields, L.D., Cairns, T., Mc. William, I.G., 1976, Modern Methods
of Chemical Analysis, 2nd edition, 229, John Wiley & Sons, Inc., New York
Robinson, T., 1995, Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi, 156-158, ITB,
Bandung
Sastrohamidjojo, H., 2001, Spektroskopi, 23-26, 39, Liberty, Yogyakarta
Stahl, E., 1973, Drug Analysis by Chromatography, 119-123, ITB, Bandung
Stahl, E., 1985, Analisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi, 4, 16-17,
119-122, ITB, Bandung
Sutopo, L., 1985, Teknologi Benih, 25-41, CV Rajawali, Jakarta
Tyler, V.E., Brady, L.R., Robbers, J.E., 1988, Pharmacognosy, 9th edition, Lea &
Febiger, Philedephia.
Tjitrosoepomo, G., 2003, Morfologi Tumbuhan, 251, UGM Press, Yogyakarta
Van Steenis, C.G.G.J., 1975, Flora, 45-47, 67-68, 228-229, 235, PT. Pradnya
Paramita, Jakarta
Wagner, H., Bladt, S., Zgainski, E.M., 1984, Plant Drug Analysis : A Thin Layer
Chromatography Atlas, Springer-Verlag Berli Heidelberg, Germany
Yanuarsih, S. S., 2001, Isolasi dan Identifikasi Aglikon Saponin Buah Lerak
(Sapindus rarak D.C), Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma,
Yogyakarta

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

Lampiran 1 : Surat pengesahan determinasi

49

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

Lampiran 2 : Sertifikat analisis Succus Liquiritae

50

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

Lampiran 3 : Foto biji (kiri) dan kecambah (kanan) kacang hijau

51

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

Lampiran 4 : Uji saponin

Keterangan :
A : Uji buih
B : Reaksi Liebermann-Burchard

52

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

Lampiran 5 : Alat hidrolisis (refluks)

53

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

Lampiran 6 : Alat menyaring isolat

54

PLAGIAT
PLAGIAT MERUPAKAN
MERUPAKAN TINDAKAN
TINDAKAN TIDAK
TIDAK TERPUJI
TERPUJI

55

BIOGRAFI PENULIS

Yohana Octaviani lahir di Klaten pada tanggal 29


Oktober 1985 dan merupakan anak pertama dari empat
bersaudara dari pasangan Sugiarto dan Lisa Norawati.
Penulis mulai menempuh pendidikan di TK Kristen
Kridawita

Klaten

pada

tahun

1989,

kemudian

melanjutkan pendidikan di SD Kristen 3 Klaten selama


6 tahun dan lulus pada tahun 1997. Pendidikan lanjutan
tingkat pertama ditempuh oleh penulis dari tahun 1997
sampai 2000 di SLTP Pangudi Luhur 1 Klaten.
Selanjutnya penulis menempuh pendidikan SMU di SMU Stella Duce 1
Yogyakarta dan lulus pada tahun 2003. Kemudian, penulis melanjutkan studinya
di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.