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Lavorante 2010
FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE HISTOLOGA, EMBRIOLOGA, GENTICA Y BIOLOGA CELULAR
CATEDRA I
GENTICA
I- GEN
Concepto de Gen: Secuencia completa de cidos nucleicos que tiene la informacin para la sntesis de un producto
gnico funcional (polipptido o ARN).
Requisitos para ser un gen:
-
Estructura de un gen:
a.
Regin Promotor, contiene los potenciadores y los silenciadores. Son secuencias reguladoras cortas
inmediatas a las que se unen diferentes factores de transcripcin. Ej: Caja TATA (30nt antes del inicio de la
transcripcin indica que tipo de ARN pol debe actuar).
b.
c.
El ADN codificante solo corresponde al 1,1% del total de ADN. La mayor parte esta formada por ADN no
codificante, compuesto por ADN intergnico y ADN de intrones.
Pseudogen: Secuencia idntica a la de un gen, pero que no se expresa por carecer de promotor.
Genes parlogos: Se encuentran por duplicado en varios cromosomas
Genes ortlogos: cumplen funciones similares en dos especies semejantes.
Proteoma: Suma de todas las protenas codificadas de un organismo.
Genoma: Conjunto de todo el material gentico de un organismo.
II MUTACIN
Mutacin: Cambio permanente en la secuencia de ADN de un organismo.
Para que la mutacin se transmita a la prxima generacin, debe ser en clulas germinales.
Para que la mutacin se exprese debe ser en clulas somticas.
Puede afectar a clulas germinales o somticas generando los siguientes resultados.
Clulas Germinales
Clulas Somticas
enfermedades hereditarias
defectos del desarrollo (malformaciones congnitas)
mutaciones silenciosas
muerte celular
cambios tolerables
cambios silenciosos
desarrollo tumoral
Tipos de mutacin:
a- Por criterio morfolgico
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1 mutaciones puntuales: afectan una sola base. Si es purina x purina, o pirimidica x pirimidica es
transicin. Si es prica por pirimidica o viceversa es transversin.
2 mutaciones de extensin variable o segmentarias: Afecta ms de una base. Puede ser delecin,
insercin o expansin de repeticiones de tripletes.
b- Por criterio funcional
1 mutaciones silenciosas: en regiones no codificantes, sin efecto sobre el fenotipo
2 mutaciones de cambio de encuadre: cambio en el marco de lectura por perdida o adicin de una o dos
bases
3 mutaciones sin sentido: Genera la formacin de un triplete codificante en uno sin sentido por el cambio
de una base. Produce terminacin temprana de la cadena peptdica.
4 mutaciones de cambio de sentido: sustitucin de una base por otra, codificando ahora para un
aminocido distinto.
5 mutaciones de elementos de control: afectan al sitio promotor o secuencias reguladoras.
6 mutaciones de expansin de repeticin de tripletes: Se genera un triplete anmalo que se replica
mltiples veces generando a su vez una protena anmala. En condiciones normales ser repiten entre 5 y 35
veces; superado cierto umbral y al aparecer en un gen o cerca del mismo; generan enfermedad. (Huntington
(CAG en regiones codificantes), X Frgil (CCG en 5), neurofibromatosis, osteogenesis imperfecta, ditrofia
miotnica (CTG en 3)
c-
(La exposicin a la radiacin es acumulativa durante toda la vida, y afecta principalmente a clulas somticas)
Agentes Qumicos: - Sustancias alquilantes (dimetilnitrosamina, metil metanosulfonato)
Factores que afectan las probabilidades de mutacin:
a- Aumenta a mayor tamao gentico
b- Ciertas bases son ms proclives, secuencias con dobletes o tripletes se denominan puntos calientes de
mutacin
c- Mayor probabilidad a mayor numero de intrones
Funcin de las ADN pol
Alfa y Delta
Beta y Epsilon
Gamma
Replicacin
Reparacin
Replicacin mitocondria
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REMA (Rep. De mal apareamiento de bases): es temprano, para pocos pares de bases. Depende de un
complejo proteico para el reconocimiento, de una endonucleasa para el corte y de la ADN por para la
restauracin.
REBA (Rep. Por escisin de bases) es tardo, y reemplaza un solo nuclesido daando Primero se
reconoce la base daada. Luego una glucosidasa corta la unin glucosdica y una endonucleasa hace el
corte de la cadena. La ADN pol por ltimo restaura junto a una ligasa usando la otra cadena como molde.
REN (Rep. Por escisin de nucletidos) en cualquier momento, repara lesiones de a 2 a muchas bases.
Acta principalmente en daos que distorsionan mucho la doble hlice, como los generados por rayos UV.
Estos ltimos producen dmeros de TT (timinas) que son cortados por medio de endonucleasas y rellenados
por ADN pol y ligasas. Cuando este mecanismo se altera se genera el XERODERMA PIGMENTOSO
(fotosensibilidad, sequedad, pecas, aumento de pigmento, atrofia, tumores).
Reparacin de rupturas de doble cadena: asociado a mecanismos de recombinacin meitica.
La mayor parte de las mutaciones son perjudiciales y su permanencia es limitada por la seleccin natural. Puede
haber algunas ventajosas que permiten la adaptacin a los cambios ambientales
III RBOL GENEALGICO
Es el diagrama que se confecciona con los miembros de una familia indicando el sexo, la relacin con el propsito
(caso que origina el estudio) y si estn afectados o no. Para esto se utilizan smbolos convencionales que permiten
resumir esa informacin y presentarla en forma clara. El objeto de estudio de la gentica mdica es el individuo y su
familia, por lo que es de inters el registro tanto de los individuos afectados como los sanos, vivos o muertos. Los
siguientes son los smbolos ms utilizados:
-
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Raquitismo: Se puede deber tanto al dficit de vitamina D que desfavorece la mineralizacin de los
huesos; o tambin puede originarse a causa de una alteracin gentica que codifica para unos
receptores que absorben fosfato en los tbulos renales, generando el mismo efecto.
b- Malformaciones: Pueden generarse por Talidomida (frmaco sedante antinauseoso) o por
enfermedades autosmicas recesivas.
Proceso epigentico: Se cambia al fenotipo sin alterar el genotipo por la influencia de un factor en la funcin
gnica. No hay cambio en la secuencia. Son transmisibles por mitosis y meiosis.
Tipos de Herencia
a Enfermedades monognicas: Se afecta un solo gen, siguen la lnea mendeliana. Son dominantes o
recesivas (Ej; Hemofilia, acondroplasia)
b Enfermedades multifactoriales: Son polignicas. Para que se genere la enfermedad deben alterarse
varios genes y un factor ambiental que gatilla la enfermedad. (Ej: Hipertensin, Obesidad)
c Enfermedades de origen cromosmico o cromosomopatas: Se altera todo un cromosoma, tanto por falta
(monosoma), exceso (trisomia).o anomala estructural. Aqu el daos SI es observable en un cariotipo por medo de
microscopio de luz. Suelen generarse en la meiosis del progenitor y no son heredables.
IV ENFERMEDADES MONOGNICAS - HERENCIA MENDELIANA
Cada individuo recibe un conjunto de cromosomas del padre y otro de la madre. Cada conjunto se denomina
haploide y el conjunto de ambos diploide. Los cromosomas maternos y paternos forman parejas (cromosomas
homlogos), as tambin los genes que los conforman hacen parejas, y estas ltimas que codifican para el mismo
rasgo se denominan alelos.
Conceptos:
Alelos: genes que se encuentran en el mismo locus de cromosomas homlogos y tienen la informacin para
una determinada caracterstica.
Ej: color de ojos.
Heterocigosis: cuando los alelos poseen distinta informacin.
Ej: ojos claros/ojos oscuros
Homocigosis: cuando los alelos poseen la misma informacin.
Ej: ojos claros/ojos claros
Dominancia: es el carcter que se expresa en homocigosis y en heterocigosis. Se expresa solo un alelo que
es dominante sobre el otro.
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Mutaciones nuevas: Complican porque no hay antecedentes familiares para detectar la enfermedad.
Generalmente son autosmicas dominantes.
Mosaicismo de la lnea germinal: Durante el desarrollo embrionario, una mutacin afecta a una parte o
todas las clulas germinales de un individuo. Entonces, la enfermedad est portada en sus gametas pero no
se expresa. Puede transmitir la enfermedad a sus descendientes.
Retraso en la edad de aparicin: Muchas no se hacen visibles hasta la edad adulta. Por Ej. Huntington.
Pleiotropismo: Los genes pleiotrpicos poseen ms de un efecto discernible en el organismo. Produce
alteraciones en varios rganos.
Ej: Osteognesis Imperfecta: enfermedad que presenta como caractersticas clnicas: esclerticas
azuladas, fracturas patolgicas y sordera. El gen afectado altera la sntesis del colgeno.
Ej 2: Sndrome de Marfan, en donde se altera la fibrilina.
Penetrancia: Es la frecuencia con la que se manifiesta una enfermedad o un fenotipo en un individuo que
ha heredado un alelo mutado. Es el grado en que un gen dominante en heterocigosis o uno recesivo en
homocigosis expresa un defecto detectable en el fenotipo. Cuando el efecto se observa siempre se
denomina penetrancia completa. En caso de que se presente solo en un porcentaje se denomina
penetrancia incompleta.
Expresividad variable: Es cuando un gen causa una enfermedad con diferente intensidad en diferentes
organismos.
Heterogeneidad: Cuando una patologa puede ser causada por diferentes alteraciones genticas. Si el
defecto se debe a diversas alteraciones dentro de un mismo gen se denomina heterogeneidad intraallica
(fibrosis qustica); en cambio si es en diversos genes es heterogeneidad interallica. (retinitis
pigmentaria).
Impronta Genmica: La expresin de un alelo depende del progenitor del cual se ha heredado.
Fenmenos que complican la expresin fenotpica:
Interaccin Allica: La funcionalidad de un producto gnico puede ser alterada por la produccin de otro
gen.
Epistasis: Ocultamiento de la expresin de un gen (denominado gen hiposttico) por la actividad de otro
que participa en la misma cadena de reacciones metablicas pero en una posicin previa al gen que queda
oculto.
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- Cancer de mama
Aa-aa
aa Aa aa - aa
Aa aa Aa aa aa - aa
a
Aa (afectado)
Aa (afectado)
aa
aa
AA Aa Aa Aa AA
aa Aa aa - AA
A
AA
Aa (portador)
Aa (portador)
aa (afectado)
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Xa
XA
XA XA mujer sana
XA Xa mujer portadora
XA Y hombre sano
Xa Y hombre enfermo
XA
Xa
XA Xa mujer portadora
XA Xa mujer portadora
XA Y hombre sano
XA Y hombre sano
Lavorante 2010
Xa
XA
XA XA mujer sana
XA Xa mujer enferma
XA Y hombre sano
Xa Y hombre enfermo
En hombre sano con mujer enferma vemos que el 50% tanto de hombres como mujeres ser
enfermo y el otro 50% sano. No hay portadores en estos casos.
IV e. ENFERMEDADES DE HERENCIA LIGADA AL CROMOSOMA Y
Caractersticas:
Las mujeres no portan la enfermedad, ni la padecen
Solo se transmite Varn Varn
X
X X mujer sana
X X mujer sana
Y*
X Y* hombre enfermo
X Y* hombre enfermo
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Estudio en gemelos: Al ser los gemelos monocigticos genticamente idnticos, las diferencias entre ellos se
deberan a efectos ambientales.
Estudio en adopcin: Los nios de padres con la enfermedad adoptados por padres que no la presentan, pueden ser
objeto de estudio para averiguar si desarrollan la enfermedad.
VI ENFERMEDADES DE ORGEN CROMOSMICO CROMOSOMOPATAS.
Enfermedades por alteracin en el nmero, estructura interna o disposicin de partes del cromosoma. Genera
mltiples efectos en el fenotipo.
Cuanto mayor sea el material gentico alterado mayor ser la afectacin, de hecho la gran mayora de las
cromosomopatas numricas se manifiestan como abortos o muertes prenatales.
Se clasifican en:
- ALTERACIONES NUMRICAS
Poliploidias
Aneuploidias
Diandrias
Diginias
Mosaicismos
- ALTERACIONES ESTRUCTURALES
Deleciones
Duplicaciones
Translocaciones
Inversiones
Isocromosoma
ALTERACIONES NUMRICAS
Por alteracin en el nmero de cromosomas. Pueden ser del conjunto cromosmico o de algunos cromosomas en
particular.
La mayora son letales.
Decimos que una clula normal es euploide, y es decir que tiene 46 cromosomas, el numero diploide (reconocido
como 2n), Las gametas en cambio, tienen el numero haploide (n) de cromosomas, es decir 23 y que este es el
conjunto cromosmico bsico.
De acuerdo a esto las aberraciones cromosmicas numricas se clasifican en:
Poliploidia: ms de 2 juegos (69, 92 cromosomas). Son mltiplos del nmero haploide excepto el euploide
que es normal. No son compatibles con la vida.
Aneuploidia: nmero de cromosomas no mltiplo de 23
Si tenemos un cromosoma de ms es TRISOMIA
Si tenemos un cromosoma de menos es MONOSOMIA
Generalmente no son compatibles con la vida aunque existen excepciones:
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TRISOMIAS viables
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AUTOSOMICAS
SEXUALES
Sndrome de Klineffelter
Sndrome de Metahembra
MONOSOMIAS viables
AUTOSOMICAS
Sndrome XYY
Incompatible con la vida
SEXUALES
Sndrome de Turner
Diandrias: los 46 cromosomas son paternos. Se forma una clula huevo no viable = MOLA
HIDATIFORME
- Los anexos fetales SI estn formados
- El embrin NO se desarrolla
-
Diginia: los 46 cromosomas son maternos. Se forma una clula huevo no viable = TERATOMA OVARICO
Los anexos fetales NO estn formados
El embrin SI se desarrolla
Mosaicismo: Se define como mosaicos cuando en un individuo existen dos tipos de lneas celulares, una
lnea con el nmero normal de cromosomas y otra con el nmero de cromosomas alterado. La lnea celular normal
atempera a la patolgica. Se produce en estadios embrionarios iniciales, cuanto mas temprano se produzca el defecto
ms clulas afectadas habr y ms grave la afectacin fenotpica.
Ejemplos de anomalas numricas.
Trisoma del par 21: Es la ms frecuente, relacionada a la edad materna en la gestacin. En el 95% de los
casos el sndrome de Down se debe a esto; el 5% restante se debe a una translocacin cromosmica que determina
una condicin trisomica en el brazo largo del cromosoma 21. Hipotona muscular, retraso, hipoplasia maxilar,
anomalas internas.
Trisomia del par 18: Genera el sndrome de Eduars. Tambin se relaciona a la edad materna. Afecta ms a
las nias. Poca sobrevida. Retraso en el crecimiento neurolgico, hipertona muscular, sindactilia, luxacin de
cadera, malformaciones cardiovasculares y gastrointestinales.
Trisomia del cromosoma 13: Genera el sndrome de Patau. Poca sobrevida. Paladar hendido, microftalmia,
polidactilias, retraso, orejas bajas, malformaciones cardiacas, renales , gastrointestinales y cerebrales.
Sndrome de Turner: Por falla en meiosis paterna, el gameto masculino no aporta cromosoma sexual.
Pacientes con amenorrea, ausencia de cambios puberales femeninos, estatura baja, cuello membranoso y disgnesa
ovrica. No tiene ovarios.
Sndrome de Klinefelter: Se relaciona a la edad materna. En algunos casos se debe a disyuncin paterna.
Pacientes con testculos pequeos, gonadotrofinas elevadas, menor coeficiente intelectual.
Sndrome 47, XXY: No tiene relacin con la edad. Los 2 Y los entrega el padre. Leve descenso del CI,
mayor estatura y leves signos de malformacin, CONDUCTA CRIMINAL.
Trisomia 47, XXX: relacin con la edad materna. Menor CI, leves signos de malformacin, fertilidad no
afectada, presentan doble corpsculo de Barr.
ALTERACIONES ESTRUCTURALES:
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SUSTANCIA
TIPO DE BANDA
Quinacrina
Brillante, Fluorescente
Giemza
(previo Oscuras
tratamiento con calor)
Desnaturalizacin
con
alcali-giemza
Cromomicina
Nitrato de plata
Inverso a Q y G
SECTOR DE ADN
Rica en T_A
Rica en A_T
ADN
repetitivo
(heterocromatina
constitutiva.)
Rica en G_C
Organizadores nucleolares
EL CROMOSOMA METAFSICO
Todos los cromosomas alcanzan en la metafase su mximo grado de organizacin, ordenamiento y compactacin.
Cada cromosoma metafsico est constituido por dos cromtides unidas por el centrmero. Este centrmero o
constriccin primaria divide al cromosoma en dos brazos que se designan p (petit) para el brazo corto y q para el
brazo largo. De esa manera, por ejemplo, 7p es el brazo corto del cromosoma 7 e Yq es el brazo largo del
cromosoma Y. La posicin del centrmero permite clasificar a los cromosomas en tres tipos principales:
Metacntricos: cuando el centrmero es ms o menos central y los brazos son de aproximadamente igual longitud.
Submetacntricos: cuando el centrmero est alejado del centro y los brazos son desiguales.
Acrocntricos: cuando el centrmero est cerca de uno de los extremos y uno de los brazos es muy corto. Los
cromosomas acrocntricos humanos tienen satlites unidos por un tallo, excepto el Y. Ellos son los cromosomas 13,
14, 15, 21 y 22 y dichos satlites estn constituidos por heterocromatina.
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regin isocromtica
cromosoma anular
rob
Translocacin robertsoniana
ter
Para designar una banda en particular se acord poner primero el nmero del cromosoma seguido del smbolo del
brazo, el nmero de la regin, el nmero de la banda, subbanda, etc., todo seguido y sin dejar espacios. Ejemplo,
14q32.3 es la designacin para la subbanda 3, de la banda 2, de la regin 3, del brazo largo del cromosoma 14. Al
leerlo de corrido, los nmeros que corresponden a regin, banda y subbanda deben decirse separadamente y no
como decenas.
Las bandas permiten tambin el mapeo de genes en el cromosoma, es decir la designacin del locus (pl. loci).
Muchos rearreglos cromosmicos han permitido la identificacin de genes debido a los efectos fenotpicos de la
disrupcin de estos.
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Cuando de describe la composicin cromosmica, o cariotipo, de un individuo adems del nmero total de
cromosomas y el par sexual se puede tambin indicar ganancia o prdida de un cromosoma poniendo +13 o -16 y se
interpreta como la presencia de un cromosoma 13 extra o la ausencia de un cromosoma 16 respectivamente, o lo que
es lo mismo una trisoma 13 o una monosoma 16. Cuando ocurre una translocacin recproca entre dos cromosomas
se pone t(8;14)(q24;q32) que indica que los cromosomas involucrados son el 8 y el 14 y los puntos de ruptura estn
en 8q24 y 14q32. Cuando hay aumento del bloque de heterocromatina en los cromosomas que normalmente lo
contienen se usa colocar h+ junto al brazo del ese cromosoma, por ejemplo 9qh+, y se interpreta un polimorfismo ya
que esta es una variacin frecuente en la poblacin normal.
Ejemplos del uso de la nomenclatura en algunas anomalas cromosmicas:
a- 47,XX,+21: trisoma 21 en una mujer ( sndrome de Down).
b- 47,XY,+18: trisoma 18 en un varn (sndrome de Edwards).
c- 45,X: monosoma del X (sndrome de Turner)
d- 47,XXY: trisoma de cromosomas sexuales (sndrome de Klinefelter)
e- 45,XY,t(13;14)(p10;p10): translocacin entre los cromosomas 13 y el 14 con los puntos de ruptura en sus
respectivos brazos cortos (translocacin robertsoniana).
f- 46,XX,del(6)(q24): delecin del brazo largo del cromosoma 6 desde la banda q24 hasta el telmero. Delecin
terminal.
g- 46,XX,,der(2),t(2;12)(p24;q21)mat : desbalance cromosmico en una mujer producto de una translocacin
recproca entre los cromosomas 2 y 12 heredada de la madre. Tiene una trisoma parcial del segmento 12q21 y una
monosoma parcial de 2p24.
h- 45,X[4]/47,XXX[20]/46,XX[76]: mosaicismo de tres lneas celulares diferentes. Los nmeros entre corchetes
indican la cantidad de metafases con esos hallazgos.
i- 69,XXY: triplioda. Hay tres juegos haploides de todos los cromosomas.
HIDRIZACIN IN SITU Y FLUORESCENCIA (FISH)
Metodo utilizado para la identificacin de la regin de un cromosoma donde se encuentra una secuencia
determinada de cido nucleico. Se detecta por seal fluorescente.
Se pueden utilizar las preparaciones convencionales para estudio de cariotipo.
Se utiliza una secuencia de ADN complementaria a la que estamos buscando marcada con una molcula que emita
luminiscencia, un fluorocromo. Esta secuencia de ADN marcado se denomina sonda.
Pasos:
- Se toman celulas detenidas en matafase
- Se colocan en solucin con la sonda.
- Si se encuentra la secuencia, sta se asocia a la sonda con el fluorocromo. Si no esta. La sonda queda
flotando.
- Coloco la muestra en un microscopio de fluorescencia, previa remocin de la solucin.
Las tcnicas en la que se utilizan sondas se denominan:
- Southern Blot para encontrar ADN complementario
- Northen Blot para ARN
- Western Blot para protenas.
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Las sondas de ADN se utilizan para detectar una enfermedad gentica o para evaluar el parentesco entre dos
personas.
VIII INGENIERA GENTICA TCNICAS DE GENTICA MOLECULAR
Tcnica del Adn Recombinante para clonacin de genes
El conocimiento de la secuencia nucleotdica de un gen provee informacin importante acerca de su estructura,
funcin y relacin evolutiva con otros genes similares. Esta tcnica es utilizada para obtener suficiente cantidad de
una secuencia especfica de ADN para estudiar.
Pasos:
1- Corte del gen
Con enzimas de restriccin. stas son protenas naturales, que poseen las bacterias para
defenderse de la infeccin de ADNs extraos (virus). Son especficas y tienen actividad
endonucleasa. El resultado del corte se denomina fragmento de restriccin.
2- Incroporacin del gen a un vector:
El gen debe ser introducido a una maquinaria biosintetica para ser multiplicado. Pero no tiene
capacidad de incorporarse por si solo a una clula procarionte para realizar dicha cuestin.
Entonces se utiliza una secuencia asociada de ADN con capacidad infectiva denominada ADN
vector. sta unin se denomina ADN hbrido o recombinante y se realiza por medio de Ligasas.
Hay tres tipos de vectores:
PLASMIDOS (pequeas secuencias de ADN circular, bicaternario y desnudo; son
resistentes a antibiticos. Existen tanto de origen natural como artificial)
BACTERIOFAGOS (son virus que atacan bacterias, son ms infectivos e incorporan
secuencias de ADN ms grandes)
COSMIDOS (son artificiales, con mayor capacidad infectiva y aceptan mas ADN, se
consideran un hbrido entre plasmido y bacteriofago)
3- Incorporacin del ADN hbrido a la maquinaria biosintetica:
Las clulas ms idneas son las procariontes. Una vez la clula incorpora el ADN, se la coloca en
un medio adecuado para la replicacin. Adems de replicar el ADN, la clula podr sintetizar los
productos del gen estudiado.
Electroforsis en Agarosa y Tincin con bromuro de Etidio
Se utiliza para separar y observar secuencias especficas de ADN
Pasos:
1- Por medio de enzima de restriccin se cortan varias secuencias de ADN de diferentes tamaos y se colocan
en un gel de agarosa (gelatinoso).
2- Se somete el gel a un campo elctrico. As las cadenas de ADN (poseen cargas negativas) sern atradas al
polo positivo, siendo las ms pequeas las que migren ms rpidamente.
3- Cuando las secuencias terminan de migrar se baan con bromuro de etidio, que se introduce en las hlices
emitiendo luz anaranjada. As pueden visualizarse las bandas de ADN y se fotografan para ser
documentadas.
PCR Reaccin en cadena de la Polimerasa:
Permite copiar millones de veces una secuencia de ADN en un tubo.
Pasos:
1- Se coloca el ADN molde en una solucin especfica junto a desoxinucleotidos en exceso, mg2+ para
estabilizar el ADN (que posee carga negativa), primers y polimerasa termorresistente (polimerasa Taq)
2- Se pasa la solucin por diferentes estadios de temperatura
o 95 se desnaturalizan las cadenas de ADN molde
o 60 se pegan los primers
o 75 comienzan a actuar las polimerasa
As se obtienen 2 cadenas a partir de una. Luego, estas dos se pasan a un nuevo ciclo (compuesto por los 2
pasos anteriores y as sucesivamente.
GENOTECAS GEONMICAS
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Son colecciones de fragmentos de restriccin que abarcan un genoma por completo. Se mantienen en cultivo y se
guardan en envases llamados placa de petri.
IX TCNICAS PARA DIAGNOSTICO CLNICO
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