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Cours Mtabolisme Des Xnobiotiques

Master 1 Toxicologie fondamentale et applique


Dpartement le vivant et lenvironnement
Mme Berrebbah

Cours n5 : Ractions de phase II La conjugaison


Au cours de la dtoxification des xnobiotiques, des modifications chimiques ou des
condensations de molcules permettent de modifier (en gnral augmenter) la solubilit de ces
molcules, donc leur excrtion.Ces ractions sont les ractions de phase II.
Ce sont en gnral des conjugaisons avec des substrats hydrophiles : acide glucuronique le
plus souvent, mais aussi sulfurique ou actique ; ou bien avec des acides amins : glycocolle,
glutamine, ou bien encore dautres substrats : glutathion, carnitine,...
Il arrive que ces ractions conduisent des composs moins solubles quau dpart, mais ces
ractions dangereuses sont rares : esters de la carnitine, composs mthyls
Les transfrases (T) catalysent une raction de transfert soit l ajout dun
compos endogne hydrophile
La raction de phase II quantitativement la plus importante est catalyse par
lenzyme : UDP-glucuronosyltransfrase(UGT) et lagent de conjugaison est
lacide glucuronique

Glucuronoconjugaison
La conjugaison des xnobiotiques avec lacide -glucuronique est la plus
frquente des ractions de la phase II. Lacide -glucuronique est un
driv du glucose
La glucuronoconjugaison intervient dans le mtabolisme de la bilirubine
(UDP-glucuronosyl transfrases). La bilirubine libre, insoluble, doit tre
transporte dans le plasma par la srumalbumine. Une fois conjugue par
le glucuronate elle devient soluble et peut tre limine par les reins.
Le paractamol est limin en majorit sous la forme dun
glucuronoconjugu.
La morphine est partiellement glucuronoconjugue
. Cette conjuguaison ne la rend pas inactive, mais facilite son limination
urinaire et empche son passage travers la barrire hmato mninge
Sulfoconjugaison
La sulfatation est une raction de conjugaison catalyse par des sulfotransfrases rencontre dans le mtabolisme des acides biliaires
(sulfolithocholate) et dans celui des andrognes surrnaliens (sulfate de
DHEA).
Le coenzyme qui permet le transfert de lion sulfate est le PAPS ou
phophoadnosine phosphosulfate,.
Le paractamol est sulfat sur la fonction phnol, comme les strodes. Ce
sulfate peut tre ensuite remplac par un glutathion.

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Mthylation
Les ractions de mthylation sont des ractions de dtoxification quon
rencontre dans certaines voies mtaboliques comme le catabolisme des
catcholamines (produite par un acide amin, la tyrosine, qui agit en tant
qu'hormone ou neurotransmetteur), catalyse alors par la catechol-Omthyl transfrase (COMT).
Le coenzyme qui permet le transfert du radical mthyl est la Sadnosylmthionine,
La mthylation de la nicotine est une des voies de dtoxification de cet
alcalode du tabac
Actylation
Des ractions dactylation se rencontrent dans le mtabolisme : synthse
de la N-actylglutamine pour la rgulation du cycle de lure.
Lisoniazide (antibiotique) est actyle par une actyl-transfrase
hpatique dont lactivit est gntiquement dtermine. Lactyl (COCH3) se substitue un des hydrognes dune fonction amine.
Les sulfamides (substances soufres qui permettent de lutter contre les
infections) sont aussi limins par actylation.
Glycoconjugaison
La conjugaison avec le glycocolle est une des ractions principales du
mtabolisme des acides biliaires.
De nombreuses substances aromatiques xnobiotiques sont conjugues
avec le glycocolle au cours des ractions de dtoxification de phase II.
Lacide benzoque est un produit rsultant du mtabolisme de nombreux
xnobiotiques. Aprs conjugaison avec le glycocolle, il donne lacide
hippurique. Ce dernier est frquemment retrouv dans les urines des
chevaux do il tire son nom.
Esters de la carnitine
A issus du mtabolisme des acides gras ou des acides amins sont
transfrs sur la carnitine par des acyl-CoA carnitine transfrase pour
entrer dans les mitochondries et poursuivre leur oxydation.
Certains acyl-coenzymes A issus du mtabolisme de xnobiotiques se lient
avec la carnitine de manire irrversible, entranant le blocage de ce
coenzyme et celui de la -oxydation qui en dpend.
Glutamoconjugaison

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Certains mtabolites comme le phnylactate, produit final du


mtabolisme de la phnylalanine lorsquelle nest pas hydroxyle en
tyrosine, sont conjugus avec la glutamine au cours des ractions de
phase II.
Conjugaison au glutathion
La glutathion S transfrase protine multifonctionnelle est une enzyme
soluble, prsente dans le cytosol
inductible du cytoplasme du foie qui catalyse la liaison de certaines
molcules avec un peptide, le glutathion, sur chaque sous-unit : un site
de fixation pour le glutathion
un site de liaison pour le toxique afin de favoriser leur diffusion dans le
plasma..
Certains xnobiotiques peuvent tre transfrs sur le glutathion au cours
de la phase II de leur dtoxification. Cest le cas du paractamol fortes
doses.
Dans lalcoolisme chronique le taux de glutathion tant profondment
diminu, ces ractions sont beaucoup plus difficiles.

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Cours n6 : Variabilit dexpression des enzymes du Mtabolisme


I Induction
Certains susbtrats, inducteurs enzymatiques sont capables daugmenter la synthse des cytochromes
P450 et par consquent leur activit enzymatique. On parle dinduction enzymatique.
Leffet inducteur est peu spcifique. Un inducteur peut augmenter la synthse et lactivit enzymatique
de une ou plusieurs isoformes des CYP, par exemple le phnobarbital induit le synthse des CYP3A et
CYP2B6,

Augmentation potentiellement trs impor-tante de lactivit de systmes


mtaboliques (P-450 surtout, mais aussi enzymes de phase II) par de
nombreux mdicaments, hydrocarbures aromatiques polycycliques,
insecticides, strodes, etc.
Linduction apparat en un ou quelques jours et ncessite la synthse de
nouvelle protines par stimulation de la transcription.
Cette induction est commande par loccupation dun rcepteur
intracellulaire; par ex. rcepteur la dioxine ou aux hydro-carbures
aromatiques
Quest ce quun inducteur ??
Cest un corps chimique qui en augmentant la synthse dune enzyme,
augmente la vitesse de la raction enzymatique.
Lacclration dune raction mtabolique peut tre le rsultat dune
activation de lenzyme (effet du substrat) ou bien dune induction de
lenzyme (augmentation de sa synthse).
De nombreux xnobiotiques exercent un effet inducteur sur les enzymes
de dtoxification hpatiques en augmentant globalement la synthse des
enzymes des membranes du rticulum endoplasmique lisse ( lieu de
synthse des protines)
Exemples:
phnobarbital : induction du CYP3A mais aussi nombreux autres
enzymes hpatiques, amplification du RE. Activation peu spcifique
du mtabolisme hpatique de nombreuses substances.

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Metallothionines induits par les mtaux


benzpyrne : stimulation trs rapide et trs importante du CYP1A2
(epoxydation du benzpyrne et dautres hydrocarbures aromatiques
polycycliques).
PCB (polychlorinated biphenyl) : induction du mtabolisme des
strodes
On a utilis lactivit des P450 comme indicateur des effets des
contaminants organiques, on a examin le rle des P450 dans la
capacit de la mouette rieuse de supporter un environnement
pollu. Les activits enzymatiques sont plusieurs fois suprieurs
chez les mouettes frquentant un dpt dordure que chez celles
frquentant un lagune assez peu pollu et sont positivement
corrles avec le niveau de rsidus organo- chlors trouvs dans les
tissus des oiseaux
les P450 sont induits par exposition aux polluants

Consquences de linduction
LAcclration considrable de la vitesse dlimination de toutes les
substances mtabolises par le systme induit (demi-vie diminue),
mdicaments mais aussi hormones endognes mais aussi formation
acclre de mtabolites toxiques ou carcinognes
ii) Inhibition
Lactivit denzymes intervenant dans le mtabolisme peut tre inhibe par des
composs exognes et endognes. Cette inhibition augmente la concentration en principe
actif, prolonge effet pharmacologique prolongs et augmente lincidence de la toxicit induite
par le mdicament.
Plusieurs mcanismes sont impliqus. Lors de ladministration de deux ou plusieurs
mdicaments, ils peuvent entrer en comptition pour la mme enzyme. Ce qui a pour effet de
diminuer la vitesse du mtabolisme du mdicament de plus faible affinit ou prsent en
concentration moins leve
Linhibition des cytochromes P450 par certains mdicaments ou aliments dits inhibiteurs
enzymatiques est un autre facteur de variation du mtabolisme. Linhibition est le plus souvent
comptitive et se manifeste rapidement avec le plus souvent une augmentation de la concentration
plasmatique et demi-vie du mdicament dont le mtabolisme a t inhib avec un risque de toxicit.
Linhibition enzymatique est frquemment lorigine dinteractions mdicamenteuses
Dlai et dure de linhibition enzymatique : leffet est immdiat ds linstauration de linhibiteur
Les consquences cliniques de linhibition du mtabolisme des mdicaments sont :

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Une augmentation de la concentration de produit actif et une augmentation la dure de leffet
thrapeutique avec un risque de toxicit si la formation de mtabolites inactifs est ralentie par
linhibition enzymatique. Cest le cas le plus frquent
ou Une diminution de leffet thrapeutique si linhibition conduit une diminution de la
formation de mtabolites actifs.
Les principaux inhibiteurs enzymatiques (ktoconazole, macrolides, ritonavir, jus de
pamplemousse..)

I Facteurs environnementaux
-

Alimentation (tat nutritionnel)


Mdicaments (interaction)

Consquences dans la rponse pharmaco-toxicologique


pharmacogntique, interactions mdicamenteuses (induction et inhibition),
ractions indsirables aux mdicaments). La connaissance de ces variations
permet une meilleure utilisation des mdicaments et une thrapeutique
personnalise.

Polluants (exposition pralable des xnobiotiques)


Diffrences lies lcotype

Ltude chez des populations humaines de la forme P450 2C19 a montr que
cette dernire est absente chez 2 6% de la population caucasienne et jusqu
20% chez les populations asiatiques

II Facteurs endognes
-

Diffrence sexuelle

Les variants P450 IIC11 et P450 IIC7 sont respectivement plus dominants chez
les males que chez les femelles
Ces variant prsentent des diffrences dinductibilit par divers xnobiotiques.
Ce qui peut entrainer une vulnrabilit attache au genre.

- Physio-pathologiques
*Espece: Variations qualitatives (diffrents isoformes) et/ou quantitatives
(mme isoformes taux diffrents)
Mtabolites ventuellement diffrents extrapolation des tudes ?
* Pathologies : insuffisance hpatique , inflammation :
cytokines , diabte , cancers (variations dans la tumeur)
-Toute atteinte du foie altre ces biotransformations
* Age : foetus (moins de CYP), vieillard Induction)
Foetus :3A7 : un seul isoforme qui nexiste pas chez ladulte
Nouveau n :isoformes matures ds la 2me semaine puis
augmente chez ladulte
(dou fragilit de certains enfants vis--vis des xnobiotiques)

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* Expression tissu-spcifique de certaines isoformes : exemple


CYP1B1 dans le tissu mammaire
Un CYP nest pas spcifique dun substrat : un CYP mtabolise plusieurs substrats diffrents et un

substrat peut tre mtabolis par plusieurs CYP.


- Variabilit du facteur de risque humain
Il a t observ des populations prsentant une actylation rapide et une
forte mtabolisation et dautres caractrisations par une actylation lente
et une faible mtabolisation ; par consquent, la seconde catgorie
accumulera davantage de xnobiotiques (polluants ou mdicaments).
- Facteur gntique
Prsence de polymorphismes gntiques ou de mutations rares sur des EMX
Frquences des polymorphismes diffrents selon les populations ethniques (ex
favisme et dficit en G6PD)

Cours n7 : Phase III : Transport et Elimination


Ces une tape indispensable la dtoxification pour le transport du
mtabolite conjugu hydrophile hors de la cellule grace aux P*
transporteuse :MRP multidrug related protein 7 recenses :MRP1
,MRP2
Il sagit de transporteurs membranaires qui permettent dliminer les molcules
initiales intactes ou leurs mtabolites hydrophiles .
Dans les entrocytes, ces transporteurs peuvent se situer sur la membrane
apicale ou dans la membrane basolatrale limination soit vers la lumire
intestinale soit vers le sang.
Excrtion
Lexcrtion a un rle essentiel dans la diminution de la toxicit ;Les
mtabolites rapidement excrts vitent les concentrations et
lendommagement des cellules.

Les principes actifs sont limins du corps sous forme inchange ou sous forme de
mtabolites. Les Xnobiotiques peuvent tre excrts par plusieurs voies. Ainsi ils peuvent
treexcrts dans les urines via les reins, dans les fces sous via le tractus gastro-intestinal
(bile et intestin), dans lair exhal via les poumons, dans le lait maternel ou par la sueur.
Les principales voies d'limination sont l'excrtion rnale et l'excrtion biliaire et fcale. Les
organes excrteurs liminent les composs polaires et hydrosolubles plus efficacement que
des substances ayant une solubilit lipidique leve.
L'excrtion est fortement affecte par :

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Les proprits physiques


La fixation ventuelle aux protines plasmatiques
La polarit

Les caractristiques de la biotransformation des mdicaments peuvent


tre dcrites de faon simpliste laide de 2 paramtres
pharmacocintiques, la clairance et la demi-vie dlimination.
Par dfinition, la clairance correspond au volume de sang totalement pur du
mdicament par unit de temps. Elle est donc gnralement exprime en L/h.
Plus la clairance est leve, plus les capacits dlimination du mdicament par
lorganisme sont importantes. Cette notion de clairance prend donc en compte
tous les processus dlimination du mdicament quils sagissent dlimination
sous forme inchange (rnale) et des diffrentes biotransformations
(intestinale, hpatique). On peut donc parler de notion de clairance (Cl) totale
et de clairances hpatique, intestinale ou rnale, la premire tant la rsultante
de toutes les autres :
Cl totale = Cl rnale + Cl hpatique +
La vitesse dlimination par biotransformation peut tre estime par la demi-vie
dlimination (T1/2) dfinie comme le temps quil faut lorganisme pour liminer
la moiti du mdicament. Elle est calcule partir de linverse de la pente de
dcroissance des concentrations plasmatiques en mdicament en fonction du
temps.
La clairance et la demi-vie sont relies par la notion de volume de
distribution (Vd), paramtre pharmacocintique de distribution :

L'excrtion rnale
Elle reprsente la voie d'limination la plus importante pour les mdicaments et leurs
mtabolites. Le rein est perfus par le sang raison de 1,4 L/min. L'excrtion des
xbobiotiques ou de leurs mtabolites est ralise selon trois processus : la filtration
glomrulaire, la scrtion tubulaire active et/ou la rabsorption tubulaire passive.
Lunit charge de ses processus cest le nphron, il y a environ un million de nphrons par
rein. Le nphron comporte plusieurs partie distinctes, dans lordre :
i) le glomrule ; ii) le tube proximal ; iii) lanse de Henl ; iv) le tube distal, et v) le tube
collecteur.
Le sang irrigue le nphron par lartriole rnale affrente, et il est drain par lartriole
effrente.
La filtration glomrulaire
La porosit du glomrule (pores dun de 8 nm) ne permet pas le passage des cellules
sanguines (globules, plaquettes), ni celui des grosses molcules (protines, enzymes). Au
niveau du rein,
le glomrule filtre les petites molcules (principes actifs, mtabolites). En

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consquence, seul la fraction de principe actif libre (non-lie aux protines) accdera la
lumire du tubule rnal proximal.
Scrtion tubulaire active
Au niveau des tubules, deux principaux systmes sont responsables de la scrtion
tubulaire active des principes actifs et des mtabolites.
De nombreux acides organiques(pnicilline, indomthacine)
chargs ngativement ainsi que des mtabolites (glucuronides)
sont transports par un systme anionique
, tandis que les bases organiques (morphine) sont
transportes par un autre systme (cationique) qui scrte la choline, l'histamine, et d'autres
bases endognes, charges positivement. Les systmes transporteurs sont relativement non
slectifs et des ions organiques de charge similaire entrent en comptition pour le transport.
Rabsorption tubulaire
Toujours au niveau des tubules rnaux, les formes non ionises des principes actifs
(acides et bases faibles) subissent une rabsorption passive. Les principes actifs rediffusent
alors du fluide tubulaire vers le plasma.
. Excrtion biliaire et fcale
De nombreux mtabolites de mdicaments forms dans le foie sont excrts vers le
tractus intestinal par le canal biliaire et donc dans les fces. Certains mtabolites sous forme
conjugue sont hydrolyss dans lintestin.
Et peuvent etre rabsorbs dans le sang et excrts ultrieurement. Cest le cycle entrohpatique
Le temps ncessaire pour que la moiti de la quantit de principe actif administr soit
limine en dehors de lorganisme est appel temps de demi-vie terminale ou t1/2. Cette
valeur varie selon la voie dadministration, et la forme du mdicament