Funcionamento gnico:

Transcrio

Fibrose cstica: doena

humana causada por um alelo
defeituoso de um nico gene

Afeta vrios rgos:

ductos ou tubos ficam
obstrudos

Muco espesso e
pegajoso e secrees

Orgos afetados
pela fibrose cstica

Causa frequente de morte:

bloqueio da via erea por muco

Como possvel um defeito em apenas um dos milhares

de genes no genoma humano resultar em morte?

Gene confere uma funo crucial manuteno da vida humana

FUNO GNICA

chave para o entendimento das doenas hereditrias em

seres humanos

produtos iniciais de todos os genes

RNA
sntese de RNA: TRANSCRIO
processo que copia a seqncia de nucleotdeos no DNA
primeira etapa na transferncia de informao do
gene para a protena

seqncia RNA seqncia de aa de cadeia polipeptdica

TRADUO

Processo pelo qual o RNA sintetizado a partir

de um molde de DNA

DNA transcrito em RNA e o RNA chamado transcrito

Fluxo da informao

Propriedades do RNA
O RNA se diferencia do DNA em trs aspectos:
o RNA uma molcula de fita simples ao invs de uma
hlice dupla fita.

os nucleotdeos do RNA contm o acar ribose ao

invs do desoxirribose;
o RNA contm a base uracila ao invs da timina;
pode adquirir conformaes variadas

Propriedades do RNA
RNA uma cadeia unifilamentar de nucleotdeos
G

G
OH
C
A
A
OH
T
U
T
A

OH
C

C
G
OH

DNA

RNA

Propriedades do RNA
RNA possui acar ribose em seus nucleotdeos:
- fosfato-ribose com uma base ligada em cada ribose

Estrutura qumica dos aucares

ribose e desoxirribose

Esqueleto de pentose-fosfato de RNA

Propriedades do RNA
nucleotdeos com bases: A, G, C e U
- U: encontrada no lugar da T

Estrutura qumica da
base pirimidina uracila

Propriedades do RNA
RNA pode adquirir conformaes variadas

Propriedades do RNA

Uracil em
lugar da T

OH no C 2
Ligaes
fosfotister

Classes de RNA
RNAs de informao:
intermedirio na sntese do produto funcional final: protena
passa a informao do DNA para a protena
mRNA

RNAs funcionais:
Ativos como RNA, nunca so traduzidos em protenas
contribuem em vrias etapas na transferncia da informao
do DNA para a protena
tRNA
rRNA

Para que servem os RNAs?

Passar as informaes contidas nos genes para a clula
desempenhar suas funes.

Definio de gene:
Um gene uma unidade de transcrio, que consiste de um
segmento de DNA que se estende do stio de incio de
transcrio ao stio de trmino de transcrio.

Transcrio
Como o gene (DNA) transcrito em uma
molcula de RNA?
TRANSCRIO
baseia-se pareamento complementar de bases
dois filamentos do DNA se separam
um dos filamentos atua como molde para a sntese de RNA

RNA sintetizado de modo complementar e com

polaridade inversa

Transcrio
Replicao
(duplicao do DNA)

DNA
Transcrio
(Sntese de RNA)

RNA
Traduo
(Sntese de Protenas)
Protena

PROTENA

Transcrio
Filamentos de DNA utilizados como moldes para a transcria

No cromossomo total ambos os

filamentos so usados como molde
Genes diferentes podem ser
transcritos de moldes diferentes
Em qualquer gene apenas um
filamento utilizado e nesse gene
sempre o mesmo filamento

RNA

gene
a

5
3
RNA

gene
b

gene
c
RNA

3
5

Transcrio

Sentido da transcrio 5 3

Nucleotdeos so sempre adicionados na ponta crescente 3

Transcrio
Transcrio de dois genes

Enzima RNA polimerase: adiciona o nucleotdeo complementar ao

molde de DNA

Transcrio
Transcrio dos genes do rRNA

medida que molculas de RNA polimerase movem-se ao longo do gene, as

molculas do RNA crescente podem ser observadas sob ME

Transcrio

Filamento codificante (no molde): fita do DNA que possui

sequncia idntica a fita recm formada de mRNA (exceto por
possuir uracilas em vez de timina)

Fita molde: fita do DNA que serve de molde para a adio

dos ribonucleotdeose

Transcrio

Requisitos para a transcrio

1. Um molde de DNA
2. Ribonucleotdeos
3. Protenas envolvidas na sntese do RNA

Transcrio
POLIMERIZAO: 5---> 3
Para a atividade de sntese de RNA:
precisam de uma regio promotora no DNA
requerem uma fita de DNA molde
precisam de rNTPs
no requerem primer
no tm atividade de exonuclease
pareamento DNA / RNA

Transcrio catalizada pela enzima

RNA-POLIMERASE

Processo de transcrio procaritico

Trs estgios da transcrio:
iniciao, alongamento e trmino

Iniciao
Reconhecimento do promotor pela RNAP holoenzima (fator )
RNA polimerase se liga a se liga a sequncia especfica de DNA:

Promotor
est no incio de um gene extremidade 5
comea a transcrio
parte importante da regio reguladora do gene
est na ponta 5 do gene
chamada de regio reguladora

Processo de transcrio procaritico

Iniciao
Conveno para a designao das extremidades 5e 3de um gene

Sequncias altamente conservadas (consenso) na fita

codificadora :
-35 TTGACA
-10 TATAAT

Processo de transcrio procaritico

Alongamento
Deslocamento da RNA polimerase ao longo do DNA
Formao da bolha de transcrio

Enzima RNA polimerase:

catalisa o alongamento 3 do filamento de RNA
compara trifosfatos de ribonucleotdeos livres (rNTPs) com
a base exposta seguinte no molde de DNA
se ocorrer combinao complementar adiciona rNTPs
cadeia (ponta 3-OH)

Processo de transcrio procaritico

Alongamento

Processo de transcrio procaritico

Alongamento

sada do fator sigma

alterao conformacional da RNA Pol e polimerizao do RNA
hbrido de RNA e DNA - 12 pb

Processo de transcrio procaritico

Trmino

RNA pol.
reconhece seqncias especficas de nucleotdeos no DNA

sinais para a finalizao da cadeia

filamento de RNA e RNA polimerase

so liberados do molde de DNA

Processo de transcrio procaritico

Trmino
presena de sequncias repetidas e invertidas na regio 3
formao de um grampo de terminao
seqncia rica em GC

desestabilizao do hbrido e desligamento do RNA

Processo de transcrio procaritico

Trmino

Estrutura de um stio de finalizao para a

RNA polimerase nas bactrias
Seqncia GC: ligaes complementares formando uma ala em grampo seguida
pela seqncia final de Us.
Ala em grampo e seco de Us: sinal para a liberao de RNA pol. e finalizao
da transcrio.

Processo de transcrio procaritico

Trmino

Processo de transcrio procaritico

Unidade de Transcrio
promotor
regio codificante de RNA
finalizador
upstream

downstream

Promotor

Regio codificante de RNA

5
3

3
5
Ponto de incio
da transcrio

Stio finalizador da
transcrio

RNA transcrito

Transcrio em Eucariontes
Transcrio em eucariontes mais complexa
1o
genoma muitos genes a serem reconhecidos e transcritos
mais DNA no codificante
genes mais afastados - baixa densidade de genes
E. coli = 1 gene por 1.400 pb
Drosophila = 1 gene por 9.000 pb
Humanos = 1 gene por 100.000 pb

encontrar comeo do gene: encontrar agulha no palheiro

lidam com essa situao de vrios modos....

Transcrio em Eucariontes
Transcrio em eucariontes mais complexa
1o
genoma muitos genes a serem reconhecidos e transcritos
mais DNA no codificante
genes mais afastados - baixa densidade de genes
E. coli = 1 gene por 1.400 pb
Drosophila = 1 gene por 9.000 pb
Humanos = 1 gene por 100.000 pb

encontrar comeo do gene: encontrar agulha no palheiro

lidam com essa situao de vrios modos....

Transcrio em Eucariontes
Diviso trabalho transcrio entre trs polimerases:
RNA pol. I transcreve genes de rRNA (50-70%)
5.8S, 18S e 28S excluindo 5S rRNA
RNA pol. II transcreve genes que codificam protenas
mRNA

(20-40%)

RNA pol. III transcreve pequenos RNA funcionais (10%)

tRNA, snRNA, 5S rRNA
Sempre necessitam de protenas auxiliares fatores de transcrio
(equivalentes aos fatores sigma de procariotos)

Transcrio em Eucariontes
2o Presena de um ncleo em eucariontes
Transferncia de informaes do DNA para a protena:

PROCARIOTOS

EUCARIOTOS

Transcrio em Eucariontes

Procariontes: nica RNA polimerase

transcrito primrio o mRNA
traduo ocorre direto no transcrito cresci/o

Eucariontes: trs RNAS polimerases

transcrito primrio processado
transcrio
traduo

ncleo
citoplasma

mRNA

Transcrio em Eucariontes
3o Molde para transcrio (DNA) organizado em cromatina

Algumas estruturas de cromatina podem bloquear o acesso da RNA

polimerase ao molde de DNA: regular a expresso gnica

Transcrio em Eucariontes
INCIO: formao do complexo de iniciao

Fatores de transcrio:
reconhecem e se ligam ao promotor antes da RNA pol II
atraem a RNA polimerase II
posiciona RNA pol no stio correto para incio da transcrio

FTs podem permanecer no promotor p atrair mais RNA pol II

vrios transcritos de um nico gene

Processo de transcrio Eucaritica

ALONGAMENTO:
Aps incio transcrio....
RNA pol II dissocia-se dos GTFs
alongamento transcrito primrio de RNA

ocorre dentro da bolha de transcrio

igual a sntese RNA procaritico
RNA sofre processamento antes de ser traduzido

Processo de transcrio Eucaritica

TRMINO:

pouco conhecido
reconhecimento de AAUAAA ou AUUAAA 3 pela endonuclease
endonuclease: corta a ponta do RNA 20 bases depois

Processamento de RNA eucaritico

Processo pelo qual o RNA primrio modificado
Processo de transformao de um transcrito primrio, pr-mRNA
ou RNA precurssor (hnRNA RNA heterogneo nuclear) em RNA
maduro ou mRNA processado

produto inicial da transcrio

(transcrito primrio de RNA)

processado

protenas se ligam ao RNA

transportado p/ citoplasma

Processamento de RNA eucaritico

Antes do processamento...

DNA

Transcrito
primrio
Regio 5 no
traduzida

Regio 3 no
traduzida

Quais modificaes ocorrero no RNA precursor ??

Processamento de RNA eucaritico

pr-mRNA (ncleo)

adio revestimento (cap) 7-metilguanosina na ponta 5

adio cauda poli-A (150-200 nucleotdeos adenina) na ponta 3

recomposio - splicing (remoo ntrons e unio dos

xons do RNA primrio)

m-RNA final (citoplasma)

Processamento de RNA eucaritico

Processamento de transcrito primrio (pr-mRNA)

7-metilguanosina
Sinal de poliadenilao:
AAUAAA ou AUUAAA

Clivagem por
endonuclease

Cauda poli-A

Processamento de RNA eucaritico

Processamento de transcrito primrio (pr-mRNA)

Processamento de RNA eucaritico

Processamento do transcrito para gerar um mRNA

xons: pedaos que codificam protenas

Introns: pedaos de funo desconhecida que separa os xons e no
codifica protena

Processamento de RNA eucaritico

Transferncia de informaes do DNA para o RNA e protena

Processamento de RNA eucaritico

Adio do cap no terminal 5

Ocorre antes do trmino da transcrio

Ligao covalente de uma guanina metilada (metil guanosina) no
primeiro nucleotdeo transcrito pela guanilil transferase
Proteo do mRNA da ao de exonucleases - estabilidade
Reconhecimento do mRNA pelo ribossomo

Processamento de RNA eucaritico

Adio da cauda Poli A no terminal 3

SOMENTE EM mRNA
Mais de 200 resduos de adenina na extremidade 3
Sequncias conservadas de reconhecimento presentes na regio
no codificante sequncia sinal para poliadenilao
Pequenas variaes entre organismos distantes evolutivamente
Quanto maior a cauda, maior a estabilidade e meia vida do mRNA

Processamento de RNA eucaritico

Processamento do Gene da Ovalbumina

Recomposio-splicing:
Remoo de ntrons e
unio dos xons

A recomposio une as regies

codificantes, os xons, de modo que
o mRNA seja totalmente co-linear
com a protena que ele codifica

Processamento de RNA eucaritico

Nmero e tamanho dos ntrons variam:
gene para gene
espcie para espcie
Leveduras: 200 dos 6.300 genes tem ntrons
Mamferos (humanos): muitos ntrons
tamanho ntron 2.000 nucleotdeos
tamanho xon 200 nucleotdeos

maior parte DNA codifica ntrons e

no xons

Processamento de RNA eucaritico

Ex: Gene humano da Distrofia muscular de Duchene
2,5 milhes de nucleotdeos
79 xons
78 ntrons

processamento RNA

79 xons: mRNA de 14.000 nucleotdeos

ntrons: correspondem a grande maioria dos 2,5

milhes de pares de bases