El cultivo de microalgas conocido como cultivos de apoyo o cultivos anexos (considerando en esta

definicin tambin al cultivo de zooplancton) es primordial en el desarrollo de los cultivos

principales,esto es, para los moluscos durante todo su ciclo de vida crustceos y peces en su etapa
larvaria Las microalgas son las encargadas del suministro de energa por medio de biomolculas
sintetizadas de elementos menos complejos transformados a travs de la fotosntesis .Estas microalgas
son las que mayormente contribuyen a la produccin de biomasa en los ocanos, estuarios, lagos y
reservorios. La posicin de estos organismos dentro de las redes trficas forman los pilares o bases de
stas debido al aporte de energa de las biomolculas sintetizadas por estos Hoff y Snell 2001. Es as
como hasta el momento estos microorganismos no se han podido sustituir como fuente nutricional para
cualquier organismo en cultivo Caizares et al 1994.
El trmino microalga se refiere a aquellos microorganismos que contienen clorofila y otros pigmentos
fotosintticos capaces de realizar fotosntesis, stas especies aportan un alto contenido nutricional para
peces, crustceos y moluscos, adems de ofrecer facilidades de manejo en sistemas de cultivo tanto en
laboratorio como en produccin a gran escala con fines comerciales. El trmino microalga no tiene
sentido taxonmico alguno y dentro del mismo se incluyen organismos con dos tipos celulares distintos
cianobacterias que tienen estructura celular procariota y las restantes microalgas con estructura celular
eucariota; Pese a las grandes diferencias estructurales fisiolgicamente ambos tipos de microalgas
eucariota y procariota son similares con un metabolismo fotosinttico similar al de las plantas superiores
La reproduccin es generalmente por divisin binaria con tiempos de duplicacin de una hora o menos
para los procariotas cianobacterias y de 8 a 24 horas o ms para las eucariotas Carpenter 1979 Dawes
1991.
No todas las especies incluidas en este grupo son fotoauttrofas como se explic al principio de esta
seccin algunas otras son verdaderas hetertrofas debido a que no requieren de luz y toman la energa
de compuestos orgnicos tales como los azcares y cidos orgnicos de igual forma muchas otras
especies son mixotrficas esto es que pueden reproducirse en presencia de luz o en la oscuridad Hoff y
Snell 2001.
El crecimiento mieroalgal se rige por la ley del mnimo es decir el factor Iimitante del crecimiento es
aquel que est presente en cantidades ms prximas al mnimo critico necesario para la microalga Es
importante conocer las condiciones ptimas y los lmites de tolerancia de una microalga para todos o el
mayor nmero de parmetros Ahora bien estas condiciones o lmites para un parmetro
generalmente cambian cuando un segundo parmetro flucta Caizares 1994
Al igual que como cualquier otro organismo vivo las condiciones fsicas tienen gran influencia en el
crecimiento de la microalga. Cada especie presenta un particular intervalo de temperatura intensidad de
luz preferencias espectrales salinidad bixido de carbono y oxgeno para la produccin de un mximo
crecimiento Tambin se debe mencionar que ms que la influencia de un solo parmetro es el
conjunto de parmetros o que crea determinadas respuestas en el crecimiento de las microalgas
Caizares 1994

TABLA 1. PARMETROS PRINCIPALES DE LOS CULTIVOS DE

MICROALGAS
COMPUESTOS
QUIMICOS

REQUERIMIENTOS
Fsicos

VALORES

Luz

2,000 4,000
lux

Temperatura

15 22C

Salinidad

0.37

pH

79

Redox
CO2CO3

g/100 ml

O, H

O2H2O

g/100 ml

N2NH4+ NO3

g/100 ml

PO4

g/100 ml

SO4

g/100 ml

Na, K, Ca, Mg

Sales

g/100 ml

Fe, Zn, Mn, B, Br, Si

Sales

mg/100 ml

Cu, Co, Cl, I, Sr, Rb, Al, et Sales

g/100 ml

Vitaminas

g/100 ml

Nutritivos C

B12, tiamina, biotina

En esta tabla se exponen los requerimientos principales de los cultivos de microalgas y sus valores aproximados. En cada
caso habr que estudiar los reqerimientos particulares de la especie y de la variedad que se vaya a cultivar en las
condiciones concretas de cultivo que se van a utilizar, por lo que estos datos son slo orientacin (Kinne, 1979).

Como
parmetros
fsicos
se
consideran:
La luz- las microalgas son fotoauttrofas encargadas de convertir la energa luminosa en metablica
por medio de la fotosntesis y sus periodos de exposicin a sta pueden ser continuos mediante luz
artificial discontinuos periodos de iluminacin alternados con periodos de oscuridad tambin con luz
artificial o el ciclo natural da y noche Richmond 1986
La aireacin asegura la distribucin homognea de las clulas y los nutrientes dentro del cultivo
dejndolos disponibles para su mejor aprovechamiento mejora la distribucin de la luz a las clulas
asegurando que permanezcan fotosintticamente activas evitando que se sedimenten y previene una
estratificacin trmica Richmond 1986
En el caso de la temperatura las microalgas en las que se est interesado generalmente para su cultivo
son las consideradas como especies tropicales debido a que su crecimiento no sufre alteraciones en un
intervalo de 16 a 270C presentando un ptimo de 240C Bajas temperaturas en referencia con el
intervalo anterior no matan a la microalga sin embargo puede provocar una disminucin de crecimiento
temperaturas arriba de 350C provocaran que la mayora de las microalgas colapsaran Hoof y Snell
2001

El intervalo de salinidad ptimo para una microalga depender de la especie Generalmente en el

cultivo a interiores este parmetro no es controlado y se maneja la salindad presente en el agua de
mar En un cultivo a exterior la salinidad se convierte en el parmetro control en el crecimiento de la
microalga Abalde et al 1995
Dentro de los requerimientos qumicos necesarios para un buen crecimiento de las microalgas en
cultivo se encuentran entre otras cosas el balance entre los macronutrientes especficos y los
micronutrientes Un desbalance en la proporcin suministrada de estos nutrientes invariablemente se
manifiesta ya sea como un descenso en el crecimiento o hasta la detencin del mismo Hoof y Snell
2001
Por macronutrientes se consideran la fuente de nitratos fosfatos y en el caso de las diatomeas la adicin
de silicatos.
Con respecto a los micronutrientes son aquellos que se uministran en poca cantidad trazas en
comparacin con los anteriores mencionados pero no por ello menos importantes Se sabe que en
soluciones alcalinas algunos metales se precipitan agentes quelantes tales como el EDTA Acido Etilen
diamino tetractico se utilizan para mantener los metales en solucin hacindolos disponibles para las
microalgas
Kaplan
et
al
1986
Para proporcionar estos nutrientes se debe seleccionar el medio de cultivo que se va a utilizar El agua
marina es un medio de cultivo ideal para el crecimiento de las microalgas marinas sin embargo es
necesario enriquecerla con nutrientes. Los medios de cultivo son muy diversos pero todos coinciden en
una fuente principal de nitrgeno fsforo y una mezcla de metales traza con solucin de quelante y
vitaminas Provasoli et al 1957 Stein 1973 Existen diversas formulaciones de medios de cultivo algunos
de estos han sido seleccionados de diferentes laboratorios y utilizados durante muchos aos De igual
forma se han formulado medios especficos para algunas especies de microalgas provasoli et al 1957
adems es prctica comn que a partir de un medio formulado se realicen modificaciones
empricamente hasta que se satisfagan los requerimientos de diversas microalgas utilizadas para
investigacin Myers 1962.
Un alta o baja excesiva en el pH disminuye el crecimiento de la microalga por el rompimiento de muchos
procesos celulares Si el nitrgeno no es suministrado al cultivo como sal de amonio la mayora de las
microalgas selectiva mente tomaran el ion amonio provocando una baja en el pH Si los iones nitratos
son eliminados por el alga el pH tiende a incrementarse pero usualmente controlado por suministro de
bixido de carbono del cultivo

MEDIOS DE CULTIVOS

Se han desarrollado diferentes medios para el cultivo de microalgas que van desde las frmulas para
enriquecer el agua de mar natural, hasta el uso de medios artificiales.
Los medios artificiales se usan principalmente para fines experimentales, ya que como se ha
mencionado, brinda resultados constantes, aunque existen algunas especies que no crecen en medios
artificiales por factores desconocidos que afectan su crecimiento, las principales frmulas utilizadas van
desde el agua de Miguel, que data de 1910, desarrollada por Allen-Nelson; el medio de End-Schereiber
de 1934, hasta frmulas especficas para familias como la frmula del Laboratorio Haskins de Nueva
York para diatomeas, Provasoli et al., 1975; Matthiesen & Thorner, 1966; McIachlan, 1973; Guillard F.,
1973; Droop, 1975, 1979; Schoene, 1982, etc.

El fitoplancton se desarrolla y multiplica en relacin de las condiciones fisicoqumicas del medio. En trminos
generales son los macronutrientes o factores limitantes del crecimiento el carbono, Nitrgeno, Fsforo, Silicio,
Magnesio, Potasio y Calcio, que se requieren en cantidades relativamente grandes, mientras que los llamados
micronutrientes (Fierro, Manganeso, Cobre, Zinc, Sodio, Molibdeno, Cloro y Cobalto) se necesitan en menores
cantidades.
Existen otros medios que incluyen en su composicin sustancias orgnicas (vitaminas, aminocidos) necesarios
para aquellas especies de microalgas Auxtrofas, es decir que no sintetizan por medio de la fotosntesis este tipo de
compuestos y resultan factores que pueden limitar su crecimiento; tal es el caso de Platimonas, Chrysophytas y
algunas Bacillariophyceas.
TABLA 2. MEDIO CHU 10 (MODIFICADO POR GERLOFF)
(0. UMEBAYASHI, 1975)
(Recomendado para aislamiento de microalgas
de hbitats oligotrficos y eutrficos)
Ca(NO3)2
.
K2HPO4
Na2CO3
MgSO4.7H2O
Na2SiO3
Citrato de Fierro
Amoniacal

04%
0.01%
0.02%
0.025%
0.025%
0.005%

NOTA: Puede usarse para medio solidificado

Agar-Agar
1.0%

TABLA 11. MEDIO DE YASHIMA (SISFFAA,

1964a)
(Para cultivo masivo de cloroficeas marinas)
Sulfato de Amonio (para la
100
agricultura 21%)
g/t
Superfosfato de Calcio (para la
15 g/t
agricultura 21%)
Urea (para la agricultura 21%)
15 g/t
3050
Clewat 32
g/t
Componentes de Clewat 32:
0.385
FeCl2 (como fuente de Fe)
%
0.166
ZnCl2 (como fuente de Zn)
%
0.775
MnCl2 (como fuente de Mn)
%
0.017
CoCl2 (como fuente de Co) TABLA 12. YANASE & IMAI (1968) PARA Monochrysis lutheri, Platymonas sp.,
%
Nitzschia closterium, Chaetoceros calcitrans
0.007
CuSO4 (como fuente de Cu)
NaCl%
18 mg
Metal M
30 ml
(NH4)6Mo7O24 (como fuente de 1 0.632
KC
600 mg
Fe (as Cl-)
100 g
Mo)
%
NaNO
2.470
500 mg
Tris
1g
3
H3 BO3 (como fuente de B)
%
MgSO4 . 7H2O
5g
Vit.B12
3g
0.005
EDTA
% Cl-)
Ca (as
100 mg
Na2 SiO3
80 mg
MEDIO DE YASHIMA MODIFICADO
K2HPO4
30 mg
Vitamin Mix
1 ml
(HIRATA, 1975)

Medio de Yashima (en la misma

H2O
1l
concentracin)
Peptona
50 g/t
* Mezcla
de metales 100 ml, contanido: Na2 EDTA, 100 mg; Fe, 1 mg; Zn, 0.5 mg; Mn, 4 mg;Co, 0.01
0.005
Peptidasa
mg; Cu,
0.004
mg; B, 20 mg.
%
Mezcla
de vitaminas 50 ml, contenido: B12, 10 g; biotina, 50 g; B1, 5 mg
0.005
Diaminasa
%
(recomendado para cultivos axnicos)

TABLA 3. MEDIO ENRIQUECIDO

TABLA 13. MEDIO DE GUILLARD & RHYTER (PARSONS &

STRICKLAND, 1961)
A. SOLUCIONES NUTRIENTES

MEDIO MIGUEL (ALLEN-NELSON, 1910)

Soluci KNO3
20. 2 g
1 Disolver 0.08 gr de clorhidrato de Cobalto CoCl2.6H2O y
n A:
H2O
100 ml
0.8 gr de Sulfato de Cobre CuSO4.5H2O; en 100 ml de
Soluci Na2HPO412H2O
4g
H2O destilada.
n B:
CaCl26H2O
4g
HCl conc.
2 ml
2 Aadir 1 ml de solucin A.1. a aproximadamente 800 ml
FeCl3
2 ml
de H2O destilada, que previamente se le ha adicionado:
H2O
80 ml
Agregar 2 ml de la Solucin A y 1 ml de la
0.2natural,
gr de yTricloruro Frrico FeCl3.6H2O
Solucin B a un litro de agua de mar
calentar a 70C por 20 minutos. 0.06 gr de Sulfato de Zinc ZnSo4.7H2O
MEDIO ERD-SAHREIBER ENRIQUECIDO
0.12 gr de Sulfato de Manganeso MnSO4.H2O
(FOYN, 1934a,b)
0.03
NaNO3
10 gr
mgde Molibdato de Sodio Na2MoO4.2H2O
Na2HPO412H2O
2 mg
Extracto de suelo
5 ml
Agua de mar
100 ml
MEDIO ERD-SCHREIBER
*Agua de mar
1 litro
Extracto de suelo
50 ml

Aadir 1.2 gr de Etilenodiaminotetracetato Disdico (EDTA) diludo a cerca de 900 ml de H 2O destilada.

Ajustar el pH de la solucin con Hidrxido de Sodio IN-Na(OH), hasta 7.5.

Evitar la formacin de precipitado, el cual puede elevar la adicin de mucho alcali.

Aadir 10 gr de Nitrato Potsico KNO 3 y 1.4 gr de Fosfato Dihidratado de Potasio KH2PO4.

Diluir la solucin a 1 litro y en autoclave a menos de 15 libras de presin por 15 minutos.

Guardar la solucin en botellas de vidrio en la obscuridad.

B. SILICATO DE SODIO

Disolver 10.5 gr de Metasilicato Pentahidratado de Sodio Na2SiO3.5H2O 14 gr de Na2SiO3.9H2O en 1 litro

de agua destilada.

Esterilizar la solucin por filtracin a travs de un filtro de vidrio.

Guardarla en un envase de polipropileno esterilizado.

C. ACIDO HIDROCLORHIDRICO

Preparar una solucin 0.1N-HCL.

Determinar por titulacin la cantidad de esta solucin necesaria para neutralizar 10 ml de la solucin B.2-Si
ml de 0.IN-HCL han sido utilizadas para neutralizar 10 ml de solucin B.2, multiplicar por 100 y esta
cantidad llevarla a 1 litro de H2O destilada.

Esterilizar la solucin cida por filtracin a travs de un filtro de vidrio.

Guardarlo en una botella de polipropileno esterilizado.

D. SOLUCION DE VITAMINA

Disolver 10 mg de Tiamina hidroclrica y 10 mg de Biotina en 100 ml de H 2O destilada.

Diluir 10 ml de solucin D.1 en 100 ml de H 2O destilada.

Esterilizar solucin D.2 pasndola a travs de un filtro de vidrio.

Guardarla en porciones de 10 ml en tubos estriles de tapa enroscada a menos de 20C.

TABLA 14. MEDIO DE GUILLAR F/2 (J. STEIN, 1979)

Nutrientes Mayores
NaNo3
7.5
NaH2PO4.H2O 0.5

Solucin Primaria
% w/v
% w/v

NH4Cl

2.65

Na2SIO3.9N2O

% w/v
% w/v (calentar para
disolver)

Usar un mililitro de estas soluciones por litro de agua de mar, para preparar el medio F/2. Sugerencia: Preparar el
NaNO3 junto con NaH2PO . H2O en 100 mililitros.
Metales Traza
CuSO4.5H2O
ZnSO4.7H2O
ZnCl2
CoCl2.6H2O
MnCl2.4H2O
Na2MnO4.2H2O

Solucin Primaria
0.98 % w/v
2.2 % w/v
1.05 % w/v
1.0 % w/v
18 % w/v
0.63 % w/v

Es conveniente hacer las soluciones primarias en forma individual.

y con una concentracin menor de 106 ms concentrada que en el medio F/2.
Solucin Primaria de Metales Traza
A. Con Secuestrante Frrico (Cloruro Frrico):
Disolver 5 gr del Secuestrante Frrico en 900 ml de agua destilada y aadir 1 ml de cada una de las soluciones
primarias de metales traza preparados anteriormente; aforar a un litro y asegurar que el pH quede cerca de 4.5. Use
1 ml de esta solucin por cada litro de agua de mar para hacer el medio de cultivo. Agua de mar filtrada (5, 10,
etc.) y de ser posible irradiada con UV.
B. Con EDTA y Cloruro Frrico (FeCl.6H2O)
Disuelva 3.15 g de FeCl.6H2O 4.36 de EDTA (Na2) en 900 ml de agua destilada, agregue 1 ml de cada una de las
soluciones stocks primarios de metales traza y afore a 1 litro, asegure un pH de 2.0.
Use 1 ml de esta solucin por litro de agua de mar para preparar el medio f/2.
Solucin Primaria de Vitaminas

Solucin Primaria de Biotina: Se prepara a partir de cristales de Bl, disolver 10 mg de biotina en 96 ml de

agua destilada. Haga esta solucin ligeramente cida para ser autoclavada y mantngase en un congelador.

Solucin de Bitamina B12: A partir de Cyanocobalamina U.S. de 1000 mg/ ml solucin inyectable. Tomar 1 ml
y aforarlo en 100 ml de agua destilada. La solucin se acidifica para ser autoclavada y se congela.

Solucin Primaria de Vitaminas

Tomar 1 m de la solucin primaria de Biotina y 0.1 ml de la solucin stock primaria de B 12, aforar a 100 ml
con agua destilada y aadir 20 mg de Tiamina HCl.

Se pueden preparar ampolletas de 2, 5 10 ml y almacenarlas estriles (acidificas) en el congelador.

Use ml de esta solucin por cada litro de agua de mar para preparar el medio f/2.
Preparacin del Buffer Tris
Tome 50 g de Tris y disulvase en 200 ml de agua destilada y ajuste el pH a 7.2 en HCL. Use de 1 a 5 ml por litro
de medio antes de la autoclave, ajustando el pH a 7.4 (recomendado usar 1 ml por litro cuando el pH del medio es
7.98.2).

TABLA 16. MEDIO MET 44 (SCHONE & SCHONE, 1982)

(Para microalgas marinas de la Familia Bacilarioficea)
NaNO3
3.4 mg
Na2HPO4.12H2O
0.925 mg
Na2SiO3.9H2O
10.14 mg
Na2EDTA.2H2O
0.803 mg
FeSO4.7H2O
60.0 g
MnCl2.4H2O
14.4 g
Vitamina B12
0.5 g
Biotina
0.5 g
Tiamina-HCl
0.5 g
Para enriquecer un litro de agua de mar
NOTA: La solucin stock de Fierro y Silicato debe de acidificarse un poco con una gota de Acido Sulfrico
concentrado, y la solucin de EDTA debe acidificarse con Acido Clorhdrico.
El EDTA puede ser adicionado antes que el Fierro.
Para la produccin de microalgas a nivel comercial se usa el agua de mar enriquecida con fertilizantes agrcolas
(Urea, Fosfato triple, Nitrato de Amonio, etc.) (Chu, 1942, y Tamiya, 1957; SISFFAA, 1964a) y tradicionalmente la
fertilizacin de estanques con abonos orgnicos, en cultivos de especies herbvoras como las carpas.