Las tcnicas espectroscpicas o espectrofotomtricas se basan en la utilizacin
de energa luminosa de cierta longitud de onda para identificar y cuantificar
analitos de una muestra. Las radiaciones ultravioleta y visible (UV-Visible) se usan ampliamente con fines analticos y ambas pueden ser medidas con los espectrofotmetros comunes (Verde J. et al., 2013) La espectrometra ultravioleta-visible o espectrofotometra UV-Vis implica la espectroscopia de fotones en la regin de radiacin ultravioleta-visible. Utiliza la luz en los rangos visible y adyacentes (el ultravioleta (UV) cercano y el infrarrojo (IR) cercano. En esta regin del espectro electromagntico, las molculas se someten a transiciones electrnicas (Verde J. et al., 2013). La absorcin de radiacin por una especie M es el resultado de la interaccin de los fotones incidentes con los electrones de los orbitales moleculares (, y n) o atmicos (s,p,d,f). Este proceso puede interpretarse como un proceso de dos etapas: en la primera ocurre la excitacin electrnica y en la segunda, la relajacin, que generalmente se presenta como la conversin de energa de excitacin en calor segn La energa tambin puede liberarse a travs de procesos radiativos o de conversin interna de la molcula M. La energa tambin puede liberarse a travs de procesos radiativos o de conversin interna de la molcula M. Este proceso se lleva a cabo de forma continua durante la exposicin de M a la luz, y es lo que le otorga a sus soluciones el color que observamos (Arenas I. et al., 2004) Cuando un analito en disolucin capaz de absorber luz se coloca en la celda de un espectrofotmetro y se le hace incidir luz de cierta longitud de onda (monocromtica o de un solo color), parte de la luz incidente es absorbida por el analito y otra parte atraviesa y llega al fototubo del equipo que la detecta y mide (Verde J. et al., 2013). La ley de Lambert y Beer, indica cuantitativamente como la absorbancia depende de la concentracin de las molculas absorbentes y de la longitud del trayecto, paso ptico o recorrido de la luz en la celda. Cuanto mayor sea la concentracin de las molculas absorbentes mayor ser la absorbancia pues habr ms molculas por unidad de volumen absorbiendo, e igualmente entre mayor sea la longitud del paso ptico, mayor ser la absorbancia pues existirn ms molculas en el trayecto recorrido por la luz (Verde J. et al., 2013). La ley de Lambert y Beer slo se cumple con radiacin monocromtica y en disoluciones diludas (10-2-10-6 M) debido a que en disoluciones concentradas las molculas de soluto interaccionan entre s y cambian sus propiedades, entre ellas, la absortividad. Bajo estas condiciones, un gran nmero de compuestos siguen la ley de Beer, pero algunos no muestran una relacin lineal entre absorbancia y concentracin. Para saber el intervalo de concentraciones en el que un compuesto sigue una relacin lineal con la absorbancia (ley de Lambert y Beer), se elabora una curva de calibracin midiendo las absorbancias de disoluciones del analito de concentraciones conocidas (Verde J. et al., 2013).
Las mediciones espectrofotomtricas son ms confiables con valores de
absorbancia en el intervalo de 0.187 a 0.824, o bien, con valores de transmitancia entre 15 y 65%, debido a que si la absorbancia es muy grande y pasa muy poca luz a travs de la muestra es difcil medir esta energa radiante, y si por el contrario pasa demasiada luz (absorbancia muy pequea), es difcil apreciar la diferencia entre la muestra y el blanco o referencia (Verde J. et al., 2013). Cuando una onda encuentra a una molcula, puede cambiar la direccin de propagacin (dispersin) de esa onda, o puede ser absorbida. Muchas molculas absorben radiacin a longitudes de onda diferentes. Un espectro de absorcin mostrar un nmero de bandas de absorcin correspondientes a grupos estructurales que estn dentro de la molcula (Amzquita F. et al., 2008) La absorcin de radiacin UV o visible corresponde a la excitacin de los electrones externos. Hay tres tipos de transiciones electrnicas a considerar: 1. Transiciones que involucran electrones , y n. 2. Transiciones que involucran electrones de transferencia de carga. 3. Transiciones que involucran electrones d y f (Amzquita F. et al., 2008). Cuando un tomo o molcula absorbe energa, sus electrones son promovidos de su estado basal a un estado excitado. En una molcula los tomos pueden rotar o vibrar con respecto a ellos (Amzquita F. et al., 2008). La mayora de los iones de los metales de transicin, aquellos con una subcapa d incompleta, pueden absorber radiacin visible en casi todos sus estados de oxidacin. Tal es el caso de los iones de cromo, cobalto, cobre, nquel y hierro; con soluciones coloreadas que absorben radiacin visible; y cuya concentracin puede ser determinada a partir su absorbancia haciendo uso de la Ley de Beer (Arenas I. et al., 2004). Los compuestos y iones de los metales de transicin presentan dos tipos de espectros electrnicos. Adems de las bandas intensas de absorcin por transferencia de carga ( de 103 a 104 ) descritas anteriormente, presentan bandas dbiles de absorcin debidas al campo ligante (con valores de 10 -1 a 10-2). Mientras que las bandas de transferencia de carga ocurren completamente en la regin ultravioleta, las bandas de campo ligando, generalmente se encuentran en la zona visible, an cuando pueden extenderse, ocasionalmente, al cercano infrarrojo o al cercano ultravioleta. El color caracterstico de los iones y complejos de los metales de transicin puede ser atribuido siempre a la absorcin del campo ligante. El nombre de campo ligante es debido a que el tomo o ion del metal de transicin en el vaco tiene orbitales d los cuales estn degenerados, o iguales en energa, mientras que la presencia de los ligantes produce un campo electrosttico que fracciona los orbitales en niveles de energa diferentes (Amzquita F. et al., 2008). El rango de linealidad es confirmado por mediciones experimentales. La no linealidad se debe al equilibrio qumico o a otros efectos qumicos que pueden
ser distinguidos por mediciones de la misma solucin en celdas con capacidad
para dejar pasar diferentes longitudes. Los efectos instrumentales son generalmente peores para soluciones en celdas de alta longitud en donde la absorbancia es mayor, considerando que la no linealidad debido al efecto qumico es independiente de la longitud y dependiente de la concentracin. Si las mediciones son realizadas en las porciones no lineales de la curva de calibracin entonces el estndar puede ser medido para asegurar que la funcin de calibracin es conocida con precisin. En algunas aplicaciones, los factores de alta dilucin no pueden ser usados por que la pequea absorbancia del analito es medida sobrepuesta en la cima de un gran fondo de absorbancia. En este caso, caractersticas instrumentales tales como la perdida de radiacin pueden ser apropiadas para obtener una linealidad (Arenas I. et al., 2004). Dado que hay una serie de fenmenos que no permiten la aplicacin de la Ley de Beer, en la prctica se realiza siempre una calibracin de la tcnica de medida, con la cual obtenemos una relacin matemtica entre la concentracin y la absorbancia. El proceso de la calibracin se basa en medir la absorbancia de varias disoluciones patrn (de concentracin conocida), en las mismas condiciones que se mide la absorbancia de la disolucin problema, y se hace una interpolacin (Amzquita F. et al., 2008). El sulfato de cobre II, tambin llamado vitrolo azul, o caparrosa azul, es un compuesto derivado del azules. Una disolucin acuosa de Cu2+ a trasluz azulado. Esta coloracin se debe a la interaccin radiacin lumnica que atraviesa la disolucin.
sulfato cprico, piedra azul
cobre que forma cristales la percibimos de un color de los iones cobre con la
Al observar el color de dos disoluciones de Cu2+ con diferente concentracin,
observamos que a mayor concentracin corresponde una mayor intensidad de color azul de la disolucin. Por lo tanto, podemos saber la concentracin de la sustancia segn la intensidad del color. Esta propiedad de la interaccin de la luz con una gran cantidad de especies qumicas nos permitir identificar y cuantificar analitos, dando lugar a una rama de la qumica analtica denominada espectrofotometra. La espectrofotometra estudia los fenmenos de interaccin de la luz con la materia (Arenas I. et al., 2004). Los tomos emiten radiacin electromagntica cuando son sometidos a la radiacin; se llevan a cabo transiciones electrnicas de estados energticos de baja energa a estados energticos de alta energa y viceversa. La espectroscopia de absorcin, est relacionada con el hecho de que una sustancia absorbe la luz, provocando que los electrones salten de un nivel de energa a otro mayor; este fenmeno permite explicar por qu algunas sustancias son coloreadas (Arenas I. et al., 2004). El color de las soluciones de iones metlicos se ve muy afectado por la presencia de otras especies como algunos aniones o ligandos. Muchos cationes metlicos reaccionan con dadores (ligandos) de pares de electrones para formar compuestos de coordinacin o complejos. Los ligandos deben tener por lo menos un par de electrones sin compartir disponible para la formacin del
enlace. Son ejemplos de ligandos inorgnicos comunes, el agua, el amoniaco y
los iones haluro. En las reacciones de formacin de complejos, un ion metlico, Ma+, reacciona con un ligando, nL b, para formar el complejo MLn a nb (Arenas I. et al., 2004). El color azul de una solucin diluida de sulfato de cobre es muy azul pero al agregar amoniaco se intensifica el color y cambia la longitud de onda. La presencia de los ligandos de NH 3 alrededor del ion Cu 2+provoca que los orbitales 3d del n Cu 2+ se diferencien, posibilitando la absorcin de un fotn de energa adecuada que provoca la transicin electrnica (Prez G., 2016). Un espectrofotmetro es un instrumento utilizado para determinar a qu longitud de onda la muestra absorbe la luz y la intensidad de la absorcin. Aunque varan en el diseo, todos los espectrofotmetros consisten de una fuente de luz, un selector de longitud de onda, un contenedor transparente en el cual se deposita la muestra, un detector de luz y el medidor. Las longitudes de onda utilizadas en el laboratorio comprenden a la luz visible y ultravioleta (Arenas I. et al., 2004).. La luz se puede explicar como un conjunto de radiaciones que se mueven por todo el espacio. Aquellas detectables por nuestro ojo corresponden a la luz visible, pero la mayora son invisibles para nosotros. Estas radiaciones se pueden describir como partculas y como ondas. La descripcin como onda se basa en que la luz consta de campos elctricos y magnticos que oscilan sinusoidalmente y en forma perpendicular a la direccin de traslacin por el espacio. La radiacin slo se absorbe o emite en unidades definidas (Arenas I. et al., 2004). La espectrofotometra es una tcnica que mide la interaccin de molculas con la radiacin electromagntica. La luz que se encuentra en la luz visible y la luz ultravioleta de los espectros electromagnticos presenta una energa de 150400 kJmol-1. La energa de la luz es usada para promover electrones de un estado de excitacin a otro (Amzquita F. et al., 2008). Si deseamos determinar la concentracin de una solucin de cobre se debe medir las absorbancias y analizar la solucin. La absorbancia de un soluto depende linealmente de la concentracin y por consiguiente la espectrofotometra de absorcin es ideal para hacer mediciones cuantitativas. La longitud de absorcin y la fuerza de absorbancia de una molcula no slo depende de la naturaleza qumica, si no del ambiente molecular en donde se encuentre el cromforo. La espectrofotometra de absorcin es por lo tanto una excelente tcnica. Las mediciones espectroscpicas son muy sensibles y se requieren pequeas muestras de material para el anlisis (Arenas I. et al., 2004)..