UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

FACULTAD: Facultad de Ciencias Agropecuarias

ESCUELA PROFESIONAL: Ingeniera en Industrias Alimentarias
ASIGNATURA, SEMESTRE Y AO: Lab. Microbiologa de los Alimentos - III semestre 2016
NMERO DE LA PRCTICA: Prctica de laboratorio N 04
NOMBRE DE LA PRCTICA: Mtodos de siembra y cultivo
NOMBRE DEL DOCENTE: Ing. Amelia Castro
NOMBRES DEL ESTUDIANTE: Ian Nathaniel Zarate Romero 2015-11007
DA, HORA Y GRUPO: Lunes, 13 15 horas, Grupo 3

MTODOS DE SIEMBRA Y CULTIVO

Laboratorio N 04

Ian Nathaniel Zarate Romero

E.A.P. Ingeniera en Industrias Alimentarias
nathanzarate@hotmail.com

I.

OBJETIVOS
Aprender los principales mtodos de siembra de microorganismos.

II.

MATERIALES Y EQUIPOS
Materiales:

III.

Matraz
Tubos de ensayo
Pipeta
Cocina elctrica
Mascarilla protectora
Algodn estril
Placas Petri
Gradilla
Asa de Kolle
Aguja de kolle

Mechero bunsen
Medios de cultivo preparados:
Caldo MR-VP(caldo rojo de metilo)
Voger y Proskaver
Agar BPLS modificado (agar verde
brillante rojo de fenol lactosa sacarosa
modificado)
Agar nutritivo
Caldo cerebro corazn

FUNDAMENTO TEORICO
En biologa, y especficamente en microbiologa, un cultivo es
un mtodo para la multiplicacin de microorganismos, tales
como bacterias, hongos y parsitos, en el que se prepara un
medio ptimo para favorecer el proceso deseado. Un cultivo es
empleado como un mtodo fundamental para el estudio de las
bacterias y otros microorganismos que causan enfermedades
en medicina humana y veterinaria.
Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el desarrollo de ste en
medios de cultivo y condiciones de laboratorio controladas. La poblacin de
microorganismos desarrollada en un medio se denomina cultivo. Cuando ste contiene una
sola especie de microorganismo, se denomina cultivo puro o axnico, cuando contiene
ms de una especie de microorganismos se denomina cultivo mixto. Un cultivo tipo
contiene una especie conocida de microorganismos y es conservada en el laboratorio para
realizar diversos ensayos y estudios. Un cultivo axnico consiste en una sola especie
microbiana, proveniente de una sola clula. Los cultivos axnicos son muy raros en la
naturaleza. En los medios naturales por ejemplo, en el suelo, agua, o en el cuerpo humano

existen cultivos mixtos. En un cultivo mixto, viven muchas y

diferentes especies de forma conjunta. Un cultivo axnico se
obtiene artificialmente en el laboratorio. A la hora de obtener
un cultivo axnico se han de tomar precauciones especiales,
ya que los microorganismos estn por todas partes, en la
naturaleza, en el laboratorio y en los instrumentos y
recipientes
usados
en
los
experimentos.
Estos
microorganismos no deseados o contaminantes deben ser eliminados de un cultivo para
que ste pueda ser axnico. El segundo paso para obtener un cultivo axnico es inocular o
introducir, una sola clula de un microorganismo en un medio slido o lquido, esterilizado
previamente. De esta manera, aislamos un solo microorganismo del resto y se podr
multiplicar en condiciones favorables.
Para impedir la contaminacin de los cultivos, es necesario tener plena conciencia de la
ubicuidad de los microorganismos, lo que determina
que el are y todas las superficies estn densamente
pobladas por microorganismos, de este modo en la
transferencia de una muestra microbiolgica a otro
recipiente, se deben tener una serie de cuidados que
eliminen los riesgos de contaminacin. Estos incluyen
el
rea de trabajo, el lavado de las manos, la
esterilizacin de todos los utensilios y medios de cultivo
a
emplear y realizar la transferencia del microorganismo en una zona estril, la que se
obtiene trabajando cerca de la flama del mechero. Al conjunto de procedimientos
realizados para prevenir o evitar la contaminacin se le llama tcnica asptica; el
seguimiento cuidadoso y detallado de la misma evita accidentes tales como:
La contaminacin y prdida del cultivo en estudio
La salida y dispersin de microorganismos del cultivo, lo que ocasionara la
contaminacin de utensilios, productos y del personal. Este ltimo aspecto es
particularmente importante cuando se trabaja con cultivos de microorganismos
patgenos.
Con relacin a la concentracin del inculo, un error frecuente del principiante consiste en
tomar muestras grandes, lo que es innecesario. Una colonia de bacterias del tamao de la
cabeza de un alfiler contiene varios millones de microorganismos, es obvio que con una
cantidad pequesima (casi invisible) que se adhiera al asa, ser ms que suficiente para
efectuar una transferencia exitosa.
En la transferencia de microorganismos se emplean agujas,
asas de inoculacin, hisopos, pipetas o pipetas Pasteur que
debern esterilizarse previamente. La utilizacin de estos
dispositivos, as como de los diferentes medios de cultivo tiene
aplicaciones especficas. Por ejemplo: los medios lquidos se
preparan en tubos o matraces que se cubren con tapones de
algodn o tapones especiales. Un cultivo lquido puede ser transferido mediante un asa
microbiolgica, un hisopo, pipeta o pipeta Pasteur; el inculo se deposita dentro del caldo o
medio lquido. En este tipo de cultivos los microorganismos presentan un desarrollo
particular que se manifiesta en la superficie o a travs de todo el lquido. Una de las
ventajas que presenta este tipo de cultivo se refiere a la posibilidad de agitarlos acelerando

la velocidad de microorganismos anaerobios, por otra parte, en este tipo de cultivos, las
poblaciones se encuentran suspendidas y es fcil homogenizarlas, lo que permite
estandarizar la concentracin del inculo. La desventaja que presentan, e que en ellos e
difcil detectar contaminacin a simple vista. Los medios semislidos e preparan en tubos,
se inoculan con aguja de siembra (asa recta) o pipeta Pasteur; en este ltimo caso es
necesario calentar el medio y cuando se encuentra en estado lquido y a una temperatura
de aproximadamente 42C se agrega el inculo, se homogeniza y se deja solidificar. Estos
medios se emplean para estudiar la movilidad de los microorganismos y para favorecer la
separacin de microorganismos con diferentes requerimientos de oxgeno. Los medios
slidos e preparan en tubos o matraces dependiendo de la cantidad o de las necesidades,
despus de esterilizarlos, estos se inclinan o vierten en cajas de Petri. La siembra se
realiza con el asa, inoculando la superficie del agar con mucha suavidad; en estos medios,
los microorganismos al multiplicarse forman agregados que se hacen visibles a simple
vista; a estos agregados se les denominan colonias, las que presentan caractersticas que
varan con el tipo de microorganismo cultivado y el medio de cultivo empleado. En
cualquier medio de cultivo es de primordial importancia ajustar el pH, ya que aun cuando la
mayora de los microorganismos crecen mejor en pH neutro, algunos requieren de pH
alcalino o cido, por lo que al proporcionar un pH adecuado se favorecer el crecimiento
del microorganismo de inters y la obtencin del
cultivo. Con este mismo propsito durante la
incubacin se deben proporcionar las condiciones
adecuadas para el microorganismo en estudio. El
crecimiento ptimo de los microorganismos se
presenta a temperaturas que la mayora de las veces
estn relacionadas con la de su hbitat natural.
En el estudio de cultivos bacterianos algunos de los criterios que se emplean para
caracterizarlas incluyen: tamao, morfologa celular, forma de agrupacin, reaccin a la
tincin de Gram, formacin de esporas, movilidad, presencia de inclusiones de reserva y
caractersticas culturales en medios lquidos y slidos en los que presentan patrones de
desarrollo en cuanto a la forma, tamao, elevacin y color de las colonias.

IV.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
A. Siembra en tubos
1. Siembra de un tubo de ensayo a otro
El tubo con el material para la siembra y el tubo con el medio de cultivo se toman
ambos con la mano izquierda en forma inclinada, de tal manera que os extremos de
ambos tubos estn a un mismo nivel.
Con la mano derecha se toma el asa y se esteriliza en posicin vertical en el
mechero, con la misma mano se extrae los dos tapones con el dedo meique y el
siguiente apoyndolos a la palma al mismo tiempo, se flamea el extremo de los dos
tubos; con el asa se toma un poco de material de siembra, luego de enfriarla y con
cuidado se le traslada al tubo con el medio de cultivo.

a) Cuando la siembra es en un
caldo de cultivo, el asa con el
material se introduce en un
lquido por la pared inferior del
tubo y se extrae por la pared
superior. Atencin el caldo de
cultivo no debe mojar el tapn de
algodn!

b) Para sembrar en un agar inclinado, el asa con el

material se le da movimientos de zig-zag en la
superficie del agar de abajo hacia arriba.

c) Para sembrar en una columna de agar vertical

(por picadura), se utiliza una aguja la cual se
esteriliza bajo mechero, y con el material de
siembra se introduce hasta el fondo de la
columna.
d) Tambin hay un procedimiento que es una
combinacin de estriado y picadura para un agar
estra en la superficie y se inocula con la aguja
en el fondo del agar.

inclinado,

se

e) La siembra en un caldo de cultivo se puede

realizar con una pipeta de Pasteur o una pipeta
graduada (aproximadamente se mide 1ml de
material de cultivo). Luego de la siembra las
pipetas se colocan en un lquido desinfectante si se
trabaja con microorganismos patgenos.
2. Siembra a un matraz con medio de cultivo desde una placa Petri
La placa Petri con el material de siembra se coloca frente a uno con la tapa arriba.
Se esteriliza el asa, se abre la placa
bajo mechero, se toma con el asa un
poco de material, se retira el asa, se
cierra la placa y con la mano izquierda
se toma el matraz con el medio de
cultivo (agar licuado), se coloca el asa
con el material dentro del matraz luego
se retira el asa y se calienta la boquilla para luego taparlo.
B. Siembra en placa Petri

1. Tcnica de la placa estriada en sectores (en superficie)

La placa Petri con agar se divide en
sectores. La siembra se realiza con un
asa (con material de siembra), sobre el
agar realizando movimientos en zigzag desde un extremo de la placa
hacia el centro e esta. Es necesario
que las estras no
toquen los sectores vecinos. Esterilizar el asa al terminar la siembra luego de cerrar
la placa y colocar la placa con la tapa hacia abajo.
2. Tcnica de siembra con un extensor (en superficie)
Con la mano izquierda levantar la tapa de la placa Petri bajo mechero sostenindolo
con el dedo ndice y el pulgar. Con un asa o
pipeta se vierte 1ml del material de siembra a
la superficie del agar, y con el extensor se
cubre toda la superficie con el material
haciendo movimientos giratorios, se cierra la
placa y se coloca el extensor en una solucin
desinfectante. Colocar la placa con la tapa
hacia abajo.
3. Tcnica de vaciado en placa por incorporacin
Rotular las placas. Colocar el material de siembra con una pipeta en cada placa
(1ml). Agregar el agar (10-15ml). Realizar
movimientos de vaivn para distribuir bien el
material.
Colocar las placas con la tapa hacia arriba
hasta que enfri el agar. Invertirlos en el
momento de llevarlos a incubar.

V.

RESULTADOS

VI.

Se coloc una muestra microbiana en cada medio de cultivo de una manera distinta
para aprender las distintas formas en que se pueden cultivar y diferenciarlas unas de
otras.
Es necesario que la siembra se haga en medios de cultivo, sean agares o caldos, para
que se d el crecimiento y desarrollo de los microorganismos.
Luego de incubar los cultivos estos deben formar pequeas colonias ya sean puras o
mixtas, si se ha utilizado una sepa de microorganismo, un buen resultado sera que solo
se formen colonias de la misma especie de lo contrario significa que la siembra no se
hizo con el respectivo cuidado.

DISCUSIN DE RESULTADOS
El mtodo de siembra por estras es usado para obtener cultivos axnicos. Se
siembra una muestra de la poblacin mixta y a continuacin se hacen estras sobre
la superficie de un medio slido preparado en una placa Petri. Conforme se van

haciendo estras en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la superficie
del medio menos microorganismos. Y al incubar se obtendrn colonias visibles y
aisladas a las cuales se les puede volver a sembrar para asegurar que sean
axenicas.
En el mtodo de vertido en placa, las muestras diluidas se mezclan con agar
fundido y se vierten en placa. Algunas colonias quedarn embebidas en el agar y
otras crecern en la superficie. Las colonias superficiales se extendern y sern
ms grandes.
En el mtodo de extensin en placa, las muestras diluidas se siembran
directamente en la superficie de la placa de agar, extendindolas con ayuda de un
asa de Diralsky de cristal estril. La suspensin se absorbe en el agar, dejando las
clulas microbianas sobre la superficie. Las placas se incuban hasta la aparicin de
las colonias.
Los mtodos de vaciado y extensin permiten obtener un mayor nmero de
colonias aisladas que el mtodo de siembra por estra.

VII.

CONCLUSIONES
Se pudo conocer los mtodos de siembra y cultivo ms utilizados en el laboratorio
de microbiologa y dndonos a conocer correctamente el mtodo que hemos
utilizado en la prctica.
Es necesario realizar los mtodos de siembra y cultivo en condiciones aspticas
para no obtener microorganismos indeseados en nuestro cultivo.
Si se trabaja con microorganismos patgenos siempre realizarlo de forma segura y
correcta, usar guantes y mascarillas para evitar contaminacin.
Los medios de cultivo proporcionan todas las condiciones ideales para que crezcan
los microorganismos.
Los microorganismos se cultivan para obtener de ellos solo una sola especie
(cultivos puros) y realizar pruebas bioqumicas, de tincin, y especficas de la
bacteria de estudio.

VIII.

BIBLIOGRAFIA
http://es.scribd.com/doc/14173131/5-Tecnicas-Basicas-Para-El-Cultivo-deMicroorganismos
http://es.wikipedia.org/wiki/Cultivo_%28microbiolog%C3%ADa%29

 http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/images/file/ClaseProc
ariontes/Alejandra/Pr%C3%A1ctica%201%20T%C3%A9cnica%20as
%C3%A9ptica.pdf