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UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

FACULTAD: Facultad de Ciencias Agropecuarias


ESCUELA PROFESIONAL: Ingeniera en Industrias Alimentarias
ASIGNATURA, SEMESTRE Y AO: Lab. Microbiologa de los Alimentos - III semestre 2016
NMERO DE LA PRCTICA: Prctica de laboratorio N 03
NOMBRE DE LA PRCTICA: Medios de Cultivo
NOMBRE DEL DOCENTE: Ing. Amelia Castro
NOMBRES DEL ESTUDIANTE: Ian Nathaniel Zarate Romero 2015-11007
DA, HORA Y GRUPO: Lunes, 13 15 horas, Grupo 3

MEDIOS DE CULTIVO
Laboratorio N 03
Ian Nathaniel Zarate Romero
E.A.P. Ingeniera en Industrias Alimentarias
nathanzarate@hotmail.com

I.

OBJETIVOS
Conocer los principales principios para la preparacin de medios de cultivo.

II.

MATERIALES Y EQUIPOS
Materiales:

III.

Matraz
Tubos de ensayo
Pipeta
Cocina elctrica
Vaso precipitado
Probeta
Balanza analtica
Agua destilada
Piseta
Mascarilla protectora

Algodn estril
Medios:
Caldo MR-VP(caldo rojo de metilo) Voger
y Proskaver
Agar BPLS modificado (agar verde
brillante rojo de fenol lactosa sacarosa
modificado)
Agar nutritivo
Caldo cerebro corazn

FUNDAMENTO TEORICO
Para obtener colonias de microorganismos es
necesario utilizar determinados sustratos nutritivos
(medios de cultivo), en los cuales los
microorganismos pueden desarrollar todos sus
procesos vitales.
Un medio de cultivo consta de un gel o una solucin
cuenta con los nutrientes necesarios para permitir,
condiciones favorables de pH y temperatura, el

que
en

crecimiento de virus, microorganismos, clulas, tejidos vegetales o incluso pequeas plantas.


Segn lo que se quiera hacer crecer, el medio requerir unas u otras condiciones.
Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser
preparados; ya preparados pueden encontrarse en estado slido, semislido o lquido.

Condiciones generales para el cultivo de microorganismos


El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una
serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo al
propio medio.
1. Disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como
mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern
necesarias ciertas vitaminas y hormonas.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de extractos de carne o
extractos de levadura.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a muchos
medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc.
Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores de
ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores.
2. Consistencia adecuada del medio
Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos
como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido o
slido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de
fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.
3. Presencia de oxgeno y otros gases
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno
normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero los
microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en una
atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias (tensin
de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo
capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.
4. Condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es imprescindible
para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que
prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las estufas de cultivo a 35-37C

proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el
crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el medio.
5. Luz ambiental
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia
de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los microorganismos
fotosintticos.
6. pH
La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que
requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar que la presencia de cidos o
bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo
o incluso alterar sus procesos metablicos normales.
7. Temperatura
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y 43C.
Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los termfilos a 80C o incluso a temperaturas
superiores (hipertermfilos). En lneas generales, los patgenos humanos crecen en rangos
de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los saproftos tienen rangos ms
amplios.
8. Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin de
formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano
normal del o de los especmenes inoculados en dichos medios. El sistema clsico para
esterilizar los medios de cultivo es la autoclave.
Clasificacin
Segn sus cualidades fsicas, se distinguen:

lquidos

semislidos

slidos
Segn su uso:
medio general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los que
necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar CLED).
medio selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo determinado
(hongos, bacterias entricas, protozoos...).
medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo medio.
Puede ser por su crecimiento, su metabolismo, su respiracin, etc. (por ejemplo, medio de
McConkey).
medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento
de una amplia variedad de microorganismos, se utiliza para la cosecha de diferentes tipos
de microorganismos en un mismo medio.
medio mnimo: contiene la mnima cantidad de nutrientes posible que permite el
crecimiento de una especie;
medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento temporal a
especmenes transportados; mantienen su viabilidad y su concentracin;

IV.

simple

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
a) Para la preparacin de medios de cultivo se utiliza agua
limpia, destilada neutra. Los recipientes que se utilizaran
lavaran esmeradamente y se esterilizaran en la autoclave
el fin de eliminar cualquier sustancia extraa.

se
con

b) Segn la etiqueta de preparacin se usa cierta cantidad de


cultivo por 1L de agua, entonces calculamos la cantidad de
cultivo si utilizamos solo 50ml de agua en caso de un caldo y
100ml de agua en caso de un agar.
c) Luego de calcular el peso de cultivo se pesa este en la balanza analtica, siempre
teniendo cuidado al manejar el envase (usar mascarilla
protectora, tambin algodn) y procurando realizar el
proceso lo ms rpido posible y tapando el envase del
medio y el recipiente donde pesemos el medio para evitar
contaminacin.

d) Una vez pesado el medio se incorpora el agua destilada la cantidad


correspondiente si es un caldo o un agar usando la probeta.
e) Luego si se trabaja con un caldo este se debe disolver bien en el
entonces se debe mover constantemente hasta que
disuelva el medio. Para un agar por ser un medio solido su
disolucin en el agua debe ser por medio de calor, para ello
usa la cocina y debe permanecer hasta que disuelva todo el
medio.
f) Ya disuelto ambos medios se procede a depositarlo en
recipientes (previamente esterilizados) para ser llevados al
autoclave, el caldo se divide en tubos de ensayo con ayuda de
pipeta mientras que el agar se deposita en un matraz o bien
tambin pueden ir en tubos de ensayo.

agua

se

la

g) Se tapan correctamente con algodn, papel y una cuerda y se


llevan
a la autoclave para ser esterilizados comnmente a 120C por 15 minutos y luego se
guardan en refrigeracin para su posterior uso.

V.

RESULTADOS
Tabla de datos de cada medio de cultivo necesarios para su preparacin
Agar BPLS a preparar

Agar BPLS preparado

Medios de
cultivo
Datos

Agar BPLS
modificado

Caldo MR-VP

Agar nutritivo

Caldo
cerebrocorazn

Cantidad de
medio por litro
de agua
Cantidad de
medio por 50ml
de agua
Cantidad de
medio por 100ml
de agua

52,0g

17,0g

23,0g

37,0g

--------------

O,85g

-------------------

1,85g

5,2g

------------------

2,3g

-------------------

Agar nutritivo a preparar

Agar nutritivo preparado

Caldo MR-VP y caldo cerebro-corazn a


preparar

VI.

VII.

Caldo MR-VP y Caldo cerebro-corazn


preparado

DISCUSIN DE RESULTADOS

La preparacin de los medios de cultivo segn la etiqueta es cierta cantidad


para un litro de agua destilada pero en laboratorio se tuvo que modificar la
cantidad para una menor porcin de agua por medio de regla de tres simple.

La disolucin del agar es necesaria con calor por ser un medio de cultivo slido.
El caldo de cultivo no necesita calor para ser disuelto aunque tambin se puede
asegurar que disuelva bien con un poco de calor.

Muchos de los cultivos presentan un color definido que puede ser para
identificar los microorganismos que crecen a travs de ellos.

Es necesario usar instrumentos esterilizados y esterilizar los medios de cultivo,


como tambin que al preparar los medios no puede hacerlo alguien enfermo o
alrgico, todo esto para que no se contaminen los medios de cultivo.

CONCLUSIONES
Los medios de cultivo nos permiten desarrollar microorganismos, proporcionndoles las
mejores condiciones y nutrientes para que crezcan y puedan ser estudiados.
Con ayuda de los medios de cultivo podemos desarrollar cultivos puros y mixtos.
Los medios de cultivo pueden ser del tipo generales que permite el crecimiento de todo
microorganismo como tambin pueden ser selectivos que significa que permiten el
crecimiento de ciertos microorganismos as como la coloracin del medio permite tambin
identificar caractersticas de estos microorganismos.

Siempre para preparar medios de cultivo se debe proteger bien las vas respiratorias con
mascarillas para no inhalar el medio que se mezcla con el aire o podramos tener graves
complicaciones.
La creacin de medios de cultivo ha ido evolucionando desde que se preparaban caldos
de carne hervidos hasta los que se preparan a partir de medios deshidratados que se
mantienen en envases sellados que duran varios aos.

VIII.

BIBLIOGRAFIA
http://es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivo
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm
http://ecommerce-prod.merck.de/pharmaceutical-ingredients/agar-bplsmodificado/MDA_CHEM-110747/spanish/p_YLGb.s1LrSoAAAEW9ywfVhTn
http://www.mcd.com.mx/pdfs/caldo_infusion_cerebro_corazon.pdf
http://www.mcd.com.mx/pdfs/AGAR%20NUTRITIVO.pdf
http://www.mcd.com.mx/pdfs/caldo_mrvp.pdf