TERAPIA GNICA:

*introduccin de genes normales a las clulas que tengan genes o alelos

afectados, esto para reconstruir la prdida de un producto proteico
*es causada para corregir un fenotipo, sintetizando cantidades suficientes de
un gen normal para corregir una enfermedad.

ETAPAS DE LA TERAPIA GNICA

*identificacin del gen defectuoso
*clonacin del gen normal
*identificacin de las clulas, tejido u rgano blanco
*insercin de l gen noral y funcional en el ADN de la clula blanco

MTODO
suponen contar con un adecuado sistema de vehiculizacin o transferencia y,
al mismo tiempo, disponer de promotores adecuados para conseguir la mxima
expresin del gen insertado en la clula. La introduccin en una clula de
material genmico forneo se denomina transferencia gnica, transduccin o
transfeccin.
*introduccin del gen funcional ala s clulas
*el gen transferido (transgen) coodifica ygenera protenas
*la perotena codificada por el transgncorrige el desorden

ASPECTOS A CONSIDERAR EN LA TERAPIA GNICA

*cmo dirigir os genes a clulas especficas, ciertos tejidos y animales
completos?
POR MEDIO DE RECERTORES ESPECFICOS DE CADA CLULA
*cunto y en qu tiempo el gen introducido deber ser expresado?
PARA QUE SE EXPRESE COMO UNO QUIERA QUE SE EXPRESE NECECITA TENER
UN PROMOTOR ADECUADO
*el sitio y la dosis del gen dirigido
*algn efecto txico (qu tanto se est expresando?)
>en ocasiones puede provocar mutaciones

*hay alguna adversidad biolgica a consecuencia del vehculo y el gen dirigido

*gen episomal: no est insertado, est en el citoplasma

TIPOS DE TERAPIA
*en clulas germinales: Se hace en el ovocito fecundado o en un blastocito.
Aquella dirigida a modificar la dotacin gentica de las clulas implicadas en la
formacin de vulos y espermatozoides y, por tanto, transmisible a la
descendencia. Este tipo de terapia gnica sera la indicada para corregir de
forma definitiva las enfermedades cong- nitas, una vez que la tcnica sea
eficaz y segura, situacin que no parece darse en el momento actual. aquella
dirigida a modificar la dotacin gentica de las clulas implicadas en la
formacin de vulos y espermatozoides y, por tanto, transmisible a la
descendencia. Este tipo de terapia gnica sera la indicada para corregir de
forma definitiva las enfermedades cong- nitas, una vez que la tcnica sea
eficaz y segura, situacin que no parece darse en el momento actual.
*en clulas somticas: la modificacin gentica no puede transmitirse a la
descendencia. Solamente se llevan a cabo protocolos clnicos en este tipo de
terapia gnica
>entrada
vector viral (se le pone un ligando que se una a un receptor especfico de una
clula en especfico), a estos virus se les quita la regin de DNA que causa el
dao a la clula
liposoma: tambin se pueden dirigir hacia un tipo de clula especfica
agregndole sustancias que se unan a los receptores celulares de la clula
diana

TERAPIA IN VIVO
agrupa la tcnicas en las que el material gentico se introduce directamente
en las clulas del organismo, sin que se produzca su extraccin ni manipulacin

in vitro. La gran ventaja de las tcnicas in vivo sobre la terapia gnica in vitro
es su mayor sencillez. Sin embargo, tienen el inconveniente de que el grado de
control sobre todo el proceso de transferencia es menor, la eficiencia global es
tambin menor (dado que no pueden amplificarse las clulas transducidas) y,
finalmente, es difcil conseguir un alto grado de especificidad tisular.
*virus de ADN
>el material gentico es transferido directamente dentro del cuerpo del
paciente
>puede ser un proceso al azar, poca habilidad de control y menos
manipulacin
>opcin viable por tejidos que no pueden ser crecidos in vitro, o si las clulas
crecidas no pueden ser transferidas
*para ponerlo en el lugar deseado: se puede introducir por endoscopa y en
este caso s se introduce en las clulas deseadas, cuando se introduce por va
intravenosa en ocasiones se introduce en otras clulas (proceso al azar)

TERAPIA EX VIVO (IN VITRO)

comprende todos aquellos protocolos en los que las clulas a tratar son
extradas del paciente, aisladas, crecidas en cultivo y sometidas al proceso de
transferencia in vitro. Una vez que se han seleccionado las clulas que han sido
efectivamente transducidas, se expanden en cultivo y se introducen de nuevo
en el paciente
*virus de ADN
>el material gentico es primero transferido dentro de las clulas crecidas in
vitro
>el proceso es controlado, las clulas alteradas genticamente son
seleccionadas y expandidas, hay ms manipulacin
>las clulas son regresadas al paciente
*hay que tener mucho cuidado al manipular los cultivos para evitar una posible
contaminacin, ya que si no se trabaja con las medidas de higiene necesarias
los cultivos contaminarse principalmente de hongos donde el ms comn es el
micoplasma

TRANSFERENCIA GNICA

Tras la transferencia gnica, los genes insertados se pueden llegar a integrar

en los cromosomas de la clula, o bien quedar como elementos genticos
extracromosmicos (episomas).
Genes integrados en cromosomas
La ventaja de que el gen se integre en el cromosoma es que puede
perpetuarse por replicacin cromosmica tras la divisin celular. la integracin
puede perturbar los patrones normales de expresin de genes que controlan la
divisin o la proliferacin celular, por ejemplo a travs de la activacin de un
oncogn o de la inactivacin de un gen supresor de tumores o de un gen
implicado en la apoptosis (= muerte celular programada). Algunos sistemas de
transferencia gnica estn diseados para insertar genes en clulas donde
pueden quedar como elementos extracromosmicos (episomas) y tener una
expresin elevada. Si las clulas estn dividindose activamente, el gen
introducido puede no segregar igualmente a las clulas hijas, por lo que la
expresin a largo plazo puede ser un problema.

TIPOS DE VECTORES
*virales
constituyen la forma ms eficaz de transferir genes teraputicos al interior de
las clulas diana. mantiene la capacidad de infectar las clulas pero es incapaz
de multiplicarse en ellas. En la transferencia mediada por virus se sustituyen
ciertos genes prescindibles del vector por aquellos genes que se desea
introducir en las clulas diana. La regin que ocupan estos genes se denomina
regin para insercin o cassette; Los vectores virales constituyen los
sistemas ms eficaces para transferir genes, ya que son capaces de infectar
una elevada proporcin de las clulas diana, es decir, poseen una elevada
eficacia de transfeccin, que en algunos casos llega a ser incluso del 100 %.
Otro punto clave a considerar en la terapia gnica in vivo es la reaccin
inmunitaria que el organismo receptor pone en marcha, pudiendo eliminar el
material gentico a travs de la muerte de las clulas genticamente
modificadas
>adenovirus
>virus adeno asociados
>virus de Herpes simple
>virus vaccinia
*virus de RNA
>retrovirus
*Vectores no virales

En estos mtodos el ADN forneo o ex- geno est integrado en un plsmido,

son poco txicos; y no son inmunognicos. Los inconvenientes de estos
mtodos son su baja eficacia de transduccin de las clulas diana y que
algunos de ellos slo pueden utilizarse in vitro
>mtodos in vitro
trnasfeccin con fosfato de calcio
micro inyeccin
electroporacin
>mtodos in vitro e in vivo
liposomas
inyeccin de ADN desnudo (va al azar)
biobalstica

Marcaje celular
Consiste en introducir, junto con el gen teraputico, uno o ms genes que
permitirn identificar y seleccionar aquellas clulas diana que hayan
incorporado el transgn.

TERAPIA ANTISENTIDO
El trmino antisentido se aplica a secuencias cortas de ADN o ARN
(oligonucletidos) diseadas para ser complementarias de secuencias gnicas
especficas, con el fin de interferir el flujo de informacin gentica. Los agentes
teraputicos antisentido inhiben la sntesis proteica al interferir los procesos de
transcripcin y/o traduccin.
Secuencias antisentido: derivan de cidos nucleicos que se unen (hibridan)
con hebras de ARNm citos- licas (hebras con sentido: portadoras de la
informacin necesaria para la sntesis de protenas en los ribosomas) o de
ARNhn (precursor nuclear del ARNm), a travs de puentes de hidrgeno, por
complementariedad de las bases correspondientes del cido nucleico.
Normalmente, las secuencias antisentido son secuencias cortas de cido
nucleico, por lo que habitualmente se les denomina oligonucletidos
antisentido. Secuencias antign: de forma similar a las secuencias
antisentido, las secuencias antign se hibridan al ADN de doble hebra
localizado en el ncleo, creando secuencias en triple hlice que bloquean la
transcripcin del gen correspondiente, bien directamente o bien interfiriendo

en la unin de protenas a secuencias especficas del ADN. Ribozimas: los

ARN antisentido pueden catalizar enzimticamente la hidrlisis de secuencias
especficas de ARNm. Estos ARN catalticos se denominan ribozimas, y actan
sobre sustratos naturales concretos, pero en el caso de la terapia antisentido
se dise- an de forman que combinen dicha actividad cataltica con la
posibilidad, aportada por el apareamiento de bases, de reconocer
especficamente diversas secuencias de ARN diana

CARACTERSTICAS IDEALES DE UN VECTOR

*altas concwnteaxiones del virus pwemirw infectar a muchas clulas
*reproducibilidad de la prisuccin
*habilidad para transducir clulas en divisin y en no divisin
*habilidad para integrarse en un sirio especfico en el cromosoma, i para ser
antenido estable como episoma
*una unidad tramscripcional que puede responder a la manipulacin de sus
ele,entos refulatorios
*habilidad para seleccionar un tipo de clula blanco
*que los componentes no induzcan a ua tespuesta inmune

------------------------------------------------------------Las unidades de cuantificacin viral son los mois

------------------------------------------------------------------..-------------

LIPOSOMAS
Liposomas catinicos
*partculas cargadas positivamente las cuales interactan con el ADN formando
complejos estables
*conmtienen lpidos y co-lpidos
*los co-lpidos son requeridos para estabilizar los complejos
*DOPE y DOPC son comnmente usados como co-lpidos
*lipofectamina es el lpido ms comnmente usado
Liposomas cargados negativamente
*atrapa el ADN mayor que la formacin de complejos
*forman como una miscela
*el ADN es atrapado en el interior en una fase acuosa
*es desestabilizado por un PH bajo
*alta eficiencia para introducir in vivo

RIESGOS DE LA TERAPIA GNICA

*cambios a la entrada en clulas germinales
*sobre expresin del gen ( toxicidad)
*puede afectar otras clulas fiferrentes a las del b,lanco
*dversas reacciones a los vectores virales o a los muchos genes
*usando vextores, existe el temos de que uma cez que ja emtradp al cuerpo
pueda recuperar su habiliudad para causar su endermedad original
*uede generar mutaciones
*activacin de un proto-oncogen a un oncoges

APLICAIONES

*hemofilia------------------------hpigado,, msculo
*fibrosis qustica----------------clulas de pulmn
*cncer
*prkinsos----------------clulas neuronales

PARA DETERMINAR SI ES O NO ES ES EL TEJIDO EN EL QUE SUPONEMOS QUE

EST LA ALTERACIN
*primero se hacen anlisis no invasivos, empezando con anlisis de sangre y
todo lo que no sea invasivo
*si el resultado es positivo; ahora s (en caso de que se necesite) podemos
realizar una biopsia y analizarla con todos los mtodos moleculares que sean
necesarios