PROTOCOLO DE TRABAJO PARA EL

DIAGNOSTICO Y CONTROL DE LA
LEISHMANIA

HOSPITAL DE APOYO DE HUANTA

LABORATORIO CLINICO

HUANTA PERU
2012

HOSPITAL DE APOYO DE HUANTA

Seor Doctor
EDGARDO ARTURO GARCIA RAMOS
DIRECTOR DEL HOSPITAL DE APOYO HUANTA
Seora Biloga
ROSA MARIA BAUTISTA MARTINEZ
JEFA DEL SERVICIO DE LABORATORIO
Seor Bilogo
WALTER RAL RAMOS VALDIVIA
RESPONSABLE DE LEISHMANIASIS

Laboratorio Clnico

Leishmania

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TABLA DE CONTENIDOS
GENERALIDADES
DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
LEISHMANIA CUTANEA
o FROTIS DE LA LESION
o CULTIVO DE LEISHMANIA
o PRUEBA DIFERENCIAL
LEISHMANIA MUCOCUTANEA
o PRUEBA DE INTRADERMOREACCION DE MONTENEGRO
o PROCEDIMIENTO
o LECTURA E INTERPRETACION DE RESULTADOS
o ENVIO DE MUESTRAS

ANEXO
DIAGRAMA

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GENERALIDADES
Las Leishmaniasis constituyen una endemia que afecta ancestralmente a la
poblacin andina y selvtica de nuestro pas. Testimonio de esto lo constituye la
impresionante iconografa prehispnica que expresa las secuelas destructivas y
deformantes que ocasiona la variedad cutneo-mucosa de esta enfermedad. Las
Leishmaniasis son zoonosis silvestres ocasionadas transmitidos al hombre por
vectores del gnero Lutzomyia.
En el Per, se reportan las formas cutneo-andina o uta y cutneo-mucosa o
espundia tropical. Se estima que 75,0 80,0 % de casos reportados
corresponden a la forma cutneo-andina y el 10,0 25,0 % restante pertenece a
formas cutneo-mucosas. Existen, predominantemente, dos especies del parsito
de transmisin: L. braziliensis peruviana, responsable de la variedad cutneoandina, y L. braziliensis-braziliensis, que produce la variedad cutneo-mucosa. Se
han descrito en forma aislada algunos casos producidos por L. amazonensis.
La Leishmaniasis, son un conjunto de enfermedades

muy diferentes entre s

producidas por distintas especies de un Protozoario perteneciente

al gnero

Leishmania. Esta enfermedad de evolucin crnica se caracteriza por comprometer

piel, mucosa y vsceras dependiendo de la especie de Leishmania causante y de la
respuesta inmune del husped.

1.

La forma cutnea de la Leishmania se caracteriza por presentar

lesiones muy particulares, siendo la ms frecuente las lesiones de
tipo ulceroso.
- Las primeras manifestaciones son pequeas lesiones caracterizado por
mculas rosadas o rojas, pruriginosas del tamao de la cabeza de un
alfiler hasta de una lenteja, que tiene semejanza a las picaduras de los
insectos, a los pocos das esta se elevan y adquieren un carcter
papuloso, presentando una base firme, indurada e hipermica.
-

Despus de varios das la lesin inicial se ulcera espontneamente y se

recubre de un lquido amarillento y adherente, que posteriormente da
lugar a la costra. La ulcera caracterstica es generalmente redondeada,

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indolora, con bordes bien definidos y cortados en forma de

sacabocado; este borde es hipermico, levantando e indurado, que
recuerda a la imagen de un crter. Cuando se desprende la costra se
observa un fondo granuloso y limpio, con un exudado lquido no
purulento sin tendencia al sangrado espontneo.

2.

Leishmaniasis mucocutnea,
Las mucosas secundarias pueden aparecer existiendo todava las
manifestaciones cutneas o cuando estas ya han cicatrizado que es lo mas
frecuente. las lesiones mucosas se instalan de preferencia en las vas
areas superiores, comprometiendo las estructuras anatmicas mas
ventiladas por el pasaje del aire inspirado. Las lesiones mucosas
comienzan a nivel del tabique nasal cartilaginoso, pero puede tambin
comenzar en otras partes de las vas areas superiores. En los primeros
aos de su evolucin compromete muy poco el esta general, se pueden
encontrar enfermos con lcera extensa en el rostro que realizan
normalmente su trabajo; sin embargo cuando las lesiones mucosas estn
muy avanzadas y comprometen la mucosa de la boca y la laringe, la
alimentacin y la respiracin se encuentran alteradas, con el consiguiente
compromiso del estado general. Algunos enfermos pierden casi por
completo la voz y se vuelven sordos. En estas condiciones donde tambin
se encuentra dificultad para la alimentacin, los enfermos presentan
desnutricin, con la consiguiente aparicin de otras infecciones sobre
agregadas como el caso de la tuberculosis.

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DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
El diagnstico se establece mediante procedimientos parasicolgicos e
inmunolgicos. Es importante conocer el lugar de procedencia del
paciente, residencias anteriores considerando la permanencia o la visita
a reas endmicas de leishmaniasis,

antecedentes ocupacionales

relacionados, como trabajo en lavaderos de oro, recoleccin de caf,

cacao en las zonas de selva de nuestro pas.

LEISHMANIASIS CUTANEA

1. FROTIS DE LA LESION (RASPADO, IMPRONTA)

En las lesiones iniciales sin contaminacin bacteriana, es posible obtener
una buena muestra y encontrar las formas amastigotes intracelulares o
fuera de las clulas cuando stas se rompen, por accin mecnica de la
toma de muestra.
La tasa de demostracin parasitaria a travs del frotis es variable, sin
embargo su sensibilidad es baja y depender de la destreza de la
persona que realiza la lectura de la lmina. Se tiene reportes en Per de
un 4,7 % de positividad.
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Muestra: Tejido Exudado

Es una prueba simple y de bajo costo, la sensibilidad de la prueba
depende de factores como:
Tiempo de evolucin de las lesiones
Obtencin adecuada de la muestra
Repeticin de la prueba (3 veces)
Experiencia en el reconocimiento del amastigota.
Microscopio operativo con buena resolucin.
PROCEDIMIENTO DE OBTENCION DE MUESTRA
2. Lavar la lesin con agua y jabn
3. desinfectar con alcohol 70% la superficie externa de la lesin
4. Presionar con firmeza los bordes de la lesin hasta que
empalidezca; hacer el raspado directo de la lesin con ayuda
de un bistur (secar con algodn o gasa si sta sangra).Mnimo
dos lminas
5. Extender en una lamina portaobjetos el material obtenido en la
hoja de bistur, procurando que este sea delgado y evitando
pasar dos veces por el mismo sitio.
6. Realizar

otro

raspado

del

tejido;

observar

con

KOH

presencia/ausencia de hongos.
7. Extender en otra lmina para la coloracin de Ziehl Nielsen.
8. Rotular las muestras y dejar secar al medio ambiente.
9. Anotar los datos del Paciente en la ficha epidemiolgica
respectiva.

PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA
Fijar las lminas (2) con alcohol metlico para
diagnostico de leishmaniasis.
Cubrir la lmina con solucin de trabajo giemsa
por 20 minutos.
Descartar el colorante y lavar ligeramente con
agua corriente.
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Secar al medio ambiente y hacer la lectura con

objetivo de inmersin (100X).

10. CULTIVO DE LEISHMANIA

El parsito crece relativamente bien en medios de cultivo, entre 24 a 26C,
como el NNN (Novy-McNeal-Nicolle), agar sangre y el LIT-BHI. El material
puede ser obtenido por puncin aspirativa o por biopsia.
El material obtenido a travs de puncin aspirativa puede ser inoculado
directamente en el medio de cultivo y el material obtenido por biopsia debe
ser homogenizado en solucin salina con antibiticos (500 UI de penicilina y
1 mg de estreptomicina o 0,250 mg de gentamicina por ml de solucin
salina) luego des inoculado en el medio de cultivo. A pesar que muchos
organismos pueden crecer en una a dos semanas, los cultivos deben ser
mantenidos y examinados por cuatro semanas.
La tcnica del cultivo ofrece ventajas sobre los frotis coloreados por la fcil
observacin de gran nmero de formas promastigotes mviles, en contraste
con la dificultad y el mayor tiempo empleado en la bsqueda de formas de
amastigotes.
1. Lavar la lesin con agua y jabn
2. Desinfectar la zona elegida con alcohol 70% y agua
oxigenada.

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3. Con una jeringa de tuberculina, la cual ha sido cargada

previamente con 0.2 mL de solucin salina estril ms
antibitico, se punciona y se inyecta lentamente el contenido
dentro del rea decolorada de la ppula, o dentro del margen
no necrotizado de la lcera
4. Rotar suavemente hacia derecha e izquierda, al mismo tiempo
que se aplica ligera presin del mbolo hacia atrs. El
procedimiento es relativamente indoloro, sin embargo, puede
utilizarse un anestsico local.
5. Dos a tres gotas del material aspirado es inoculado en tubos
con la tapa de rosca que contiene medios de cultivo NNN o
Agar sangre.
6. Mantener los tubos de cultivo entre 24 - 25C, revisar
diariamente.
PRUEBA DIFERENCIAL
III.

CULTIVO DE HONGOS

1.

Tomar la muestra, de la misma forma que para hacer el frotis

de leishmania

2.

sembrar la muestra en forma directa en agar sabouraud

3.

Incubar al medio ambiente por 20 das

4.

Identificar las estructuras fngicas

5.

informar.

LEISHMANIASIS MUCOCUTANEA

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PRUEBA DE INTRADERMOREACCION DE MONTENEGRO

Es un mtodo indirecto para el diagnstico de la leishmaniasis, es una
reaccin de hipersensibilidad tarda, conocida con el nombre de prueba de
Montenegro o prueba de la leishmanina. Consiste en la aplicacin de un
antgeno extracto soluble preparado a partir de promastigotes procedentes
de cultivo. La leishmanina se aplica intradrmicamente en la cara anterior
del antebrazo izquierdo del paciente y se hace la lectura entre 48 a 72 horas
como mximo.
Pacientes con enfermedad activa que tengan ms de 4 semanas de
evolucin, personas con infeccin antigua o cicatrizada, e individuos con
infeccin bacteriana agregada, en los cuales el parsito no pudo
demostrarse directamente.
PROCEDIMIENTO
1.

Limpiar y desinfectar con alcohol 70%, el tercio superior de la cara

ventral del antebrazo

2.

Inyectar, con la jeringa de tuberculina, va intraepidrmica 0.1 mL

de la leishmanina, luego girar el bisel de la aguja antes de retirar
la jeringa, esto evitar la prdida del antgeno.

3.

Llenar ficha epidemiolgica

4.

Hacer la lectura a las 48 horas; el mximo permisible es de 72

horas.

LECTURA E INTERPRETACIN DE RESULTADOS

Hacer La lectura a las 48 horas, el mximo permisible es 72 horas

de inyectado el antgeno. En las personas que muestran reaccin
positiva al antgeno (leishmanina), se observa, generalmente, una
zona rojiza e indurada en el sitio de la inoculacin.

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Para delimitar el rea de reaccin, utilizar un bolgrafo y trazar

sobre la piel, desde uno de los extremos hacia el punto de
inoculacin, avanzando hasta encontrar resistencia. Repetir
siguiendo los cuatro cuadrantes.

Medir el dimetro de la ppula con una regla graduada en mm.

Si uno de los dimetros de la induracin en el sitio de la inoculacin

es de 5 mm o mayor se considera la IDRM positivo.

ENVIO DE MUESTRA
Se enviar suero de los pacientes sospechosos de leishmania que hayan
salido negativo en el frotis, cultivo negativo y no reaccionaron con la prueba
de

Intradermoreaccin de Montenegro y que se sospeche de una

leishmaniasis con cuadro clnico caracterstica de dicha enfermedad; al

Laboratorio Referencial para su estudio correspondiente con la ficha
epidemiolgica correctamente llenado.

Las muestras de suero sern conservadas en refrigeracin

(4C) por cortos perodos de tiempo y en congelacin por
mayo tiempo

Colocar los viales con muestras en una bolsa plstica y luego

acondicionar en un contenedor Secundario (recipiente de
cartn grueso o plstico, rodeado de hielo seco o cubos de
hielo).

El recipiente secundario debe ser colocado en una caja de

tecnoport u otro material que conserve las temperaturas
bajas.

Cerrar y sellar hermticamente la caja trmica.

Rotular la caja trmica.

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ANEXO
PACIENTE

MUESTRA

EXUDADO

TEJIDO

FROTIS

HONGOS

POSITIVO

BK

NEGATIVO

PRUEBA DE LA
LEISHMANINA

CULTIVO

POSITIVO

TRATAMIENTO

NEGATIVO

TRATAMIENTO

SUERO DEL PACIENTE

PARA IFI

POSITIVO

NEGATIVO

TRATAMIENTO

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