PROTOCOLO DE TRABAJO PARA EL

DIAGNOSTICO Y CONTROL DE LA
MALARIA

HOSPITAL DE APOYO DE HUANTA

LABORATORIO DE ANALISIS CLINICO
Huanta - Per
2012

HOSPITAL DE APOYO DE HUANTA

Seor Doctor
EDGARDO ARTURO GARCIA RAMOS
DIRECTOR DEL HOSPITAL DE APOYO HUANTA
Seora Biloga
ROSA MARIA BAUTISTA MARTINEZ
JEFA DEL SERVICIO DE LABORATORIO
Seor Bilogo
WALTER RAL RAMOS VALDIVIA
RESPONSABLE DE MALARIA

Laboratorio Clnico

Malaria

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TABLA DE CONTENIDOS
GENERALIDADES
1.
TOMA DE MUESTRA HEMATICA
PROCEDIMIENTO

2.

PREPARACION DE GOTA GRUESA Y FROTIS

2.1. COLORACION DE LA GOTA GRUESA
2.2
OBSERVACION MICROSCOPICA
2.3. EXAMEN DE RUTINA DE LA GOTA GRUESA Y DEL FROTIS
INFORME DE RESULTADOS

3.
4.

ANEXO
PREPARACION DE REACTIVOS Y COLORANTES
o PREPARACION DE SLAUCION MADRE DE GIEMSA
o PREPARACION DEL COLORANE DILUIDO

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GENERALIDADES
La malaria causa aproximadamente un milln de muertes cada ao en el
mundo. En Amrica Latina, la enfermedad es endmica en 21 de los 35 pases
que la conforman, de acuerdo a la Organizacin Panamericana de la Salud.
La incidencia de Plasmodium vivax, ha permanecido relativamente estable en
las regiones de la sierra y selva del pas, con un ligero declive en la costa,
donde no ha habido cambios climticos significativos durante el perodo
estudiado (1994-2006)
La Malaria o Paludismo, es una enfermedad causada por un Protozoario
del gnero Plasmodium y transmitida por un mosquito o zancudo del gnero
Anpheles.
En el Per, existen tres especies del Plasmodium capaces de infectar al
hombre: P. Vivax, P. Falciparum y P. Malariae. Aunque la mayor parte de los
casos registrados por el MINSA corresponde a infecciones por p. Vivax.
Los sntomas predominantes de la enfermedad son malestar general,
escalosfros, fiebre, sudoracin y cefalea, los que luego de instalado el cuadro
general, se presenta por periodos relativamente libres de molestias.
En el organismo humano, el parsito se ubica en un ambiente
intracelular, invadiendo Glbulos rojos, hepatocitos, etc. Desde el punto de
vista diagnstico, su bsqueda y observacin es ms fcil en los glbulos rojos
circulantes contenidos en una muestra de sangre de la Gota Gruesa y el de
Frotis.

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1.

TOMA DE LA MUESTRA HEMATICA

La muestra de sangre perifrica se obtiene para preparar dos clases de

pelcula de sangre, una gruesa y un delgada, la gota gruesa y el frotis
respectivamente, para su examen por microscopia directa.
La gota gruesa est conformada por numerosas capas de clulas sanguneas,
en su mayora glbulos rojos, los que son deshemoglobinizados durante la
coloracin Giemsa. Esta concentracin de glbulos rojos facilita la deteccin de
los parsitos que pudieran estar presentes en el interior de alguno de ellos.
El frotis consiste de una capa delgada, nica, de clulas sanguneas. Esto
facilita la observacin de las caractersticas morfolgicas de los parsitos
presentes en los glbulos rojos.
PROCEDIMIENTO:
a.

Sostenga la mano izquierda del paciente, con la palma hacia abajo, y

seleccione el tercer dedo a partir del pulgar o el dedo ndice; para esto
haga que el paciente extienda el dedo seleccionado y flexione los
dems (en nios pequeos, use el dedo gordo del pie)

b.

Limpie el dedo con una pieza o torunda de algodn ligeramente

humedecida en alcohol para retirar la suciedad y la grasa de la yema
del dedo.

c.

Seque el dedo con un algodn limpio, estimulando la circulacin de la

sangre con unos golpecitos suaves, pero firmes.

d.

Sostenga el dedo del paciente con la mano izquierda, tomndolo por sus
lados y manteniendo una suave presin sobre ellos para favorecer la
salida de sangre.

e.

Punce la yema del dedo con una lanceta estril, Hgalo con un
movimiento rpido.

f.

Deje salir la primera gota de sangre y lmpiela con una torunda de

algodn seca. Asegrese que ninguna hilacha de algodn permanezca
en el dedo, que pueda mezclarse posteriormente con la sangre.

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g.

Colecte dos gotas de sangre de la siguiente manera:

Ponga en contacto el primer tercio externo de la superficie de una lmina
con la sangre. Esta gota es para preparar la gota gruesa. Luego, ponga
en contacto el tercio medio de la superficie de la lmina con la sangre.
Esta gota es para preparar el frotis.

h.

Limpie la sangre restante del dedo con una torunda de algodn

humedecida en alcohol, e indique que la presione contra el lugar de la
puncin por 5 minutos.

2.

PREPARACIN DE GOTA GRUESA Y FROTIS

Aplique una esquina de la lmina auxiliar sobre la gota de sangre destinada a

la preparacin de la gota gruesa, y revuelva con 6 movimientos circulares, de
modo, que la sangre se distribuya uniformemente en un crculo de
aproximadamente 1 cm., de dimetro (o en un cuadrado de 1 cm de lado).
El frotis, con uno de los extremos de la lmina auxiliar forme un ngulo de 45,
en un lugar, entre la segunda gota de sangre, hasta tocar la gota, deje que se
distribuya sangre entre el borde de la lmina auxiliar y la superficie de la
lmina, haga correr el borde de la lmina sobre la superficie.
2.1.

COLORACIN DE LA GOTA GRUESA

En la tincin de la muestra hemtica se utiliza un colorante diluido, el que se

prepara a partir de una solucin madre.

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El colorante diluido se prepara al instante de la coloracin, en donde se toma 2

gotas de solucin madre de giemsa para 1 mililitro de agua destilada.
Coloque las lminas a colorear sobre la varilla de vidrio.
Vierta colorante diluido sobre la gota gruesa, cubrindola completamente.
Deje actuar el colorante por 10 minutos aproximadamente.
Descarte el exceso de colorante diluido y lave la lmina con un chorro suave
de agua corriente.

2.2.

OBSERVACIN MICROSCPICA

Los parsitos de malaria toman con la coloracin de Giemsa un aspecto

determinado en la gota gruesa y el frotis, que permite el reconocimiento del
tamao y forma del parsito y de sus partes.
El ncleo del parsito (la cromatina),
es

generalmente,

redonda

se

colorea de un rojo intenso (rojo

grosella)
El citoplasma toma diferentes formas,
desde una forma de anillo a una
totalmente irregular, y se colorea
siempre de azul, aunque la tonalidad
puede variar ligeramente.

Etapa de Trofozoito Joven

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Es la etapa ms vista; frecuentemente llamado anillo, aunque puede tomar la

forma de un anillo incompleto.
Etapa de Trofozoito Mediano y Adulto
Debido a que la etapa de trofozoito es una etapa creciente, el parsito dentro
del glbulo rojo puede variar en tamao desde pequeo a grande. El pigmento
malrico aparece a medida que el parsito crece.

El pigmento es un

subproducto del metabolismo del parsito que no se colorea, pero tiene un

color propio, que puede variar de amarillo plido a castao oscuro o negro.
Etapa de Esquizonte
En esta etapa el parsito de malaria comienza a reproducirse. Esta
reproduccin es conocida como asexual, se reproducen solos por simple
divisin, de parsitos con dos piezas de cromatina a parsitos con un nmero
de puntos de cromatina y citoplasma definido. Cuando este estado est
presente el nmero de puntos de cromatina observados son de utilidad para
determinar especies.
El proceso de formacin de esquizontes, que tiene lugar en el hgado y en
sangre, es conocido como esquizogonia (heptica o eritroctica).
Etapa de gametocito
La etapa de gametocito en los parsitos es sexual, se hace hembra o macho
en preparacin para la siguiente etapa, que tiene lugar en el estmago del
mosquito anofelino hembra.
Los gametocitos pueden ser redondos o en forma de pltano o salchicha,
dependiendo de la especie.

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2.3.

EXAMEN DE RUTINA DE LA GOTA GRUESA Y DEL FROTIS

El examen de la gota gruesa es mejor para detectar la presencia de parsitos,

mientras el examen del frotis es mejor para determinar la especie.
Rutinariamente, la gota gruesa debe ser examinada primero. Si est bien
preparada y fue coloreado antes de su auto fijacin, es posible determinar las
especies de los parsitos de malaria con ese examen.
Examen de la gota gruesa
El examen de rutina de la gota gruesa requiere observar 100 campos ptimos.
Una lmina pude declararse como negativa slo despus de observar los 100
campos sin haber encontrado parsitos.
Si se encuentra parsitos, igualmente, debe examinarse un total de 100
campos microscpicos. Esto asegura una pequea posibilidad de infeccin
mixta (ms de una especie presente en una muestra de sangre). Si es posible,
debe identificarse la(s) especie(s) a la que pertenece(n) el parsito(s).
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Procedimiento:
-

Verifique la clave de la lmina que va examinar en la hoja de registro de

datos.

Coloque la lmina entre los soportes de la platina mecnica y verifique

que est sostenida, firmemente, al momento de mover el carro. De lo
contrario, se puede perder de vista objetos sospechosos antes de que
puedan ser ubicados.

Examine la gota gruesa completa con el objetivo de 10 X hasta localizar

una zona conveniente para la bsqueda de plasmodios (una en la que
se observe leucocitos numerosos y bien coloreados).

Coloque aceite de inmersin sobre

la zona seleccionada de la gota

gruesa y haga girar el objetivo de 100 X hasta ponerlo en posicin sobre

ella.
-

Baje el objetivo hasta ponerlo en contacto con el aceite de inmersin.

Verifique que la parte seleccionada de la lmina es aceptable.

Examine 100 campos. Desplace la muestra de sangre siguiendo el

patrn mostrado. Recuerde usar el ajuste fino para enfocar, y
accionando el micromtrico hacia delante y atrs con el fin de observar
el mayor nmero posible de capas sanguneas.

x
Examen del frotis de sangre
El examen de frotis de sangre requiere mayor tiempo de observacin en
comparacin con la gota gruesa.
Se debe realizar este examen en las siguientes circunstancias:
-

Cuando no es posible examinar la gota gruesa por alguna razn (por

ejemplo, ser muy pequea.)

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Cuando no es posible identificar en la gota gruesa la(s) especie(s) de

Plasmodium presente(s)

El aspecto que deben presentar estas preparaciones al microscopio debe ser

la siguiente:
-

El fondo debe estar limpio y exento de residuos; los eritrocitos deben

estar teidos de color rosa-plido.

Los leucocitos tienen ncleo de color morado oscuro y grnulos bien

definidos.

Los grnulos de Schuffner deben verse como un moteado en los

eritrocitos que contiene P. Vivax.

La cromatina de los Plasmodios se tie de color grosella intenso y el

citoplasma de clor azul violceo o azul cielo. Los grnulos de Schuffner
deben verse como un moteado en los eritrocitos.

3.

INFORME DE RESULTADOS

Se proceder a la lectura de 100 campos microscpicos

Cualquier nmero inferior a 40 parsitos en 100 campos debe escribirse con el
nmero de parsitos encontrados en la lectura.
Si observ ms de 40 parsitos, use la siguiente escala:
Positivo ( +/2 )
Positivo ( + )
Positivo ( ++ )
Positivo ( +++ )
Positivo ( ++++ )

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De 40 a 60 parsitos en 100 campos

Un parsito por campo en 100 campos
De 2 a 20 parsitos por campo en 100 campos
De 21 a 200 parsitos por campo en 100 campos.
Ms de 200 parsitos por campo en 100 campos.

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ANEXO 1
PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES
PREPARACIN DE SOLUCION MADRE DE GIEMSA

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Colorante Giemsa en polvo, certificado

0,75 g

Alcohol metlico puro (sin acetona)

65,00 mL

Glicerina pura

35,00 mL

Estas cantidades son suficientes para preparar 100 mL de solucin madre.

Agregar, los ingredientes directamente a una botella de tamao adecuado que
contenga perlas de vidrio macizo, limpias de dimetro no mayor que 5 mm.
Agitar la botella intensamente de 6 a 10 veces al da, durante 3 das como
mnimo.
PREPARACIN DEL COLORANTE DILUIDO

Preparar la Solucin Madre Giemsa al 5 % con agua destilada.

Solucin Madre Giemsa

0,05 mL

Agua destilada

0,95 mL

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