Ciertas formas de radiacin pueden matar los microorganismos.

Radiacin ultravioleta: con longitudes de onda entre 100 y 400 nm. Las de mayor
actividad microbicida son las comprendidas entre 260-270 nm. Son absorbidas por
lo cidos nuclicos y aminocidos aromticos. Afectan a los cidos nucleicos
provocando errores en la duplicacin y prdida de viabilidad. Tienen bajo poder de
penetracin: solo se utilizan para la esterilizacin de superficies, (quirfanos, salas
de envasado de medicamentos). Producen daos en ojos y piel.
Radiacin Ionizante: Tienen mayor energa que las ultravioleta y por tanto mayor
poder de penetracin. Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los
cidos nuclicos, protenas y otros componentes celulares. Se utilizan para la
esterilizacin de materiales termosensibles como jeringas, sondas, suturas, guantes,
etc. No se utilizan para medios de cultivo o soluciones porque producen alteraciones
de los componentes. Solo se utiliza a escala industrial por el alto costo.

La temperatura afecta a la velocidad de crecimiento (y, por lo tanto al tiempo de

generacin, g). Cada bacteria (y suponiendo que el resto de condiciones
ambientales se mantienten constantes) muestra una curva caracterstica de tasa de
crecimiento en funcin de la temperatura, donde podemos distinguir tres puntos
caractersticos llamados temperaturas cardinales:
Temperatura mnima: por debajo de ella no hay crecimiento;
Temperatura mxima: por encima de ella tampoco existe crecimiento;
Temperatura ptima: permite la mxima tasa de crecimiento (o sea, g mnimo).
El margen entre la temperatura mnima y la mxima se suele llamar margen de
crecimiento, y en muchas bacterias suele comprender unos 40 grados.
Cada especie o cepa bacteriana tiene temperaturas cardinales distintas, de modo
que una bacteria puede presentar una temperatura ptima superior a la temperatura
mxima de otra, o inferior a la temperatura mnima de una tercera. Segn el rango
de temperaturas al que pueden crecer las distintas bacterias

La temperatura mnima se puede explicar en funcin de un descenso de la

fluidez de la membrana, de modo que se detienen los procesos de transporte de
nutrientes y el gradiente de protones.
Por encima de la temperatura mnima la tasa de crecimiento va aumentando
proporcionalmente hasta alcanzar la temperatura ptima, debido a que las
reacciones metablicas catalizadas por enzimas se van aproximando a su ptimo.
En dicha temperatura ptima las enzimas y reacciones se dan a su mxima tasa
posible.
A partir de la temperatura ptima, si seguimos subiendo la temperatura se
produce un descenso acusado de la tasa de crecimiento hasta alcanzar
la temperatura mxima. Dicha temperatura refleja desnaturalizacin e inactivacin
de protenas enzimticas esenciales, colapsamiento de la membrana citoplsmica y
a veces lisis trmica de la bacteria.
Obsrvese en el grfico que la temperatura ptima est ms cerca de la mxima
que de la mnima.
MICROORGANISMOS PSICRFILOS
Las psicrfilas o crifilas: crecen a partir de entre -5 a 5C.
a)

Las llamadas psicrfilas obligadas tienen temperatura ptima a 15-18C, como

por ejemplo Flavobacterium. La bacteria Polaromonas vacuolata, recientemente

aislada en aguas heladas de la Antrtida es lo que pudiramos llamar un psicrfilo
extremo: tiene su ptimo de crecimiento en 4C, y es incapaz de crecer a 14C (se
muere de calor!).
b)

Las psicrfilas facultativas o psicrotolerantes (tambin llamadas psicrotrofas)

presentan temperatura ptima en torno a los 20-30C y mximas a los 35C. Las
bacterias y hongos psicrotrofos son los responsables de que los alimentos
guardados en nevera se estropeen al cabo del tiempo.
Ejemplos de medios permanentemente fros son la mayor parte de las aguas
ocenicas (cuya temperatura media es de unos 5oC, pero que en las profundidades

alcanzan slo 1-2C por encima de cero) y las reas permanentemente heladas del
rtico y de la Antrtida. En los medios helados existen pequeas bolsas o
microcavidades de agua lquida, donde pueden medrar algunos microorganismos.
Un

ejemplo

no

bacteriano

muy

caracterstico

es

el

alga

de

las

nieves (Chlamydomonas nivalis), que llega a conferir color rojo a la nieve en algunas
zonas de montaa a mitad de la estacin estival.
MICROORGANISMOS MESFILOS
Los mesfilos presentan temperaturas ptimas a los 25-40C y mximas
entre 35 y 47C. La mayor parte de las eubacterias (incluyendo las patgenas)
pertenecen a esta categora. La mayor parte de los microorganismos que viven en
ambientes templados y tropicales, incluyendo los simbiontes y parsitos, pertenecen
a esta categora.
MICROORGANISMOS TERMFILOS
Las nicas formas de vida capaces de vivir por encima de 65C son todas
procariotas. Los termfilos presentan ptimos a 50-75C y mximos entre 80 y
113C. Dentro de esta categora se suele distinguir las termfilas extremas
(=hipertermfilas), que pueden llegar a presentar ptimos cercanos a los 100C, y
que taxonmicamente pertenecen al dominio de las Archaea.
Los hipertermfilos, con ptimos por encima de los 80C son de hecho incapaces
de crecer a menos de 37oC, como las citadas arqueas (ej., Thermoproteus,
Pyrococcus, Pyrodictium). La arquea Pyrolobus fumarii, habitante de los humeros
termales submarinos tiene su ptimo nada menos que a 105C y puede llegar a
aguantar 113C, y parece que detiene su metabolismo (por fro) a la agradable
temperatura de 90C (!).
Las termfilas facultativas pueden crecer a menos de 37C, como p. ej. la
eubacteria Thermus aquaticus.
Se han aislado bacterias termfilas en medios artificiales, como calentadores de
agua domsticos e industriales.

Entendemos por esterilizacin todo tratamiento de un material con un agente fsico

(como el calor, que nos ocupa en este momento) o qumico

que acarrea la

eliminacin de toda forma de vida en l. Una vez estril, el material sigue estril
indefinidamente con tal de que est encerrado en un compartimento estanco,
sellado y libre del contacto con microorganismos del ambiente exterior. Se pueden
lograr por calor hmedo o por calor seco.
(Esterilizacin: eliminacin de toda forma de vida, includas las esporas.
Desinfeccin: proceso de destruir los agentes infecciosos.)
6. Vapor de agua a presin: Trabaja a presin superior a la atmosfrica. El agua a
presin atmosfrica hierve a 100C. A presiones superiores, la temperatura de
ebullicin aumenta por lo que se pueden calentar soluciones acuosas (como
los medios de cultivo-) a temperaturas superiores a 100C. Permite elevar la
presin de una a dos atmsferas sobre la presin atmosfrica. El dispositivo trabaja
aislado del exterior. En un sistema aislado del exterior, cada elevacin de
temperatura provoca un aumento de presin. La relacin entre temperatura y
presin depende de la composicin de la atmsfera incluida en el sistema. La
esterilizacin por vapor a presin se lleva a cabo en un autoclave. Estos equipos
emplean vapor de agua saturado, a una presin de 15 libras lo que permite que la
cmara alcance una temperatura de 121C. El tiempo de esterilizacin usualmente
es de 15 minutos, sin embargo, en algunas oportunidades, dadas las caractersticas
del material, es necesario variar el tiempo de esterilizacin.
Tindalizacin (nombre en honor de John Tyndall): Es un mtodo de esterilizacin
fraccionada para materiales que se inactivan o estropean a ms de 100C. Consiste
en someter el material a varios ciclos (normalmente 3 4) de dos fases sucesivas
cada uno:
a)

en la primera fase el material se calienta a una temperatura entre 50 y 100C,

durante 1 2 horas;

b)

en la segunda fase el material se incuba en una estufa, a 30-37C durante 24

horas.
Durante las fases de tipo a) mueren todas las clulas vegetativas de la
muestra, pero permanecen viables las esporas, que quedan activadas para
germinar. Durante las fases de tipo b) se produce la germinacin de las esporas
activadas en la respectiva fase anterior. En la siguiente fase de tipo a) morirn las
clulas vegetativas procedentes de la germinacin en la fase anterior; y as
sucesivamente, hasta que al cabo de unos cuantos ciclos no queda ningun
microrganismo en la muestra.
Como se puede ver, este mtodo es bastante engorroso y consumidor de
tiempo, por lo que en los ltimos aos ha sido reemplazado por otro mtodo de
esterilizacin, aunque ya no dependiente del calor: se trata de la esterilizacin por
filtracin. Consiste de hacer pasar una solucin a travs de una membrana o filtro
de un tipo de material (normalmente nitrato de celulosa) que presenta poros de un
tamao inferior al de cualquier clula bacteriana (dimetro de poro =0,22 m).

Tras la pasteurizacin, el nmero de bacterias viables desciende un 97-99%. Los

potenciales patgenos que pueda llevar la leche (Brucella, Salmonella, bacilo
tuberculoso, Streptococcus, etc) son eliminados fcilmente. La pasteurizacin
tambin se emplea para la preparacin de vacunas a base de microorganismos
inactivados por el calor.
La pasteurizacin (en honor a Pasteur, que la introdujo en los aos 1860) consiste
en tratar la leche a 63oC durante 30 min, tras los cuales se enfra y envasa
rpidamente.
La pasteurizacin instantnea (tambin conocida por sus siglas en ingls HTST,
de high temperature-short time) se logra calentando a 72C durante slo 15
segundos, tras de lo cual la muestra se enfra rpidamente. Esta tcnica es la ms
usada actualmente, ya que: mata ms rpidamente; mata mejor organismos ms

resistentes; altera menos el sabor; acta en flujos continuos (y permite procesar

grandes volmenes de leche).
5. Incineracin: Se aplica directamente la llama de un mechero. Se utiliza para la
esterilizacin de asas e hilos de siembra, pinzas as como las bocas de tubos y
matraces antes y despus de utilizarlos. La incineracin se emplea para destruir
materiales de desecho contaminados.
Aire caliente: alcanzan temperaturas mayores a 150C. Las condiciones usuales de
esterilizacin son de 160-180C durante 1-2 horas. Las ventajas son que penetra en
materiales insolubles en agua (aceites, grasas) y es menos corrosivo sobre metales
que el calor hmedo. Se utiliza para la esterilizacin de materiales secos, grasas,
aceites y material de vidrio y metales termorresistentes. Este proceso se lleva a
cabo en hornos especiales que permiten la distribucin uniforme del calor en su
interior
8. Este procedimiento es aplicable a la esterilizacin de lquidos y gases,
especialmente los primeros. Cuando el lquido a filtrar no puede resistir, sin
descomponerse , la accin del calor, se aplica la tcnica de filtracin, la que puede
efectuarse mediante presin o aspiracin.
Se basa en el pasaje de lquidos a travs de sustancias porosas que detienen a los
microbios. Los antiguos filtros se fabricaban en forma de bujas que son cilindros
huecos abiertos por una extremidad y cerrados por otra, de paredes de espesor
variable.
La filtracin se reconoci como tcnica de esterilizacin a partir de las
observaciones de Koch en 1893, con la epidemia de clera y la presencia del vibrin
en el agua
En la actualidad se usan membranas filtrantes con poros de un tamao
determinado. El tamao del poro depender del uso al que se va a someter
la muestra. Los filtros que se utilizan no retienen virus ni micoplasmas, estos ltimos
estn en el lmite de separacin segn el dimetro de poro que se utilice. La
filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles. Su usa para

esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones

intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos, medios para cultivos celulares, y
soluciones de antibiticos y vitaminas.
Existen

tres

tipos

a- Filtros

profundos

bsicos

Filtros

de
de

filtros:
profundidad:

Consisten de un material fibroso o granular prensado, plegado, activado, o pegado

dentro de los canales de flujo. En este tipo de filtros la retencin de las partculas se
produce por una combinacin de absorcin y de retencin mecnica en la matriz.
b-

Membranas

filtrantes:

Tienen una estructura continua, y la retencin se debe principalmente al tamao de

la partcula. Partculas ms pequeas al tamao del poro quedan retenidas en la
matriza del filtro debido a efectos electrostticos.
y 14 cm de dimetro, con un soporte de papel siliconado para su proteccin debido
a la fragilidad de la misma, la ue debe ser monada en un soporte estril y que
permita el ingreso del lquido a esterilizar a presin.La firma Millipore ha
desarrollado membranas de 0,45
c-

Filtros

de

huella

de

nucleacin

(Nucleoporo):

Son pelculas muy delgadas de policarbonato que son perforadas por un tratamiento
conjunto con radiacin y sustancias qumicas. Son filtros con orificios muy regulares
que atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como tamices, evitando el
paso de toda partcula con un tamao mayor al del poro.

9. Afecta tanto a los microorganismos como a los agentes qumicos. El aumento de

pH por encima de 7 incrementa la carga negativa de los microorganismos afectando
la concentracin del agente sobre la clula. El pH determina el grado de disociacin
y la efectividad del agente qumico, pues a menor disociacin mayor permeabilidad
y mayor efectividad.

La mayora de las bacterias pueden crecer dentro de un margen de pH de su medio,

manteniendo al mismo tiempo su pH interno ptimo prcticamente constante.
Por ejemplo, Escherichia coli puede crecer bien entre pH 6 y pH 8, pero su pH
interno es siempre 7.6 o muy cercano a ese valor.
Respecto del margen normal de pH a los que crecen las bacterias, stas se pueden
clasificar en:
Neutrfilas, si crecen de modo ptimo en torno a la neutralidad (entre pH 5.5 y 8).
Acidfilas, si crecen normalmente entre pH 0 y pH 5.
Alcalfilas, si crecen entre pH 8.5 y pH 11.5.
La mayor parte de las bacterias son neutrfilas. Muchas bacterias neutrfilas
modifican el pH del medio, y resisten entornos relativamente cidos o alcalinos. Por
ejemplo, algunas bacterias fermentativas excretan cidos, mientras otras alcalinizan
el medio, p. ej., produciendo amonio a partir de desaminacin de aminocidos. Por
otro lado, la mayor parte de los hongos y levaduras requieren pHs ligeramente
cidos (en torno a 4-5).
Aunque los microorganismos pueden crecer en un margen ms o menos amplio de
pH (alrededor de un ptimo), los cambios bruscos pueden ser lesivos (afectando a
la membrana y al transporte de solutos, e inhibiendo enzimas). Si el pH citoplsmico
cae rpidamente hasta 5 o menos, la bacteria puede morir.
Uno de los mecanismos que, al menos en neutrfilos parece controlar el pH interior
es un sistema de antiporte H+/K+: a pH cidos, el interior celular puede quedar en
principio ms alcalino que el exterior. Este sistema introduce protones en el interior y
saca iones potasio. De esta manera neutralizan el pH interior y siguen teniendo un
potencial de membrana para establecer una fuerza protn motriz que les suministre
energa.
Si el pH interior cae en torno a 6 o 5.5, bacterias como E. coli o S.
typhimurium inducen una respuesta de tolerancia a cidos, consistente en ATPasas

translocadoras de protones (expulsan protones al exterior) y chaperonas (protenas

celadoras) para corregir las protenas desnaturalizadas.
Existen algunos notables procariotas cuyo pH ptimo es muy bajo (acidfilos
extremos u obligados): Algunas eubacterias del gnero Thiobacillus (T. thiooxidans,
T.

ferrooxidans) y

las

arqueas

de

los

gneros Sulfolobus,

Thermoplasma y Ferroplasma tienen su ptimo a pH 2, y generan ellas mismas

estos bajos pH al oxidar sulfuros hasta cido sulfrico. (Sulfolobus es un Secciones
un termoacidfilo). De hecho, estas bacterias necesitan esas altas concentraciones
de H+ para mantener la integridad de sus membranas y envueltas: a pH neutro esas
envueltas se desintegran. Una arquea sorprendentemente acidfila es Picrophilus
oshimae, cuyo pH ptimo es nada menos que 0.7 (aparte de que es una termfila
que necesita temperaturas de ms de 60C).
Las especies alcalfilas obligadas tienen ptimos de pH en torno a 10-11. Por
ejemplo, Bacillus alcalophilus , cuyo pH interno es de 9. Sus hbitats tpicos son
suelos carbonatados y lagunas alcalinas (algunos son tambin halfilos,
como Natronobacterim gregoryi). Estos organsimos tienen gran inters industrial,
porque de ellos se obtienen enzimas hidrolticas como proteasas y lipasas que se
usan como aditivos en detergentes.

7. Horno Pasteur: El calor seco se utiliza principalmente para esterilizar material de

vidrio y otros materiales slidos estables al calor. El aparato que se emplea es el
horno Pasteur. Autoclave Para el material de vidrio de laboratorio se consideran
suficientes dos horas de exposicin a 160 C. Algunos materiales no se deben
esterilizar en el autoclave. Sustancias que no se mezclan con el agua no pueden ser
alcanzadas por el vapor sobreviviendo los microorganismos que contengan. Otras
sustancias se alteran o son destruidas por tratamientos prolongados de calor
emplendose en estos casos otros mtodos de esterilizacin. El llamado horno de
Pasteur, mediante calentamiento a 160-170C durante 2-3 horas permite esterilizar
materiales inertes de laboratorio resistentes al calor: material de vidrio y metlico,
aceites y jaleas, etc.

Autoclave Emplendose para esterilizar medios de cultivo o material que no puede

sufrir ms de aquella temperatura.
10. Diferencias entre una sustancia qumica antisptica y una sustancia qumica
desinfectante.
Las sustancias qumicas antispticas producen muerte o inhibicin celular, en las
bacterias, por oxidacin, hidrlisis e inactivacin de enzimas, con prdida de
constituyentes celulares, en cambio las sustancias qumicas desinfectantes actan
como desnaturalizantes o precipitantes de protenas, inhiben enzimas y causan
muerte celular; otra diferencia es que las sustancias qumicas antispticas son ms
selectivas y se usan en tejidos vivos, por otro lado los desinfectantes son ms
potentes, mas rpidos y termoestables que los antispticos, y algunos son mas
txicos.
bacteriostticos: cuando impiden el crecimiento bacteriano;
bactericidas: cuando destruyen (matan) las bacterias.
En general, si no slo nos referimos a las bacterias, sino a cualquier tipo de
microorganismos,

hablamos

respectivamente

de

agentes microbiostticos y microbicidas. Ahora bien, para una misma sustancia

qumica, la lnea de demarcacin entre un efecto microbiosttico y otro microbicida
depende muchas veces de la concentracin de dicha sustancia y del tiempo durante
el que acta.
Antispticos
Alcoholes
Lesionan la membrana celular de los microorganismos y desnaturalizan protenas
celulares. Desorganizan la estructura fosfolipdica.
No destruyen esporas y tienen una accin germicida lenta. Los alcoholes de cadena
corta tienen un efecto nocivo mayor que los de cadena larga.

Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%. Los ms utilizados son el etanol e

isoproplico.

Iodo
Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de protenas y cidos
nucleicos. Inactiva protenas y enzimas por oxidacin de los grupos -SH a S-S,
pudiendo atacar tambin grupos amino, indoles, etc.
Se utiliza como desinfectante de la piel (tintura de iodo: yodo molecular 2% y yoduro
de sodio 2% en alcohol), aunque es irritante.
Es efectivo contra esporas en una concentracin de 1600 ppm de iodo libre.

Desinfectantes
GLUTARALDEHIDO
El glutaraldehido es un desinfectante altamente utilizado en el medio hospitalario
debido a que tiene un amplio espectro de accin, es activo en presencia de material
orgnico y no es corrosivo. Dependiendo del tiempo de exposicin se alcanzan
distintos grados de desinfeccin. Al esperar 12 horas se obtiene esterilizacin, con
30 minutos, desinfeccin de nivel alto y con 10 minutos, de nivel bajo. Si el material
que se va a desinfectar est sucio con sangre, pus o cualquier elemento orgnico,
se va a alterar el poder de desinfeccin. El material orgnico acta como barrera
fsica y se interpone entre el desinfectante y la superficie de contacto del material a
limpiar, por lo que es recomendable limpiar previamente todo el material que ser
sometido a desinfeccin. No es corrosivo.
Se utiliza para la desinfeccin de alto nivel en materiales que no se pueden someter
a altas temperaturas como endoscopios, los cuales tienen fibras pticas delicadas y
piezas de goma. Es una sustancia txica, no slo para el personal que lo manipula,
sino tambin para las personas que utilizan el instrumental. Por lo tanto se debe

enjuagar el instrumental despus de la desinfeccin para eliminar todo el

desinfectante

impregnado.

Se inactiva despus de dos semanas de preparada y por dilucin, por ejemplo al

sumergir instrumentos previamente lavados con agua sin secarlos
HIPOCLORITO DE SODIO 1%
A pesar de ser un desinfectante de alto nivel tiene un uso clnico ms limitado
porque el pH alcalino disminuye su actividad, lo mismo con la presencia de materia
orgnica, y corroe el material metlico.
Uno de los qumicos ms importantes que se usan hoy en da es el desinfectante.
Saber los efectos del desinfectante en el crecimiento bacteriano nos ayuda a
entender cmo prevenir y tratar las infecciones. No todos los desinfectantes
funcionan igual. Algunos no matan las bacterias sino que simplemente detienen su
crecimiento.

Algunos

desinfectantes

comunes

vendidos

en

las tiendas son

inefectivos para matar grmenes y crean un riesgo para la salud.

Los desinfectantes mas utilizados son:

Detergentes catinicos: Se pueden utilizar diluidos al 1% para la

desinfeccin de manos. Su uso ms corriente es para la limpieza y
desinfeccin de paredes, suelos, ropa y objetos en general.

Clorofenoles: Son muy eficaces y se suelen asociar con los detergentes

catinicos para mejorar el grado de desinfeccin.

Compuestos clorados: Son utilizados para desinfeccin de superficies,

ropas, urinarios, etc. Se suelen usar diluidos en agua y un ejemplo tpico lo
constituyen las lejas (hipocloritos).

Acido fnico: Se utiliza diluido al 5% para la limpieza de objetos y

superficies.
Los antispticos ms utilizados son los siguientes:

Alcoholes: Se utilizan para limpiar y desinfectar la piel, las manos, el filo del
instrumental y algunas superficies pequeas. Se utiliza el etanol para tejidos
y el metanol para superficies que no vayan a estar en contacto con la piel.

Mercuriocromo: En su composicin aparece el mercurio, que tiene un efecto

desinfectante muy bueno. Es especialmente utilizado en heridas superficiales
debido a que las desinfecta y las mantiene secas y protegidas.

Derivados yodados: Son utilizados para preparar la piel antes de una

intervencin quirrgica, en la puncin lumbar, antes de puncin para
hemocultivo, etc. Son extraordinariamente efectivos y ejercen su accin por
oxidacin.

Bibliografia
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/micro-ianez/19_micro.html
http://www.microbiologia.com.ar/
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_Tema_1
4_Limpieza__desinfecci%C3%B3n.pdf
http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/13agfisicos.htm
http://www.monografias.com/trabajos24/esterilizacion-laboratorio/esterilizacionlaboratorio.shtml
http://uvsfajardo.sld.cu/tema-7-metodos-de-esterilizacion
http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-ii/pb-ii-2-fisicos.htm