UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ESPE

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y LA AGRICULTURA

CDIGO: SGC.DI.505
VERSIN: 1.0
FECHA ULTIMA
REVISIN: 26/10/16

CARRERA:

GUA PARA LAS PRCTICAS DE LABORATORIO, TALLER O CAMPO

ASIGNATURA:

BIOLOGA MOLECULAR I

PERIODO
AGOSTO-FEBRERO
LECTIVO:
NRC:
1606
LAB DE DOCENCIA

NIVEL:

4TO

DOCENTE:
DRA KARINA PROAO
PRCTICA N: 3
LABORATORIO DONDE SE DESARROLLAR LA
PRCTICA:
TEMA DE LA
EXTRACCION DE DNA
PRCTICA:
INTRODUCCIN: el DNA es la molcula que guarda el cdigo gentico de todas las clulas, sin importar que el organismo sea
multicelular o unicelular , eucariota o procariota, todos tiene el DNA como vehculo de su cdigo gentico
Muchas de las tcnicas de biologa molecular incluyen algn tipo de manipulacin de material gentico. Estos procedimientos han
logrado hasta el grado el conocimiento del cdigo gentico, que ya es posible clonar organismo entero. Los procedimientos
iniciales eran largos y tediosos y podan pasar varios das antes de saber con certeza se haba logrado obtener DNA en calidad y
cantidad suficiente para poder manipularlo, hoy da podemos obtener suficiente DNA de buena calidad en unas horas.
Existen varios protocolos para la extraccin de DNA y esto se los utiliza dependiendo del tipo de muestra que se est utilizando y el
nivel de pureza que se requiere. Por lo que la seleccin de material para la extraccin cumple con un rol fundamental. Usualmente
el en caso de tejidos vegetales jvenes presentar un mayor rendimiento de DNA, ya que el caso de tejidos vegetales maduros o
enfermos, la extraccin se dificulta por la presencia de polisacridos y Pol fenlicos; estos producen una degradacin del DNA
Existen varios protocolos para la extraccin de DNA y esto se los utiliza dependiendo del tipo de muestra que se est utilizando
extraer el DNA de una clula se debe seguir varias etapas
1. Lisis Celular: esta etapa consiste en romper la pared celular, membrana plasmtica y nuclear mediante proceso
mecnicos, choque osmtico, choque trmico, detergentes, y enzimas
2. Purificacin: esta etapa es opcional ya que nos permite obtener un DNA de mejor cada libre de molculas contaminantes,
esto lo conseguimos con soluciones de cloroformo/isoamiloalcohol
3. Precipitacin: para precipitar el DNA lo hacemos generalmente con etanol al 05% helado isopropanol, isoamiloalcohol
4. Lavado: con etanol al 70 %
Se deber colocar de manera resumida el fundamento de la prctica a desarrollar
OBJETIVOS:

Identificar las etapas del proceso de extraccin de DNA

Entrar e instruir el estudiante sobre el uso, manejo y utilizacin de materiales y reactivos para una adecuada extraccin
con DNA Zol Reagent
Conocer la tcnica y/o procedimiento que se debe seguir para realizar una extraccin con DNA zol Reagent y compararla
con otras tcnicas

MATERIALES:
REACTIVOS: DNA Zol Reagent, nitrgeno lquido, etanol, hielo,
cloroformo, TE, Tris.

INSUMOS: hojas

EQUIPOS: mortero y pistilo, micropipetas y puntas, esptulas, gradillas, marcador de vidrio, centrifuga, eppendorf 1,4 ml,
micropipetas, puntas, pH metro.

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DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y LA AGRICULTURA

CDIGO: SGC.DI.505
VERSIN: 1.0
FECHA ULTIMA
REVISIN: 26/10/16

CARRERA:

MUESTRA:
Muestra vegetal
INSTRUCCIONES:
Se deber colocar las actividades a desarrollar previas al inicio de la prctica, por ejemplo:
- Utilice ropa de proteccin: mandil, guantes, gafas, cabello recogido, zapato cerrado, etc.
- Verifique la disponibilidad de los equipos a usar en la prctica
ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:
-

DNA Zol es un procedimiento de aislamiento de DN vegetal, animal y bacteriano, el proceso se basa en el uso de un
nuevo detergente de lisis con guanidina que permite una precipitacin selectiva del ADN de una clula destruida
Este procedimiento es sencillo replicable y eficiente. Adicionalmente, este producto permite extraccin de ADN de grandes
cantidades de muestra as como de pequeas
Lisis de clulas y ncleos de Homogenizacin de tejidos
Aadir q ml DNA zol por -50 mg de tejido
Macerar (tejido congelado en nitrgeno lquido)
Mezclar a fondo usando una pipeta
Incubar por 5-10 min a temperatura ambiente mezclando por inversin o rotacin
Aadir 300ul de cloroformo (proporcin 1:1 con DNA zol)

Centrifugacin
- Centrifugar por 10 min a 10 000 rpm a 4c o Ta
- Transferir sobrenadante a su nuevo tubo(remueve tejidos insolubles, RNA exceso e polisacridos del homogenizado asla
DN del material extracelular o celular)
Precipitacin
- Precipitar con 0.5 ml etanol 100 % por 1 ml de DNA zol usado
- Mezclar por inversin y almacenar a T ambiente por 1-3 min
- Capturar el DNA con una punta y colocarlo en el fondo de un tubo limpio y/o centrifugar 4000 rpm por 1-2min a TA a 4c.
eliminar el sobrenadante
Lavado
- Lavar el precipitado 2 veces con 1 ml de etanol a 95%
- En cada lavado invertir el tubo de 3- 6 veces
- Almacenar los tubos verticalmente por 30 segundos o 1 minuto para depositar ADN en el fondo, eliminar el etanol
Suspensin
- Secar el ADN a T ambiente por 10- 15 min
- Disolver el pellet en TE pH 8
RESULTADOS OBTENIDOS:
- Describa los resultados obtenidos de la prctica realizada y discuta cada una de las observaciones
CONCLUSIONES:
Con el conocimiento derivado de su observaciones, indique conclusiones y recomendaciones acerca extraccin de DNA
RECOMENDACIONES:

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CDIGO: SGC.DI.505
VERSIN: 1.0
FECHA ULTIMA
REVISIN: 26/10/16

CARRERA:

Se refiere a sugerencias dadas por el docente para el correcto desarrollo de la prctica.

FIRMAS

F: .

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Nombre:

Nombre:
COORDINADOR DE REA DE
CONOCIMIENTO

Nombre:
COORDINADOR DE LABORATORIOS

DOCENTE