ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS QUMICAS
INGENIERA EN BIOTECNOLOGA AMBIENTAL
PROYECTO DE BIORREMEDIACIN
DOCENTE: ING. KARLA GUERRA

TEMA: CARACTERIZACIN INICIAL DE SUELOS CONTAMINADOS CON

HIDROCARBUROS PROVENIENTES DEL CENTRO DE SERVICIOS
TCNICOS Y TRANSFERENCIA TECNOLGICA AMBIENTAL (CESTTA).

INTEGRANTES:
KATTY ANGULO
CATHERINE CABRERA
DIEGO CUJILEMA
MNICA HIDALGO
RHITA INCA
SILVANA MORETA
KLEVER NIQUINGA
JEIMY PREZ
STEPHANIE PINTADO
ANDREA RUIZ
SEMESTRE: OCTAVO A
RIOBAMBA ECUADOR

1. OBJETIVOS
1.1.
OBJETIVO GENERAL
Desarrollar la caracterizacin inicial de suelos contaminados con hidrocarburos
provenientes del Centro de Servicios Tcnicos y Transferencia Tecnolgica
Ambiental (CESTTA).
1.2.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Realizar la determinacin de parmetros fsico qumicos como; pH, temperatura

y humedad.
Determinar el porcentaje de nitrgeno y de fsforo asimilable en la muestra de

suelo contaminado.
Preparar un medio de cultivo y posteriormente realizar la siembra de la muestra

de suelo contaminado.
Ejecutar el conteo de microorganismos de la siembra realizada.
Identificar los metales pesados presentes en la muestra de suelo contaminado.
Determinar la cantidad de azufre elemental presente en la muestra de suelo

contaminado.
Efectuar la determinacin de pH y conductividad elctrica de la muestra de

suelo contaminado.
Reconocer los TPH Y HAPS presentes en la muestra de suelo contaminado.
2. INTRODUCCIN
Uno de los mtodos de biorremediacin de suelos contaminados con hidrocarburos son
las biopilas que tambin se conocen como bioceldas, biomontculos o pilas de composteo.
Se utilizan para reducir las concentraciones de los hidrocarburos totales del petrleo
(HTP) en suelos contaminados con hidrocarburos a travs de la biodegradacin. La
biopila se define como un proceso biolgico controlado donde los contaminantes
orgnicos son biodegradados y mineralizados. El proceso consiste en formar pilas con el
suelo contaminado y estimular la actividad microbiana, aireando y/o adicionando
nutrientes y humedad. El incremento de la actividad microbiana es proporcional a la
reduccin de las concentraciones de HTP.
La tecnologa de biopilas utiliza el oxgeno contenido en el aire y estimulan el
crecimiento de bacterias aerobias, las cuales degradan los constituyentes del petrleo
adsorbido por el suelo; la forma de suministrar el oxgeno, el aire se inyecta o extrae a
travs de tubos perforados que atraviesan la pila.
Uno de los principales problemas de la biodegradacin, es que, en presencia de altas
concentraciones del contaminante en el suelo, pueden existir efectos de toxicidad sobre la

poblacin microbiana. Otro, es la insuficiencia de nutrientes en el suelo; sin embargo, la

presencia de cantidades mnimas de nitrgeno y fsforo permiten la biodegradacin en el
suelo, aunque a velocidades muy bajas. Los factores ambientales que afectan la actividad
microbiana y por lo tanto la biodegradacin son: contenido de humedad, temperatura,
nutrientes inorgnicos (principalmente nitrgeno y fsforo), aceptores de electrones
(oxgeno, nitrato, sulfato), pH, presencia de metales pesados, tipo y cantidad de material
orgnico presente.
La biodegradacin de los hidrocarburos se lleva a cabo principalmente por dos grupos de
microrganismos: las bacterias y los hongos. Las bacterias tienen un crecimiento muy
rpido y una mayor capacidad de adaptacin a los medios contaminados. La
biodegradacin depende de un adecuado suministro de agua, por lo que es importante
conocer la porcin de agua disponible para los microrganismos. Esta puede conocerse
indirectamente a travs de la capacidad de campo que depende de la textura y porosidad
del suelo. La biodegradacin de los hidrocarburos es ptima con un contenido de
humedad entre 70 y 95 % de la capacidad de campo.
Los nutrientes inorgnicos principales para la biodegradacin son el nitrgeno y el
fsforo. El primero es necesario para la sntesis de protenas y la pared celular, mientras
que el fsforo es necesario para formar los cidos nucleicos y para el ATP. El nitrgeno
puede perderse rpidamente en el suelo debido a la lixiviacin del amonio y nitratos y por
la desnitrificacin del suelo. El fsforo se encuentra frecuentemente limitado debido, a su
baja solubilidad y biodisponibilidad. El fsforo orgnico en suelos se encuentra
principalmente en los cidos hmicos mientras que el fsforo inorgnico se encuentra en
combinacin con el Fe, Al, Ca, F.
La biorremediacin depende principalmente de la actividad de los microrganismos
aerobios por lo que se requiere un suministro adecuado de oxgeno al suelo.
Aproximadamente se requieren de 3Kg de O2/ Kg de HC para asegurar una buena
degradacin. Cuando los poros del suelo se encuentran ocupados por molculas de agua,
la difusin del oxgeno es menor y se pueden presentar condiciones anxicas. Para tener
una degradacin aerobia es necesario tener aproximadamente 10% de poros libres en la
matriz del suelo. Los contaminantes orgnicos presentes en el suelo, son la fuente de
carbono que los microrganismos requieren para la biodegradacin.
3. MARCO TERICO

EL SUELO
Qu es?
El suelo est compuesto por minerales, materia orgnica, diminutos organismos
vegetales y animales (microorganismos), aire y agua. Es una capa delgada que se ha
formado muy lentamente, a travs de los siglos, con la desintegracin de las rocas
superficiales por la accin del agua, los cambios de temperatura y el viento. Las
plantas y animales que crecen y mueren dentro y sobre el suelo son descompuestos
por los microorganismos, transformados en materia orgnica y mezclados con el
suelo.
Composicin del suelo
La matriz de un suelo est compuesta por los siguientes componentes principales:
Minerales: Los materiales minerales constituyen los principales componentes

estructurales de los suelos y suponen ms del 50% del volumen total.

Aire agua: Conjuntamente constituyen el volumen de poros, que, por lo
general, ocupa entre el 25 y 50% del volumen total. La proporcin aire agua

vara considerablemente con la humedad del suelo.

Organismos vivos: Ocupan menos del 1% del volumen.
Materia orgnica: Oscilan entre el 3 y 6% del volumen, con valor medio.
(Cando, 2011)

Caractersticas de los suelos agrcolas

No todos los suelos son iguales para la agricultura, los hay mejores o peores segn
sus caractersticas.

Fuente:(Jorajuria, 2000)
4

Un buen suelo agrcola debe ser:

a) Lo suficientemente poroso para permitir la circulacin del aire y del agua en su interior.
b) Acidez neutra que permita el desarrollo de la mayor parte de las plantas y a su vez
favorezca la descomposicin de la materia orgnica.
c) Rico en materia orgnica (humus) que favorezca la vida de los microorganismos, aire el
suelo y favorezca la retencin del agua.
d) Rico en microorganismos (insectos, hongos, bacterias.) que descompongan la materia
orgnica y la transformen en minerales para las plantas.
As pues los suelos no slo estn formados por tierra, sino que junto a sta ha de haber
materia orgnica en descomposicin y muchsimos microorganismos.
Otras caractersticas del suelo agrcola es que se encuentra en zonas de clima que favorecen
el desarrollo y crecimiento de cultivos, teniendo en cuenta principalmente la variacin de
precipitaciones (lluvias), temperatura, vientos, periodicidad de sucesos como fenmenos
climticos (tormentas elctricas, vientos fuertes, etc.); por otra parte, el suelo debe ser rico
en nutrientes, y tambin influye la pendiente del suelo que para el caso de suelos aptos para
la agricultura debe ser igual o menor a 5% (se puede medir mediante un proceso
determinado con herramientas especficas). (Jorajuria, 2000)
CARACTERSTICAS, COMPOSICIN Y PROPIEDADES FISICOQUMICAS DE
LOS HIDROCARBUROS
Los principales componentes del petrleo son los hidrocarburos, los cuales representan el
50-98% en relacin a la composicin total.
El carbono (80-87%) y el hidrgeno (10-15%) son los principales y ms abundantes
elementos en el petrleo, aunque otros como el azufre (0-10%), nitrgeno (0-1%) y el
oxgeno (0- 5%) estn presentes en cantidades menores ya sea en su forma elemental o bien
como constituyentes heterocclicos y grupos funcionales. Tambin se reportan algunos
metales traza como Vanadio, Nquel, Hierro, Aluminio y Cobre, cuya concentracin va
dependiendo del tipo de petrleo crudo y la regin en donde se form.
As, los hidrocarburos del petrleo consisten en compuestos saturados de cadena lineal
(alcanos), compuestos acclicos (ciclo alcanos) y compuestos aromticos conteniendo
cuando menos un anillo bencnico en su estructura molecular. Los alcanos a su vez pueden
ser saturados de cadena lineal o isoalcanos de cadena ramificada con la formula general

(CnH2n+2) y con tomos de carbono desde C1 hasta C40 y en ocasiones se han reportado
cadenas con ms de 60 tomos de carbono. (Botello, 2005)
FUNDAMENTO BIOQUMICO DE LA BIODEGRADACIN
El fundamento bioqumico de la biorremediacin se basa en que en la cadena respiratoria, o
transportadora de electrones de las clulas, se van a producir una serie de reacciones de
xido-reduccin cuyo fin es la obtencin de energa. La cadena la inicia un sustrato
orgnico (compuestos hidrocarburados) que es externo a la clula y que acta como dador
de electrones, de modo que la actividad metablica de la clula acaba degradando y
consumiendo dicha sustancia.(Arroyo, 2004)

Fuente: (Arroyo, 2004)

La concentracin y composicin de la comunidad microbiana y la tasa de transformacin de
contaminantes est influenciada por diversos factores:

Necesidad de nutrientes: El metabolismo microbiano est orientado a la reproduccin de

los organismos y stos requieren que los constituyentes qumicos se encuentren disponibles
para su asimilacin y sintetizacin. Los nutrientes principalmente requeridos son el fsforo
y el nitrgeno. Por lo general suele haber en el suelo una concentracin de nutrientes
suficiente, sin embargo, si estos no se encontrasen en el rango normal se puede adicionar
mayor cantidad al medio. El rango normal de C: N: P depende del sistema de tratamiento a
emplear, siendo de modo habitual 100:10:1.

pH del suelo: afecta significativamente en la actividad microbiana. El crecimiento de la

mayor parte de los microorganismos es mximo dentro de un intervalo de pH situado entre
6 y 8. As mismo el pH tambin afecta directamente en la solubilidad del fsforo y en el
transporte de metales pesados en el suelo. La acidificacin o la reduccin del pH en el
suelo se puede realizar adicionando azufre o compuestos del azufre.

Temperatura: generalmente las especies bacterianas crecen a intervalos de temperatura

bastante reducidos, entre 15 y 45C (condiciones mesfilas), decreciendo la biodegradacin
por desnaturalizacin de las enzimas a temperaturas superiores a 40C e inhibindose a
inferiores a 0C.

Humedad: los microorganismos requieren unas condiciones mnimas de humedad para su

crecimiento. El agua forma parte del protoplasma bacteriano y sirve como medio de
transporte a travs del cual los compuestos orgnicos y nutrientes son movilizados hasta el
interior de las clulas. Un exceso de humedad inhibir el crecimiento bacteriano al reducir
la concentracin de oxgeno en el suelo. El rango vara en funcin de la tcnica.

Estructura qumica del hidrocarburo: la inherente biodegradabilidad de un hidrocarburo

depende, en gran medida, de su estructura molecular. Siendo los parmetros que ms van a
afectar la halogenacin, la existencia de ramificaciones, la baja solubilidad en el agua y la
diferente carga atmica.
UTILIZACIN DE BIOPILAS EN EL PROCESO DE BIORREMEDIACIN

La tcnica de biopilas es un tratamiento de biorremediacin de tipo ex situ en condiciones no

saturadas, consistente en la reduccin de la concentracin de contaminantes derivados del
petrleo en suelos excavados mediante el uso de la biodegradacin.
La tcnica consiste en la formacin de pilas de material biodegradable de dimensiones variables,
formadas por suelo contaminado y materia orgnica (compost) en condiciones favorables para el
desarrollo de los procesos de biodegradacin de los contaminantes.
Estas pilas de compost pueden ser aireadas de forma activa, volteando la pila, o bien de forma
pasiva, mediante tubos perforados de aireacin.
En principio, las biopilas se pueden aplicar a la mayora de los compuestos orgnicos, siendo ms
eficaz en los compuestos de carcter ms ligero.
Entre los factores que influyen en la aplicacin de las biopilas destacan:

Los hidrocarburos deben ser no halogenados y deben encontrarse en el suelo en

concentraciones menores a 50.000 ppm.

Necesidad de una densidad de poblaciones microbianas (>1.000 CFU/gramo de suelo),

condiciones de humedad (40-85% de capacidad de campo), temperatura (10 y 45C),
textura (baja proporcin de arcillas), pH del suelo adecuadas (6 y 8) y baja presencia de

metales pesados (< 2.500 ppm).

La concentracin de nutrientes en el suelo cuyo rango normal de C: N: P sea de 100:10:1.
El tiempo de actuacin puede ser alto (meses a aos) y el coste bajo.

Atenuacin natural
La atenuacin natural, aunque no est considerada como una tcnica de descontaminacin
propiamente dicha, est englobada dentro de las tcnicas de remediacin in situ de muy bajo
coste. Su caracterstica principal es la utilizacin de los procesos fisicoqumicos de interaccin
contaminante-suelo y los procesos de biodegradacin que tienen lugar de forma natural en el
medio. Estos procesos se conocen como procesos de biorremediacin natural.
Los procesos de biorremediacin natural son aquellos que van a reducir la concentracin de los
contaminantes y entre los que se encuentran la dilucin, dispersin, volatilizacin, adsorcin,
biodegradacin y aquellas reacciones qumicas que se producen en el suelo o en el agua y que
contribuyen de alguna forma a la disminucin de la contaminacin.
Entre los factores que influyen en la eficacia y viabilidad de la atenuacin natural destacan:
La exigencia de proteccin y el riesgo de los potenciales receptores durante el tiempo que
dura la atenuacin.
La existencia de unas condiciones geolgicas y geoqumicas favorables.
Las necesidades de reduccin de la masa contaminante en un intervalo razonable de
tiempo (meses a aos), tanto en la superficie del suelo como en la zona ms subsuperficial
del mismo, as como de la calidad de las aguas subterrneas.
Confirmacin de la existencia de los tipos y nmero de poblaciones de microorganismos
que puedan biodegradar los contaminantes.
Produccin y conservacin en el medio de subproductos de carcter persistente o ms
txico que los iniciales, durante y despus de la atenuacin natural.
Para condiciones aerobias la condicin ambiental ptima de concentracin de oxgeno
disuelto en el agua debe ser superior a 0,5 mg/l. (Arroyo, 2004)
ANLISIS REALIZADOS EN EL CESTTA

Recuento de microorganismos
Se trata de conocer el nmero total de microorganismos presentes en el suelo. Este
nmero no guarda relacin con el de microorganismos patgenos por lo que no
puede usarse como ndice de su presencia y slo debe considerarse un indicador de
las caractersticas.
Dependiendo de las caractersticas del medio utilizado (medio rico, medio limitado
en nutrientes para medida de la flora no lctica de alimentos fermentados) y de las
condiciones de incubacin (mesfilos, psicrfilos) los microorganismos analizados
sern miembros de poblaciones diferentes. En general se investiga la presencia de
microorganismos aerobios o aerotolerantes (anaerobios facultativos); aunque, en
ciertas situaciones, puede ser de inters hacer recuentos de anaerobios totales.
Se han desarrollado tcnicas que hacen posible la automatizacin del proceso. Hay
cuatro tcnicas biolgicas bsicas tcnicas de recuento de viables:
1. - Conteo en placa Standard (Standard Plate Count).
2.- Determinacin del nmero ms probable.
3.- Mtodos basados en la reduccin de colorantes por viables.
4.- Contaje microscpico directo. (Rodrguez, 2007)

Conductividad elctrica del suelo

Todos los suelos frtiles contienen por lo menos pequeas cantidades de sales
solubles. La acumulacin de sales solubles en el suelo se atribuye principalmente a
problemas de drenaje y a la accin de riegos continuados, seguidos de evaporacin
y sequa.
Cuando un suelo tiene un exceso de sales solubles se le denomina suelo salino. La
medida de la conductividad elctrica (CE) del suelo y de las aguas de riego permite

estimar en forma casi cuantitativa la cantidad de sales que contiene. El anlisis de la

CE en suelos se hace para establecer si las sales solubles se encuentran en
cantidades suficientes como para afectar la germinacin normal de las semillas, el
crecimiento de las plantas o la absorcin de agua por parte de las mismas.
Las sales solubles que se encuentran en los suelos en cantidades superiores al 0.1 %
estn formadas principalmente por los cationes Na+, Ca2+ y Mg2+ asociados con los
aniones Cl-, SO42-, NO3- y HCO3-. (Ruz, 2009)

Medicin de la humedad del suelo

Para la medicin de la humedad del suelo se tienen mtodos de laboratorio y
mtodos de campo. Los mtodos de laboratorio se caracterizan por que determinan
directamente la humedad del suelo.

Mtodo gravimtrico.
Este mtodo determina el contenido de humedad del suelo como el peso del agua
dentro de la matriz del suelo. Se evala como la diferencia de peso entre una
muestra de suelo hmeda y seca. Implica la recoleccin de la muestra del suelo,
pesndola de ser posible en ese momento para determinar su peso hmedo. Luego
se lleva al laboratorio donde se seca en un horno a 105 C durante 24 horas,
momento en que es pesada nuevamente. La humedad de la muestra. (Martnez,
2001)

Medicin del pH del suelo

En los suelos, el pH es usado como un indicador de la acidez o alcalinidad de stos
y es medido en unidades de pH. El pH es una de las propiedades ms importantes
del suelo que afectan la disponibilidad de los nutrimentos, controla muchas de las
actividades qumicas y biolgicas que ocurren en el suelo y tiene una influencia
indirecta en el desarrollo de las plantas.

10

Procedimiento de Extraccin: se mide una cantidad definida de suelo seco y molido

y se coloca en un vaso de extraccin. Se agrega agua desionizada en proporcin
1:25 y se agita durante 10 minutos.
Procedimiento Analtico: el pH-metro debe ser calibrado previamente con las
soluciones buffer de pH 4.00, 7.00 y 10.00. Luego, se introduce el electrdo en la
muestra y se proceda a realizar la lectura de pH. (Jarpa, 2003)

Compuestos no Hidrocarburos presentes en el suelo

Varios de estos compuestos se encuentran en el crudo y en las corrientes refinadas. Los
ms importantes son sulfuros orgnicos, compuestos de nitrgeno y de oxgeno. Tambin
hay trazas de compuestos metlicos que pueden ser causa de problemas en ciertos

procesos catalticos. (Ferrera, 2006)

Compuestos de Azufre
Los compuestos de azufre determinan la corrosividad potencial del crudo. En las naftas
presentan dificultades en cuanto a corrosin, olor y explosiones deficientes de las mismas.
El crudo que contiene SH2 se denomina "Crudo cido", pero algunas tecnologas se
refieren descuidadamente a crudo "High sulphur" como crudo cido. En el crudo "High
sulphur", el SH2 puede ser bajo, pero el porcentaje de compuestos que contienen azufre es
alto. El crudo cido tiene mucho SH 2, el crudo agrio tiene muchos mercaptanes, por
ejemplo y es muy corrosivo.
Los compuestos de azufre son complejos y generalmente trmicamente inestables. Los
cclicos como el tiofeno son ms estables. Se eliminan craquendolos durante el proceso
de refinacin en el cual se forma SH2 y compuestos orgnicos simples de azufre.
Ciertos compuestos de azufre que son corrosivos por su acidez como SH 2 y mercaptanos,
se eliminan con tratamientos qumicos. Los compuestos de azufre no cidos se

transforman en SH2 durante el tratamiento. (Ferrera, 2006)

Compuestos de Nitrgeno
El contenido de nitrgeno en la mayora de los crudos existentes, es relativamente bajo,
generalmente menor que 0,1% en peso aumentando en las fracciones de alto punto de
ebullicin.
Hay varios tipos de hidrocarburos nitrogenados y son considerablemente ms complejos
que los compuestos hidrocarbonados de azufre. Son completamente estables
trmicamente y por esta razn en los cortes livianos solo aparecen trazas de nitrgeno. Se
cree que son derivados de las protenas presentes en los materiales a partir de los cuales se

11

form el crudo. Una pequea cantidad presente en el gasoil de la alimentacin para

cracking cataltico tiene un efecto adverso sobre la selectividad de la catlisis. En los
petrleos crudos no existen compuestos bsicos de N 2, estos se forman por

descomposicin en la destilacin.
Compuestos Metlicos
Los compuestos metlicos deben conocerse dado trazas de metales tales como Fe, Na, Ni,
V, Pb, y As tienen efectos adversos sobre los procesos de refinacin.
El que se encuentra en forma ms abundante es el vanadio junto con menores niveles de
nquel y hierro. El Bosque de Venezuela por ejemplo, tiene 1200 ppm de V y 150 ppm de
Ni. El mayor problema es que aun en pequeas cantidades estos elementos son veneno en
varias etapas del procesamiento.
La presencia de vanadio es indeseable por ser veneno del catalizador. La misma se
comprueba mediante pruebas de absorcin o emisin atmica. El Na puede causar
problemas en el enladrillado de los hornos. Se encuentran generalmente como sales
disueltas en el agua suspendida o como compuestos organometlicos y jabones metlicos.
Existen numerosas tcnicas para su determinacin, siendo las ms utilizadas las de
absorcin atmica. Tambin existen en el petrleo trazas de metales en solucin o en
suspensin como entidades inorgnicas. (Ferrera, 2006)

4. MATERIALES, EQUIPOS, REACTIVOS Y SUSTANCIAS

4.2. Calculo de temperatura (T):
Materiales:

Termmetro

Sustancias

Suelo contaminado (Biopila)

4.3. Calculo de pH:
Materiales:

Vaso de precipitacin
Varilla de agitacin
Esptula
Papel aluminio

Equipos:
12

Balanza analtica
pH metro

Sustancias:

Agua destilada
100g de suelo

4.4.

Calculo de la humedad:

Materiales:

Mortero
Pistil
Crisol
Esptula
Papel aluminio

Equipos:

Horno de secado
Desecador
Balanza analtica

Sustancias:
Agua destilada
3g de suelo
4.5. Clculo del porcentaje de fsforo (P):
Materiales:

Vasos de precipitacin
Matraz Erlenmeyer de 250 ml
Soporte Universal
Frascos
Fibra de vidrio
Muestra de suelo

Equipos:

13

Espectrofotmetro UV

Reactivos:

Vanadato
Fenolftalena
Olsen

Sustancias:

4.6.

Agua destilada
Clculo del porcentaje de nitrgeno (N):

Materiales:
Mortero
Pistilo
Esptula
Papel aluminio
Tamizador pequeo
Fundas plsticas
Muestra de suelo
Equipos:

Balanza elctrica
Digestor
Equipo para destilar
Equipo de titulacin

Reactivos:

Sulfato de cobre
Sulfato de potasio
cido sulfrico
cido Brico
Rojo de metilo
Verde de bromocresol

Sustancias:

14

Agua

5.7.

Preparacin de medio de cultivo, siembra y conteo de microorganismos:

5.

Preparacin del medio de cultivo

6.

Materiales

Tubos de ensayo
Gradilla
Mechero de alcohol
Varilla de agitacin
Pipetas
Erlenmeyer de 250 ml.
Vasos de precipitacin 250mL
Toallas absorbentes.
Una franela.
Guantes.
Mascarilla.
Mandil.
Papel aluminio.
1 Pera.
7. Equipos
Autoclave
Agitador mecnico
Balanza elctrica
8.

Siembra y conteo de microrganismos:

9. Materiales

15

Micropipeta regulada de 1mL

Placas petrifilm
Tubos de ensayo
Vasos de precipitacin 250mL
Toallas absorbentes.
Una franela.
Guantes.
Mascarilla.
Mandil.
Mechero de alcohol
Equipos
Incubadora
Flujo Lamina

5.8. Identificacin de metales pesados:

Materiales:

Pera de succin
Pipeta graduada
Vasos de precipitacin
Papel filtro
Pipeta graduada

Equipos:

Espectrofotmetro de emisin atmica

Digestor de suelos

Reactivos:

cido ntrico

Sustancias:

Agua destilada

5.9.

16

Determinacin del contenido de Azufre elemental:

Materiales:

Frasco estril
Pera de succin
Pipeta graduada
Muestra de suelo

Equipos:

Espectrofotmetro UV
Agitador mecnico
Reactivos:
Reactivo de sulfato SulfaVer 4
Sustancias:

Agua destilada
5.10. Clculo del pH y conductividad elctrica

Materiales
Mortero
Tamizador
Esptula
Envase de muestra (muestra de orina)
Equipos
Balanza
Agitador
pH metro multifuncional
Sustancias

Agua destilada
5.11. Anlisis de TPH Y HAPS

17

Sustancias y Reactivos:

Agua ionizada
Solvente (Diclorometano)
Solvente( Diclorometano + hexano)
Acetonitrato
Materiales
Tubos de ensayos
Pipeta volumtrica
Peras de succin
Esptula
Equipos

Generador ultrasnico con potencia de 300 W

Aparato Agitador con movimiento horizontal (de 200 a 300 oscilaciones por

minuto)
Centrfuga
Evaporador rotatorio provisto de un bao de agua con control adecuado de

temperatura
Balanza analtica

4. PROCEDIMIENTO
4.1.
Clculo de Temperatura:

18


Insertar el
termmetro en la
rea del suelo
hasta la lnea
marcada en el
medidor (12 cms.
aprox.)

Esperar unos
minutos,
aproximadamente
entre 3 o 4
minutos.

Se puede repetir
las mediciones en
varios puntos.

Registrar el dato
de temperatura
obtenido del
termmetro.

9.2.

19

Clculo de pH:

Tomar una muestra

de suelo
contaminado,
porcedente del
CESTTA.

Al cabo de 24 horas,
medir el pH de la
solucin utilizando
adecuadamente el
pH metro.

Pesar 100 g de suelo

con la ayuda de una
balanza analtica.

Dejar reposar la
solucin por un
lapso de tiempo de
24 horas.

Registrar el valor
obtenido.

9.3.

20

Clculo de porcentaje de Humedad:

Colocar 100mL de
agua destilada en
un vaso de
precipitacin de 250
mL.

Agregar los 100g de

suelo en el vaso de
precipitacin y
mezclar
correctamente.


9.4.

Clculo del porcentaje de nitrgeno (N):

Se toma un mortero y
pistilo, para
posteriormente triturar
la muestra de suelo, con
el objetivo de lograr una
Tomar una muestra
textura arenosa. Esto se
de suelo hmedopodr
realizar solamente
representativo en una
cuando ya haya existido
un secado previo.
bolsa de ziploc

Una vez colocado en

los tubos del digestor,
se aade
aproximadamente 2
gramos de un
catalizador (sulfato
de cobre y de
potasio).

Realizar dos muestras

con pesos similares,
los mismos que
despus son
colocados en el
digestor.

Colocar los 3 gramos

de suelo hmedo en
el crisol y pesar.

Colocar Ac. Sulfrico

aproximadamente 30
ml a cada una de las
muestras.

Tamizar la muestra de
suelo, para de esta
manera separar el
Pesar el
crisol
de
grnulo
grueso
del
grnulo
fino.
porcelana en la

balanza analtica.

Se pesa de 1 a 2
gramos de suelo
aproximadamente y
se coloca en una
canasta que se la
realiza utilizando
como material papel
aluminio. 3
Despus pesar

gramos de suelo con

la ayuda de la balanza
analitica .

Se lleva al digestor
los tubos, donde la
temperatura variar
hasta 500 grados
centgrados y esperar
3 horas, con la
finalidad de extraer
metales y que se
neutralice.

Llevar a enfriar y
aadir 8 gotas de un
indicador mixto de
rojo de metilo y verde
de bromocresol.

Colocar la muestra en
Dejar enfriar la
el horno de secado
muestra en el
durante 12 horas a
desecador
y pesar la
Colocar
en el
una
temperatura
de.
muestra seca.
erlenmeyer una base
Para la titulacin el
105C.
en la varilla
Colocar en el tubo de

volumtrica y dejar
caer por goteo, hasta
que el cido cambie
de color.

Reportar los
volumenes de cido
utilizado.

21

receptor es el Ac.
brico (50 ml para
cada muestra) al 2%.

detilado de 50 ml de
agua.

Hacer tres veces este

procedimeinto para
tres muestras de
suelo.


9.5.

Clculo del porcentaje de fsforo (P):

Triturar la muestra
del suelo en un
mortero, para
posteriormente
llevarlo a tamizar.

Pesar 10 g de suelo
previamente
tamizado y colocar en
un frasco.

Aadir 25 ml de olsen
con el fin de extraer
los macro y
micronutrientes

Colocar en un nuevo
frasco, aadiendo 10
ml de muestra
filtrada.

Filtrar a travs de
una fibra de vidrio.

Agitar por
aproximadamente
una hora.

En el mismo frasco,
aadir 10 ml de
vanadato, 1 gota de
fenoftalena, aforar a
20 ml con agua
destilada y agitar por
aproximadamente
una hora.

Elaborar muestra en
blanco con una
diluci 1:10, para
esto se coloca 10 ml
de olsen con 1 gota
de fenoftalena,
aadir 10 ml de
vanadato y aforar a
20 ml con agua
destilada.

Colocar la muestra en
blanco en el
espectrofotmetro UV
visible para calibrar.

Observar los
resultados.

Colocar la muestra a
analizar en el
espectrofotmetro UV
visible.

Anotar dichas
observaciones.
22


9.6.

Clculo del porcentaje de microorganismos:

9.6.1. Preparacin del medio de cultivo

1. Rotular todo el
material indicando
dilucin, o tcnica
de siembra,
medios
1. Rotular
todo el
de cultivo.

material indicando
dilucin, o tcnica
2. de
Realizar
los
siembra,
medios
clculos
y
de cultivo.

relaciones
necesarias para la
preparacin del
medio de cultivo
2. Tomamos
(Peptona)
que1mL
es del
necesario
para la
flujo laminar
de la
dilucin.
muestra
de suelo, la

agitamos, colocamos
la muestra en un
3. Diluir
de y la
tubo de3gr
ensayo
Peptona
en 200mL
rotulamos
como
de agua destilada
tubo 10-1.
3. Tomamos 1mL del
tubo 1 y lo
transferimos al tubo
2, agitamos la
mezcla al menos
diez veces y esa
ser la disolucin
10-2

9.7.

23

6. Colocar 90ml de
la solucin en un
6. Avaso
medida
deque se
siembra las
precipitacin.

disoluciones de
suelo contaminado
se rotula las placas
petrifilm e incubar a
5.35
Colocar
con
una
C por 72
horas.
pipeta 9mL de la
solucin
en 10
5. Al obtener
ya
tubostodas
de ensayo
las

disoluciones
procedemos a
sembrar las mismas
en las
4. Agitar
laplacas
dilucin
conpetrifilm
una varilla
de
con el
agitacin
su
medio dehasta
Peptona,
completa
las soluciones 10-4
homogenizacin.
10-5 10-6
4. Repetimos el
procedimiento hasta
obtener la
disolucin 10-6

9.6.2. Siembra y conteo de microrganismos.

Identificacin de metales pesados

7. Llevar a
esterilizacin las
soluciones hasta
los 121C, luego
7. Observar
dejar
enfriarlas
por 15
coloniasmin.
formadas

en cada uno de los

medios y reportar el
conteo en UFC.

8. Pesar 10gr de
una muestra de
suelo S-198 y
colocarla en una
funda ziploc

8. Cuantificar las
unidades
9.formadoras
Colocar los
de10gr
de la muestra de
colonia
una
suelo en
encada
los 90mL
dela
lassolucin
cajas. y
de
llevarlo a un
agitador mecnico
por 10 a 15 min.

9. Desechar
cuidadosamente las
placas en
contenedores
apropiados.

Triturar la muestra
de suelo.

Tamizar la muestra
de suelo
previamente
triturada.

Pesar 5,0029 g de
suelo.

Filtrar al vaco.

Tapar el frasco y
llevarlo al agitador
por el trasnscurso de
una hora
aproximadamente.

Aadir los 20 ml de
reactivo de Azufre
(S).

Realizar dilusion
solamente si es
necesario.

Realizar la medicin
en el equipo HACH.

24

Leer el valor del

sulfato.

Secar la muestra
de suelo en una
estufa a 100 C.

Triturar la muestra
de suelo.

Tamizar la muestra
de suelo triturada.

Aadir 10 ml de
cido ntrico. (1:1).

Colocar la masa de
suelo en un tubo
para digestin.

Pesar
aproximadamente
1,0005 g de suelo.

Realizar la
digestin de la
muestra mediante
microondas
(Programa: EPA
3051: especfico
para suelos).

9.8.

Realizar las mediciones

del contenido de metales
pesados en el
espectrofotmetro de
emisin atmica.

Determinacin del contenido de Azufre elemental:

9.9.

25

Clculo del pH y conductividad elctrica

Triturar los
grumulos del suelo
en el mortero.

Tamizar el suelo.

Pesar 10 gramos
de la muestra.

Agitar 10 minutos.

Colocar 20 ml de
agua destilada.

Colocar en un vaso
estril.

Empapar de
nuestra muestra
los electrodos.

Observar los datos

del pH y
conductividad en
la pantalla del
equipo cuando ya
se haya
estabilizado.

Lavar los
electrodos con
agua destilada.


4.2.
4.3.

Clculo de HAPS
Clculo de THP

Realizar el mismo
procedimiento de
extraccin de
suelo 2 veces ms.

Colocar al suelo
solvente
(diclorometano).

Agitar 1 minuto.

Somete a
limpiador
ultrasnico.

Repetir el
procedimiento
anterior una vez
ms.

Extraer en la fase
liquida y reservar
en un tubo de
ensayo.

Llevar a la
centrifuga.

Sacar y dejar
enfriar 5 minutos.

Unir los lquidos

extrados en un
tubo de ensayo.

Para concentrar la
muestra
evaporando todo
el solvente y la
fase slida colocar
en el
rotaevaporador 10
minutos
aproximadamente
(o hasta que ya no
se observe fase
lquida).

Sacar la muestra y
colocar
acetonitrilo.

Filtrar, rotular y
reservar hasta
llevarlo a equipo
de anlisis de
HAPS.

26

6. RESULTADOS Y ANLISIS
6.7. RESULTADOS
6.7.1. DETERMINACIN DE TEMPERATURA

1er Anlisis - Da de anlisis: 2/12/2016

Temperatura de la superficie = 30C

Temperatura a 20cm de profundidad = 22C

2do. Anlisis - Da de anlisis: 8/12/2016

Pesar una muestra
de 4 g
Temperatura
= 26C
aproximadamente
de suelo
contaminado
previamente
3er. Anlisis - Da de
triturado en un tubo
de ensayo.

Con ayuda de una

pipeta volumtrica
agregar 5ml de
solvente
(diclorometano +
anlisis: hexano)
9/12/2016
a la
muestra.

Colocar en el
agitador por 1
minuto.

Temperatura = 27C

6.7.2. DETERMINACIN DE pH

Meter al limpiador
ultrasnico 5
1er.
Anlisis minutos.

N.-

Para iniciar la
extraccin: meter al
limpiador ultrasnico
a 52C por en
tiempo de 5
minutos.

Sacar y dejar enfriar

en el periodo de 5 a
10 minutos.

Da

pH

MUESTRA
1
2/12/2016
8.9
Retirar el lquido en
Nota: para la determinacin deColocar
este elemento
se utiliz
el pH metro
5 ml ms
de
Someter a agitacin
por 1 minuto.

2do. Anlisis

N.-

otro tubo, reservar y

dejar el slido en el
mismo tubo.

solvente al tubo que

contiene el slido.

Da

pH

MUESTRA
Introducir a la
centrifuga por 5
Centrifugar
2 para
7/12/2016
9.48 minutos para lograr
Sacar del limpiador,
obtener una
dejar
enfriar
5
una mejor
segunda
Nota: para
la determinacin de este elemento
se utiliz el pH metro
separacin
minutos.
separacin de la
de fases.

fase slida con la

lquida.

27
Retirar la fase
lquida y colocar
donde estaba la

Filtrar para evitar el

paso de material

Colocar en un tubo
vial, codificar y

el equipo de TPH.

3er. Anlisis

N.-

Da

pH

MUESTRA
2
9/12/2016
9.53
Nota: para la determinacin de este elemento se utiliz el pH metro
6.7.3. DETERMINACIN DEL % DE HUMEDAD

1er Anlisis

Da de anlisis: 2/12/2016

ue

st

ra

s
u

M
d

M
s

el

M
s

28

3.

4
2

4
4

2
4

3.

29

Muestra 1

M 1=

Muestra 2

1
4

0
4

3.

MhMTs
x 100
Mh

Frmula general:
H=

)
4

3.01640.8362
x 100 =72.27
3.0164

M 2=

Muestra 3

M 3=

3.05980.8333
x 100 =72.76
3.0598

Humedad total
HT =

3.06310.8481
x 100 =72.31
3.0631

72.27+72.31+72.76
=72.444
3

Humedad total= 72.44%

2do. Anlisis

Da de anlisis: 9/12/2016

ue

st

ra

s
u

30

M
d

M
s

el

M
s

31

)
4

3
3

2
3

8
4

7
4

MhMTs
x 100
Mh

Muestra 1

Frmula general:
H=

3.04930.3631
x 100 =88.09
3.0493

M 1=

Muestra 2

M 2=

Muestra 3

M 3=

3.02780.3491
x 100 =88.47
3.0278

3.02150.3501
x 100 =88.41
3.0215

Humedad total
HT =

88.09+88.47+ 88.41
=88.32
3

Humedad total= 88.32%

6.7.4. DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE FSFORO

N. ABSORB
CONCENTRAC
MUESTRA
ANCIA
ION (mg/l)
1
0.274
0.4622
Nota: para la determinacin de este elemento se utiliz el
espectrofotmetro UV visible

6.7.5. DETERMINACIN DEL % DE NITRGENO

MUESTRA 1 (M1)

MUESTRA 2 (M2)

32

Peso de Suelo

en la

Balanza.

M1 = 2.0002 g

M2 = 2.0001 g

MUESTRA 1 (M1)
(M2)

33

Concentracin del H2SO4

Normalidad [N]= 0.02

TITULACIONES
MUESTRA 2

Normalidad Real [N Real]= 0.0212

Datos de Volmen.

M1. Volmen = 13.6 mL de H2SO4

M2. Volmen = 13.5 mL de H2SO4

Frmula General.
N 1=

Vtit x 14 x NReal H 2 SO 4 x 1000

Peso Muestra .

N 2=

N1
10000

MUESTRA 1
N 1=

(13.6 mL ) (14 ) (0.0212 H 2 SO 4)x 1000

=2018.038196 mg/ Kg
2.0002 g

N 2=

2018.038196 mg/Kg
=0.2018
10000

0.20

MUESTRA 2
N 1=

(13.5 mL )( 14 ) (0.0212 H 2 SO 4 )x 1000

=2003.299835 mg/Kg
2.0001 g

N 2=

2003.299835mg/ Kg
=0.200
10000

0.20

6.7.6. CONTEO DE MICROORGANISMOS

34

Da de la siembra: viernes 02/12/016

Da del conteo: lunes 05/12/016

El conteo se realiz a las 72 Horas

DILUCION
UFC/g
ES
Suelo
DILUCIN
Imposible
-4
10
Conteo
6.7.7.
DILUCIN

480 X
-5
5
10
10
DILUCIN
35 X 106
10-6
IDENTIFICACIN DE METALES PESADOS Y AZUFRE ELEMENTAL
Y DEMS PARMETROS

PARMETRO

HIDROCARBUROS TOTALES

CONDUCTIVIDAD ELCTRICA

ARSNICO

AZUFRE ELEMENTAL

BARIO

BORO

CADMIO
COBALTO

COBRE

CROMO

CROMO HEXAVALENTE

35

pH

CIANURO

RESUL
TADO
0.37
ug/g
8.26
unidade
s de pH
6820
uS/m
<0.5
ug/g
1652.37
ug/g
616.63
ug/g
10.2
ug/g
<0.5
ug/g
<10
ug/g
27.61
ug/g
15.42
ug/g
0,09
ug/g
0,053
ug/g

ESTAO

FLUORUROS

MERCURIO

MOLIBDENO

NIQUEL

PLOMO

SELENIO

VANADIO

ZINC

1,86
ug/g
2,78
ug/g
0,23
ug/g
0,94
ug/g
17,53
ug/g
17,32
ug/g
<0,5
ug/g
<50
ug/g
157,36
ug/g
6,96%
1,54
48x106

HUMEDAD

RAS

CONTEO DE
MICROORGANISMOS
NITRGENO
0,20%

6.7.8. DETERMINACIN DE PH Y CONDUCTIVIDAD

N. PH
CONDUCTIVID
MUESTRA
AD
1 (S198)
8.26
6820
Nota: Se utiliz 10 gramos de suelo y es un solo proceso para las dos
parmetros

6.7.9. DETERMINACIN DE TPH Y HAPS

36

PARMETRO
ANALIZADO

Valor ug/g

332,3
0,37

Hidrocarburos totales
Hidrocarburos
aromticos policclicos

6.8.

ANLISIS DE RESULTADOS

RESU
LTAD
O

HIDROCARBUROS TOTALES

pH
CONDUCTIVIDAD ELCTRICA

332.3
ug/g
8.26
6820
uS
<0,5
616,6
3
10,2
<0.5
<10
27,61
15,42
0,09
1,86
0,23
0,94
17,53
17,32
<0,5
<50
157,3
6
0.37
ug/g
0.462
2
mg/L
0.20

7. DATOS OBTENIDOS DE LOS

ANLISIS REALIZADOS EN LOS
LABORATORIOS DEL CESTTA

ARSNICO
BARIO

BORO
CADMIO
COBALTO
COBRE
CROMO
CROMO HEXAVALENTE
ESTAO
MERCURIO
MOLIBDENO
NIQUEL
PLOMO
SELENIO
VANADIO
ZINC

HAPs

FSFORO

%NITRGENO

37

Criterios
de Calidad de
Suelo Agrcola
Libro
VI
Anexo
2
TULS
MA
0 ug/g

6a8
2mmh
os/cm
12
750

2
2
40
63
65
0,4
5
0,8
5
50
20
2
130
200

<2 ug/g

0.1- 0.3
mg/L

 AZUFRE ELEMENTAL

%
1652.
37
mg/K
g

250
mg/Kg

CANTIDAD MICROBIANA RECOMENDADA PARA UN TRATAMIENTO DE

DESCOMPOSICIN ES DE: 1 milln al menos de UFC/g Suelo. (CESTTA)

CANTIDAD OBTENIDA EN EL LAB. DEL CESTTA ES DE: (480 x105 o 48x106 )

UFC/g Suelo

Dentro de lo que est marcado con color amarillo indica que esta fuera del lmite
permisible segn el Libro VI Anexo 2 del TULSMA que nos trata especficamente para
suelos agrcolas donde se puede justificar que el suelo no est apto para esa actividad y
requiere de un tratamiento que permita reducir su concentracin o a su vez eliminarlos.
Y lo que tambin nos preocupa es la deficiencia de ciertos nutrientes como el nitrgeno
para el metabolismo microbiano que debe estar disponible para poder llegar a nuestro
objetivo.

El nitrgeno presente en el Suelo es del 0.20% por lo que si puede ser aceptable esta
cantidad pero si queremos tratar un suelo que contiene HAPs y TPH se requiere de ms
cantidad de Nitrgeno para poder alcanzar la fase exponencial microbiana de
crecimiento y se logren degradar todos esos contaminantes por lo que se tendra que
adicionar Nitrgeno y eso se lo podra hacer aadiendo Urea (CH4N2O) al Suelo donde
ah tendramos el Nitrgeno disponible.

La proveniencia del Suelo indica que es de alguna Industria petrolera, adems existen
valores bajos en lo que respecta a metales dentro de los cuales se logr identificar:

Arsnico (As), Cadmio (Cd), Cobalto (Co), Cromo (Cr), Cobre (Cu), Mercurio
(Hg), Nquel (Ni), Plomo (Pb), Estao (Sn) y Cinc (Zn) en comparacin con los
parmetros permisibles ,pero s un pH bsico de 8.26 que indica la presencia de los
Hidrocarburos segn como nos testifica el Libro de TULSMA estamos tratando de un
suelo que est gravemente afectado ya que segn la ley debera existir 0 ug/g o hasta
0.1 ug/g por la cual no cumple ya que nuestro suelo esta con 332.3 ug/g.

En la carga microbiana del Suelo obtenida en los Laboratorios del CESTTA pues indica
que estamos dentro de lo que se dira conveniente para tratar ese Suelo, pero resulta que
la cantidad de Azufre elemental est demasiado alto por lo que requiere ser disuelto y
consumido por los microorganismos por lo que la opcin sera realizar una
Bioaumentacin para que el proceso de disminucin de azufre se lo efecte en menor
tiempo. De los microorganismos que se analizaron fueron Aerobios totales y de los que
se utilizara para hacer la Bioaumentacin estn los gneros de: Pseudomonas,
Azotobacter catalogadas como las ms eficientes para procesos de tratamiento de
Hidrocarburos presentes en el suelo.

8. OBSERVACIONES
8.7. Observaciones de la determinacin de concentracin de fsforo.
38

El olsen es utilizado para la extraccin de macro y micronutrientes que en

nuestro caso es el fsforo.

Se observ que para la extraccin de este elemento es necesario esperar que
las sustancias reaccionantes tengan el tiempo suficiente para reaccionar en

toda la muestra.
El vanadato es un indicador que cambia de color de la muestra a amarillo

segn la concentracin de fsforo presente.

Se utiliz el espectrofotmetro UV visible para la determinacin del mismo.
8.8. Observaciones de la Determinacin de %Nitrgeno.
El uso del catalizador (Sulfato de Cobre y de Potasio) acelera la reaccin
que ayudar a obtener en menor tiempo los resultados de determinacin de

Nitrgeno en la muestra de suelo no influye este catalizador en el anlisis.

La tierra que se dio uso para este proceso debe estar seca
En el digestor le permite un calor variable que llega hasta 550C es por
rangos de temperatura primero lo que es el calentamiento luego la digestin

completa y luego empieza a bajar la temperatura.

En el programado del digestor, cuando se digesta el suelo se elevan vapores
cidos llegan a una solucin de Hidrxido de color azul y se neutraliza en

un tiempo de 3 Horas y media hasta que se enfre.

En el equipo de destilacin se coloc el Erlenmeyer con la solucin color
rosa por el indicador (rojo de metilo y verde de bromocresol) donde el gas
sube se condensa y cae y se tiene un receptor que es el cido brico se

produce una reaccin y se vuelve de color verde la solucin

Durante la titulacin se deja caer una base a la solucin de color verde y se
produce en cierto tiempo por goteo de una base una reaccin donde ste

cambia a color rosa que fue su color original.

El cido Sulfrico presenta dos Normalidad, pero para los clculos se
trabaja con la Normalidad Real ya que es la ms cercana a tener datos

8.9.

precisos como lo realizamos en la prctica.

Observaciones Microbiolgicas
La preparacin del medio de Peptona se lo realiza sin calor porque solo con

agitacin lleg a disolverse homogneamente.

Todo el material debe estar debidamente esterilizado.
En el autoclavado a los 90C se deja escapar el vapor con la finalidad de
que se oxigene dentro de l y no ocurra derrames de las soluciones.

39

La tierra que se usa para este proceso debe tener un porcentaje de humedad.
Para el conteo se puso en la incubadora las diluciones de 10-4 10-5 10-6 a
35C ya que se tratan de mesfilos con la finalidad es de tener una
poblacin mayor de 1 milln para poder determinar que mtodo de

Biorremediacin se puede aplicar para el suelo.

La dilucin10-4 tena una excesiva cantidad de aerobios totales por lo que se

descart esa placa y slo se cont las diluciones de 10-5 y 10-6

El conteo se nos facilit porque cada consorcio microbiano tena un color

rojo que era visible.

Para el reporte de resultados se usa el elevado a la 10 con nmero positivo
de poblaciones, no se usa el negativo porque no estamos quitando

poblaciones de microorganismos.
8.10. Observaciones de TPH, HAPS, pH y conductividad elctrica.

40

HAPS

Al colocar el
solvente y agitar se
observa una mezcla
homognea.

-Despus de
colocar en la
centrifuga se puede
observar una
separacin de
componentes en dos
fases.

-La fase
lquida se presenta
con un color
amarillento.

-La fase
slida se observa un
color caf.

-Al momento
de la extraccin en
el evaporador
rotatorio el lquido
se evapora.

-La fase
lquida final se
observa una
consistencia pastosa
color caf

41

TPH

pH

CONDUCTIVIDAD

-Al colocar el
solvente y
agitar se
observa una
mezcla
homognea.

Mezcla
homognea
de color
grisceo

Mezcla homognea de
color grisceo

-Despus de
colocar en la
centrifuga se
puede observar
una separacin
de
componentes
en dos fases.

-La fase
lquida se
presenta con
un color
amarillento.

-La fase slida

se observa un
color caf.

9. CONCLUSIONES
Se realiz la determinacin de parmetros fsico qumicos como: pH,
temperatura y humedad, de la muestra de suelo contaminado procedente del
CESTTA, siguiendo los pasos adecuados para llevar a cabo estas mediciones,
mismas que fueron realizadas con una frecuencia de 2 veces por semana. El
parmetro de temperatura fue variando respecto a las condiciones climticas del
lugar, dando un valor de 30C la primera semana y 26 y 27C la segunda
semana. El pH del suelo medido en la en la primera semana (moderadamente
alcalino, pH=8.9), como el de la segunda semana (muy fuertemente alcalino,
pH=9.53)no cumplen con los valores mximos permisibles establecidos en la
NORMA DE CALIDAD AMBIENTAL DEL RECURSO SUELO Y CRITERIOS
DE CALIDAD DE REMEDIACINPARA SUELOS CONTAMINADO, LIBRO
VI Anexo 2,TULSMA; para un suelo de uso agrcola, esto debido a la relacin
suelo solucin, donde el efecto de humedecer el suelo regularmente aumenta el
42

pH de la suspensin del mismo, por lo que se pueden obtener diferencias

superiores a una unidad de pH. La humedad de la muestra de suelo en la primera
semana fue 72.44% mientras que al cabo de dos semanas fue de 88.32%, esto

debido a que se procedi a humedecer regularmente el suelo.

Se determin el porcentaje de nitrgeno y de fsforo asimilable en la muestra de
suelo contaminado procedente del CESTTA, que dependi principalmente del
tipo de material madre y de las condiciones climtica del lugar. El fsforo que se
constituye como nutriente esencial de suelo, present una concentracin de
0.4622mg/L (igual a 0.4622mg/kg), lo que significa que este suelo sobrepasa los
lmites en los que el fsforo se encuentra plenamente disponible para plantas y
animales (entre 0,1 y 0,3 mg/L). El porcentaje de nitrgeno fue de 0.20% en
ambas muestras, lo que demuestra que este suelo presenta una concentracin
deficiente de nitrgeno total. Estos parmetros no se encuentran establecidos en

la Norma Tcnica del Suelo.

Se prepar un medio de cultivo a partir de Peptona, medio de alta calidad
nutricional y uno de los ms adecuados para el cultivo de diferentes colonias
bacterianas, posteriormente se realiz la siembra de las diluciones de suelo
contaminado (10-4,10-5 y 10-6) en las respectivas cajas Petri film, que rotuladas

correctamente fueron incubadas a 35C por un periodo de 48 horas.

Se ejecut el conteo de microorganismos de la siembra realizada al cabo de 72
horas; mismo que fue reportado con un valor de 480x105 UFC/g Suelo en la
dilucin 10-5, un valor de 35x106 UFC/g Suelo en la dilucin 10-6, sin embargo
en la dilucin 10-4 fue imposible realizar el conteo, pues el medio se encontraba

totalmente cubierto de colonias.

Se identific los metales pesados presentes en la muestra de suelo contaminado,
dentro de los cuales se logr identificar: Arsnico (As), Cadmio (Cd), Cobalto
(Co), Cromo (Cr), Cobre (Cu), Mercurio (Hg), Nquel (Ni), Plomo (Pb), Estao
(Sn) y Cinc (Zn), todos presentes en concentraciones relativamente bajas,
cumpliendo con los valores mximos permisibles establecidos en Norma

Tcnica del Suelo.

Se determin la cantidad de azufre elemental presente en la muestra de suelo
contaminado, siendo un valor de 1652,37 ug/g, lo que significa que la cantidad

43

de azufre presente en este suelo excede considerablemente los lmites

permisibles establecidos en la Norma Tcnica Ecuatoriana, correspondiente a un
valor de 250mg/Kg. De tal forma que se debe incrementar la actividad

microbiana de la biopila para con ello aumentar la mineralizacin del azufre.

Se efectu la determinacin de pH (en el CESTTA) de la muestra de suelo
contaminado, dando como resultado un pH moderadamente alcalino igual a
8.26; es decir que no cumple los valores mximos permisibles establecidos en la
norma ecuatoriana, esto debido a la relacin suelo solucin, donde el efecto de
humedecer el suelo regularmente hace aumentar el pH de la suspensin del
mismo, por lo que se pueden obtener diferencias superiores a una unidad de pH.
La conductividad elctrica fue de 682.0 uS/m (igual a 1.46 mmhos/cm), lo que
significa que este no excede los valores mximos permisibles respecto a la
conductividad elctrica establecida por la Norma Tcnica del Suelo., con un

valor de 2 mmhos/cm para un suelo de uso agrcola.

Se reconoci los TPH Y HAPS presentes en la muestra de suelo contaminado,
en un valor de 332,3 ug/g y 0,37 ug/g respectivamente, lo que significa que el
contenido de HAPS excede los valores mximos permisibles establecidos en la
Norma Tcnica del Suelo, cuyo valor es de 0.1 ug/g para suelo de uso agrcola.
Respecto a los TPH, existe una abundancia de los mismos, excediendo los

valores mximos permisibles.

10. RECOMENDACIONES
Evitar la entrada accidental de agua lluvia a la biopila, se recomienda proteger

bien el techo y la base aislante de la biocelda.

Se debe homogenizar y humedecer correctamente el suelo, esto se recomienda

hacerlo diariamente.
Tamizar completamente el suelo, evitando dejar piedras u otros materiales que

afecten la degradacin biolgica de la biopila.

Al medir la temperatura de la biopila, si la tierra es muy dura o pedregosa,
recomendamos que previamente haga un agujero con un clavo largo o varilla de

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madera para facilitar la introduccin posterior del termmetro.

Se recomienda repetir las mediciones de temperatura en varios puntos.

Para los anlisis de humedad se recomienda usar el horno a 105 C, para no

falsear la humedad en suelos que contienen cantidades significativas de materia

orgnica, yeso o ciertos tipos de arcillas.

Los datos obtenidos de la medicin de muestras, se debe hacer con una balanza
analtica y los valores a tomarse en cuenta deben estar en cuatro decimales

dando el ltimo decimal un valor de 2. (ej. 2.0002)

Para acelerar las reacciones qumicas de las muestras de nitrgeno se utiliza el

sulfato de cobre y el sulfato de potasio como catalizador de las reacciones.

Usar el medio de agar peptona para el desarrollo adecuado de microrganismos

aerobios totales, ya que es un agar ptimo para las muestras de suelo.

Se debe usar correctamente guantes, mascarilla para evitar la contaminacin

accidental de nuestras muestras de suelo.

Usar los instrumentos necesarios para remover el suelo constantemente.
Usar proteccin en las manos (guantes) para evitar daos en la piel.

11. BIBLIOGRAFA

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